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METODOLOGIAS
Estufa
Balana Infra-vermelho
Mufla
Digestores
MTODO DE SOMOGYI-NELSON
Mtodo instumental : Espectrofotomtrico
Princpio do mtodo:
A glicose desproteinizada da amostra reduz sal de cobre, em meio alcalino
e a quente. A forma reduzida do sal de cobre atua sobre o reativo arseno
molibdico determinando o aparecimento da cor azul, cuja intensidade
proporcional ao teor de glicose da amostra. Sob a ao do calor e do lcali, os
acares redutores se decompem parcialmente em fragmentos oxidveis pelohidrxido cprico
existente no reativo de Somogyi - Nelson, resultando em cido
oxlico, malnico, etc. Nesta reao o hidrxido cprico (azul) se reduz hidrxido
cuproso (amarelo).
Continuando o aquecimento, o hidrxido cuproso perde uma molcula de
gua, transformando em xido cuproso (vermelho).
O xido cuproso assim formado, vai reduzir o reativo arsenomolbdico
dando o xido de molibdnio (MO3O8) de colorao azul, cuja intensidade
proporcional a quantidade de glicose existente na amostra.
Extrao da amostra:
- Pesar 1g de amostra (ou pipetar 5 ml de suco) em um Becker de 50 ml
- Adicionar 5 ml de NaOH - 0,5N e agitar
- Lavar as paredes do Becker com gua destilada
- Neutralizar com cido actico glacial ( 0,1ml)
- Transferir o extrato para um balo de 100ml, lavando bem o Becker,
completar o volume.
- Neste extrato sero feitos os acares redutores(1a SOLUO)
Hidrlise cida da sacarose
- Do extrato obtido acima pipetar 20ml e transferir para um balo de 100ml
- Adicionar 0,5ml de HCL concentrado
- Aquecer em banho Maria fervente por 15 min.
- Esfriar em banho de gelo
- Neutralizar com sol. saturada de carbonato de sdio (1,5ml)
- Completar o volume do balo para 100ml.
- Usar esta sol. para desproteinizao (2a SOLUO)
Desproteinizao da amostra
-Colocar respectivamente em dois tubos de ensaio: 3ml da 1a soluo (tubo 1)
3 ml da 2a soluo (tubo 2)
Em cada um dos tubos adicionar:
- 9,0 ml de gua destilada
- 1,2 ml de sol de hidrxido de brio 0,3N
- 1,2 ml de sol. sulfato de zinco a 5%
- agitar os tubos e deixar em repouso por 1o min.
- filtrar
Doseamento:
Usar para o doseamento 1,0 ml do extrato desproteininizado para acares
redutores e 2,0 ml da sol. hidrolizada e desproteinizada para a sacarose, seguindo
a seqncia da tcnica usada na curva padro.
- Completar o volume final dos tubos para 10 ml, usando 6,0 ml de gua destilada
- Ler a D. O. em espectrofotmetro a 510 nm.
Preparo da solues:
-sol de Sulfato de Zinco (ZnSO4) a 5%
- sol. de hidrxido de brio Ba(OH)2 . 8H2O 0,3N
Pesar 47,2 g de Ba(OH)2 e diluir para 1000 ml com H2O destilada
Equivalncia das solues
Colocar em erlenmeyer de 250ml, 5 ml da sol. de (ZnSO4), 20 ml de H2O
destilada e 2 gotas de sol. de fenoftaleina alcolica 1%. Titular com a sol. de
Ba(OH)2, at viragem para colorao rsea.
Reativo A:
Carbonato de sdio anidro ................................25g
Tartarato duplo de Na e K ...................................25g
Bicarbonato de sdio ................................20g
Sulfato de sdio anidro. ................200g
H2O destilada q.s.p ....................................1000ml
Reativo B:
Sulfato de cobre (CuSO4. H2O) .......................................................................25g
H2O destilada q.s.p. .........................................................100 ml
H2SO4 conc............ ............................................. ..............................2 gotas
Reativo cprico
Reativo A............................................................................................................25 ml
Reativo B .............................................................................................................1 ml
*** preparar na hora do uso
Reativo Arsenomolbdico:
Dissolver 25 g de molibdato de amnea em 450 ml de H2O destilada
Adicionar 21 ml de H2SO4 conc e misturar bem
Separadamente, dissolver 3 g de arseniato dissdico (Na2HASO4. 7H2O) em 25 ml
de H2O destilada. Juntar essa sol. primeira e agitar. Colocar a mistura em banho
Maria regulado a 56oC por 25 min. Guardar em frasco mbar (escuro)
Soluo padro de glicose: (sugesto 1g/1000ml --- retira 100ml/1000ml.)
Pesar 100mg de glicose pura e diluir para 1000 ml com H2O destilada
Cada 1ml da soluo contm 100 g de glicose
Clculo
AR e ART: leitura.K.100
Diluio da amostra em g
Referncia
Nelson, N.A. A photometric adaptation of Somogyi method for determination of
glicose. Journal Biological Chemistry, Baltimore, v.135, p. 375, 1944.
AMIDO
Procedimento
- Pesar 5 g de amostra e transferir para erlenmyer de 500 ml com auxlio de 150
ml de gua destilada.
- Agitar por 15 min.
- Filtrar em papel de filtro, lavando com 500 ml de gua destilada e dispensar o
filtrado
- Furar o papel de filtro com um basto de vidro e recolher a amostra em um
erlenmyer de 500 ml com 150 ml de gua.
- Adicionar 10 ml de HCL concentrado a amostra
- Tampar com condensador de refluxo e levar ao banho maria fervente por 50 min.
- Esfriar neutralizar com NaOH concentrado 10 ml, completar o volume par 500
ml e filtrar
** prosseguir como na determinao de acares redutores totais a partir do item 5
Clculo: 1000T x 0,9: % amido
tomada de ensaio
Referncia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods os
analysis of the AOAC. 11th ed, Washington, 1970. 1015p.
Extrator soxhlet
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Mtodo:
Pesar 2 g de amostra
Ferver em refluxo com cido sulfrico 1,25% por 30 min.
Filtrar em papel de filtro e lavar com gua fervendo
Ferver o resduo com NaOH 1,25% por 30 min.
Filtrar em papel de filtro e levar a estufa para secar
Clculo
% fibra bruta = peso do papel com amostra aps a secagem - peso do papel x 100
Peso da amostra
Referncia
CECCHI, H.M. Fundamentos tericos e prticos em anlise de alimentos.
Campinas, SP. Editora da UNICAMP. 1999. 211p.
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