1) INTRODUCCIN

Los distintos orgnulos intracelulares constituyen un nivel en la estructura subcelular de las clulas
eucariotas. Un nivel de organizacin ms avanzado lo proporciona el citoesqueleto, que consiste en una
red de filamentos de protena que se extienden por el citoplasma de todas las clulas eucariotas. El
citoesqueleto proporciona un armazn estructural para la clula, actuando como un andamio que
determina la morfologa celular y la organizacin general del citoplasma. Pero adems de desempear
este papel estructural, el citoesqueleto es el responsable de los movimientos de la clula. stos no slo
incluyen a los movimientos de la clula en conjunto, sino tambin al transporte interno de los orgnulos y
de otras estructuras (tales como los cromosomas mitticos) a travs del citoplasma. Es importante sealar
que el citoesqueleto es mucho menos rgido y estable de lo que su propio nombre indica. Ms bien es una
estructura dinmica que se est reorganizando continuamente segn las clulas se mueven y cambian de
forma (por ejemplo, durante la divisin celular).

El citoesqueleto est constituido por tres tipos principales de filamentos de protena: filamentos de actina
(tambin llamados microfilamentos), filamentos intermedios (abreviadamente en ingls IFs) y
microtbulos, que se mantienen juntos y unidos a los orgnulos intracelulares y a la membrana plasmtica
mediante varias protenas accesorias (en ingls denominadas en su conjunto IFAPs). Estas protenas
accesorias son el objeto de estudio de este trabajo.

Los microfilamentos, los filamentos intermedios y los microtbulos abarcan la mayor parte de las
protenas del citoesqueleto en las clulas no musculares. Tanto los microfilamentos como los
microtbulos son polmeros constituidos por un solo tipo de protenas (actina y tubulina,
respectivamente). Los filamentos intermedios, por el contrario, estn constituidos por varias protenas
diferentes que se expresan en distintos tipos de clulas. Hasta la actualidad se han identificado ms de 50
protenas diferentes de filamentos intermedios, y se las ha clasificado en seis grupos en funcin de las
similitudes entre sus secuencias de aminocidos (Tabla I.1).

Los filamentos intermedios forman una elaborada red en el citoplasma de la mayora de las clulas,
extendindose desde un anillo que rodea al ncleo hasta la membrana plasmtica. Tanto los filamentos de
queratina como los de vimentina se fijan a la envuelta nuclear, aparentemente con la funcin de
posicionar y anclar el ncleo dentro de la clula. Adems, los filamentos pueden asociarse no slo con la
membrana plasmtica, sino tambin con los otros elementos del citoesqueleto (microfilamentos y
microtbulos), proporcionando un andamiaje que integra a los componentes del citoesqueleto y organiza
la estructura interna de la clula.

TABLA I.1. Protenas de los filamentos intermedios

Ti p o

Protena

Tamao (kDa)

Lugar de expresin

Queratinas cidas (15 protenas)

40-60

Clulas epiteliales

II

Queratinas neutras o bsicas (15 protenas)

50-70

Clulas epiteliales
Fibroblastos

Vimentina

54

Glbulos blancos
Otros tipos celulares

III

Desmina

53

Clulas musculares

Protena cida fibrilar glial

51

Clulas gliales

Periferina

57

Neuronas perifricas

NF-L

67

Neuronas

NF-M

150

Neuronas

NF-H

200

Neuronas

-internexina

66

Neuronas

Lminas nucleares

60-75

Lmina nuclear

VI

Nestina

200

Clulas madre del SNC

Protenas de neurofilamentos:

IV

Los filamentos intermedios tambin se asocian con distintos orgnulos celulares y con ciertas estructuras
especializadas de la membrana plasmtica como los desmosomas y los hemidesmosomas en clulas
epiteliales, los costmeros en clulas del msculo estriado, y los discos intercalados en el msculo
cardaco. De este modo, los filamentos intermedios actan como integradores del espacio citoplasmtico
en las clulas, y como integradores de las clulas en los tejidos, confiriendo as estabilidad mecnica a los
rganos.

Las interacciones entre los filamentos intermedios y otros elementos del citoesqueleto, as como los
orgnulos celulares estn coordinados por las protenas asociadas a filamentos intermedios (ms
conocidas como IFAPs). Muchas de estas protenas han emergido como reguladores crticos de la
integridad de los tejidos. Sin embargo, hoy se sabe que las IFAPs no se limitan a unir filamentos
intermedios, y muchas de ellas son enzimas, adaptadores y receptores cuyo papel dentro de las clulas va
ms all del puramente estructural. De hecho, se est empezando a considerar a las redes de filamentos
intermedios como un andamio sobre el que las IFAPs se organizan, regulan y controlan la actividad
metablica celular, contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis celular. As, las interacciones entre
las lminas nucleares y las protenas asociadas al ncleo no slo son necesarias para la organizacin del
carioesqueleto, sino que tambin estn implicadas en la regulacin de la transcripcin gnica y en el
2

control de la divisin celular. Por otra parte, en algunos casos existe una lnea muy fina entre los
filamentos intermedios y las IFAPs, ya que en algunos casos los polipptidos de los filamentos
intermedios parecen jugar un papel clave en el anclaje de otros filamentos a diferentes orgnulos celulares
y a la membrana plasmtica.

A continuacin vamos a centrar nuestra atencin en los filamentos intermedios del citoplasma y en sus
protenas asociadas, y veremos como dichas protenas organizan a los filamentos intermedios y actan
como reguladoras de la actividad del citoesqueleto.

2) FAMILIA DE LAS PLAQUINAS

Una de las mayores familias de IFAPs fue descubierta en 1991 y emergi como una gran familia de genes
responsables de la unin de las redes del citoesqueleto y la membrana plasmtica. Las protenas
codificadas por dichos genes constituyen en la actualidad la familia de las plaquinas, una denominacin
que deriva de la localizacin de muchas de estas protenas en la placa citoplasmtica electrondensa
formada por los anclajes de los filamentos intermedios. Actualmente se sabe que la familia de las
plaquinas es muy extensa, incluyendo protenas de gran tamao constituidas por diferentes subunidades
con dominios de unin a filamentos intermedios, dominios de unin a actina (denominados ABD en
ingls), dominios de unin a microtbulos, repeticiones de espectrina y dominios de unin a estructuras
especficas como los desmosomas y los hemidesmosomas. Las plaquinas de mayor tamao contienen un
gran nmero de repeticiones de espectrina y se denominan por ello espectraplaquinas.

Los primeros genes de plaquinas se encontraron en los invertebrados Caenorhabditis elegans y

Drosophila, y se denominaron VAB-10A/B y SHORTSTOP respectivamente. Estos genes juegan un
papel importante en la adhesin celular y en la formacin de los tejidos. Las ms modernas plaquinas
presentes en el epitelio de vertebrados derivan por especializacin (principalmente como elementos de
unin de los filamentos intermedios) de estas versiones primitivas de plaquinas presentes en
invertebrados. Resulta interesante el hecho de que Drosophila ni siquiera tiene filamentos intermedios en
el citoplasma celular, y las regiones de las susodichas plaquinas primitivas similares a los dominios de
unin a filamentos intermedios de las plaquinas modernas tienen otras funciones. Este hecho sugiere que
la capacidad de unin a filamentos intermedios de las plaquinas o bien se perdi con la evolucin o bien
surgi posteriormente en las versiones ms modernas de las plaquinas.

No obstante, en este trabajo nos vamos a centrar slo en los miembros de la familia de las plaquinas que
interaccionan con los filamentos intermedios del citoesqueleto: la desmoplaquina, la BPAG1, la plectina
(las ms importantes), as como la envoplaquina, la periplaquina y la poco comn epiplaquina (las
3

descubiertas ms recientemente).

La mayor parte de las plaquinas se localizan en las uniones de anclaje que median entre las clulas
(desmosomas) o entre una clula y el substrato al que se adhiere (hemidesmosomas). Dichas uniones de
anclaje incluyen elementos transmembrana que interactan con molculas de la matriz extracelular en los
hemidesmosomas o con otros elementos transmembrana de clulas adyacentes en los desmosomas. En el
caso de los hemidesmosomas, los elementos transmembrana son protenas de la familia de las integrinas
(como por ejemplo BPAG2/BP180). En el caso de los desmosomas, dichos elementos transmembrana son
protenas de los tipos cadherinas, desmoglenas y desmocolinas. En estas uniones de anclaje, las colas
citoplasmticas de estas molculas transmembrana se organizan a modo de andamio y forman un
complejo proteico para el anclaje de los filamentos intermedios a la membrana plasmtica. Las uniones
especializadas clula-clula y clula-substrato en las clulas endoteliales, que no constituyen desmosomas
ni hemidesmosomas, han emergido recientemente como un importante punto de contacto de los
filamentos intermedios. Las plaquinas son, pues, un grupo de IFAPs muy importante por el papel
fundamental que estas protenas tienen en la organizacin del citoesqueleto. En el caso de la especie
humana, cada vez es mayor el inters por las plaquinas por cuanto que parecen jugar un papel crtico en
ciertas enfermedades caracterizadas por una considerable debilidad de los tejidos. Estas enfermedades
suelen ser hereditarias, o al menos lo es la predisposicin a padecerlas, pudiendo ser desencadenadas por
la exposicin a ciertas molculas que podran desactivar su capacidad de anclar los filamentos
intermedios, comprometiendo as la estabilidad mecnica de las clulas y de los tejidos.

Vamos a estudiar brevemente cada una de las protenas de la familia de las plaquinas mencionadas en el
epgrafe anterior. Centraremos nuestra atencin especialmente en las funciones de dichas protenas y en
su relacin con diferentes patologas que afectan a la especie humana.

2.1) Desmoplaquinas
Las desmoplaquinas de tipo I (abreviadamente DP1) y de tipo II (abreviadamente DP2) fueron
identificadas por primera vez en 1974 como un componente muy abundante de los desmosomas, y se
encontraron formando parte de estas estructuras en tejido epitelial, tejido cardaco, clulas de las
meninges y clulas dendrticas foliculares de los ndulos linfticos. Pero tambin se ha encontrado
desmoplaquina fuera de los desmosomas, en uniones endoteliales especializadas. DP1 y DP2 estn
codificadas por productos del splicing del trnscrito primario de un mismo gen. DP2 presenta 599
aminocidos menos en su dominio central con respecto a DP1, pero es idntica a sta si comparamos los
dominios C-terminal y N-terminal de ambas. El dominio central de ambas desmoplaquinas presenta una
configuracin lineal en hlice-, mientras que los dominios C-terminal y N-terminal presentan una
4

configuracin globular. Este patrn estructural se observa no slo en las desmoplaquinas, sino tambin en
otras IFAPs como la plectina, la envoplaquina y la periplaquina, de las que hablaremos ms adelante. En
el caso de la epiplaquina (una plaquina recientemente descrita), se conserva el dominio C-terminal de
otras plaquinas, pero se han perdido el dominio N-terminal y el dominio central.

El anlisis de la secuencia del cDNA de las desmoplaquinas ha demostrado que el dominio C-terminal de
las mismas est constituido por tres subdominios. Cada subdominio est a su vez formado por entre 4 y 5
repeticiones en tndem de 38 residuos de aminocidos cargados que intervienen en la unin de las
desmoplaquinas a los filamentos intermedios. Estudios cristalogrficos con rayos X han confirmado
recientemente la estructura de dichas repeticiones, denominadas repeticiones de plaquina (abreviadamente
PR por sus siglas en ingls). Cada PR presenta dos hlices que se disponen de forma antiparalela una
respecto a la otra y constituyen una estructura globular discreta denominada dominio de repeticin de
plaquina (abreviadamente PRD por sus siglas en ingls). Las estructuras de las PRDs son similares, y
algunos autores creen que estas PRDs presentes en varios miembros de la familia de las plaquinas (y no
slo en las desmoplaquinas) son unidades independientes que se organizan en tndem en las plaquinas.

