INFORME DE LABORATORIO N 1

MICROBIOLOGIA

OBJETIVOS

INFORME DE
LABORATORIO
MICROBIOLOGIA
2. Cules seran para usted
las normas bsicas de
bioseguridadenel
laboratoriode
microbiologa?

1. Establecer normas y principios

bsicos de comportamiento en el
laboratorio.

2. Aprender y utilizar los mtodos de

esterilizacin disponibles en el
laboratorio.

Uso adecuado de materiales.

Uso de dotacin: bata, cofia y gafas.

PRACTICA 1

3. Conocer los materiales y equipos

utilizados en el laboratorio de
microbiologa.

5. Aplicar criterios disciplinares para

la intervencin segura en ambientes
de laboratorio.

No ingerir alimentos, bebidas, no

fumar en el rea de laboratorio.

PRESENTADO
POR:
Mantener el rea
de trabajo
Maraorganizada
Nelcy Len Ramrez
Cod:28271828
Diana Yaneth Villamizar
3. Cmo puede usted evitar
Cod:1098623003
Cuestionario de entrada
en el laboratorio
Diego Alexander
Rodrguez daos a su
salud?
Cod:1098626229
1. Que es bioseguridad?
Diana santos
Cod:90082650414
Tener cuidado con los
Las normas de bioseguridad son un
Blanca Luzmateriales
Urrego Piedraita
inflamables como
conjunto de medidas preventivas
Cod:60351225
alcohol etlico evitando
destinadas a proteger la salud y
contacto con mechero.
seguridad de las personas que
Manipular correctamente el
realizan actividades en el laboratorio
mechero para evitar
frente a riesgos procedentes del
quemaduras
manejo de agentes biolgicos, fsicos
Manipular cuidadosamente las
o qumicos, estas normas de
sustancias qumicas evitando
bioseguridad estn destinadas a
el contacto con los ojos, se
reducir el riesgo de transmisin de
PRESENTADO A:
recomienda el uso de gafas.
microorganismosdefuentes

Ludy Janeth Mendoza Lavar muy bien las manos para

reconocidas o no reconocidas de
evitar irritaciones por
infeccin en Servicios de Salud
sustancias, en caso de sufrir
vinculadasaaccidentespor
de alergias utilizar guantes
exposicin a sangre y fluidos
quirrgicos.
Universidad Nacional Abierta
y a Distancia (UNAD)
corporales.
Evitar distracciones puesto que
en un
descuido,
se nos puede
Bucaramanga
(Abril
del 2009)
partir algn elemento
ocasionando cortaduras.

4. Mencione las clases de

esterilizacin, cuales son los
agentes de esterilizacin con
ms uso en el laboratorio; en
que consiste cada uno de
ellos y para qu materiales
se utilizan.
1. Calor seco: se efecta en estufas
de aire seco u hornos Pasteur y se
manejan temperaturas entre 160
180C, por un espacio de dos horas
aproximadamente. Este mtodo se
utiliza para esterilizar el material de
vidrio generalmente: tubos, cajas de
Petri, pipetas y erlenmeyers. No se
debe emplear para esterilizar medios
de cultivo o agua pues se evaporan
hasta secarse. Previo al horneado el
material de vidrio se recubre con
papel Kraf y se sella con cinta
indicadora de esterilidad, una vez
realizado el proceso de esterilizacin
se revisa la cinta la cual debe
tornarse de color caf oscuro lo que
indica una correcta esterilizacin. El
calor seco tambin se utiliza para
secar material de vidrio como tubos y
pipetas, este material se deja en el
horno por dos horas a 60C. Las
lminas y laminillas se secan con un
trapo suave. Los dems materiales se
secan a temperatura ambiente.

