RECOPILADO POR:

EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

NMX-F-070-1964. MTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIN DE

TIAMINA. THIAMINE DETERMINATION. TEST METHOD. NORMAS
MEXICANAS. DIRECCIN GENERAL DE NORMAS.
ASUNTO
Con fundamento en lo dispuesto en los Artculos 1o., 2o., 4o., 23 inciso C y 26 de la
Ley General de Normas y de Pesas y Medidas, publicada en el Diario Oficial de la
Federacin con fecha 7 de abril de 1961, esta Secretara ha aprobado la siguiente Norma
de MTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIN DE TIAMINA.
1.

DEFINICIN Y GENERALIDADES

1.1

Definicin

Esta Norma establece el Mtodo para la determinacin de Tiamina, las condiciones en

las que deber realizarse, sus especificaciones y campo de aplicacin.
1.1.1

Tiamina

Se conoce con el nombre de Tiamina, la vitamina B1, que forma parte del complejo
vitamnico B.
1.2

Generalidades

1.2.1

Campo de aplicacin

Este mtodo es aplicable en los anlisis fsico-qumicos de productos teraputicos o

dietticos.
1.2.2

Fundamento

Se basa en la transformacin que sufre la Tiamina pasando a Tiocromo por la accin

que sobre ella ejerce el reactivo oxidante, siendo en esta forma determinada su
fluorescencia y por consiguiente la valoracin de la Tiamina.
2.

CLASIFICACIN Y ESPECIFICACIONES

2.1

Clasificacin

Esta Norma establece un slo mtodo para la determinacin de la Tiamina, el mtodo

del tiocromo.
2.2

Especificaciones

2.2.1

Equipo

Potencimetro, centrfuga, autoclave o bao de vapor, fluormetro, refrigerador, balanza

analtica, estufa elctrica y material usual de laboratorio.
Tubo para cambio de bases.- El tubo de vidrio para cambio de bases, tiene una longitud
total de 200 mm con un depsito en el extremo superior de 50 mm de largo y 20 mm de
dimetro y convergente del tubo de adsorcin que es de 5 a 6 mm de dimetro interno y
unos 140 mm de longitud. El extremo inferior del tubo termina en un capilar de 10 mm
de longitud y de un dimetro tal que, cuando est cargado, la velocidad del flujo no ser
superior a un ml/min.
Acondicinese el tubo para usarse, colocando sobre el extremo superior del tubo capilar
y con ayuda de una varilla de vidrio, un tapn fro de lana de vidrio fina. Agrguese una
suspensin acuosa de 1 a 2 g de silicato de sodio purificado para cambio de base al tubo
de adsorcin cuidando de arrastrar por lavado el silicato de las paredes del recipiente.
Para mantener el aire fuera de la columna de adsorcin, se mantendr una capa del
lquido sobre la superficie del silicato durante el proceso de adsorcin. Se evitar que el
tubo se vace colocndole un casquete de hule (lleno de agua para evitar la inclusin del
aire) en el extremo inferior del tubo capilar.
2.2.2

Material

2.2.2.1 Reactivos

Silicato de sodio.
Acetato de Sodio.
Verde de Bromocresol.
Hidrxido de Sodio.
Azul de timol.
Enzima diastsica.
Acido Actico.
Cloruro de potasio.
Ferricianuro de potasio.
Sulfato de quinina.
Acido Sulfrico.
Clorhidrato de Tiamina.
Pentxido de fsforo.
Alcohol etlico.
Acido clorhdrico.
Alcohol Isobutlico.
Sulfato de sodio anhidro.

2.2.2.2
Preparacin de soluciones
2.2.2.2.1
Solucin 2 N de acetato de sodio
(NaC2H3O2 3H2O). Disulvanse 275 g de acetato de sodio reactivo en suficiente agua
para hacer 100 ml.
2.2.2.2.2
Indicador verde de bromocresol para pH
Disulvase 0.1 g de indicador con 2.8 ml de NaOH 0.05 N y dilyase a 200 ml con agua
destilada.