El dominio C-terminal de las desmoplaquinas que contiene las PRDs aparece asociado con filamentos
intermedios en diferentes tipos de tejidos en los que estn presentes los desmosomas. La forma en la que
tienen lugar estas interacciones es todava hoy objeto de discusin. Los estudios cristalogrficos con rayos
X mencionados anteriormente sugieren que los residuos cargados de la superficie de las PRDs podran estar
involucrados en la interaccin con los filamentos intermedios. Estudios adicionales han demostrado que la
intervencin de dichos residuos es crtica para la unin de las desmoplaquinas a ciertas protenas de los
filamentos intermedios como la vimentina y las queratinas epiteliales K8/18. No obstante, son todava
necesarios estudios adicionales que aclaren el modo en que dichas PRDs participan en la unin de las
desmoplaquinas y otras plaquinas a los filamentos intermedios.

Varios investigadores han apuntado que las interacciones de las desmoplaquinas con los filamentos
intermedios presentan especificidad de secuencia. Aunque las conclusiones de estos investigadores difieren,
en trminos generales todos ellos resaltan la importancia de la PRD tipo C en la asociacin con las
queratinas y de la PRD tipo B con protenas de los filamentos intermedios del tipo III (como la vimentina y
la desmina). Por otra parte, la fosforilacin de un residuo de serina en el dominio C-terminal de las
desmoplaquinas daa las interacciones de stas con los filamentos intermedios y parece estar involucrada en
la regulacin del tamao de la regin de la desmoplaquina que se incorpora al ensamblaje de los
desmosomas.

La secuencia de los filamentos intermedios necesaria para su interaccin con el dominio C-terminal de las
5

desmoplaquinas es tambin todava objeto de debate. Varios estudios realizados con levaduras a mediados
de los aos 90 sugirieron que la mera presencia de keratinas neutras de tipo II (como K5 o K1) en los
filamentos intermedios era suficiente para la asociacin de stos con las desmoplaquinas. Estudios
posteriores sugirieron que en el caso de las queratinas K8/18, ambas deban estar presentes para una
interaccin eficaz con las desmoplaquinas. En el caso de las queratinas K5/K14 la presencia del
heterodmero se ha revelado recientemente como crtica para la interaccin con las desmoplaquinas. Todos
estos estudios en conjunto han llevado a pensar que el dominio C-terminal de las desmoplaquinas utiliza
distintos tipos de combinaciones de secuencias para unirse especficamente a los filamentos intermedios de
distintos tipos celulares.

En cuanto al dominio N-terminal de las desmoplaquinas, ste es necesario para la incorporacin de estas
protenas a la placa desmosomal. Dicho dominio contiene una regin bien conservada en todas las protenas
de la familia de las plaquinas (con la excepcin de la epiplaquina). A dicha regin se la denomina dominio
de plaquina, e inicialmente se propuso que era una estructura globular caracterizada por una serie de
repeticiones formando series de haces antiparalelos. Ms recientemente, esta visin del dominio de
plaquina ha sido refinada y actualmente se describe como una serie de repeticiones de espectrina que rodean
a un dominio SH3, configurando una estructura globular. Experimentos de co-inmunoprecipitacin y de
superposicin in vitro han demostrado que el dominio de plaquina contiene sitios de unin para las
protenas de armadillo placoglobina, placofilinas 1-3 y p0071. Adems, el dominio de plaquina puede
unirse directamente a las cadherinas desmosomales desmoglena 1 y desmocolina 1. La multiplicidad de
interacciones entre el dominio N-terminal de las desmoplaquinas y otros componentes de la placa de unin
constituye una herramienta que nos permite afinar el conocimiento de la arquitectura y el funcionamiento de
dicha placa de unin. Inmunoensayos de alta resolucin llevados a cabo con anticuerpos especficos contra
los dominios N-terminal y C-terminal de las desmoplaquinas han resultado coherentes con las funciones de
estos dominios en la unin de las desmoplaquinas a puntos concretos de la membrana plasmtica y en el
anclaje de los filamentos intermedios del citoplasma, respectivamente. Estos inmunoensayos han
demostrado que el dominio N-terminal est localizado prximo a la membrana plasmtica, mientras que el
dominio C-terminal est localizado ms hacia el interior del citoplasma, donde se anclan los filamentos
intermedios.

La importancia crtica de las desmoplaquinas, tanto durante el desarrollo como en el individuo adulto, ha
sido puesta de manifiesto por mutaciones naturales observadas en humanos y por mutaciones inducidas
artificialmente en ratones de experimentacin. La prdida total de las desmoplaquinas da como resultado un
fenotipo letal que hace al embrin inviable debido como consecuencia de un ensamblaje defectuoso de los
desmosomas y una asociacin tambin defectuosa de las queratinas K8/18 en el ectodermo embrionario. La
ausencia de desmoplaquinas en animales provoca la muerte prematura de stos debido a importantes
6

defectos en el corazn, el neuroepitelio, la epidermis y la microvasculatura, lo que pone de manifiesto la

gran importancia de las desmoplaquinas en el mantenimiento de la integridad de los tejidos. La eliminacin
de desmoplaquinas en tejido cutneo de ratn, as como ciertas mutaciones del gen de las desmoplaquinas
observadas en humanos, han confirmado esta idea, ya que indefectiblemente provocan debilidad estructural
de la piel e incluso cardiomiopata.

Aunque la base celular de muchos defectos de los tejidos est todava en fase de estudio, se sabe que el
desacoplamiento de los filamentos intermedios de los desmosomas disminuye la estabilidad de capas de
queratinocitos in vitro. Asimismo, el truncamiento del dominio C-terminal de las desmoplaquinas tambin
disminuye la solidez de las uniones intercelulares, reduciendo la estabilidad mecnica de los tejidos.

2.2) BP230 (BPAG1) y sus isoformas

BPAG1 fue inicialmente identificado en 1981 como un antgeno en el penfigoide bulloso, una enfermedad
autoinmune caracterizada por la aparicin de grandes ampollas en la piel. Posteriormente, en 1985, BPAG1
fue descrita como un componente de los hemidesmosomas. Junto con la plectina, BPAG1 media en la unin
de los filamentos intermedios de queratina con los hemidesmosomas. Y al igual que las desmoplaquinas,
BPAG1 ejerce su funcin de enlace unindose a receptores de membrana (como la integrina 64 y la
glucoprotena transmembrana BP180) a travs de su dominio N-terminal y a filamentos intermedios a travs
de su dominio C-terminal.

Debido a su importante expresin en los hemidesmosomas, se predijo que la anulacin de la BPAG1 podra
provocar efectos devastadores en la piel de ratones. En efecto, dichos efectos se observaron en respuesta al
estrs en ratones carentes de BPAG1. Sorprendentemente, la prdida del locus de BPAG1, bien inducida
artificialmente, bien debida a mutaciones espontneas, produce en ratones la degeneracin de neuronas
sensoriales y una progresiva distona muscular (esto es, prdida del tono muscular).

Este fenotipo llev al descubrimiento de que el locus de BPAG1 es ms largo de lo que originalmente se
crea, ya que codifica para mdulos adicionales caractersticos de los miembros de mayor tamao de la
familia de las plaquinas, dando lugar a cuatro isoformas distintas de BPAG1. Defectos neuronales
observados en ratones mutantes han sido asociados recientemente a la isoforma BPAG1a, una isoforma
gigante con un dominio de unin a actina cuya expresin en el msculo estriado esqueltico podra
explicar anormalidades musculares en ratones con distona muscular. En cuanto a la especie humana,
hasta muy recientemente no se haban identificado mutaciones de BPAG1. Pero en 2004 se caracterizaron
varias isoformas especficas del cerebro en pacientes con atresia esofgica y retraso psicomotor que
manifestaban una posible haploinsuficiencia de BPAG1.
7

Las cuatro isoformas conocidas de BPAG1 se derivan del mismo gen por splicing diferencial. El
componente estructural de las cuatro isoformas es el dominio de plaquina mencionado anteriormente.
Este dominio media la unin de BP230 (conocida como BPAG1e) a BP180 (colgeno XVII o BPAG2) y
a la integrina 4. Tanto en BPAG1e como en BPAG1n el dominio de plaquina est seguido de dos
dominios PRD tipos B y C interconectados mediante un subdominio de unin. Al igual que en las
isoformas gigantes BPAG1a (619 kDa) y BPAG1b (824 kDa), BPAG1n presenta un dominio de unin a
actina en el extremo N-terminal. Otras caractersticas de las isoformas BPAG1a y BPAG1b son la
presencia de un dominio de repeticin de espectrina y un dominio de unin a microtbulos en su extremo
C-terminal. La isoforma BPAG1b, que se expresa en el corazn y en el msculo estriado esqueltico,
contiene adems un dominio PRD.

Los dominios PRD de BPAG1 son los responsables de la interaccin con los filamentos intermedios, si
bien todava no est muy clara su especificidad para diferentes tipos de filamentos intermedios. En algn
caso los datos de investigacin sugirieron que BPAG1n interacciona con neurofilamentos, ya que el
dominio PRD inmunoprecipitaba con protenas de neurofilamentos. Otro grupo de investigacin observ
que la protena de neurofilamentos denominada periferina interacciona con el extremo C-terminal de la
BPAG1. Experimentos ms recientes mostraron una interaccin entre el dominio C-terminal de BPAG1 y
heterodmero de queratina K5/14 pero no entre dicho dominio y el heterodmero de queratina K8/18 o la
vimentina, lo que contrasta con el amplio espectro de unin de las desmoplaquinas con dichas protenas
de filamentos intermedios. Esta diferencia en el repertorio de uniones de BPAG1 y de las desmoplaquinas
refleja el amplio conjunto de filamentos intermedios con los que las desmoplaquinas se unen in vivo en
los desmosomas de corazn, meninges y epitelios simple y complejo.

2.3) Plectina
La plectina y la IFAP300 fueron identificadas independientemente a partir de clulas ricas en filamentos
intermedios cultivadas en el laboratorio, y junto con la protena hemidesmosomal 1 (abreviadamente
HD1), recientemente se ha demostrado que son protenas idnticas. La plectina es una plaquina presente
en una amplia variedad de tejidos y clulas. Es una plaquina muy verstil por cuanto que acta como
conector entre todas las redes de filamentos del citoesqueleto de clulas no musculares, as como protena
de anclaje en estructuras especializadas de la membrana plasmtica como los hemidesmosomas, los
desmosomas, los discos intercalados, los costmeros y las bandas Z de las sarcmeras del msculo
estriado. En epitelios complejos la plectina se concentra en el estrato celular ms basal, lo que constituye
un claro reflejo de su localizacin en hemidesmosomas. Su importancia en estas estructuras ha sido
puesta de manifiesto tanto por mutaciones inducidas en el laboratorio como por mutaciones naturales que
8

afectan a la integridad de los hemidesmosomas. Pero la plectina tambin es un constituyente importante

de los desmosomas, donde su presencia puede ser debida en parte a las ya demostradas interacciones con
las desmoplaquinas. No obstante, la funcin de la plectina en los desmosomas todava no se entiende muy
bien, y los pacientes con mutaciones que afectan a la plectina no muestran evidencias obvias de defectos
desmosomales.

El cDNA de la plectina en humanos y en ratas codifica para un polipptido de aproximadamente 4600

aminocidos de longitud con una masa molecular de aproximadamente unos 500 kDa. Los estudios
estructurales llevados a cabo indican que, al igual que otras plaquinas epiteliales, la plectina consta de 2
dominios globulares terminales y un dominio central en hlice . Este dominio central est flanqueado
por un extremo N-terminal con un dominio de plaquina, y por un extremo C-terminal con 6 dominios
PRD. Al igual que las desmoplaquinas, la plectina presenta un dominio GSR terminal muy conservado
que interacciona con los microtbulos (algo que no sucede en el caso de las desmoplaquinas). El hecho de
que la plectina pueda asociarse con actina, microtbulos y filamentos intermedios ha llevado a concluir
que la plectina, desde el punto de vista funcional, integra todos los componentes estructurales del
citoesqueleto celular, tal y como demuestran muy grficamente los puentes de plectina que unen
filamentos intermedios, microtbulos y microfilamentos de actina, puentes fcilmente observables con el
microscopio electrnico.