2. Calor hmedo en autoclave: se

utiliza para esterilizar medios de
cultivo preparados, escobillones,
gasas entre otros. Adicionalmente se
tieneotraautoclavepara
descontaminar cultivos antes de ser
desechados. La autoclave es un
recipiente en el que se consigue
exponer el material a esterilizar a
temperaturas superiores a la de
ebullicin del agua, gracias al
aumento de la presin. El autoclave
se opera a presin de 15 lb. Y a

121C. El tiempo de exposicin

depende del material y volumen que
se esterilice, pero en general esta
comprendido entre 15 y 30 minutos.
3. Flameado: usado principalmente
para asas, es otro mtodo de
esterilizacin comn usado en el
laboratorio. Consiste en poner el asa
con la cual se va a hacer el cultivo,
durante unos minutos en la llama del
mechero.
4. Radiaciones
Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que
alteran las bases de los cidos
nuclecos, estructuras proteicas y
lipdicas, y componentes esenciales
paralaviabilidaddelos
microorganismos.
Rayos Ultravioletas:
Afectan a las molculas de DNA de
losmicroorganismos.Son
escasamente penetrantes y se
utilizan para superficies, se utilizan
para la esterilizacin en quirfanos.
Rayos Gamma:
Su empleo esta basado en los
conocimientos sobre la energa
atmica. Este tipo de esterilizacin se
aplica a productos o materiales
termolbiles y de gran importancia en
el campo industrial. Puede esterilizar
antibiticos vacunas y alimentos
5. Filtracin
Se usan membranas filtrantes con
poros de un tamao determinado. El
tamao del poro depender del uso al
que se va a someter las muestras.
Los filtros que se utilizan no retienen
virus ni micoplasmas, estos ltimos

estn en el lmite de separacin

segn el dimetro de poro que se
utilice. La filtracin se utiliza para
emulsiones oleosas o soluciones
termolbiles. Su usa para esterilizar
aceites, algunos tipos de pomadas,
soluciones oftlmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnsticas,
radiofrmacos, medios para cultivos
celulares, y soluciones de antibiticos
y vitaminas. Existen tres tipos bsicos
de filtros:
-Filtros profundos o Filtros de
profundidad:
-Membranas filtrantes:
-Filtros de huella de nucleacin
(Nucleoporo)

5. Establezca las diferencias entre

esterilizacin y desinfeccin.
Laesterilizacinimplicala
destruccindetodoslos
microorganismos, incluyendo los
esporos. La desinfeccin supone la
destruccin de los microorganismos
vegetativos que pueden causar
enfermedades o en el contexto de las
industrias de alimentos, los que
pueden producir alteraciones. La
desinfeccin no mata necesariamente
a los esporos.

Tabla 1. Caractersticas tipo de Esterilizacin.

Tipo de Esterilizacin

Esterilizacin con
calor seco.

Esterilizacin con
calor hmedo.

Radiaciones

Filtracin

Agente de
esterilizacin

Temperatura de
uso (si se
aplica)

Calor

160- 180 C

Calor

121C

Energa(ondas
110 a 115 C
magnticas)

Presin
Aspiracin

Equipo utilizado

Material que se
puede esterilizar por
este mtodo.

Estufas de aire seco u Tubos, cajas de Petri,

horno Pasteurpipetas y erlenmeyers.

Autoclave

Diafragnometro

Filtros
- Filtros profundos
o Filtros de profundidad
-Membranas filtrantes
-Filtros de huella de
nucleacin(Nucleoporo)

Cultivos preparados

Materiales
termolbiles
Comojeringas,
sondas.
Antibiticos, vacunas,
alimentos

Lquidos y gases

En una primera parte se hizo nfasis

en las normas de bioseguridad que
se deben tener en cuenta en el
laboratorio, estas son:
NORMAS GENERALES:
El acceso al laboratorio estar
limitado solo al personal
autorizado.
No se debe pipetear con la
boca.
El personal que trabaje en el
laboratorio debe cumplir a
cabalidad las normas de
bioseguridad.
Toda rea debe estar marcada
con la respectiva seal de
riesgo biolgico y su nivel de
contencin.
Al ingresar al laboratorio se
debe tener en cuenta el debido
porte de la bata manga larga,
abotonada y limpia, as mismo
una vez se ingrese se debe
colocar los abrigos libros y
dems objetos, en sitios
adecuados para evitar un
posible accidente y NUNCA
sobre los bancos o mesones.
Las puertas y ventanas deben
permanecer cerradas durante
la sesin de laboratorio para
evitar la contaminacin por
corrientes de aire.
Al inicio y trmino de una
prctica se debe limpiar la
superficie de trabajo con una
solucin desinfectante.
Ellaboratoriodebe
permanecer limpio y ordenado,
durante el trabajo o el trmino
del mismo.
Lvese las manos a la hora de
entrar y al trmino de cada
sesin de trabajo, secndolos
con toallas de papel.

