Introduccin:

El dolor es una experiencia sensorial o emocional desagradable asociada a un

dao tisular real o potencial, la analgesia es la ausencia de dolor que se consigue
mediante el uso de frmacos u otros sistemas de terapia.
Se considera que un frmaco tiene propiedades analgsicas cuando, en dosis no
toxicas, suprime la respuesta conductual, eleva el umbral o el tiempo de reaccin
al estimulo nociceptivo. La eficacia de la administracin de analgsicos se valora
sistemticamente. Los signos significativos del grado de dolor o sufrimiento deben
reevaluarse una vez que el animal se encuentre bajo los efectos de los
analgsicos. Igualmente hay que valorar la modificacin de: el comportamiento, el
apetito, la temperatura corporal, la frecuencia respiratoria y la palpacin de la zona
que origina el dolor. Los AINES son analgsicos de potencia moderada, inhiben la
cicloxigenasa bloquean la sntesis de prostaglandinas.

Ketorolaco:

Pertenece a la familia de antiinflamatorios no esteroideos (AINES), dentro de la

subclasificacin de arilpropinicos. A este grupo pertenecen otros AINES
ampliamente utilizados como el naproxen, el ibuprofeno, el ketoprofeno. El
ketorolaco comparte las siguientes caractersticas estructurales con los frmacos
de su tipo.
1. Grupo de cido carboxlico el cual se une al sitio de accin.
2. Grupo fenilo.
3. Tiene estructura plana conformada por un nitrgeno que le confiere
estabilidad en la unin a la ciclooxigenasa (COX), complejoenzimtico
sobre la que acta, como el resto de los AINES.}

Figura 1.- Estructura del ketorolaco

Mecanismo de Accin:

La ciclooxigenasa es una enzima que cuenta con dos isoformas diferentes:

A. COX-1
B. COX-2
La cual es responsable de sintetizar prostaglandinas
a partir del cido
araquidnico. Los tejidos en los que cada isoforma se expresa son diferentes: la
COX-1 forma parte constitutiva de la mayora de las clulas en el organismo, entre
las que se destacan las clulas parietales, cardiacas, renales y epiteliales y tiene
como finalidad sintetizar PG protectoras de la mucosa gstrica, de la homeostasis
electroltica en casos de hipovolemia, PG involucradas en la vasodilatacin y las
facilitadoras de agregacin plaquetaria.
Por otro lado COX-2 adems de ser constitutiva en menor cantidad, tambin es
inducida por los procesos inflamatorios, ya que adems de la sntesis de
prostaglandinas, es catalizadora de la produccin de prostaciclinas y tromboxanos
responsables de la regulacin vasoconstriccin/ vasodilatacin, fibrinlisis,
sensibilizacin de receptores nociceptivos perifricos y otros eventos que ocurren
durante la inflamacin.
El ketorolaco, al no ser selectivo para alguna de las isoformas, inhibe tanto la
formacin de PGs pro-inflamatorias y PGs en nociceptores perifricos
(antiinflamacin y analgesia: efectos farmacolgicos deseados),
como la
produccin de PG protectoras provenientes de COX-1.

Figura 2.- Inhibicin de sntesis de prostaglandinas por ketorolaco.