Ciertos estudios han examinado en detalle el papel de secuencias especficas de la plectina en lo

concerniente a la unin a elementos del citoesqueleto. El dominio C-terminal de la plectina est
constituido por seis PRD e incluye una regin bien conservada en el quinto dominio PRD. Esta regin
comprende puntos de unin a la vimentina y a las queratinas K8/18, tal y como han demostrado los
ensayos de unin in vitro de tipos salvajes y mutantes de fragmentos de plectina en clulas cultivadas. La
plectina tambin se une a las protenas de los tres tipos de neurofilamentos, a la GFAP y a la lamina B. Al
igual que ocurra en las desmoplaquinas, la fosforilacin de la plectina regula su asociacin con diversos
filamentos intermedios. As, la fosforilacin catalizada por protena quinasas A y C reduce la unin de la
plectina con la lamina B, mientras que la interaccin con la vimentina es potenciada por la fosforilacin
de la plectina catalizada por la protena quinasa A.

El dominio ABD del extremo N-terminal de la plectina muestra la misma afinidad por la actina que en
otras protenas de unin a actina. Este dominio ABD y los dominios de plaquina estn tambin
implicados en la unin a 4 integrina, unin que compite con la unin del dominio ABD con la actina. Se
ha encontrado un sitio de unin a 4 integrina en el dominio PRD, y el anlisis cristalogrfico por rayos X
del dominio ABD ha revelado que este dominio est plegado de forma similar a la observada en otros
dominios ABD. La estructura de este dominio ABD experimenta un cambio conformacional al unirse a la
9

actina, pero no al unirse a la 4 integrina. Esta observacin puede ayudar a explicar la competencia entre
las uniones de la plectina a F-actina y 64 integrina. Un estudio llevado a cabo por Sevcik y
colaboradores en 2004 inform de un sitio adicional de unin a vimentina en el primer dominio CH de la
plectina. Esta regin muestra una acusada homologa con la fimbrina, otro dominio CH presente en
IFAPs, tal y como veremos ms adelante. A diferencia del sitio de unin a filamentos intermedios del
extremo C-terminal, este sitio de unin a vimentina del extremo N-terminal no se une a filamentos
intermedios de vimentina, tal y como han demostrado experimentos de co-sedimentacin in vitro.
Basndose en esta informacin, los autores han propuesto que este sitio adicional de unin a filamentos
intermedios del extremo N-terminal de la plectina sea un regulador de la dinmica de la red de filamentos
intermedios, ms que un estabilizador de dicha red.

El gen de la plectina contiene ms de 40 exones que rodean alrededor de 32 kb en el cromosoma 15.

Cuando se transcribe, este da lugar a un trnscrito primario inusualmente complejo que codifica para las
muchas isoformas de la plectina. Dichas isoformas se obtienen por splicing diferencial y presentan
diferencias en cuanto al tipo de clulas y tejidos en los que estn presentes, as como en cuanto al estado
del desarrollo durante el que aparecen. Tales diferencias presumiblemente reflejan las mltiples y
diversas funciones de la plectina. A nivel celular, algunas isoformas de la plectina se alinean con fibras de
actina en clulas cultivadas. Otras isoformas de la plectina, en cambio, muestran diferentes patrones de
disposicin. Por ejemplo, la isoforma 1f de la plectina se localiza en los contactos focales en fibroblastos
y en clulas endoteliales, donde ancla los filamentos intermedios a la membrana plasmtica.

Tal y como se describi anteriormente, tanto el dominio C-terminal como el dominio N-terminal de la
plectina se unen a la cola citoplasmtica de la 4 integrina de los hemidesmosomas. La importancia de la
plectina en la estructura y la funcin de los hemidesmosomas se pone de manifiesto por las consecuencias
de su ausencia tanto en humanos como en ratones. Aunque la plectina es prescindible para la formacin
de los hemidesmosomas, su ausencia tiene efectos devastadores sobre la piel debido a la perturbacin que
dicha ausencia produce en los hemidesmosomas. Pero adems, tanto ratones como seres humanos
carentes de plectina manifiestan deficiencias musculares, lo que no es sorprendente habida cuenta de que
la plectina es un componente de los discos Z del msculo estriado esqueltico, de los discos intercalados
del msculo cardaco y de las placas densas de las clulas del msculo liso. Es ms, en el msculo
estriado esqueltico la plectina no slo une la desmina a los discos Z, sino que tambin juega un
importante papel en la extensin de la red de filamentos intermedios de desmina hacia las placas densas
costamricas, donde se une a la vinculina a travs de la actina. En 1999, Fuchs y colaboradores
descubrieron que la isoforma de plectina predominante en el msculo contena el exn 2 y presentaba
mayor capacidad de unin con la actina que las isoformas carentes de dicho exn.

10

Ms recientemente se ha propuesto que la principal funcin de la plectina es la de andamio de

sealizacin. Trabajando con levaduras se descubri la protena de anclaje de la protena quinasa C,
denominada RACK1. Se demostr que EGF (siglas en ingls del factor epidrmico de crecimiento)
estimulaba la formacin de un complejo plectina-RACK1-PKC. Los autores concluyeron que la plectina
secuestraba a RACK1 en el citoesqueleto en clulas no inducidas por EGF y la trasladaba a otros puntos
de la clula (se cree que determinados sitios de la membrana plasmtica) en respuesta a la induccin por
EGF.

2.4) Envoplaquina y periplaquina

La envoplaquina y la periplaquina fueron inicialmente identificadas como dos substratos de la enzima
transglutaminasa, de 210 y de 195 kDa respectivamente, que se expresaban a alto nivel durante la
diferenciacin de los queratinocitos y participaban en la formacin de la envoltura crnea de estas clulas.
Inicialmente se crea que la envoplaquina y la periplaquina slo estaban presentes en tejidos epiteliales
complejos, pero no en epitelios simples ni en tejidos parenquimticos y tejido cardaco. Sin embargo, varios
estudios recientes parecen sugerir que la periplaquina tambin se expresa en epitelios simples.

Al igual que otros miembros de la familia de las plaquinas presentes en epitelios, la envoplaquina y la
periplaquina constan de un extremo N-terminal con un dominio de plaquina, una regin central en hlice y
un extremo C-terminal. Sin embargo, en contraste con otras plaquinas, tanto la envoplaquina como la
periplaquina muestran un dominio C-terminal relativamente corto. La envoplaquina contiene el llamado
dominio de unin seguido de un dominio PRD, mientras que la periplaquina slo contiene el susodicho
dominio de unin. Tambin en contraste con otros miembros de la familia de las plaquinas, la distribucin
de residuos cidos y bsicos observada en la regin central en hlice de la envoplaquina y de la
periplaquina sugiere que ambas plaquinas no slo son capaces de formar homodmeros, sino tambin
heterodmeros. Esta afirmacin se sustenta en estudios de co-inmunoprecipitacin que muestran que ambas
plaquinas pueden formar un complejo. Anlisis bioqumicos recientes demostraron la formacin de
complejos solubles de envoplaquina y periplaquina en condiciones de estequiometra equimolar, y revelaron
que la solubilidad de la envoplaquina requiere la presencia de periplaquina. Anlisis bioqumicos
adicionales y estudios de microscopa electrnica realizados en 2004 demostraron que la forma soluble del
complejo formado por envoplaquina y periplaquina es un dmero, y que estas dos plaquinas pueden formar
oligmeros de mayor tamao.

Tanto la envoplaquina como la periplaquina han sido localizadas en los desmosomas, si bien su distribucin
es diferente. Se ha demostrado que envoplaquina y periplaquina participan en el andamiaje de la envoltura
11

crnea de los queratinocitos, siendo enzimas transglutaminasas las que catalizan su conversin en puentes
de unin con las protenas de los desmosomas y de la envoltura crnea de queratinocitos adyacentes, as
como con lpidos. Se ha demostrado que tanto la propia periplaquina como los oligmeros de envoplaquina
y periplaquina unen vesculas de lpidos sintticas similares en composicin a la cara citoplasmtica de la
membrana plasmtica de las clulas eucariotas. Estas observaciones permiten afirmar que, aparentemente, el
papel de estas plaquinas es la de protenas de andamiaje para la formacin de la envoltura crnea de los
queratinocitos.

Pese a su corto extremo C-terminal, la envoplaquina y la periplaquina aparecen asociadas con filamentos
intermedios cuando se co-expresan en las clulas, y esta propiedad depende de sus dominios de unin.
Estudios realizados en 2002 demuestran el papel de la periplaquina (que no de la envoplaquina) como
ligando en asociacin directa con queratina K8 y vimentina. Se ha propuesto que la periplaquina podra
estabilizar la interaccin de la envoplaquina con la red de filamentos intermedios. La periplaquina tambin
es necesaria para el confinamiento de la envoplaquina en los lugares de unin clula-clula y, adems,
presenta un dominio en su extremo N-terminal que facilita su asociacin con el citoesqueleto de actina.
Dado que ni la envoplaquina ni la periplaquina muestran un dominio ABD en su extremo N-terminal,
todava subsiste la pregunta acerca de cmo se asocian ambas plaquinas. Sin embargo, un estudio reciente
ha identificado a una nueva protena que podra participar en la asociacin de la periplaquina y la
envoplaquina y en el anclaje de la periplaquina a la actina.

Al igual que otros miembros de la familia de las plaquinas, existen anticuerpos contra la envoplaquina y la
periplaquina. Dichos anticuerpos estn presentes en el organismo humano en personas afectadas de la
enfermedad denominada pnfigo paraneoplsico, una enfermedad autoinmune de la piel y las mucosas
caracterizada por la formacin de grandes ampollas y la consiguiente destruccin de tejidos (se dice
neoplsica porque la mayora de las personas que la padecen, padecen tambin un cncer del tipo sarcoma,
linfoma o leucemia). No est muy claro el papel que envoplaquina y periplaquina juegan en el desarrollo de
enfermedades como el susodicho pnfigo paraneoplsico. Experimentos realizados en 2004 revelaron que,
mientras que ratones carentes de periplaquina no lo manifestaron claramente en su fenotipo, la eliminacin
del gen de la envoplaquina conduca a un fenotipo caracterizado por un retraso en la formacin de la
envuelta crnea de los queratinocitos. Este fenotipo contrasta con el fenotipo que presentan animales
deficientes en desmoplaquina o actina. Por ello, se cree que tanto la envoplaquina como la periplaquina
funcionan en coordinacin con otras protenas que contribuyen a compensar los efectos de la ausencia de
estas dos plaquinas.

12

2.5) Epiplaquina
La epiplaquina es un miembro inusual de la familia de las plaquinas codificado por un exn
extraordinariamente corto (unas 20 kb). Es una protena constituida por 16 dominios PRD unidos entre s
por secuencias intermedias de aminocidos.

La epiplaquina fue originalmente identificada en tejidos epiteliales a partir de sus anticuerpos en pacientes
con una afeccin autoinmune de la piel. Aunque parece tener un papel en la unin de filamentos
intermedios, todava se est muy lejos de caracterizar la funcin de este nuevo miembro de la familia de las
plaquinas.

3) INTERACCIONES ENTRE SUPERFICIE CELULAR Y FILAMENTOS INTERMEDIOS

Las plaquinas no son las nicas protenas capaces de unir filamentos intermedios a la superficie celular.
Cierto nmero de otras protenas localizadas en estructuras de la superficie celular (como los desmosomas,
los contactos focales y los costmeros musculares) contribuyen tambin al anclaje de los filamentos
intermedios a la membrana plasmtica. Los filamentos intermedios tambin pueden asociarse con
receptores de la superficie celular situados fuera de las estructuras especializadas mencionadas
anteriormente. Estos aspectos son los que analizaremos a continuacin.