El personal con cabello largo

deber recogerlo para trabajar
dentro del laboratorio. As
comousartodoslos
implementos necesarios para
la proteccin segn el nivel de
riesgo biolgico.
Durante la prctica no se
deben guardar ni consumir
alimentos y bebidas dentro del
laboratorio.
Se debe colocar un calzado
adecuado para las prcticas en
el laboratorio.
Hable en tono bajo y evite al
mximo el movimiento dentro
del laboratorio.
Emplee los equipos segn las
instruccionesolos
procedimientosoperativos
estandarizados, al igual que
empleelosprotocolos
correspondientes a la practica.
El trasporte de materiales o de
muestras entre los laboratorios
se realizara de manera tal que
en caso de cadas no se
produzca salpicadura.
Todo personal debe poner
especial cuidado en evitar el
contactoconmateriales
potencialmente infecciosos sin
la debida proteccin.
Los derrames y accidentes
debenserinformados
inmediatamente el supervisor
de laboratorio.
Se usaran mascaras faciales si
existeelriesgode
salpicaduras o aerosoles.
Apagarlosinstrumentos
elctricos antes de manipular
las conexiones.

PASOS LLEVADOS A CABO EN LA

PRCTICA:
Una vez ya preparados, se ingresa al
rea de laboratorio, el tutor nos da las
instrucciones y recomendaciones
necesarias para llevar a cabo la
prctica. Muestra a cada equipo que
elementos se usaran durante la
prctica, a continuacin mostraremos
algunos de los elementos utilizados
en la prctica.
Horno microondas para
hongos.
Se utiliza para esterilizar material de
vidrio, por ejemplo, cajas de Petri,
matraces, tubos de ensayo, pipetas a
travs de circulacin de aire caliente
(calor seco) a temperaturas que
varan entre 120 y 180C por un lapso
de tiempo de 20 minutos a 8 horas.

a)b)
Figura 1.Horno microondas para Hongos.

Cuenta colonias:
Se utiliza para observar el nmero
de colonias presentes en la
muestra.

Figura 3.Cuenta Colonias.

Destilador de agua
Permite la obtencin de agua
destilada, es decir, agua a la que se
le han eliminado iones e impurezas.
Mediante el proceso de destilacin el
agua es sometida al calor hasta su
ebullicinparasepararsus
componentes lquidos, luego sus
vaporessonrecogidosy
condensados.

Hornomicroondaspara
bacterias
Se afirma que el horno microondas es
ideal para esterilizar los implementos
de laboratorio, al igual que el horno
para hongos, solo que este ataca las
bacterias presentes.

a)b)
Figura 4. Desfibrilador de agua.

a)b)
Figura 2.Hono microondas para Bacterias.

Microscopio
El microscopio, de micro- (pequeo)
yscopio(observar),esun
instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeos
para ser vistos a simple vista. El tipo
ms comn y el primero que se
invent es el microscopio ptico. Se
trata de un instrumento ptico. Que
contiene una o varias lentes que
permitenobtenerunaimagen
aumentada del objeto y que funciona
por refreccin.

a)

b)

c)
Figura 6. Autoclave y olla de Presin.