El Ketorolaco el inicio de la analgesia se observa 30 minutos despus de la

administracin, cualquiera que sea la presentacin utilizada.
En cuanto a su distribucin, Ketorolaco se une a protenas plasmticas en un 99%,
sin embargo esta unin es dbil, por lo que el uso concomitante de cualquier otro
AINE puede desplazar al Ketorolaco. Una vez que el Ketorolaco ha alcanzado el
torrente sanguneo, el frmaco se metaboliza va heptica derivando en
metabolitos inactivos, por conjugacin en su mayora.
La eliminacin de
Ketorolaco es renal, y es excretado ya sea como el frmaco sin cambio, como un
metabolito conjugado o bien hidroxilado.
Mtodo de Haffner (pinzamiento de la cola) en la rata.
Este mtodo fue inicialmente diseado por Haffner en 1929 y posteriormente,
modificado por Bianchi y Franceschini; en 1954. Implica el uso de una pinza (clip,
broche de presin) aplicando en la parte medio de la cola del roedor y el registro
del tiempo que se tarda el animal en intentar quitrsela, mordiendo la pinza o, el
rea donde esta se encuentra. El reflejo de morder implica la participacin de
centros nociceptivos mas elevados, debido a que el animal tiene que identificar
exactamente el lugar donde se aplica el estimulo doloroso y adems, tiene que
realizar movimientos coordinados para poder quitarlo. Por supuesto, es importante
ajustar la presin ejercida por la pinza de manera que, sea suficientemente intensa
como para causar que todos los animales control, respondan en un lapso de 15 a
30 s para finalizar el dolor (tiempo de corte), el cual depende del tipo de pinza o
artefacto de presin que se utilice en la prueba.

Fundamento:

La presin como un estimulo nociceptivo puede aplicarse a la cola o pata de un

animal y as, la presin necesaria para facilitar una respuesta, puede registrarse.
Dado que la evaluacin de los resultados obtenidos con esos mtodos son en su
mayoria subjetivos y no tan fciles de cuantificar, este procedimiento debe
restringirse a los bioensayos de seleccin de actividad primarios o inciales. Sin
embargo, en los primeros acercamientos experimentales para evaluar un frmaco
en modelos animales, este mtodo es uno de los ms sencillo y accesibles para la
capacitacin prctica de los alumnos de la farmacologa, en el manejo de animales
y en la observacin conductual de estos.

Objetivos:
El propsito de este ensayo es capacitar al alumno para que se desarroll
habilidades en el uso de modelos animales y probar particularmente, en este caso:
a) Potencia Analgsica.
b) Tiempo de Efecto Mxima.
c) Duracin de la Actividad Analgsica de frmacos de referencia o bien de
compuestos con actividad potencial.
Objetivos particulares:
A. Administrar Ketorolaco por va intraperitoneal y va subcutanea, calcular la
dosis correcta dependiendo del peso de las ratas.
B. Medir el tiempo de Corte en el cual las ratas tarden en quitarse la pinza.
C. Medir el tiempo del efecto mximo del Ketorolaco.
Material:

Pinzas de presin.
Jeringas de insulina de 1 mL.
Marcadores.
Solucin salina (NaCl) al 0.9% (o un vehculo apropiado).
Solucin del frmaco (Acido Acetilsalicilico, Ibuprofeno, entre otros).
Solucin de los frmacos a probar (frmacos con posible actividad
analgsica).
Ratas Wistar, de cualquier sexo y de 190 a 200 g.

Mtodo:
1) Pesar a los animales, dividirlos en grupos control y grupos tratados, de
acuerdo al nmero de dosis a ensayar y, marcarlos para su identificacin.
2) Preparar las respectivas soluciones de cada frmaco que se ve a probar.
3) Aplicar la pinza en la parte de la cola de los animales (aproximadamente, a
una distancia de 1.5 cm de la base) y registrar el tiempo (latencia) que
tardan en quitrsela (tiempo de corte). Esta medida se usa como parmetro
de referencia (basal). La presin debe ser constante.

4) Administrar el vehculo o solucin por va i.p. o s.c. a los controles y la dosis

asignada por los grupos tratados, de tal manera que exista un intervalo de
por lo menos 60 s entre 2 animales en una secuencia. Usar 0.1 mL por 10 g
de peso corporal, como el volumen de inyeccin en todos los grupos.
5) Medir las latencias a los 15, 30, 60, 90 y 120 min posteriores a la hora de
administracin usando un tiempo de corte para retirar la pinza en cada uno
de estos periodos, basados en la respuesta del animal. (Nota: como el
animales est protegido contra el estimulo doloroso, esa medida va a ser
mayor que la respuesta basar, pero si tarda demasiado o no responde, se
aplica el tiempo corte en segundos como su latencia. Ver arriba).