3.1) Protenas desmosomales

3.1.1) Protenas de armadillo: placofilinas y placoglobina

Las placofilinas y la placoglobina son miembros de una gran familia de protenas de unin y sealizacin
del armadillo, un mamfero acorazado de la familia Dasypodidae muy comn en toda Latinoamrica y en
el sur de los Estados Unidos. Dicha familia de protenas est codificada por la familia de genes de
polaridad segmentaria del armadillo, muy similar a las familias de genes de polaridad segmentaria
encontradas en invertebrados como Drosophila. En esta familia, adems de las mencionadas placofilinas
y placoglobina, estn incluidas otras protenas importantes por su papel en las uniones entre clulas. Cabe
citar a la -catenina, una protena con un papel clave como adaptador en las uniones adherentes y como
efector de la va de sealizacin Wnt/wingless, responsable tanto del patrn de desarrollo de Drosophila
como del destino de las clulas en vertebrados. El dominio central de la -catenina consiste en una serie
de 12 repeticiones imperfectas, denominadas repeticiones armadillo, que proporcionan un andamiaje para
13

la interaccin con otras molculas de unin responsables de la estructura de las uniones clula-clula, as
como para la regulacin de la expresin de determinados genes a nivel de transcripcin. Adems de la
susodicha -catenina, en esta familia de protenas se incluye tambin a la catenina p120.
La placoglobina es muy similar a la -catenina, y forma parte tanto de las uniones adherentes como de los
desmosomas. Su dominio armadillo central se une a las cadherinas desmosomales, mientras que sus
cortos extremos N-terminal y C-terminal tienen una funcin reguladora y cuentan con varios sitios de
fosforilacin que son parte importante de dicha funcin reguladora. En concreto, la funcin del extremo
C-terminal es la de regular el tamao del desmosoma. La delecin de dicho extremo C-terminal da lugar a
la formacin de desmosomas de mayor tamao por extensin lateral.

Estrictamente hablando, la placoglobina no se considera una protena de unin directa a filamentos

intermedios, si no ms bien una protena de unin indirecta a filamentos intermedios a travs de sus
repeticiones armadillo con las que se une a la IFAP desmoplaquina. Sin embargo, estudios in vitro
recientes sugieren que la placoglobina se une dbilmente a queratinas epidrmicas, por lo que en tales
casos esta protena podra contribuir directamente a la unin de filamentos intermedios,
En cuanto a las placofilinas (abreviadamente PKPs por sus siglas en ingls), existen muchos datos que
constatan una interaccin de estas protenas con los filamentos intermedios. Las placofilinas se
consideran una subfamilia de protenas armadillo, ya que todas ellas son muy similares en estructura a la
protena catenina p120 de las uniones adherentes. Existen tres grandes PKPs desmosomales: la PKP1, la
PKP2 y la PKP3. Estas PKPs muestran claras diferencias en cuanto al tipo de clulas y tejidos en los que
se distribuyen, as como en las molculas que regulan su actividad, aunque todas ellas tienen en comn
que se asocian con protenas desmosomales como la placoglobina, la desmoplaquina y las cadherinas. Al
igual que otras protenas armadillo, las PKPs se localizan tanto en las uniones entre clulas como a nivel
del ncleo celular, aunque su funcin en el ncleo no es todava bien conocida. A diferencia de la
placoglobina, todos los sitios de unin de las PKPs a protenas desmosomales se extienden ms por el
dominio N-terminal que por el dominio armadillo central.

La PKP1, tambin llamada Banda 6 de una preparacin de desmosomas, fue inicialmente identificada
como una protena de unin a queratina, siendo posterior su identificacin como miembro de la familia de
protenas armadillo. Estudios in vitro realizados recientemente con levaduras han demostrado que PKP1 y
PKP2 se unen a queratinas epidrmicas y, en algunos casos, tambin a vimentina. En particular, la PKP1
se une vidamente a filamentos intermedios de queratinas K8/18 y K5/14, vimentina y desmina
sintetizados in vitro, facilitando as la formacin de haces de filamentos intermedios. Por su parte, la
PKP3 se asocia con queratina K18. El sitio de unin a filamentos intermedios en la estructura de las PKPs
14

parece ser el dominio N-terminal, hecho que suscita una cuestin todava no aclarada: cmo puede este
dominio de las PKPs unirse al mismo tiempo a ultraestructuras de la membrana plasmtica y a los
filamentos intermedios? Es ms, la relevancia fisiolgica de estas interacciones ha sido cuestionada por el
hecho de que las PKPs normalmente no se ven asociadas a filamentos intermedios en las clulas vivas, y
su posicin en la placa desmosomal sugiere que podran ser inaccesibles para los filamentos intermedios.
No obstante, trabajos realizados por Norgett en 2000 y por Vasioukhin en 2001 han sugerido que en
clulas mutantes deficientes en desmoplaquina, las PKPs podran ser las responsables de la unin de
filamentos de queratina a la placa desmosomal.

3.1.2) Pinina
La pinina fue identificada como una protena de 140 kDa que se expresa ampliamente en tejidos
epiteliales, tejido cerebral y tejido cardaco, incorporndose a los desmosomas maduros cerca de donde
los filamentos de queratina interaccionan con la placa de adhesin desmosomal. Estudios in vitro
realizados con levaduras han demostrado que el dominio N-terminal de la pinina interacciona con las
queratinas K18, K8 y K19. Otra protena de 140 kDa, similar a la lamina B e identificada a principios de
la dcada de los 90 en preparaciones de desmosomas de tejido bovino, se une a la vimentina en ensayos
realizados in vitro. Se ha intentado relacionar esta protena con la pinina, pero hasta el momento no se ha
conseguido hallar una relacin clara entre ambas.

3.1.3) Desmocalmina y queratocalmina

La desmocalmina es una protena bovina equivalente a la protena humana denominada queratocalmina.
Fue identificada como una protena desmosomal a mediados de la dcada de los 80. Cientficos japoneses
comprobaron que se una tanto a la calmodulina en presencia de Ca2+ como a filamentos de queratina
ensamblados in vitro en presencia de Mg2+. Desgraciadamente, la prdida de reactivos clave ha impedido
esclarecer hasta ahora el papel de estas protenas en la regulacin de la unin de filamentos intermedios.
Queda, pues, mucho trabajo por hacer para determinar el papel de la desmocalmina y de la
queratocalmina en el ensamblaje de los desmosomas.

3.2) Policistina-1

La policistina-1 es una protena que se expresa ampliamente y que presenta mutaciones en muchos
pacientes afectados de enfermedad renal poliqustica dominante (un trastorno hereditario que se
caracteriza por la formacin de quistes en los riones que hacen que stos se agranden, alterndose la
15

funcin renal y apareciendo un cuadro de insuficiencia renal con hipertensin arterial crnica secundaria).
La mutacin de la policistina-1 interfiere la diferenciacin normal de las clulas epiteliales de los tbulos
renales, dando como resultado la formacin de quistes en los riones. Pese a que los mecanismos
moleculares que subyacen a la enfermedad renal poliqustica dominante todava estn poco estudiados, se
sabe que el dominio C-terminal de la policistina-1 est implicado en la regulacin tanto de la va de
sealizacin Wnt/wingless (mediante la estabilizacin de la -catenina) como de la sealizacin de
protenas G (mediante la estabilizacin del regulador de protenas G denominados RGS7, que
normalmente es degradado con rapidez en los proteosomas).

Estudios in vitro realizados en 2001 permitieron identificar a las queratinas K8/18, a la vimentina y a la
desmina como protenas a las que se une la policistina-1. Se vio que las interacciones entre policistina-1 y
filamentos intermedios estaban mediadas por determinadas regiones de ambos. Adems de la asociacin
con filamentos intermedios, la policistina-1 tambin se encuentra en desmosomas asociados a dichos
filamentos intermedios, donde forma un complejo con E-cadherina y -catenina en las clulas renales.
Esta ltima interaccin aparece daada en las clulas de pacientes afectados de enfermedad renal
poliqustica, al parecer debido a un notable incremento de la fosforilacin de la policistina-1. La
policistina-1 tambin se encuentra en los contactos focales, donde est estrechamente asociada con la
integrina 21. Todava no est claro cmo la policistina-1 utiliza el andamiaje del citoesqueleto celular
para situarse y llevar a cabo su funcin reguladora, as como si las interacciones entre la policistina-1 y
dicho andamiaje estn involucradas en la enfermedad renal poliqustica. Ambas son cuestiones todava
por resolver.

3.3) Asociacin de filamentos intermedios con la regin cortical rica en actina

Un gran nmero de clulas se caracterizan por poseer una regin cortical rica en actina y en protenas de
unin a actina. La funcin de tales protenas en la motilidad, en el mantenimiento de la morfologa celular
y en la distribucin de otras protenas de membrana en las clulas polarizadas es muy importante. En
algunos casos, existen estructuras discretas que anclan la actina a la membrana, como ocurre en el caso de
las uniones intercelulares adherentes y en los contactos focales entre clulas y substrato. Aunque varios
estudios morfolgicos han descrito una estrecha asociacin de los filamentos intermedios con la actina
cortical, los recientes avances en el estudio de las interacciones entre protenas estn proporcionando un
mayor entendimiento tanto a nivel estructural como a nivel funcional de las relaciones entre filamentos
intermedios y la susodicha regin cortical rica en actina.

16

3.3.1) Contactos focales

Los fibroblastos y las clulas endoteliales no forman hemidesmosomas. En su lugar presentan estructuras
adherentes denominadas contactos focales. Los componentes pivotantes de los contactos focales son
integrinas heterodimricas que se unen a un gran nmero de molculas incluyendo fibronectina,
vitronectina y lamininas. Tradicionalmente se ha venido considerando que las integrinas se asociaban con
filamentos citoplasmticos de actina a travs de determinadas protenas de unin. Sin embargo, varias
investigaciones recientes indican que los contactos focales tambin se asocian con la red de filamentos
intermedios de vimentina. Pese a que no se ha demostrado con claridad todava, se cree que la plectina
(en particular la isoforma 1f) podra ser la protena que une los contactos focales con los filamentos
intermedios de vimentina. Tambin se ha apuntado a la protena MICAL como otro candidato potencial a
unir filamentos intermedios de vimentina y candidatos focales. La MICAL es una protena de interaccin
de la familia Cas, cuyos miembros son protenas de acoplamiento involucradas en la sealizacin de la
integrina en un amplio abanico de procesos celulares. Su expresin es particularmente importante en las
clulas T y en las clulas B, as como en los epitelios. Tambin se la ha encontrado en fibroblastos y en
contactos focales de clulas adherentes.

Existen en las clulas no epiteliales estructuras adhesivas asociadas a filamentos intermedios de

vimentina equivalentes a los hemidesmosomas de clulas epiteliales? Hay evidencias que permiten
responder afirmativamente a esta pregunta. As, aunque los ratones deficientes en vimentina no muestran
defectos obvios en el desarrollo, las clulas derivadas de estos ratones si muestran varios defectos. Los
defectos en la curacin de heridas en ratones deficientes en vimentina parecen ser debidos a fallos en la
contraccin del colgeno mesenquimtico. Los fibroblastos deficientes en vimentina presentan unas
deficientes estabilidad mecnica, motilidad y migracin direccional, lo que sugiere que la prdida de la
vimentina induce una organizacin aberrante de los contactos focales. Experimentos realizados con
cultivos de clulas endoteliales deficientes en vimentina dieron como resultado una apreciable
disminucin del tamao de los contactos focales, incluso aunque los microfilamentos y los microtbulos
no mostrasen irregularidades obvias. Adems, las clulas de vimentina mostraron una baja adhesin al
substrato. Estas observaciones sugieren que los filamentos de vimentina podran regular la adhesin
celular de forma similar a las queratinas, que estabilizan la adhesin de los hemidesmosomas a la
membrana basal.

17

3.3.2) Anclaje de los filamentos intermedios a la superficie de las clulas musculares

En el msculo estriado, tanto esqueltico como cardaco, la red de filamentos intermedios de desmina
forma un entramado que rodea a las miofibrillas. Los filamentos paralelos unen discos Z dentro de las
miofibrillas, mientras que los filamentos transversales unen miofibrillas a nivel de los discos Z. Adems,
los filamentos intermedios transversales se extienden ms all de la membrana plasmtica (sarcolema),
interaccionando con unas estructuras corticales denominadas costmeros, que actan como sitios de
transmisin de la fuerza generada por la contraccin de las fibras musculares. Los costmeros son
estructuras corticales densas que comprenden numerosas protenas y que estn alineadas
circunferencialmente con los discos Z de miofibrillas adyacentes. Estas estructuras unen las sarcmeras
con la membrana plasmtica. La red de desmina es crtica para el mantenimiento de la estructura
muscular y su funcionamiento, y cualquier mutacin que provoque deficiencia o falta de esta protena
conducir indefectiblemente a la cardiomiopata y a la distrofia muscular.