Balanza:
Este un instrumento indispensable en
el libatorio para tomar pesos de los
diferentes materiales o elementos
utilizados en el laboratorio.

a)
Figura 5.Microscopio.

b)

El autoclave u olla de
presin:
La autoclave es un recipiente
utilizado para esterilizar: medios de
cultivo, agua destilada, tierra etc.
mediantecalorhmedo.
El material a esterilizar se expone a
temperaturas superiores a la de
ebullicin del agua, gracias al
aumento de la presin. El vapor de
agua difunde por smosis a travs de
lasesporascoagulandosu
protoplasma.Generalmentese
esteriliza a temperaturas que van
entre 107-126C por un tiempo de 520 minutos con presiones que varan
entre 5 y 20 libras por pulgada
cuadrada (p.s.i).

a)
Figura 7.Balanza.

b)

Cocina elctrica:
Esta es muy importante en el
laboratorio puestoque requiere
calentar sustancias en el momento de
cualquier prctica.

a)b)
Figura 8. Cocina Elctrica.

Incubadora:
Permite obtener temperaturas de
incubacin constante, en procesos
como el cultivo de microorganismos y
de tejidos, para determinaciones
microbiolgicas. La limpieza y la
desinfeccin,peridicasy
sistemticas, son recomendables
para reducir los riesgos derivados de
la contaminacin accidental del
personal del laboratorio.

que se utilizan en el laboratorio debe

anularse la lmpara de la luz.

a)
Figura 10.Nevera.

a)

b)

c)
Figura 9. Incubadora

Neveras
Esnecesariounadecuado
mantenimiento,limpiezay
desinfeccin para reducir los riesgos
asociados a su utilizacin. Sin
embargo, an en estas condiciones,
hay que tener en cuenta lo siguiente:

b)

Cmara de flujo laminar

Es un receptculo con una nica cara
libre (la frontal) que permite el acceso
a su interior, donde se localiza la
superficie de trabajo. Permite realizar,
aislar,manipularcultivosen
condiciones de esterilidad.
La esterilidad de la zona de trabajo se
consigue porque se hace circular a
travs del interior de la cmara una
corriente de aire que previamente ha
sido microfiltrada o tratada con luz
ultravioleta para eliminar todo agente
contaminante.

No deben almacenarse cultivos de

microorganismospatgenospor
inhalacin, en recipientes que no
estn convenientemente cerrados.
No deben almacenarse reactivos
que contengan compuestos voltiles
inflamables (ter etlico, por ejemplo)
en neveras que no posean un
sistemadeproteccinanti
deflagracin.
Figura11. Cmara de flujo Laminar.

En los aparatos de tipo domstico

Asas bacteriolgicas:

Las asas bacteriolgicas bsicamente

son alambres unidos a un mango que
permite manipularlas. El alambre
puede ser de diferente material, (ferro
nquel, nicromo, platino, etc.) y la
forma (recta, curva, etc.,)

Las cajas de petri

Figura12.ASAS Bacteriolgicas.

Figura 15.Cajas de Petri.

Durante la prctica de laboratorio la

tutora nos enseo todos los
implementos que necesitaremos para
las prcticas, como son:

Asas de Hockey
Asas rectas
Isopos

Pipetas

Una vez familiarizados con los

implementos,procedemosa
desinfectarlos y lavarlos con jabn e
hipocloritodesodio,teniendo
especial cuidado en no maltratar el
material (partirlo). Despus de lavado
el material se secan con papel
absorbente el exterior de los
implementos.Despusde
desinfectadosprocedemosa
envolverlos o a empacarlos con papel
kraf, los tubos y los frascos se deben
tapar la boca con tapones de algodn
luego se sella con cinta indicadora de
esterilidad o cinta de enmascarar.
Se debe tener especial cuidado
cuando se envuelven los frascos, los
tubos de ensayo y las pipetas,
dejando indicado con cinta la boca de
estos para cuando sean destapados
se evite contaminar. Las cajas de
petri se empacan en grupos de cinco,
se envuelven con papel kraft y se
amarran con cinta de enmascarar.

a)
Figura 13. Pipetas.

b)

Tubos de ensayo

a)b)
Figura 14.Tubos de Ensayo.

Se procedea esterilizarlo en el
Horno a temperatura de 160 - 180 C,
esto se hace con la supervisin de la
tutoramarqueyrotule
adecuadamente los materiales, estos
deben llevar claramente escrito en un
lugarvisible,elnombreo
identificacin del grupo de trabajo, el
ensayo o experiencia realizada, la
fecha.