Resultados:
Tabla 1.- Peso de las ratas.
Rata
1
2

Peso g
277.5
362

Tabla 2.- Resultados del Tiempo Control en ratas.

Tiempo Control
Rata
1
2

T1 (s)
1.37
1.64

T2 (s)
1.19
1.50

T3 (s)
1.22
1.25

Media
1.26
1.46

Desviacin Estndar
0.0964
0.2781

Imagen 1.- Uso de una pinza aplicando en la parte medio de la cola de la

rata.

Clculos Posolgicos va Intraperitoneal:

Rata 1
1 mg

1000 g

277.5 g
x = 0.2775 mg

1 mL
x

1 mg
0.2775 mg
x = 0.27 mL

Se administrara 0.27 mL de Ketorolaco para la primer rata por va

intraperitoneal.

Imagen 2.- Administracin de Ketorolaco por va intraperitoneal.

Clculos Posolgicos va subcutnea:

Rata 2
1 mg

1000 g

362 g
x = 0.362 mg

1 mL
x

1 mg
0.362 mg

x = 0.362 mL

Se administrara 0.36 mL de Ketorolaco para la segunda rata por va

subcutnea.
Imagen 3.- Administracin de Ketorolaco por va subcutnea.

Tabla 3.- Resultados del Tiempo de latencia por va intraperitoneal.

Rata

T1 0
minutos

T2 5
minutos

T3 10
minutos

T4 20
minutos

T5 40
minutos

T6 80
minutos

Media

1.22
segundos

1. 42
segundos

16.43
segundos

18.71
segundos

9.10
segundos

2.19
segundos

8.17

Tabla 4.- Datos obtenidos de la administracin va intraperitoneal:

Tiempo (min)

Respuesta
%MEP

0
5
10
20
40
80
rea Total =
rea
Promedio =

0.04
0.092
1.73
0.93
0.2
0.01
653.6
108.9333333

Intervalo de
Tiempo (min)

Respuesta
Promedio

rea

0
5
5
10
20
40

8.17
8.17
8.17
8.17
8.17
8.17

0
40.85
40.85
81.7
163.4
326.8

Grafica 1.- Tiempo de latencia contra el Porciento Mximo del Efecto Posible por
va intraperitoneal.

Via Intraperitoneal
2
1.8
1.6
1.4
% MEP

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
-0.2 0

20

y = -0.0072x + 0.6854
R = 0.0965
40
60
80
Tiempo

100

Imagen 4.- Estado de latencia por va peritoneal.

Tabla 5.- Resultados del Tiempo de latencia por va subcutnea.

Rata

T1 0
minutos

T2 5
minutos

T3 10
minutos

T4 20
minutos

T5 40
minutos

T6 80
minutos

Media

1.38
segundos

2.11
segundos

5.17
segundos

13.50
segundos

8.65
segundos

4.12
segundos

5.82

Tabla 4.- Datos obtenidos de la administracin va subcutnea:

Tiempo (min)
0
5
10
20
40
80
rea total =
Promedio =

Respuesta
%MEP
0.05
0.18
0.43
0.64
0.18
0.03
465.6
77.6

Intervalo de
Tiempo (min)
0
5
5
10
20
40

Respuesta
Promedio
5.82
5.82
5.82
5.82
5.82
5.82

rea
0
29.1
29.1
58.2
116.4
232.8

Grafica 1.- Tiempo de latencia contra el Porciento Mximo del Efecto Posible por
va subcutnea.

Via subcutanea
0.7
0.6

% MEP

0.5
0.4
0.3
0.2
y = -0.0025x + 0.3169
R = 0.1018

0.1
0
0

20

40

60
Tiempo

Imagen 5.- Estado de latencia por va subcutnea.