Los costmeros han sido comparados con los contactos focales que unen la actina a la membrana
plasmtica en los fibroblastos. Al igual que los contactos focales, los costmeros contienen protenas
asociadas a actina como la vinculina, la talina, la espectrina y la anquirina. Adems, los costmeros
actan como integradores de los filamentos intermedios del citoesqueleto de las fibras del msculo
estriado. En el msculo liso, placas de material denso forman estructuras filiformes que, agrupadas en
haces, proporcionan sitios de anclaje para la actina y para los filamentos intermedios de desmina, al igual
que los costmeros en el msculo estriado. Una estructura clave localizada en los costmeros es el
llamado complejo de protenas asociadas a distrofina (abreviadamente DPC por sus siglas en ingls), un
conjunto de protenas estructurales y de sealizacin de importancia crtica para el mantenimiento de la
integridad mecnica del msculo. Los genes que codifican para estas protenas suelen sufrir mutaciones
que provocan un amplio abanico de distrofias musculares. La protena -distrobrevina es un componente
clave en la coordinacin entre la porcin especfica de filamentos intermedios del costmero y el DPC.

Las distrobrevinas son una pequea familia de protenas relacionadas con la distrofina. Estn codificadas
por dos genes. Uno de ellos, el gen de la -distrobrevina, codifica para al menos tres protenas que se
expresan en el msculo estriado, tanto cardaco como esqueltico. La -distrobrevina es un componente
clave del DPC, y su prdida conduce a la aparicin de defectos neuromusculares y a una grave distrofia
muscular. La -distrobrevina es una protena citoplasmtica unida indirectamente a componentes
transmembrana glicosilados a travs de la distrofina y otros componentes del DPC. Recientemente se han
descubierto dos nuevas protenas de filamentos intermedios del tipo IV, la sincoilina y la desmuslina, que
parecen estar asociadas con la -distrobrevina.
18

La sincoilina se expresa a alto nivel en el msculo estriado cardaco y esqueltico, y se localiza en las
uniones neuromusculares, en el sarcolema y en las bandas Z. Asimismo, la desmuslina se expresa tambin
en el msculo cardaco y en el msculo esqueltico, aunque slo se encuentra en las bandas Z. Se ha
observado que la sincoilina y la desmina interaccionan directamente una con otra, pero no forman
filamentos. De hecho, las evidencias sugieren que la sincoilina no participa para nada en la formacin de
filamentos intermedios. Se ha propuesto la hiptesis de que la sincoilina participa en el anclaje de la red
de filamentos intermedios de desmina al sarcolema y a las uniones neuromusculares. Un estudio con
pacientes con cardiomiopata relacionada con una acumulacin de desmina mostraron tambin una
acumulacin de sincoilina y de otros componentes del DPC. Estos defectos estaban relacionados con la
desaparicin tanto de -distrobrevina como de la enzima NO sintasa neuronal de la membrana. Los
autores del estudio sugirieron que la interaccin -distrobrevina-sincoilina-desmina podra ser un factor
clave para la prdida de la -distrobrevina de la membrana y la subsecuente prdida de la NO sintasa
neuronal, contribuyendo as a la isquemia.

La secuencia de la desmuslina es similar a la de la sinemina, una protena de unin a desmina

inicialmente identificada como una IFAP, pero que actualmente, por comparacin con las secuencias de
otras protenas, se considera una protena de filamentos intermedios. La similitud de secuencias entre la
desmuslina y la sinemina permite plantear la posibilidad de que la desmuslina es una homloga humana
de la sinemina. Las dos isoformas de sinemina que se conocen, denominadas -sinemina y -sinemina,
derivan de un mismo gen por splicing diferencial. Recientemente se ha identificado una tercera isoforma
en la especie humana. La -sinemina es la isoforma predominante en el msculo estriado, donde se
localiza con los costmeros y las bandas Z, y es particularmente abundante en las uniones
neuromusculares y miotendinosas. Los niveles de -sinemina y -sinemina en el msculo liso son, por el
contrario, similares. La sinemina interacciona tambin con la protena costamrica vinculina y con la
protena de las bandas Z -actinina. De esta manera, desmuslina y sinemina parece que colaboran en la
unin de los filamentos intermedios de las clulas musculares con las bandas Z y los costmeros de la
membrana plasmtica de las fibras musculares.

Ciertas mutaciones naturales que afectan al DPC en humanos estn ayudando a conocer determinadas
funciones de este complejo proteico asociado a filamentos intermedios. Por ejemplo, mientras que el
desmantelamiento de la distrofina conduce a una distrofia muscular acompaada de daos en el
sarcolema, la eliminacin de la -distrobrevina da como resultado una distrofia muscular acompaada de
mnimos daos en la membrana. Aunque muchas de estas diferencias todava no se entienden muy bien,
se ha propuesto que la interaccin entre -distrobrevina y la red de filamentos intermedios est
involucrada en la transmisin lateral de la fuerza contrctil del msculo a travs de los costmeros,

19

mientras que otros componentes del DPC se encargan de mantener la integridad mecnica de la
membrana frente a la tensin.

En el caso del msculo liso, los anclajes de la desmina a las placas densas juegan un papel crtico en la
regulacin de la transmisin de la fuerza contrctil en este tipo de tejido. Este es de especial relevancia si
se tiene en cuenta los defectos observados en el msculo de ratones deficientes en desmina, en los cuales
la fuerza por unidad de rea de seccin transversal se reduce un 40% aproximadamente. Las IFAP
candidatas a actuar como ligandos entre la desmina y las placas densas en el msculo liso son la plectina
y otros componentes de la regin cortical rica en actina, incluyendo la calponina y el complejo formado
por la espectrina y la anquirina, del que nos vamos a ocupar en el siguiente apartado.

3.3.3) Espectrina y anquirina

Junto con la plectina y otras protenas de dominios ABD, la anquirina y la espectrina tambin parecen
contribuir a unir los filamentos intermedios a la regin cortical rica en actina tanto en clulas musculares
como en clulas no musculares. Los primeros estudios realizados sobre la anquirina y la espectrina
apuntaron a estas protenas como potenciales IFAP. Pero hay que tener en cuenta que en estos estudios se
llevaron a cabo antes de empezar a utilizar protenas recombinantes, y en muchos de ellos se utilizaron
preparaciones purificadas que, en mayor o menor grado, podan estar contaminadas con otras molculas
intermediarias, por lo que sus resultados no son fiables. As, en 1984 Mangeat y Burridge atribuyeron la
condicin de IFAP a la fodrina (una variante de la espectrina) basndose en la observacin de que la
microinyeccin de un anticuerpo contra la espectrina produca una alteracin del contenido y la
distribucin de filamentos intermedios de vimentina en fibroblastos. Claro que, caba la posibilidad de
que las interacciones entre filamentos intermedios y espectrina fuese indirecta, tal y como Wiche sus
colaboradores demostraron 3 aos despus, determinando que la plectina era la IFAP intermediaria entre
las redes de filamentos intermedios de vimentina y la espectrina. En 1986, Langley y Cohen, a partir de
experimentos de co-sedimentacin in vitro de espectrina eritrocitaria y filamentos intermedios de
desmina, atribuyeron a la espectrina la condicin de IFAP. Pero la microscopa electrnica demostr que
la interaccin de los filamentos intermedios de desmina tena lugar con unas vesculas eritrocitarias, por
lo que era plausible que un contaminante como la anquirina mediase las interacciones entre la espectrina
y la desmina. Un ao despus, lejos de desanimarse, Langley y Cohen sugirieron, basndose en nuevos
experimentos in vitro, que las espectrinas presentaban cierta afinidad con filamentos intermedios de
vimentina y neurofilamentos. Experimentos posteriores confirmaron que, en efecto, la subunidad de la
espectrina cerebral interacciona con neurofilamentos NF-L. En esta ocasin, Langley y Cohen se haban
esforzado en comprobar que sus preparaciones de espectrina no estaban contaminadas con otros
componentes como la anquirina, evitando as repetir el error del experimento anterior.
20

En aparente contradiccin con estos resultados, Georgatos y Marchesi demostraron en 1985 que la
vimentina sin polimerizar era capaz de unirse a vesculas eritrocitarias despojadas de actina y espectrina.
La eliminacin de la anquirina, una protena que une complejos de actina y espectrina a la membrana
eritrocitaria, produjo un considerable descenso del grado de unin entre la vimentina y dichas vesculas.
Estos investigadores demostraron que las subunidades de filamentos de vimentina se asocian con la
membrana plasmtica de eritrocitos a travs de dominios de unin N-terminales. Esta interaccin
involucra a la sinemina.

Trabajos ms recientes sugieren que una protena 4.1, la protena 4.1R podra asociarse con protenas de
neurofilamentos en la regin postsinptica. Utilizando la tcnica del inmunoblot se demostr que, adems
de la actina y la espectrina, los polipptidos postsinpticos incluyen protenas NF-L y -internexina
interaccionando con 4.1R.

En conjunto, estos estudios ponen de manifiesto la gran variedad de molculas que en los diferentes tipos
celulares aparecen relacionadas con la actina y las protenas de filamentos intermedios, as como el modo
tan complejo en el que se relacionan con stas para el mantenimiento de la estructura y funciones del
citoesqueleto.

4) OTRAS IFAPs NO PERTENECIENTES A LA FAMILIA DE LAS PLAQUINAS

4.1) Asociacin de filamentos intermedios con la regin cortical rica en actina

En contraste con la familia de protenas que unen filamentos intermedios a otros elementos del
citoesqueleto, las protenas que ligan entre s filamentos intermedios son menos variadas y parecen
limitarse a las protenas asociadas a la queratina, como la filagrina y la tricohialina.

4.1.1) Filagrina
La filagrina fue identificada a principios de la dcada de los 80 como una protena bsica, rica en
histidina, abundante en las capas ms superficiales de la piel. Es sintetizada a partir de un precursor muy
fosforilado que se almacena en los grnulos de queratohialina de la capa suprabasal granular de epitelio
queratinizado, lo que incluye tanto la epidermis como la superficie lingual y gingival. Este precursor
forma la llamada profilagrina, constituida por repeticiones en tndem del monmero de filagrina rodeadas
por repeticiones parciales y secuencias no repetitivas. El extremo N-terminal est constituido por un
dominio A con dos sitios de unin a calcio y un dominio B catinico. Se ha propuesto que el dominio A
tiene mltiples funciones diferentes como secuestrador de calcio, facilitando as el proceso calcio
21

dependiente de conversin de profilagrina en filagrina, as como la regulacin de la solubilidad de la

protena, un factor importante para la formacin de los grnulos de queratohialina.

Durante la diferenciacin de los queratinocitos cutneos en un estrato crneo, la profilagrina experimenta

defosforilacin y proteolisis, dando lugar a molculas de filagrina de 37 kDa. Esta filagrina une los
filamentos intermedios de queratina y forma microfibrillas que se disponen en paralelo a la superficie
cutnea. La filagrina interacciona con el dominio en hlice de la queratina y se cree que dicha
interaccin es de naturaleza inica. La asociacin de la filagrina con la queratina facilita la formacin de
puentes disulfuro entre las cadenas polipeptdicas de la queratina durante la remodelacin que tiene lugar
durante la diferenciacin de los queratinocitos cutneos. Experimentos in vitro han demostrado que la
sobreexpresin del monmero de filagrina conduce al colapso de las redes de filamentos intermedios de
queratina y vimentina. La profilagrina, por el contrario, no es capaz de formar agregados de filamentos de
queratina.

La mayor parte de la filagrina es convertida en aminocidos libres al final de la diferenciacin de los

queratinocitos, quedando slo una pequea cantidad como componente del estrato crneo que se forma.
De los aminocidos libres, la arginina es deiminada por la enzima peptidil arginina deiminasa, mientras
que la glutamina es modificada por el compuesto altamente higroscpico conocido como pirrolidona
cido carboxlico. Aunque todava hay cierta controversia al respecto, se ha propuesto que los
aminocidos liberados por la degradacin de la filagrina constituyen un importante factor en el
mantenimiento de la hidratacin del estrato crneo de la piel.

