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Son pequeas molculas de ADN independientes, circulares, auto-replicantes que lleva slo unos
pocos genes, pesan de 1 Kb a 200 Kb y se pueden encontrar en las bacterias. Los plsmidos se
Los plsmidos son fciles de manipular y aislar el uso de bacterias. Pueden ser integradas en los
genomas de mamferos, lo que confiere a las clulas de mamferos cualquier funcionalidad genticos que
llevan. Por lo tanto, esto le da la capacidad de introducir genes en un organismo dado mediante el uso de
bacterias para amplificar los genes hbridos que son creados in vitro. Esta molcula de plsmido pequeo
pero poderoso es la base de la tecnologa del ADN recombinante.
Hay dos categoras de plsmidos. Plsmidos estrictas replicar slo cuando el cromosoma se replica.
Esto es bueno si se est trabajando con una protena que es letal para la clula. Plsmidos tranquilo
replicar por s mismos. Esto le da una mayor proporcin de los plsmidos en el cromosoma.
I.
TIPOS DE PLSMIDOS
Cada plsmido, dentro de la amplia diversidad de los que se conocen, se suele clasificar segn
el grupo de incompatibilidad al que pertenece (los grupos de incompatibilidad se suelen
denominar con las siglas Inc seguidas de una letra mayscula (por ejemplo IncP, IncFII, etc.).
Se dice que dos plsmidos son incompatibles cuando no pueden coexistir establemente en la
misma bacteria en ausencia de una presin selectiva permanente. Grupo de incompatibilidad
es el conjunto de plsmidos incompatibles entre s. La incompatibilidad depende del hecho de
que los distintos miembros de un mismo grupo poseen el mismo tipo de sistema de control del
nmero de copias y de reparto de dichas copias a las clulas hijas.
Existe una amplia variedad de plsmidos. Los plsmidos bacterianos son de muchos tipos
distintos, pero a grandes rasgos podemos clasificarlos atendiendo a diversos caracteres:
1. Segn que sean autotransmisibles por conjugacin o no:
a. Plsmidos conjugativos.
b. Plsmidos no-conjugativos. Dentro de esta categora se incluyen:
i.
Plsmidos no movilizables
ii.
bacteriocinognicos,
que
codifican
alguna
bacteriocina
Asignatura: Biologa
ii.
f.
i.
ii.
iii.
Asignatura: Biologa
Asignatura: Biologa
hembras ( F ).
Asignatura: Biologa
En funcin de que los plsmidos sean o no transmisibles de una bacteria a otra por medio de
contactos intercelulares, se pueden distinguir:
A. PlsmidosConjugativos (auto transmisible):Que son aquellos que se transfieren entre
cepas por medio de fenmenos de conjugacin. Algunos de estos plsmidos no slo se
transfieren entre cepas de la misma especie, sino que son capaces de hacerlo entre
especies y gneros muy diversos, recibiendo el muy apropiado nombre de plsmidos
promiscuos o de amplio espectro de hospedadores, permitiendo transferencia
horizontal de informacin gentica entre grupos bacterianos filogenticamente
alejados.
B. Plsmidos No Conjugativos: Carentes de esta propiedad de conjugacin. Dentro de
esta categora existe un subgrupo, el de los plsmidos movilizables: son aquel no auto
transmisible que pueden ser transferidos por la accin de un plsmido conjugativo
coexistente en la misma bacteria.
Existe una variedad de fenotipos y funciones determinados por plsmidos:
3+
IV.
Asignatura: Biologa
Estructura fsica:
conjugativa). Existen unos 25 genes tra, repartidos en unas 33 kb (o sea, casi la tercera
parte de F est dedicado a genes de conjugacin). La mayor parte de esos genes
estn formando parte de un gran opern traYZ (unos 20 genes).
2.
V.
Asignatura: Biologa
Las bacterias tienen tres mecanismos para el intercambio y la incorporacin del material
gentico. Son transformacin (la admisin de ADN extracelular), transduccin (los fagos
transfieren genes bacterianos a partir de una clula hospedadora a otra) y conjugacin
(transferencia genmica directa entre las clulas bacterianas temporalmente unidas).
1. TRANSFORMACIN
Transformar una bacteria una levadura, consiste en introducirle una molcula de ADN
extranjero, introducir un plsmido en una bacteria es transformar una bacteria, o sea una
transformacin. Para las clulas eucariotas (no las levaduras), no se dice transformar sino
transfectar (transformar una clula eucariota quiere decir hacerla eterna o hacerla cancerosa).
Existen varios mtodos para introducir un plsmido en una clula. Cada uno es en s una
receta y cada uno tiene una propia.
