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Determinao de protenas - Mtodo Kjeldahl::

Reagentes

. Introduo
Este mtodo baseia-se na transformao
do nitrognio da amostra em sulfato de amnio

- cido sulfrico P.A

- Zinco granulado

atravs da digesto com cido sulfrico PA e

posterior destilao com liberao da amnia, que
fixada em soluo cida e titulada. Podem-se
expressar

os

resultados

em

protdios,

multiplicando-se a porcentagem do nitrognio total

- Mistura cataltica
a)

Sulfato de potssio (K2SO4) P.A, sulfato de

sdio anidro (Na2SO4) P.A ou bissulfato de

potssio (KHSO4)

por fatores especficos

b)

Material

Sulfato

de

cobre

pentahidratado

(CuSO4.5H2O) P.A

Aparelho ou bloco digestor

c)

- macro ou micro-Kjeldahl

Misturar (a) e (b) na proporo de 10:1,

triturando em gral de porcelana at obter um p

- Balana Analtica

fino

-Balo Kjeldahl ou tubo Kjedahl

-Bquer de 250mL

Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) a 50%

-Buretas de 25 ou 50mL

(p/v)

-Erlenmeyer de 125 ou 250mL

-Esptula

soluo de cido brico (H3BO3) a 4% (p/V)

Gral de porcelana com pistilo

- pesar 4g de cido brico P.A, transferir para um

-Papel indicador universal de pH

bquer, adicionar um pouco de gua e aquecer

-Pipeta graduada

sob agitao branda at dissoluo. Resfriar,

-Pipetas volumtricas de 2 e 10mL

transferir para balo volumtrico de 100mL e

-Provetas de 50, 100 e 250mL

completar com gua. Filtrar se necessrio

-Papel de filtro
-Pina metlica

Prtica de Laboratrio/2013

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Bromatologia Nutrio bloco IV

Indicador misto

Aquecer

Pesar 0,132g de vermelho de metila

lentamente, mantendo a temperatura a 50oC por

(C15H15N3O2) e 0,06g de verde de bromocresol

uma hora ou dependendo das instrues do

(C21H14Br4O5S).

fabricante do bloco digestor

em

bloco

digestor,

princpio,

Dissolver em 200mL de lcool etlico a

70% (V/V). Filtrar se necessrio e guardar em

Em seguida, elevar gradativamente at atingir

400oC. Quando o lquido se tornar lmpido e

frasco mbar

transparente,
Obs.: O indicador misto poder ser incorporado
soluo de cido brico a 4% na proporo de

de

tonalidade

azul-esverdeada,

retirar do aquecimento, deixar esfriar e adicionar

10mL de gua

8mL por litro.

Obs.: Para produtos muito gordurosos, digerir a
Soluo padro de cido sulfrico (H2SO4) 0,1N

amostra com adio de um anti-espumante

ou soluo padro de cido clordrico (HCl) 0,1N.

Destilao
Mtodo
a) Produtos de salsicharia, enlatados e gelatina;

- Acoplar ao destilador o erlenmeyer contendo

20mL de cido brico a 4% com 4 a 5 gotas de

Micro-Kjeldahl: 0,25g

soluo de indicador misto;

Macro-Kjeldahl: 1,00g

- Adaptar o tubo Kjeldahl ao destilador e adicionar

a soluo de hidrxido de sdio a 50% at que a

Extrato de carne:
Micro-Kjeldahl: 2mL da soluo estoque a 10%

mesma se torne negra (cerca de 20mL);

- Proceder destilao, testando com papel

(p/V)
Macro-Kjeldahl: 1,00mL da soluo estoque a

indicador de pH at que no ocorra mais reao

alcalina. A soluo receptora deve ser mantida fria

10% (p/V)

durante a destilao;
- Titular com soluo de cido sulfrico 0,1N ou
soluo de cido clordrico 0,1N at a viragem do

a) Micro-Kjeldahl
((Digesto ou mineralizao: pesar em balana

indicador.

analtica ou pipetar volumetricamente a amostra

de acordo com procedimento a) ou b), transferir

Clculos:
% nitrognio total

para tubo de Kjeldahl

V * N * f * 0,014 *100
p

Adicionar 2,5g de mistura cataltica e 7mL de

% protdios % nitrognio total * F

cido sulfrico P.A

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onde:
V: mililitros de soluo de cido sulfrico 0,1 N ou
soluo de cido clordrico 0,1 N gastos na
titulao, aps a correo do branco
N: normalidade terica da soluo de cido
sulfrico 0,1N ou soluo de cido clordrico 0,1N
f: fator de correo da soluo de cido sulfrico
0,1N ou soluo de cido clordrico 0,1N
P: massa da amostra em gramas
F:

fator

de

converso

da

relao

nitrognio/protena, de acordo com o produto

Carnes e derivados F=6,25
Gelatina F=5,55
Leite e derivados=6,38
Trigo e produtos tritcolas=5,7
Ovos=6,68
Arroz=5,95
Soja=5,71
Cevada, aveia, centeio=5,83
Nozes=5,46
Obs.: fazer uma prova em branco com os
reagentes
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos qumicos e
fsicos para anlise de alimentos. So Paulo,
2008, Cap. IV, p. 123.
FAO/WHO. FAO Nutrition Meetings Report Series,
52. Energy and protein requirements. Geneva,
1973. (Technical Report Series, n. 522).
SOUTHGATE, D.A.T. The relationship between
food composition and available energy. Rome:
Joint FAO/WHO/UNU Expert Consultation on
Energy and Protein requirements. 1981.

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Bromatologia Nutrio bloco IV