80

100

Discusin:
En el presente trabajo se estudio los efectos analgsicos de un AINE (Ketorolaco),
donde se puede observar en el primer grafico l % Porciento Mximo del Efecto
Posible por va intraperitoneal llegando a su Tiempo de efecto mximo a los 10
minutos, mientras que el en el segundo grafico el Tiempo de efecto mximo fue a
los 10 minutos. Las curvas tuvieron un comportamiento creciente, esto se puede
deber al efecto analgsico del Ketorolaco, despus descendieron ya que conform
al tiempo aumenta el efecto analgsico disminuye por la degradacin del frmaco.
Por lo tanto fue ms rpido y efectivo por va intraperitoneal que por la va
subcutnea. Algunos tiempos basales fueron mayores que los obtenidos en sus
latencias, esto provoca que hubiera un cambio significativo en el promedio del
%MPE.
Conclusin:
En esta prctica se valor efecto analgsico del Ketorolaco, como representante
de los AINES por lo tanto es un buen inhibidor de las ciclooxigenasa: COX-1 y
COX-2. Se observ que el efecto vara en el tiempo y por la va de administracin
por lo tanto podemos decir que para que se logre un buen efecto analgsico en
menor tiempo la va de administracin intraperitoneal es la mejor, pero sin
descartar la va subcutnea que aunque tarde ms tiempo tambin es efectiva.
Bibliografa:

Miriam Z, Alejandra R, Nayeli J, Carmen Z. Ketorolaco. Medigraphic.

Mexico. 2007; 14:1-5.}

Macario E. Ketorolac in the era of cyclo-oxigenase-2 selective nonsteroideal

anti-inflammatory drugs: a Systematic Review of Efficacy, Side effects, and
Regulatory issues. Pain Medicine 2001: 4.

Garrote A, Bonet R. El papel de los AINES en el tratamiento analgsico.

OFFARM 2003; 22(2): 56-62.

Anexos:

Centros superiores y modulacin del dolor

Como se sabe, la va espinotalmica tiene proyecciones a la formacin reticular

del tronco cerebral y los ncleos intralaminares del tlamo, as como el complejo
ventrolateral posterior del tlamo y desde ah a la corteza sensitiva y el sistema
lmbico.
Las conexiones a los ncleos intralaminares del tlamo parecen ms relacionadas
con el alerta que con la percepcin del dolor, mientras las proyecciones del
complejo ventrolateral a la corteza sensitiva primaria aparecen como ms
relacionadas con la sensacin de dolor (Mayer y cols., 1975). Adems de la va
ascendente, se ha establecido la importancia de un sistema descendente
modulador de la aferencia nociceptiva (Fields, 2000). Esta va tiene su origen en la
corteza frontal y reas de asociacin sensorial y el hipotlamo que proyectan
hacia la sustancia gris periacueductal donde se ha encontrado alta concentracin
de endorfinas. La sustancia gris periacueductal proyecta, a su vez, hacia los
ncleos del rafe medio y desde stos nacen proyecciones descendentes hacia el
asta dorsal de la mdula, estimulando una pequea interneurona endorfinrgica
que ejerce un efecto inhibitorio sobre el aferente nociceptivo.
Adems de sistemas descendentes inhibitorios parece clara la existencia de
sistemas aumentado-res del dolor. Uno de los ncleos reticulares que reciben
proyecciones del haz espinotalmico es el ncleo reticularis giganto celularis de la
protuberancia. Observaciones recientes muestran que la destruccin de este
ncleo resulta en reduccin de la hiperalgesia inducida por una lesin perifrica
(Ren y cols., 2000). A su vez, la destruccin conjunta de los ncleos del rafe con el
ncleo reticularis giganto celularis no resulta en reduccin de la hiperalgesia,
sugiriendo que existe un equilibrio entre sistemas excitatorios e inhibitorios de la
aferencia nociceptiva.
En ncleos ms superiores tambin se ha visto que la aferencia nociceptiva
repetitiva es capaz de provocar cambios neurofisiolgicos. Por ejemplo, en el
complejo ventrolateral posterior del tlamo se ha observado una cada en la
concentracin de GABA, probablemente el principal neurotransmisor inhibitorio en
el SNC, luego de lesiones de la va espinotalmica.

Animales anlogos para evaluar frmacos con actividad analgsica:

a) Ratones
b) Hamster
c) Conejos