TRANSFORMACIN CON CACL2 + CHOQUE TRMICO:
Consiste en aadir plsmidos a las bacterias tratadas con CaCl 2 y de someterlas a un breve
choque trmico (42C). La utilizacin de otras sales de CaCl2 y la adicin de iones metlicos
aumenta la eficiencia de la transformacin. Para plsmidos de 3 kb, una transformacin eficaz
produce alrededor de 10+8 colonias/mg de ADN plasmdico superenrollado.
Otros mtodos de transformacin: Utilizando por ejemplo liposomas y son ms costosos. La
eficiencia de la transformacin es inversamente proporcional a la talla del plsmido. Para
identificar las bacterias transformadas, se utilizan marcadores de seleccin proporcionados por
plsmidos. Los marcadores de seleccin ms utilizados son los genes de resistencia a
antibiticos, como la ampicilina, la tetraciclina, el cloramfenicol y la kanamicina. Como regla, las
bacterias transformadas se cultivan en presencia del antibitico para evitar que la bacteria
pierda el plsmido que se le ha introducido.
2. TRANSDUCCIN
Es la transferencia de material gentico entre bacterias, usando como vehculo un bacterifago.
No todos los ciclos virales son iguales, pudiendo destacar dos ciclos principales, el lisognico y
el ltico. Si la respuesta es ltica, el virus se va replicando, formando una serie de nuevos fagos
a la vez, que usan a la bacteria como elemento parasitado, hasta que son capaces de parasitar
ya por ellos mismos. La segunda respuesta que podemos encontrar es la lisognica, en la que
el genoma del fago se integra en el de la bacteria, de forma que puede permanecer en este
estado estacionario bastante tiempo hasta que se produzca el ciclo ltico.
Este proceso es similar a la integracin o desintegracin del factor F, aunque la diferencia es
que en la transduccin, la integracin del profago siempre es en el mismo punto del
Asignatura: Biologa
3. CONJUGACIN
Tenemos una cepa receptora junto con material gentico que aporta otra clula, de forma que
a partir de ah, puede producirse la conjugacin, que es la transferencia de material; aunque
para que sea viable, debe darse la recombinacin gracias al proceso del entrecruzamiento. El
intercambio gentico no tiene lugar entre dos genomas completos como ocurre en eucariota,
sino que, tiene lugar entre un genoma completo (F-) que se denomina endogenote, y otro
incompleto, del donante, denominado exogenote. Obtendremos un merocigoto (diploide
parcial). La gentica bacteriana es la gentica de la merocigosis.
Para que la recombinacin d algn cromosoma viable (que podr ser circular), debe
producirse un nmero par de entrecruzamientos, puesto que si no, no obtendremos ningn
producto viable, sino un cromosoma largo lineal y extrao, parcialmente diploide. Si se da este
nmero par de entrecruzamientos, obtendremos dos productos, uno que se perder durante el
crecimiento celular y otro que ser viable.
Produccin del proceso: podemos usar los datos de la conjugacin interrumpida para realizar
un mapa con frecuencias de recombinacin, usando la conjugacin, primero tenemos que
asegurarnos de que los marcadores han pasado al cromosoma receptor, teniendo en cuenta
que gracias al gradiente de transferencia natural, pasan con mayor frecuencia y facilidad,
aquellos marcadores que se encuentran ms cerca del punto de entrada. Esto es debido a que
el apareamiento entre las bacterias suele interrumpirse espontneamente, de forma que la
transferencia de los marcadores suele ocurrir en el orden en que estos estn presentes en el
DNA a partir del punto de inicio de la transferencia del mismo factor F. Nosotros seleccionamos
para un determinado marcador, teniendo que controlar qu marcadores pasan, pudiendo
estimar que se produce un punto de entrecruzamiento hacia el ltimo marcador. Podemos
Asignatura: Biologa
--
Las clulas F (o las Hfr) forman de 1 a 10 pelos sexuales (repasar aqu lo que se dijo
oportunamente en el cap. 11 sobre este tipo de pelos, que son distintos de las fimbrias
de tipo adhesivo). El pelo interacciona especficamente, a travs de su punta, con un
--
Una clula F contacta por medio de la punta de su pelo F con el receptor de superficie
--
accin de los genes traN y traG del plsmido F, y de ompA de la clula F . La protena
producida por traD (localizada en ambas membranas, citoplsmica y externa) parece que
facilita el transporte del ADN a la clula receptora. Tras cierto tiempo de conjugacin, el
agregado se desagrega de forma activa.
Un fenmeno interesante, que tiene que ver con las interacciones entre superficies
celulares: se trata de la exclusin superficial, y consiste en un sistema por el que se evita
+
que las clulas de tipo F puedan actuar como receptoras frente a otras F . Se sabe que
la accin de dos genes del plsmido F realiza esta funcin:
Asignatura: Biologa
--
Otro fenmeno que se puede observar en los cruces F x F es la zigosis letal. Ocurre
+
--
F.