4.1.2) Tricohialina
La tricohialina es una protena de 248 kDa fuertemente cargada que se expresa principalmente en
epitelios especializados como la raz del folculo piloso, adaptado para resistir situaciones de estrs
mecnico. La tricohialina tambin se expresa, aunque en menor cantidad, en las papilas filiformes de la
lengua y en algunas clulas del estrato granular de la piel. La molcula de tricohialina contiene grandes
tramos de secuencias repetidas que forman una larga hlice, de acuerdo con anlisis bioqumicos y de
microscopa electrnica. Al igual que la profilagrina, el extremo N-terminal de la tricohialina comprende
un dominio de unin a iones Ca2+.

Inicialmente, la tricohialina se acumula en grnulos citoplasmticos de las clulas de la raz del folculo
piloso. En algunos casos tambin se han observado tambin grnulos de filagrina. A medida que la
diferenciacin celular avanza, la tricohialina se va asociando con filamentos intermedios en un proceso
dependiente de la deiminacin de residuos de arginina para formar citrulina. Segn se ha comprobado in
22

vitro, esta deiminacin (catalizada por la peptidil arginina deiminasa) hace a la tricohialina ms soluble y
rgida.

Se cree que la tricohialina contribuye a la formacin del andamiaje sobre el que se anclan los filamentos
de queratina a la envoltura crnea de la raz del folculo piloso. Enzimas transglutaminasas catalizan la
formacin de enlaces entre la tricohialina y las protenas de dicha envoltura crnea, entre las que se
incluyen la epiplaquina y protenas de pequeo tamao ricas en prolina. Se ha propuesto que
interacciones inicas entre los filamentos intermedios de queratina y la tricohialina facilitan la interaccin
covalente entre estas dos protenas. De este modo, en las clulas de la raz del folculo piloso la
tricohialina acta como ligando entre la envoltura crnea y los filamentos intermedios de queratina. Por el
contrario, en la mdula del cabello, los filamentos de queratina estn virtualmente ausentes. Por qu
virtualmente? Porque la sntesis de grnulos de tricohialina, al igual que su posterior conversin en
citrulina y la formacin de enlaces con queratina catalizada por transglutaminasas, continan
producindose. De este modo, la queratina y la tricohialina terminan formando una masa slida que
constituye la mdula capilar.

4.1.3) Protenas asociadas a queratina (KAPs)

Las protenas asociadas a queratina (conocidas tambin como KAPs por sus siglas en ingls) constituyen
un amplio grupo de IFAPs que se expresan durante la diferenciacin de clulas del folculo piloso. Las
KAPs se agrupan en tres clusters constituidos por alrededor de 80 protenas diferentes distribuidas en 23
familias. Los pesos moleculares de las KAPs oscilan, en la mayor parte de los casos, entre los 15 y los 25
kDa, si bien algunas tienen un peso molecular inferior a 5 kDa, mientras que otras tienen un peso
molecular superior a 53 kDa. Las KAPs de estas 23 familias son protenas con un alto contenido en
cistena, glicina y tirosina. Por trmino medio, el contenido en cistena de las KAPs oscila entre el 30 y el
36 mol%, mientras que el contenido en glicina y tirosina ronda el 67 mol%. Las secuencias aminoacdicas
de la mayor parte de las KAPs consisten en una nica unidad repetitiva de entre 6 y 48 aminocidos de
longitud. El inicio de la expresin de las KAPs est regulado espacial y temporalmente.

En las microfibrillas del pelo, las KAPs se unen a los haces de queratina entrecruzados que forman la
matriz amorfa que constituye el pelo. El modo en que las KAPs contribuyen a este entrecruzamiento de la
queratina es todava motivo de controversia. Los puentes disulfuro que se forman entre las protenas de la
matriz y entre stas y la queratina parecen jugar un papel en dicho entrecruzamiento. Tambin se ha

23

propuesto que interacciones apolares, como las que tienen lugar entre la glicina y la tirosina (aminocidos
ambos particularmente abundantes en las KAPs) , podran tambin jugar un papel en ese sentido.

Extraamente, los genes pmg-1 y pmg-2 relacionados con las KAPs han sido identificados no slo en los
folculos pilosos cutneos (como era de esperar), sino tambin en las glndulas mamarias, en las
glndulas sebceas y en las glndulas sudorparas. Es por ello que las KAPs parecen jugar un papel
importante en la diferenciacin de mltiples tipos celulares asociados a epitelios.

4.2) Protenas que coordinan con la actina

Varias protenas inicialmente identificadas como protenas de unin a actina han sido recientemente
redescubiertas por su papel en la regulacin del ensamblaje de los filamentos intermedios del tipo III. En
los estudios de este tipo de protenas es de gran inters el papel del llamado dominio homlogo de
calponina (abreviadamente CH por sus siglas en ingls), que tambin juega un papel importante en la
estructura de las plaquinas, y que en el caso de estas protenas parece tener un papel clave en la unin a
los filamentos intermedios. Los estudios llevados a cabo hasta el momento han sugerido la posibilidad de
que los dominios CH potencien el papel de ligando de las plaquinas y de otras protenas no plaquinas que
se unen a actina y a filamentos intermedios.

4.2.1) Calponina
La calponina es una protena de unin a actina ampliamente distribuida y que se cree juega un papel
importante en la contraccin del msculo liso mediante la inhibicin de la actividad ATPasa de la
actomiosina. Su asociacin con los cuerpos densos de las clulas del msculo liso y amplia presencia en
otros tejidos ha llevado a los investigadores a especular sobre los posibles papeles que esta protena
podra jugar en la organizacin del citoesqueleto. Los susodichos cuerpos densos en las clulas del
msculo liso son puntos de anclaje para los filamentos de desmina. Se ha comprobado experimentalmente
que la calponina se localiza y purifica junto con la desmina en dichos cuerpos densos, lo que le confiere
un importante papel en la organizacin de las redes de filamentos intermedios del citoesqueleto. La
calponina co-precipita con desmina, con la que tambin posiblemente forma haces, tal y como parece
sugerir su capacidad in vitro para incorporarse a filamentos intermedios de desmina. Sin embargo, se ha
observado que, en condiciones de baja concentracin inica, la afinidad de la calponina hacia los
tetrmeros de desmina es mayor que hacia los filamentos intermedios. Con todo, la informacin
disponible hasta el momento apunta a la posibilidad de que la calponina acte como puente entre los
filamentos intermedios y la actina en los cuerpos densos de las clulas del msculo liso.
24

4.2.2) Fimbrina

La fimbrina o plastina es una protena formadora de haces de microfilamentos de actina. Est constituida
por un dominio N-terminal que une calcio seguido de tres dominios CH. De las tres isoformas conocidas
de esta protena, la T-fimbrina es la que est ms ampliamente distribuida por los tejidos, mientras que las
isoformas I-fimbrina y L-fimbrina estn restringidas al intestino y a las clulas hematopoyticas
respectivamente. A estas dos isoformas tambin se las ha encontrado en determinados tipos de clulas
tumorales malignas (cancerosas). La L-fimbrina co-inmunoprecipita con vimentina, segn se ha
comprobado con extractos in vitro de macrfagos adherentes. Tambin se ha comprobado que el extremo
N-terminal de la vimentina se une a un residuo especfico del dominio CH1 de la fimbrina. Al igual que
sucede con la calponina y la desmina, la fimbrina interacciona mejor con tetrmeros de vimentina que con
filamentos intermedios de esta protena. La interaccin in vivo de vimentina y fimbrina ha sido observada
en los filopodios de macrfagos cuando se inician los fenmenos de adhesin de los mismos.

4.2.3) Nebulina

Estudios ultraestructurales han sugerido durante mucho tiempo que los filamentos intermedios estn
unidos de alguna manera a las bandas Z en el msculo estriado. Sin embargo, la base molecular de tal
interaccin todava no se ha establecido. Una buena candidata para esta funcin es la protena nebulina,
un componente de los filamentos finos en el tejido estriado (tanto esqueltico como cardaco). La
nebulina cruza desde el extremo final del filamento hasta unirse en el disco Z con la actina, la
tropomiosina y las troponinas. Es por ello que hasta hace poco tiempo se especulaba que las funciones de
la nebulina eran regular la longitud de los filamentos finos y actuar como andamiaje para dichos
filamentos. Sin embargo, datos ms recientes sugieren que la nebulina podra tener funciones adicionales
tanto en transduccin de seales como en la generacin de fuerza contrctil a nivel de las miofibrillas.

Hay varias isoformas de nebulina que se forman por splicing diferencial. El peso molecular de todas ellas
oscila entre los 750 y los 850 kDa. Estas isoformas permiten que las sarcmeras adopten diferentes
estructuras de acuerdo con su funcin. El extremo N-terminal de la nebulina es el que se asocia el
filamento, mientras que el extremo C-terminal es el encargado del anclaje al disco Z. Son ciertos
dominios especficos del extremo C-terminal de la nebulina los encargados de localizar el disco Z y
unirse a la hlice 1B de la desmina. Como la desmina mantiene unidos lateralmente a los discos Z, se
especula que la interaccin entre la nebulina y la desmina contribuye a integrar las miofibrillas con el
sarcolema y otros componentes de las clulas musculares. La importancia de esta interaccin ha sido
25

puesta de manifiesto por la existencia de pacientes con mutaciones que afectan al gen de la nebulina,
causando la patologa llamada miopata nemalina, caracterizada por una prdida progresiva y severa del
tono muscular y el consiguiente debilitamiento de la musculatura de tronco y extremidades.

5) PARTICIPACIN DE LAS IFAPs EN EL ANDAMIAJE DE SEALIZACIN Y EN EL

METABOLISMO CELULAR

Adems del papel meramente estructural, est cada da ms claro que los filamentos intermedios juegan
tambin un importante papel en la regulacin de la actividad metablica, ya que constituyen un andamiaje
para la regulacin dinmica de protenas asociadas como enzimas, adaptadores de seales, molculas de
estrs mecnico y molculas reguladoras de apoptosis celular, entre otras.

5.1) Protenas de estrs y chaperonas

Est claro que un papel importante de los filamentos intermedios, y en particular de los filamentos de
queratina, es el de resistir las fuerzas derivadas del estrs mecnico al que estn normalmente sometidas las
clulas. Sin embargo, los filamentos intermedios tambin juegan un papel en contrarrestar el estrs
metablico derivado del metabolismo celular. Protenas como las queratinas de epitelios simples K8/18, la
vimentina, la desmina, la periferina y la plaquinina aparecen asociadas con miembros de la familia de
protenas de choque trmico, como la B-cristalina.

Se ha comprobado que determinadas formas de estrs son causa de una importante reorganizacin de las
redes de filamentos intermedios de las clulas. Dicha reorganizacin es concomitante con la redistribucin
de la B-cristalina en dichas redes de filamentos intermedios. Los estudios realizados han sugerido que la
B-cristalina podra funcionar como una chaperona para las protenas de filamentos intermedios. Adems,
anlisis bioqumicos in vitro han sugerido que la asociacin de filamentos intermedios con chaperonas
podra regular la organizacin de dichos filamentos con el fin de evitar la aparicin de interacciones no
covalentes que podran dar lugar al colapso de las redes de filamentos intermedios por formacin de
agregados de los mismos. Si la B-cristalina funcionase como chaperona, ello quiz permitira explicar por
qu mutaciones del gen de la B-cristalina subyacen a la agregacin anormal de filamentos intermedios
observada en ciertas miopatas y en las cataratas oculares. Las queratinas tambin se asocian con otras
protenas de estrs similares a chaperonas, cuyo papel en la regulacin de la organizacin de los filamentos
intermedios de queratina es muy importante. La importancia de los filamentos intermedios de queratina en
26

la proteccin del hgado queda claramente reflejada por el hecho de que mutaciones de las queratinas K8/18
predisponen a los humanos a padecer determinadas patologas hepticas crnicas.

5.2) Protenas reguladoras de apoptosis

Entre las IFAPs ms recientemente identificadas se encuentran enzimas y receptores involucrados en el

proceso de apoptosis. Protenas de filamentos intermedios como las laminas nucleares, las queratinas del
tipo I, la vimentina y la desmina son todas ellas substratos de caspasas, y hay evidencias que sugieren que
los fragmentos de filamentos intermedios generados por la actividad de caspasas pueden actuar como
promotores de la apoptosis. Adems, investigaciones recientes han demostrado que ciertos elementos
efectores de la maquinaria apopttica como DEDD (siglas en ingls de dominio efector de muerte celular)
forman un andamiaje dependiente de queratinas K8/18 y de la forma activa de la caspasa 3. Estas
observaciones permiten sugerir la posibilidad de que los filamentos intermedios participen en el
posicionamiento ptimo de los efectores de la apoptosis.