LABORATORIO 2
PREPARACION Y MANIPULACION DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS
Aprenderlapresentacin
manipulacin de los medios
cultivo.

y
de

7.8 grs de PDA + 100 ml de caldo

nutritivo.
Se revuelve.
100 ml de caldo nutritivo.
Se revuelve.

MATERIALES
Frasco con medio de cultivo
PDA.
Frasco de Pires.
Balanza.
Papel Kraf.
Plancha de calentamiento
Elemeyer de 100ml.
Cinta de indicadores de pH.

PROCEDIMIENTO
PDA 39grs -------------1 litro
Para preparar 200ml utilizamos
7.8grs.

Se mide el pH.
pH 3.4
se pone a hervir en la plancha de
calentamiento.
Se baja y se deja enfriar.
Se pone a hervir en la olla a presin
durante 15 minutos.
Se saca y se deja enfriar.
Se hecha en la caja de petri
previamente marcadas.
Se deja cuajar.
Se cubre con cinta de enmascarar.
Se lleva a la incubadora.

Papel Kraf.
Plancha de calentamiento.
Elemeyer de 100ml.
a)
Figura 15.PDA

b)

Cinta de indicadores de pH.

En esta prctica encontramos medios
de cultivos simples como son:
Leche
Sangre diluida
Caldo de pollo
Agar peptona
Papa en trozos
Los medios de cultivo mencionados
cuales son selectivos para hongos.

Figura 16. PDA + Caldo nutritivo.

El pH para bacterias es de 7.5

El pH para hongos es de 5.0
En esta prctica preparamos

a)b)
Figura 17. PDA agregado a cajas Petri.
Tabla 2.Ejemplo anlisis medios de cultivo.

AGAR BACTERIOLOGICO
MATERIALES
Balanza.

Agar bacteriolgico
Caldo nutritivo
Se prepararon un tubo de cada
muestra:
1 tubo de agar nutritivos.
2. tubo con caldo nutritivo.
4 cajas de agar nutritivo.
50ml de caldo nutritivo.
400ml de agar nutritivo.
20gr por litro de agar 1000ml
por 4gr.
PDA medio cultivo para
Hongos para hacer 10 cajas
con 200ml/39g por litro = 7.8
4gramos de agar / 200ml de
agua destilada.
El pH para el agar nutritivo es
de pH=7.
Caldo nutritivo inclinado 10ml
en 6 tubos.
El agar se llevo al pH=7. Para
lograr esto se le agrego 4

Solucingotas
de lugol
de hidrxido de sodio el
caldo de papa se filtro.
Iodo re sublimado, 1g.
IK, 2g.
Agua destilada hasta 300 ml

BIBLIOGRAFIA
Doctora, Ludy Janeth Mendoza
Curso completo contenido en
lnea Microbiologa(Unad)
Agar de Tripticasa de Soja (TSA)
Composicin:

CONCLUSIONES
Conocimos las normas de
bioseguridad del laboratorio y
la importancia de para realizar
laspracticas
satisfactoriamente.
Figura 18. Agra Bacteriolgico.
a)

Conocimoslosdiferentes
elementosymateriales
utilizados en el laboratorio de
microbiologa.
Aprendimosadesinfectar
materiales de vidrio, manipular
y a empacar material para ser
esterilizado.

Triptosa, 15g.
Peptona, 5g.
Extracto de levadura, 3g.
Glucosa, 5g.
Cloruro sdico, 5g.
Agar, 15g.
Agua destilada, 1000 ml.

Caldo Nutriente
Composicin:
Extracto de carne, 3g
Peptona, 5g.
Agua destilada hasta 1000 ml

Conocimoslosdiferentes
mtodos de esterilizacin.

b)

Nos mostro la importancia que

tienen los micro cultivos y sus
diferentes compuestos.
Aprendimos a preparar y
manipular los medios de
cultivo utilizados en la prctica
del laboratorio.

Figura 20. Caldo de pollo (Caldo Nutritivo)

Figura 19.Tubos con Agar nutritivo y caldo nutritivo.