PRCTICAS DEL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA:
BACTERIOLOGA Y MICOLOGA

M PAZ MERINO JIMNEZ

MIREIA LLINARES MARCELO

Autoras: M Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo

Maquetacin: Patricia Penavella Soto
Edita: Educlia Editorial, S.L.
Imprime: Publidisa SA
ISBN: En curso
Depsit Legal: En curso
Printed in Spain/Impreso en Espaa.
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PREFACIO

El Cuaderno de Prcticas de Microbiologa es un

trabajo fundamental en el desarrollo de la asignatura de
FUNDAMENTOS

TECNICAS

DE

ANALISIS

MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga

terica que paralelamente tiene que ir desarrollada con
prcticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe
existir una consecucin en la ejecucin de las prcticas al
mismo tiempo que se vaya impartiendo la teora.
Con este cuaderno el desarrollo de las prcticas
seguira un orden, fundamental para cumplir los protocolos
de actuacin en el laboratorio de Microbiologa. El alumno
siguiendo los pasos de dicho cuaderno ir desarrollando la
prctica con correccin hasta la obtencin de los resultados
finales que es lo que se pretende.

INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

1. MANEJO DEL MICROSCOPIO

2. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL
3. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.
4. ESTERILIZACIN POR CALOR SECO.
5. ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO.
6. ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN.
7. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
8. CNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
9. URINOCULTIVO
10. PLEGADO DE UN FILTRO
11. INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LAS
BACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.
12. PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LA
TINCION SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.
13. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES
TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR

PARA

14. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES

TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR

PARA

15. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES

TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS

PARA

16. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES

TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS

PARA

17. REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.

18. REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.
19. REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM
20. REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDO
ALCOHOL RESISTENTE.
21. REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS
22. REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRI
O DE LA TINTA CHINA.
23. PRUEBAS BIOQUMICAS.
24. ANTIBIOGRAMA.
25. HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS
26. TECNICA
DE
PORTAOBJETOS

SIEMBRA

DE

HONGOS:TCNICA

DEL

27. TECNICA
DE
SIEMBRA
CUADRADITO DE AGAR

DE

HONGOS:TCNICA

DEL

28. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL HOYO EN

PLACA
29. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUBRE
ESCAVADO EN PLACA
30. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DE LA GOTA
PENDIENTE
31. TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACIN
DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.

PRCTICA 26. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

PORTAOBJETOS.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
-

Alcohol
Mechero Bunsen
Portaobjetos
Placa Petri
Papel filtro
Agua destilada
Medio de cultivo Sabouraud
Pipeta Pasteur estril
Asa de siembra
Muestra de hongos
Estufa Pasteur

TCNICA
1. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Prctica 7.6).
2. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
3. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todava en estado lquido)
con la ayuda de una pipeta Pasteur estril.
4. Dejar secar el medio.
5. Recortar un crculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.
6. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada para
mantener el ambiente hmedo para el crecimiento del hongo.
7. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estril tomar un poco de
muestra.
8. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeo movimiento
circular con el asa.
9. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.
10. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Preparar 100 ml de Sabouraud

Limpiar portaobjetos

Dejar secar

Cubrir con medio Sabouraud

Humedecer

Cortar crculo de papel de filtro

Tomar muestra

Sembrar en el centro del porta

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
-

Cubreobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del portaobjetos)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio

TCNICA
1. En el portaobjetos donde habamos realizado la tcnica, echamos una gota de azul de
lactofenol.
2. Poner un cubreobjetos encima.
3. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Gota azul en porta

Cubre sobre la muestra

Observar al microscopio

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 27. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

CUADRADITO DE AGAR.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
-

Alcohol
Mechero Bunsen
Placa Petri con medio agar Sabouraud
Bistur
Pinzas
Asa de siembra
Muestra con hongos
Portaobjetos
Cubreobjetos
Placa Petri vaca
Papel filtro
Agua destilada
2 capilares de microhematocrito
Estufa
Regla
Tijeras

TCNICA
1. Dibujar en un papel un cuadradito de 15x15 cm. Colocar sobre el papel la placa con agar
Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las lneas dibujadas anteriormente con la ayuda de
un bistur.
2. Con unas pinzas estriles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un
portaobjetos. El portaobjetos deber haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.
3. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.
4. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.
5. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.
6. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.
7. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Cortar cuadrado de agar

Colocar en portaobjetos

Sembrar en los laterales

Coger muestra

Colocar cubreobjetos

Colocar en la cmara hmeda

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
-

Portaobjetos
Cubreobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del cuadradito de agar)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio

TCNICA A
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el
cuadradito de agar.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES
1

Limpiar portaobjetos

Coger el cubre

Poner gota de azul

Poner cubre sobre la gota de azul

TCNICA B
1. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.
2. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedar sobre el
portaobjetos.
3. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol.
4. Poner el cubreobjetos limpio sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 28. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

HOYO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
-

Alcohol
Mechero Bunsen
Placa de Petri (la que hemos usado en la prctica 27)
Cubreobjetos
Asa de siembra
Muestra con hongos
Pinzas

TCNICA
1. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.
2. Cogemos la placa que hemos usado en la prctica anterior, y sembramos en las paredes del
hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.
3. Con una pinza estril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado
con alcohol y flameado).
4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES
1

Sembrar paredes del hoyo

Coger un poco de muestra

Colocar cubreobjetos

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
-

Portaobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del hoyo en placa)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio

TCNICA
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el hoyo.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES
1

Limpiar portaobjetos

Coger el cubre

Poner gota de azul

INDICA RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

Poner cubre sobre la gota de azul

PRCTICA 29. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

CUBRE ESCAVADO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL
-

Alcohol
Mechero Bunsen
Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.
Cubreobjetos
Asa de siembra
Muestra con hongos
Pinzas

TCNICA
1. Con unas pinzas estriles, colocar 3 4 cubreobjetos limpios en un ngulo de 45 o en la
placa con medio Sabouraud.
2. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estril.
3. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.
4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo

PROCEDIMIENTO EN IMGENES
1

Cubreobjetos en ngulo de 45 o

Coger muestra

Sembrar

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

Cerrar e incubar

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL
-

Portaobjetos
Pipeta Pasteur
Colorante azul de lactofenol
Muestra ya incubada (tcnica del cubre inclinado en placa)
Pinzas
Mechero Bunsen
Microscopio

TCNICA
1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habamos puesto en la
placa.
3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES
2

Limpiar portaobjetos

Coger el cubre

Poner gota de azul

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

Poner cubre sobre la gota de azul

PRCTICA 31. TCNICA DE VISUALIZACIN DE HONGOS.

VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA
ADHESIVA.
MATERIAL
-

Alcohol
Mechero Bunsen
Pipeta Pasteur estril
Cinta adhesiva transparente
Portaobjetos
Azul de lactofenol
Muestra con hongos
Microscopio

TCNICA
1. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
2. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran
los hongos.
3. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.
4. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.
5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES
2

Tomar muestra

Limpiar portaobjetos

Gota de azul en porta

INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO

Colocar cinta sobre la gota