2.2.2.2.3
Indicador azul de timol para pH
Disulvase 0.1 g de indicador cpn 4.3 ml de NaOH 0.05N y dilyase a 200 ml con agua
destilada.
2.2.2.2.4
Solucin de enzima
Preprese para ser usada el mismo da una solucin acuosa al 10% de un producto de
actividad patente diastsica como fosforoltica.
2.2.2.2.5
Sulfato para cambio de bases
Purifquese un silicato de sodio preparado artificialmente en polvo granuloso del tipo
para cambio de bases, que pase por un tamiz de malla de 50 a 80 hilos/cm2 de la manera
siguiente: Pngase una cantidad conveniente de 100 a 500 g de silicato para cambio de
bases, en un vaso de precipitados apropiado, agrguese suficiente cido actico caliente
al 3% hasta cubrir el material y hirvase de 10 a 15 minutos, agitando con frecuencia.
Djese sedimentar y decntese el lquido sobrenadante. Reptase este lavado tres veces.
Lvese tres veces de la misma manera con una solucin de cloruro de potasio caliente al
20% y finalmente lvese con agua hirviente, hasta que el ltimo lavado no d reaccin
de cloruro. Desquese el material a unos 100C y gurdese en vasos bien tapados.
2.2.2.2.6
Solucin neutra de cloruro de potasio
Disulvase 250 g de cloruro de potasio reactivo en suficiente agua para hacer 1000 ml.
2.2.2.2.7
Solucin cida de cloruro de potasio
Agrguese 8.5 ml de cido clorhdrico a 1000 ml de solucin neutra de cloruro de
potasio.
2.2.2.2.8
Solucin de hidrxido de sodio al 15%
Disuelvase 15 g de hidrxido de sodio en suficiente agua para hacer 100 ml.
2.2.2.2.9
Solucin de ferricianuro de potasio al 1%
Disulvase 1 g de ferricianuro de potasio en suficiente agua para hacer 100 ml. Esta
solucin tiene que prepararse el da de su uso.
2.2.2.2.10
Reactivo oxidante
Preprese mezclando 4.0 ml de solucin de ferricianuro de potasio al 1% con suficiente
solucin de hidrxido de sodio al 15% para hacer 100 ml. Esta solucin deber usarse
dentro de las cuatro horas de su preparacin.
2.2.2.2.11
Solucin madre de sulfato de quinina
La solucin de sulfato de quinina se prepara disolviendo 10 mg de sulfato de quinina en
suficiente solucin 0.1 N de cido sulfrico, para hacer 1000 ml. Consrvese esta
solucin en recipientes de vidrio color mbar.
2.2.2.2.12
Solucin tipo de sulfato de quinina
Dilyase un volumen de la solucin madre de sulfato de quinina con 3 volmenes de
solucin 0.1 N de cido sulfrico. Esta solucin presenta una fluorescencia
aproximadamente del mismo grado que el tiocromo obtenido de una microgramo de
tiamina. Consrvese esta solucin en recipientes de vidrio color mbar.

2.2.2.2.13
Solucin madre de clorhidrato de tiamina
Psense con precisin de 0.1 mg por lo menos 25 g de clorhidrato de tiamina patrn,
que se ha mantenido en un desecador con pentxido de fsforo, por lo menos durante 16
horas. Siendo el patrn higroscpico, se tomarn precauciones para impedir la absorcin
de humedad. Disulvase en alcohol etlico al 20% ajustado a un pH de 3.5 a 4.3 con
cido clorhdrico y llvese hasta un volumen de 1000 ml. La solucin madre de
clorhidrato de tiamina, podr prepararse tambin empleando alcohol etlico al 25% y
cido clorhdrico en cantidad suficiente para obtener una solucin 0.5 N
aproximadamente. Pngase en el refrigerador a 4C aproximadamente en un recipiente
bien cerrado, de color mbar.
2.2.2.2.14
Solucin tipo de clorhidrato de tiamina
De una porcin de la solucin madre, a la temperatura ambiente, transfirase un alcuota
conteniendo precisamente 100 microgramos de clorhdrato de tiamina a un matraz
aforado de 100 ml y dilyase a 100 ml con agua destilada ajustada a pH de 3.5 a 4.3 con
cido clorhdrico. Cada ml de esta solucin contiene un microgramo de tiamina. Las
diluciones que se efectan con esta solucin sern tratadas de la misma manera que las
empleadas en la preparacin de la solucin para determinacin, con respecto a la
digestin con cido. Tratamiento con enzimas, adsorcin, elusin de la tiamina del
silicato para cambio de bases.
3.