TRANSFERENCIA Y PROCESAMIENTO DEL ADN CONJUGATIVO
+
--
Una de las dos cadenas parentales del plsmido F pasa a la clula receptora,
replicndose en ella;
La otra cadena parental se queda en el donador, sirviendo a su vez como molde para
la sntesis de una nueva cadena complementaria. Esto explica porqu las clulas F
el
modelo,
la
transferencia
En
la
clula
F,
una
endonucleasa
de
la
secuencia
oriT
del
plsmido.
Los
productos
de
otros
genes
tra
Asignatura: Biologa
PLSMIDOS RECOMBINADOS:
Los plsmidos son excelentes vectores de clonaje. Puede ser "cortado" con una dos enzimas
de restriccin puede incorporrsele un fragmento de ADN que ha sido previamente cortado
usando mas mismas enzimas de restriccin.
Los plsmidos as modificados se los denomina plsmidos recombinados. En ste estado, se
los introduce entonces en una bacteria donde sern replicados.
EMARCADOR DE SELECCIN:
Es crucial el poder distinguir entre las colonias que contienen los plsmidos recombinados de
aquellas que contiene ya sea plsmidos no recombinados o que no contienen ningn plsmido.
Varios mtodos existen para realizar sta distincin y se basan en el uso de un marcador de
seleccin. En el ejemplo de abajo por ejemplo, el marcador de seleccin es la ampicilina.
A.
Asignatura: Biologa
C.
Si es posible, debe tener sitios de restriccin nicos en los gens codantes de marcadores
selectivos. Esos marcadores son inactivados cuando en ellos se inserta un fragmento de ADN
extranjero.
VII.
Como dijimos, los plsmidos son replicones, es decir, unidades de replicacin autnoma, pero
ello no significa que codifiquen toda la maquinaria para su propia replicacin. De hecho, la
mayora de los plsmidos slo codifican unas pocas protenas para este fin, y aprovechan la
maquinaria de replicacin de la bacteria husped (ADN polimerasas, ligasas, primasas, etc.),
Asignatura: Biologa
Modelo de replicacin en s (sigma), o modelo del crculo rodante: una de las dos
cadenas es rota a nivel de oriV, de modo que el extremo 3 suministra el cebador para
la replicacin de la cadena adelantada. La cadena desplazada (cadena menos)
funciona como cadena retrasada (lagging) y debe ser replicada a partir de sitios de
cebado especiales. Este tipo de replicacin es frecuente en plsmidos de bacterias
Gram-positivas.
REGULACIN DEL NMERO DE COPIAS
La regulacin del nmero medio de copias de cada plsmido en cada bacteria es una
propiedad caracterstica dependiente de cmo se controla el inicio de replicacin, siendo
diferentes los mecanismos en los plsmidos de alto nmero de copias (con control relajado) y
en los plsmidos de bajo nmero de copias (de control estricto).
En general, los plsmidos de control relajado tienen mecanismos que inhiben el inicio
de replicacin slo cuando el nmero de copias ha llegado a un cierto nivel.
En cambio, los plsmidos de control estricto tienen mecanismos que logran que slo se
repliquen una vez o un pequeo nmero de veces en cada ciclo celular.
REPARTO DE LAS COPIAS A LAS CLULAS HIJAS
Muchos plsmidos poseen sistemas de reparto (= particin), que tienden a asegurar que una
vez que el plsmido ha sido replicado, cada una de las clulas hijas va a recibir al menos una
copia. A falta de un tal sistema, y si el reparto fuera aleatorio, de vez en cuando, las propias
fluctuaciones de la segregacin aleatoria haran que parte de la progenie no recibiera una
copia, con lo que quedara curada de ese plsmido.
El reparto de las copias a las clulas hijas se suele deber a las llamadas funciones par, que
estn cerca de los genes rep y de la zona ori. Se trata de cortas secuencias de ADN que de
Asignatura: Biologa
PLSMIDOS Y MAMFEROS
Asignatura: Biologa
ENZIMAS
La bacteria produce enzimas que
escinden y destruyen los antibiticos.
Asignatura: Biologa
PARED DE LA CLULA
La pared de la bacteria aumenta de
espesor e impide por efecto rebote
la penetracin del frmaco en el
interior de la clula.
Uretritis: La uretritis puede ser causada por bacterias o virus. Las mismas bacterias que
causan las infecciones urinarias (E. coli) y algunas enfermedades de transmisin
sexual (clamidia, gonorrea) pueden llevar a que se presente uretritis. Las causas
virales de la uretritis incluyen el virus del herpes simple y el citomegalovirus.
Asignatura: Biologa
Asignatura: Biologa