Los filamentos intermedios no slo interaccionan con efectores enzimticos de la apoptosis, sino tambin
con receptores apoptticos. As, las queratinas K8 y K18 interaccionan directamente con el dominio
citoplasmtico del factor de necrosis tumoral tipo 2 (abreviadamente TNFR2) y atenan la activacin de
otros efectores apoptticos, retrasando la muerte celular. Tambin se ha observado que en cultivos
celulares carentes de queratinas K8 y K18, la sensibilidad celular a la apoptosis mediada por Fas se ve
incrementada debido a que la queratina K8 interacciona con la protena c-Flip, que regula una ruta de
sealizacin antiapopttica. Estas observaciones estn en consonancia con el hecho de que ratones
transgnicos con una mutacin del gen de la queratina K18 presentan una mayor sensibilidad a la
apoptosis mediada por Fas. En definitiva, hay suficientes datos como para afirmar que la presencia de
queratinas reduce la posibilidad de muerte celular, interaccionando bien con efectores, bien con
receptores.

5.3) Interaccin de filamentos intermedios con quinasas y con la maquinaria enzimtica del ciclo
celular
Existen evidencias que sugieren que los filamentos intermedios actan como andamiaje para las quinasas
intracelulares, regulando la actividad quinasa y, en algunos casos, la proliferacin y la diferenciacin de
las clulas.
27

Por ejemplo, la protena Cdk5 (quinasa dependiente de ciclina) hace tiempo que est considerada como
un importante modulador de la red de neurofilamentos, la cual es particularmente sensible a la regulacin
por fosforilacin. La Cdk5 es especialmente activa en clulas post-mitticas como las neuronas. La
fosforilacin de las protenas de los neurofilamentos regula su nivel de ensamblaje, su asociacin con
otros elementos del citoesqueleto y el propio transporte dentro de la neurona. Estudios recientes han
sugerido que la Cdk5 puede asociarse con las protenas NF-H a travs de su quinasa activadora p35, que a
su vez est directamente asociada con la regin C-terminal de las protenas NF-M. Ms recientemente se
ha identificado a otra protena de filamentos intermedios, la nestina, como una nueva diana para el
complejo Cdk5/p35. La asociacin de la nestina con dicho complejo est regulada por el estado de
diferenciacin de los mioblastos. Los autores sugieren que hay una continua variacin de la actividad de
la Cdk5 y la quinasa p35 sobre un andamio de nestina, y dicha variacin afecta a la organizacin y
funcin tanto de la Cdk5 como de la nestina.

Los filamentos intermedios del sistema nervioso no son los nicos que actan como sitios de unin para
quinasas. Recientemente se ha descubierto que las quinasas K8/18 se asocian con la protena quinasa p38
y que la quinasa K8 est especficamente fosforilada en la posicin Ser-73, fosforilacin que origina una
reorganizacin de los filamentos intermedios de queratina. Ciertas mutaciones relacionadas con
patologas en seres humanos sugieren que la hiperfosforilacin de la queratina podra contribuir a una
organizacin aberrante de los filamentos intermedios y desencadenar un estado patolgico en el
individuo.

La asociacin de diferentes queratinas con elementos reguladores del ciclo celular tambin influye en la
proliferacin de las clulas epidrmicas. En 1999 se demostr que la queratina K10 inhibe la proliferacin
de queratinocitos humanos al unirse a varias quinasas responsables de la fosforilacin de la protena pRb,
lo que reduce la expresin de determinadas ciclinas necesarias para la puesta en marcha del ciclo celular
de los queratinocitos.

La asociacin de filamentos intermedios con las protenas adaptadoras 14-3-3 tambin supone un
importante impacto en la regulacin del ciclo celular. Las protenas 14-3-3 son adaptadores que
interactan con determinados motivos de fosfoserina o fosfotreonina de protenas del ciclo celular,
factores de transcripcin y otras protenas involucradas en cascadas de transduccin de seales. Se cree
que la unin de estas protenas 14-3-3 a otras protenas induce cambios conformacionales, enmascarando
determinadas caractersticas de dichas protenas. Se ha observado que las protenas 14-3-3 interaccionan
directamente con filamentos intermedios de vimentina y queratina. La fosforilacin de la queratina K18
hace que sta se asocie con una protena 14-3-3, y dicha asociacin altera la organizacin de los
filamentos de queratina, lo que puede afectar a la regulacin del ciclo celular. En general, parece que la
28

interaccin de las protenas 14-3-3 con los filamentos intermedios, cuando se produce, interfiere con otros
efectores. Pero tambin cabe la posibilidad de que, en algunos casos, las protenas 14-3-3 faciliten las
interacciones de los filamentos intermedios con otros efectores, aunque este punto todava se est
investigando.

5.4) Interaccin con lpidos y membranas

Informes que datan de hace al menos dos dcadas hablan de una potencial asociacin directa entre la
vimentina y los lpidos de membrana. Investigaciones recientes con clulas deficientes en vimentina han
permitido demostrar que el movimiento intracelular del colesterol LDL est alterado y las clulas muestran
defectos en la sntesis de glicolpidos, posiblemente debido a un defecto en el transporte de glicofosfolpidos
entre la va endosomal/lisosomal y el aparato de Golgi. Se ha demostrado una interaccin indirecta entre la
vimentina y el aparato de Golgi a travs de una protena asociada al Golgi denominada
formiminotransferasa ciclodeaminasa.

La observacin de que funciones como la distribucin de marcadores de la superficie celular y el

transporte de componentes en la cascada apopttica, son funciones alteradas en clulas deficientes en
queratinas K8/18, ha llevado a pensar que los filamentos intermedios juegan cierto papel en la
organizacin de las membranas intracelulares y en el trfico de sustancias a travs de las mismas. En
2004 se descubri una interaccin entre la periferina y el adaptador proteico AP-3, involucrado en la
formacin de lisosomas, de orgnulos relacionados con lisosomas y de vesculas sinpticas. Los autores
de la investigacin ampliaron su trabajo utilizando otras protenas de filamentos intermedios como la
vimentina y la -internexina, y vieron que tambin se asociaban con AP-3. Yendo un poco ms all, estos
mismos autores observaron que en fibroblastos deficientes en vimentina, el adaptador AP-3 y los
marcadores endosomales/lisosomales de aparicin tarda experimentaban una redistribucin. Estas
observaciones sugeran la participacin de los filamentos intermedios en la regulacin de la arquitectura
de las membranas y en la compartimentacin celular, as como en el trfico de sustancias por la va
endosomal/lisosomal.

6) MOTORES MOLECULARES QUE MUEVEN FILAMENTOS INTERMEDIOS

Algunas IFAPs actan como motores moleculares y juegan un papel importante papel en el
posicionamiento de los filamentos intermedios en ciertos tejidos. Lejos de ser estticos, los filamentos
intermedios y sus precursores han demostrado ser unos elementos muy dinmicos del citoesqueleto, en
29

movimiento por toda la clula gracias a motores moleculares. Los primeros estudios que demostraron la
existencia de los filamentos intermedios como partculas precursoras en movimiento alrededor de la
clula fueron llevados a cabo en el laboratorio de Goldman y sus colaboradores. Este grupo de cientficos
demostr que la GFP-vimentina se incorpora formando pequeas partculas de vimentina en los
fibroblastos de rin de hmster (denominados fibroblastos GHK). Estas partculas de vimentina estn
sometidas a un rpido movimiento dependiente de quinesina. Eventualmente, las partculas de vimentina
forman estructuras ms largas que se denominan garabatos (sic) que, se cree, ensamblan los filamentos
intermedios, mucho ms largos. Aunque los movimientos antergrados son los ms comunes, tambin
pueden darse movimiento retrgados. Recientemente, el mismo grupo de cientficos del laboratorio de
Goldman demostr que el complejo dinena/dinactina tambin se asocia con vimentina y es responsable
del movimiento retrgado de partculas, garabatos y filamentos intermedios. De este modo, el equilibrio
entre movimientos antergrados y movimientos retrgados resulta ser importante para la homeostasia de
la red de filamentos intermedios.

La vimentina no es la nica protena de filamentos intermedios que se mueve de esta manera. Se ha

demostrado que los filamentos intermedios neuronales, y ms concretamente la protena periferina, del
tipo III, y las protenas de filamentos intermedios neuronales del tipo IV, tambin son movidas por
motores moleculares. En el caso de la periferina, tambin se observan las partculas y los garabatos que se
observan en el caso de la vimentina, aunque en tipos celulares diferentes, como las clulas PC12. Los
movimientos son bidireccionales y dependientes de microtbulos, quinesina y dinena citoplasmtica.
Varios investigadores sugieren que las partculas de periferina son parte del sistema de transporte rpido
que distribuye elementos del citoesqueleto hacia las regiones distales de las clulas.

Otros estudios con las protenas de neurofilamentos NF-M y NF-H marcadas con GFP han demostrado
que dichas protenas tambin forman partculas y experimentan un movimiento dependiente de
microtbulos similar al de la periferina. Estos estudios tratan de ayudar a explicar la base molecular del
transporte lento en los axones neuronales. Aunque las partculas de protenas NF se mueven a alta
velocidad, su transporte experimenta largas pausas sucesivas, de modo que, en conjunto, su movimiento
resulta bastante lento. En el caso de la periferina, las pausas en el movimiento son entre 2 y 3 veces
menos frecuentes, pese a que los mecanismos de transporte dependientes de microtbulos de las protenas
NF y de la periferina son similares. Se cree que ciertas diferencias entre las estructuras de
neurofilamentos y de filamentos intermedios de periferina (entre las que cabe citar la existencia de largas
colas cargadas en las protenas NF-M y NF-H) podran establecer enlaces cruzados que frenaran el
movimiento de las protenas de neurofilamentos. Tambin cabe la posibilidad de que exista una
regulacin de la asociacin de los neurofilamentos con el motor molecular a travs de procesos de
fosforilacin.
30

Recientemente se ha identificado en mamferos una protena asociada a neurofilamentos cuya importancia

en la organizacin de stos parece ser crtica. Se trata de la protena NUDEL, muy importante para el
ensamblaje del citoesqueleto de neurofilamentos a travs de su interaccin con los dominios centrales de
las protenas NF-L. Su ausencia causa una desorganizacin de las redes de neurofilamentos que induce
cambios neurodegenerativos. Dado que NUDEL tambin interacciona con la dinena, tambin parece
posible que su papel en la organizacin de los neurofilamentos est ligado al transporte dependiente de
microtbulos de dichos neurofilamentos a travs del axn. Cualquier interferencia con este proceso podra
provocar la acumulacin de neurofilamentos e inducir un proceso neurodegenerativo.

Las mutaciones que afectan a las protenas motoras a los propios filamentos intermedios (alterando sus
asociaciones con las IFAPs motoras) conducen a la acumulacin de filamentos intermedios en patologas
tan conocidas como la ELA (esclerosis lateral amiotrfica) y el Parkinson. Cualquier dao que se
produzca en el ensamblaje o en el transporte de neurofilamentos constituye un factor determinante de
enfermedad neurodegenerativa. As, por ejemplo, los ratones carentes de la cadena pesada de la quinesina
neuronal especfica muestran acumulaciones de NF-H, NF-M y NF-L en los somas de neuronas
sensoriales perifricas. La presencia de estas acumulaciones viene adems acompaada por una
apreciable disminucin del calibre de los axones sensoriales. Estas observaciones sustentan la hiptesis de
que la quinesina juega un papel muy importante en el transporte axonal lento (dependiente de
microtbulos) de al menos un tipo de substrato: las protenas de neurofilamentos.

Los filamentos de queratina muestran una motilidad diferente a la de los filamentos intermedios de los
tipos III y IV, ya que siguen movindose incluso en ausencia de microtbulos, tal y como se ha
comprobado en clulas tratadas con inhibidores de microtbulos. Se ha propuesto que la actina podra
estar involucrada en el transporte de los filamentos intermedios de queratina, ya que se ha observado en
extractos de huevos de Xenopus que la actina dirige la organizacin y el movimiento de la queratina. No
obstante, todava se sabe muy poco acerca de los mediadores de las interacciones entre las queratinas y la
actina.