MTODO DE PRUEBA

3.1

Procedimiento

3.1.1

Preparacin de la solucin para valoracin

La cantidad de material tomada para la determinacin ser tal, que la proporcin del
volumen de solucin 0.1 N de cido sulfrico, usado para la extraccin, sea por lo
menos 15 a 1 con respecto a la cantidad de muestra y al contenido de tiamina
equivalente de 3 a 100 microgramos de clorhidrato de tiamina. Pngase la cantidad de
material por determinar, pesado con precisin de 0.1 mg, en 65 ml de solucin 0.1N de
cido sulfrico contenidos en un tubo de centrfuga de 100 ml y digirase a bao de
vapor, mezclndose con frecuencia durante 30 minutos o calintase en autoclave de
121C a 123C durante 15 minutos. El lquido tiene que quedar cido durante la
digestin, si no es francamente cido al indicador azul de timol, agrguese suficiente
cido sulfrico diluido para hacerlo cido. Enfrese y ajstese el pH entre 4 y 4.5 por la
adicin de la solucin 2N de acetato de sodio usando verde de bromocresol como
indicador externo en placa adecuada. Agrguense 5 ml de la solucin de enzima,
mzclese e incbese de 455 a 50C durante 3 horas. Enfrese, centrifguese la mezcla
hasta que el lquido sobrenadante sea limpio o plsticamente lmpido, transfirase
cuantitativamente el lquido sobrenadante a un matraz aforado de 100 ml. Lvese el
residuo centrifugado con 10 ml y luego con 5 ml de cido sulfrico 0.1N y agrguense
los lavados al lquido sobrenadante y dilyase con agua hasta aforo de 100 ml. Psese
por el tubo para cambio de bases ya acondicionado, una parte alcuota de la solucin
conteniendo de 5 a 10 microgramos de tiamina; lvese el tubo con tres porciones de
agua destilada hirviente de 5 ml cada una, teniendo cuidado de evitar que la superficie
del lquido baje de la superficie del silicato. Hgase la elucin de la tiamina del silicato
para cambio de bases pasando por el tubo sucesivamente pequeas porciones de la
solucin cida caliente de cloruro de potasio. Recjanse los primeros 15 ml o 20 ml de

lquido en un matraz aforado de 25 ml, enfrese y dilyase a un volumen de 25 ml, con

solucin cida de cloruro de potasio. Esta solucin constituye la solucin para la
valoracin.
3.1.2

Oxidacin de la Tiamina a Tiocromo y medicin de la Fluorescencia

Determnese el contenido de Tiamina en la solucin para valoracin ya oxidada,

comparando la intensidad de fluorescencia de un extracto de esta solucin expuesta a
los rayos ultravioleta de la longitud de onda de 350 mm y a 400 mm con la solucin tipo
de clorhidrato de tiamina. La intensidad de la fluorescencia es proporcional a la cantidad
de tiamina presente y puede ser medida con ayuda de un instrumento para tal objeto.
Para oxidar la tiamina o tiocromo, agrguense a cantidades que contengan de 0.10 a 2.0
microgramos de tiamina en la solucin tipo de clorhidrato de tiamina tratada de manera
similar, suficiente solucin cida de cloruro de potasio para hacer un volumen de 5 ml.
Luego agrguense mezclando, 3 ml de residuo oxidante y dentro del lapso de 2 minutos
adanse 13 ml de alcohol isobutlico y agtese vigorosamente durante 2 minutos.
Cetrifguese la mezcla a baja velocidad hasta que el lquido sobrenadante sea lmpido.
Mdase en un fluormetro la intensidad de la fluorescencia de la solucin isobutlica
directamente, si es lmpida o si es turbia despus de agitar con 2 g de sulfato de sodio
anhidro. Comprese con sta, la intensidad de fluorescencia, producida despus de
oxidar la solucin tipo de clorhidrato de tiamina. La solucin tipo de sulfato de quinina
es usada para controlar la igualdad de resultados con el del instrumento. Tendr que
hacerse una correccin para la fluorescencia producida por otras substancias que no son
la tiamina y de la solucin que se valora, tratada como se indico antes, pero empleado
solucin de hidrxido de sodio al 15% que reemplazar al reactivo oxidante.
3.1.3

Clculos

mg de tiamina

1.0 x (A - B) (S - D)

Donde:
A
B

=
=

S
=
D
=
al 15%.

fluorescencia del alcohol isobutlico.

Fluorescencia del extracto de la solucin de ensayo tratado con 3 ml de
NaOH al 15%.
Medida de fluorescencia del extracto de la solucin tipo.
Fluorescencia del extracto de la solucin tipo tratado con 3 ml de NaOH

Fecha de aprobacin y publicacin: Julio 25, 1964