En resumen, los datos de que se dispone sugieren que mltiples interacciones entre IFAPs motoras y
varios tipos de filamentos intermedios estn involucradas en el correcto despliegue de los precursores de
filamentos intermedios en el citoplasma, donde polimerizan de la forma apropiada y llevan a cabo sus
funciones sin interferir con otros aspectos del metabolismo celular. Dichos precursores presentan varias
formas diferentes: desde partculas hasta filamentos cortos. Se ha demostrado que filamentos intermedios
de distinto tamao se mueven a distintas velocidades, aunque no parece que exista una relacin directa
entre el tamao y la tasa de movimiento. Se ha propuesto que IFAPs formadoras de enlaces cruzados
entre los filamentos intermedios, como muchas plaquinas, tambin participan en la regulacin del
31

transporte y ensamblaje de los filamentos intermedios a travs de la formacin de grandes estructuras en

el citoesqueleto.

7) UNA FINA LNEA SEPARA A LAS PROTENAS DE FILAMENTOS INTERMEDIOS Y A

LAS IFAPs
La clasificacin de protenas como protenas de filamentos intermedios ha sido objeto de debate durante
muchos aos, ya que no est claro si las IFAPs deben considerarse protenas de filamentos intermedios, y
si se consideran como tales, como deben clasificarse. As, por ejemplo, la sinemina y la paranemina, que
originalmente fueron identificadas como IFAPs, ahora son consideradas protenas de filamentos
intermedios. Tanto la sinemina como la paranemina difieren de las clsicas protenas de filamentos
intermedios en que requieren de otras protenas de filamentos intermedios para incorporarse a stos. En
este sentido, la sinemina y la paranemina son similares a otras protenas de filamentos intermedios como
la nestina y la tanabina en el sistema nervioso, y la recientemente descubierta sincoilina en el msculo.

Por otra parte, los datos experimentales de que se dispone sugieren que las redes de filamentos
intermedios recurren a mltiples mecanismos para su organizacin en diferentes tipos de clulas y tejidos.
Unas veces incorporan IFAPs de separacin al ncleo del polmero, mientras que otras veces utilizan
protenas perifricas de las que el polmero puede separarse con facilidad durante la remodelacin de las
redes de filamentos.

8) CONCLUSIONES
El nmero de genes que codifican para protenas de filamentos intermedios asciende a ms de 67, y la
regulacin de su expresin est estrictamente regulada a lo largo de todo el desarrollo y diferenciacin de
los tejidos. La familia de protenas de filamentos intermedios ha ido creciendo con el paso del tiempo, y
con ello ha ido afinndose el concepto de lo que es una IFAP. Ahora est claro que las IFAPs incluyen
algo ms que protenas ligadoras y formadoras de haces de filamentos intermedios. Entre las IFAPs
tenemos enzimas, motores moleculares, receptores de membrana, adaptadores y otras molculas
importantes para el control de la homeostasia celular y la regulacin del metabolismo. Estas IFAPs se
unen directamente a los filamentos intermedios y modifican sus funciones. La gran variedad de
asociaciones reguladoras que se establecen entre los filamentos intermedios y las IFAPs ha incrementado
considerablemente la complejidad funcional del andamiaje de filamentos intermedios del citoplasma
celular.
Queda mucho por ver sobre esta gran complejidad funcional del andamiaje de filamentos intermedios,
mucho ms de lo que se ha abordado en este trabajo. Por ejemplo, no se ha tratado la compleja red de
32

filamentos intermedios de laminas nucleares presente en el interior del ncleo, de suma importancia para
la especie humana por cuanto que estn surgiendo numerosas enfermedades relacionadas con mutaciones
que afectan a dichas laminas y a sus protenas asociadas. Tampoco se han tratado las asociaciones de
filamentos intermedios con protenas involucradas en patologas de origen vrico y bacteriano,
asociaciones muy importantes por cuanto que alteran las redes de filamentos intermedios durante los
procesos infecciosos.

9) FIGURAS

Figura 1: Tabla de protenas de filamentos intermedios y sus protenas asociadas.

Figura 2: La familia de las plaquinas. Se muestra la estructura de los dominios de los miembros ms
importantes de esta familia tratados en el texto.

Figuras 3A, 3B, 3C y 3D: Comparacin de las uniones clula-clula y clula-substrato.

Figura 3A: Anclaje de los filamentos de queratina a travs de la desmoplaquina en los

desmosomas. Slo se muestra una mitad del desmosoma, que es una unin intercelular que ancla
los filamentos intermedios a la membrana plasmtica. Las cadherinas desmosomales
transmembrana, las desmoglenas (Dsg) y las desmocolinas (Dsc) median en la adhesin a travs
de sus dominios extracelulares, y se asocian con las placofilinas (Pkp) y la placoglobina (Pg) a
travs de sus dominios citoplasmticos. Estas protenas interaccionan con el extremo N-terminal
de la desmoplaquina, que ancla los filamentos intermedios al desmosoma a travs de su extremo
C-terminal.

Figura 3B: Anclaje de vimentina a travs de la desmoplaquina en uniones de clulas endoteliales.

En las clulas endoteliales no hay desmosomas. En su lugar hay unas uniones intercelulares
especializadas que anclan los microfilamentos de actina y los filamentos intermedios de vimentina
a los dominios de VE-cadherina de la membrana plasmtica. La interaccin de la vimentina con
dichos dominios est mediada por la desmoplaquina, que se asocia con la VE-cadherina a travs
de las protenas armadillo placoglobina y p0071.

33

Figura 3C: Anclaje de filamentos intermedios de queratina en los hemidesmosomas. En las clulas
epiteliales los hemidesmosomas anclan los filamentos intermedios de queratina al substrato. La
integrina transmembrana 64 y el complejo BPAG2/BP180 se asocian con la plectina y la
BPAG1, que a su vez unen los filamentos intermedios de queratina a la placa hemidesmosomal.
Se cree que la protena tetraspanina CD151 juega un papel clave en el ensamblaje de estas
estructuras.

Figura 3D: Anclaje de vimentina en clulas endoteliales. En lugar de hemidesmosomas, las clulas
endoteliales presentan estructuras similares a los contactos focales que anclan la vimentina a
complejos de integrina v3 del substrato. Aunque la estructura de estas uniones todava no ha
sido elucidada, se cree que es la plectina la que ancla los filamentos intermedios de vimentina a
estas uniones.

Figura 4: Estructura del DPC y de los costmeros del msculo estriado. En la parte superior se muestra
una ampliacin de un costmero de una fibra de msculo estriado. En dicha ampliacin se pueden ver los
componentes del complejo proteico asociado a distrofina (DPC) involucrados en la unin de filamentos
de desmina a la membrana de la fibra muscular. No se muestran protenas asociadas a actina como la
vinculina, la espectrina y la anquirina, tambin presentes en estas estructuras. Adems de los
componentes del DPC, tambin hay plectina en los costmeros. La plectina contribuye a la unin de los
filamentos intermedios de desmina a estructuras asociadas a actina.

34

IFs tipo IV
-internexina
Nestina
NF-H, L, M
Sinemina/Desmuslina

B-cristalina
Grp78
Hsp27
Hsp40
Hsp/c70
Mrj

Enzimas

Desmina
GFA
P
Periferina
Sincoilina
Vimentina

-actinina
Calponina
Filagrina
Fimbrina
Nebulina
Tricohialina
Tropomodulina

Chaperonas

IFs tipo III

Unin

K1/1
0 5/1
K
4K8/1
8Queratinas del pelo

Anclaje

IFs tipos I y II
(queratinas)

4.1R
-distrobrevina
BPAG1e
Desmocalmina
Desmoplaquina
KAPs
Periplaquina
Pinina
Placoglobina
Placofilina
Plectina
Espectrina
Vinculina

Akt/PKB
Caspasa 3/9
Cdk5/p35
FTCD
JNK
p38
PKC
Raf1 quinasa

IFs tipo V
Complejos
receptores

Laminas nucleares

C-Flip
Policistina-1
TNFR2

IFs hurfanas
Adaptadores

NUDEL
14-3-3
AP-3
DEDD
TRADD

Motores

Filensin
aFaquinina

Dinena
Quinesina
VA-miosina

Figura 1
35

BPAG1e
BPAG1a

Dominio de unin a actina

BPAG1b

Dominio de plaquina
Repeticiones de espectrina
Dominio central en hlice
Repeticiones de plaquina
Motivos de unin a Ca2+
Dominio GAR
Dominio GSR
Subdominio de unin

B C

BPAG1n

B C

Plectina

B B B B B B C

Desmoplaquina I

A B C

Desmoplaquina II

A B C

Envoplaquina

Periplaquina
Epiplaquina

BBBBBBBB B B B B B

Figura 2

Dsc

Dsg

P
k
p

Pg
Desmoplaquina

Filamentos intermedios de queratina

Figura 3A

36

VE-cadherina

p007
1

Pg

Desmoplaquina

Vimentina
IF
Figura 3B

Filamentos
intermedios
de
queratina

Plectina

BP230

BP
180

4
6

C
D1
51

Laminina-5

Figura 3C

37

Vimentina

Plectina

?
3
V
Lamininas-8/9
Figura 3D

Complejo de
sarcoglicano
Sarcospan

Complejo de
distroglicano

Syntrophin
s

Distrofina
-distrobrevina
Sinemina/Desmuslina
Desmina
Costmero

Miofibrilla

Disco Z

Filamentos intermedios transversales

Figura 4

38

10) BIBLIOGRAFA

10.1) Libros consultados

COOPER, GM; HAUSMAN, RE: La clula. 3 edicin. Madrid: Marbn Libros, S.L.; 2006.

10.2) Revisiones consultadas

GREEN, KJ; BHRINGER, M; GOCKEN, T; JONES, JC: Intermediate filament associated proteins.
Adv Protein Chem 2006;70:143-202.

39

NDICE

Pgina

1) INTRODUCCIN

2) FAMILIA DE LAS PLAQUINAS

2.1) Desmoplaquinas

2.2) BP230 (BPAG1) y sus isoformas

2.3) Plectina

2.4) Envoplaquina y periplaquina

11

2.5) Epiplaquina

13

3) INTERACCIONES ENTRE SUPERFICIE CELULAR Y FILAMENTOS INTERMEDIOS 13

3.1) Protenas desmosomales

13

3.1.1) Protenas de armadillo: placofilinas y placoglobina

13

3.1.2) Pinina

15

3.1.3) Desmocalmina y queratocalmina

15

3.2) Policistina-1

15

3.3) Asociacin de filamentos intermedios con la regin cortical rica en actina

16

3.3.1) Contactos focales

17

3.3.2) Anclaje de los filamentos intermedios a la superficie de las

18

clulas musculares

3.3.3) Espectrina y anquirina.

20
40

4) OTRAS IFAPs NO PERTENECIENTES A LA FAMILIA DE LAS PLAQUINAS

21

4.1) Asociacin de filamentos intermedios con la regin cortical rica en actina

21

4.1.1) Filagrina

21

4.1.2) Tricohialina

22

4.1.3) Protenas asociadas a queratina (KAPs)

23

4.2) Protenas que coordinan con la actina

24

4.2.1) Calponina

24

4.2.2) Fimbrina

25

4.2.3) Nebulina

25

5) PARTICIPACIN DE LAS IFAPs EN EL ANDAMIAJE DE SEALIZACIN

26

Y EN EL METABOLISMO CELULAR

5.1) Protenas de estrs y chaperonas

26

5.2) Protenas reguladoras de apoptosis

27

5.3) Interaccin de filamentos intermedios con quinasas y con la maquinaria

27

enzimtica del ciclo celular

5.4) Interaccin con lpidos y membranas

6) MOTORES MOLECULARES QUE MUEVEN FILAMENTOS INTERMEDIOS

29

29

7) UNA FINA LNEA SEPARA A LAS PROTENAS DE FILAMENTOS INTERMEDIOS

Y A LAS IFAPs

8) CONCLUSIONES

32
41

9) FIGURAS

33

10) BIBLIOGRAFA

39

42