NOMBRE DE LA PRACTICA 4

Separacin de mezclas por cromatografa

Prctica 2a. SEPARACIN DE MEZCLAS HOMOGNEAS
POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA
1. RECOMENDACIONES PARA ANTES DE INICIAR LAS PRCTICAS
1. Investigar los principios de la cromatografa.
2. Investigar como se calcula el Rf.
3. Para preparar el extracto de jamaica, un da antes de la practica
deja remojar un puo de flores de jamaica en aproximadamente
50 ml de agua. el lquido resultante es el que vas a utilizar para la
prctica de separacin de colorantes.
4. Estudiar y revisar los conceptos de estados de agregacin de la
materia, procesos de interconversin entre los estados slidolquido-gas y los procesos de separacin de mezclas. Se sugiere
revisar estos conceptos en la siguiente bibliografa:

Qumica La Ciencia Central, BROWN, LEMAY y BURSTEN

(1998) (7. Ed.), Mxico, Edit. Prentice Hall
Qumica General, PETRUCCI, HARWOOD Y HERRING ,
(2002), (8va. Ed.), Prentice Hall.
Qumica y reactividad qumica, KOTZ, TREICHEL,
WEAVER (2005), (6va. Ed), Thomson.
Qumica , CHANG (2002), (7va. Ed), Mc Graw Hill.

2. INTRODUCCIN Y ANTECEDENTES DE CONOCIMIENTO

Cromatografa en Capa Fina (CCF)

Introduccin
La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa,
uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro
soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de
vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensin, otro
para aplicar la capa de adsorbente, y una cmara en la que se
desarrollen las placas cubiertas. Es preciso tambin poder guardar con
facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas.
La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La
fase estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo
general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los
componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los menos
polares.
Polaridad de los compuestos orgnicos en orden creciente:
hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehdo
aldehdo < ester < alcohol < cetonas < aminas < cidos < amidas
Ventajas de la cromatografa en capa fina
La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a
otros mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa,
...) ya que el utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que se
necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la
separacin es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores
corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El mtodo es
simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que
sea un mtodo adecuado para fines analticos.
Adsorbentes
Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en cuenta el tamao
de las partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est
mayor ser su adhesin al soporte, aunque tambin se le puede aadir
un adherente (yeso,...). Algunos de los adsorventes ms utilizados son:

Celulosa
Almidn
Azucares

Gel de slice (silicagel)

xido de aluminio (almina)
Carbn activo (carbn en polvo)
Kieselguhr

Los tres primeros se utilizan para extraer componentes polifuncionales

de plantas y animales.
Silicagel
El gel de slice o cido silcico es uno de los ms utilizados, es
dbilmente cido, su pH oscila entre 4-5. Con lo cual no se deber
utilizar con sustancias que se corrompan con los cidos. Los geles de
slice normales suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este
factor tambin se debe tener en cuentas respecto al uso de
componentes. El tamao del grano suele ser de 10 a 40 micras () y el
tamao de poro vara de 20 a 150.
Generalmente lleva incorporado un agente aglomerante, yeso (sulfato
de clcico semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente.
Tambin han sido incorporados dos indicadores del ultravioleta, juntos o
por separados (amarillo y/o verde), en diversos tipos de gel de slice.
Se trata de un adsorbente polar, pero puede ser tratado con
hidrocarburos para neutralizar los grupos -OH, de forma que se haga
apto para separar componentes lipfilos (esteroides, cidos grasos,
ceras, vitaminas liposolubles, etc). A este proceso se le denomina
cromatografa de fase reversa (silanizado).
Almina
La almina u xido de aluminio es un adsorbente ligeramente bsico
debido a que en el proceso de extraccin de la almina a partir de la
bauxita quedan algunas molculas de hidrxido de aluminio adheridas a
la almina, dndole a sta un carcter bsico. No consigue un desarrollo
tan alto de la sustancia depositada como el gel de slice.
La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir alminas
cidas, bsicas y neutras. Puede contener aglomerantes y/o indicadores
ultravioletas. Es un adsorbente de carcter polar, de tal forma que
retendr con mayor avidez a los componentes polares.

Preparacin de placas.
El adsorvente se desle en agua destilada. Para mezclar la papilla
homogneamente es preferible agitar de modo mecnico. La proporcin
de adsorbente y agua depende del tipo de adsorbente. Dos parte de
agua y una de adsorbente pueden tomarse como norma general, no
obstante, habrn de consultarse la instrucciones del fabricante.
Originariamente se utilizaban, como soporte del adsorbente, lminas de
vidrio, pero en la actualidad tambin se utilizan lminas de otros
compuestos orgnicos ms flexibles. Dependiendo del tipo de separacin
que se desee (cualitativa o preparativa) se utilizar un tamao de placa
u otro. En general para realizar una separacin preparativa de un gramo
de muestra es necesario una placa de vidrio de 20x20 cm., 35 gramos
de adsorbente y 80 ml. de agua destilada.
Las propiedades de la fase estacionaria pueden alterarse mediante la
adicin de compuestos tales como disoluciones tamponadoras para
mantener el pH deseado. En la preparacin de las placas tambin se
pueden adicionar indicadores fluorescentes o aglomerantes.
Cabe destacar la adicin de nitrato de plata (AgNO3), a este proceso se
le denomina argentacin, y se utiliza para separar componentes
insaturados.
El espesor de la placa es otro factor a tener en cuenta al preparar la
placa, en general suele ser de:
0.1-0.2 mm. para separaciones analticas.
0.5- 2 mm. para separaciones preparativas.
La placa debe quedar libre de grumos y rugosidades, que afectaran al
desarrollo del proceso cromatogrfico. Para ello existen en el mercado
extensores que se utilizan para crear de forma mecnica placas
homogneas del espesor deseado. Si no se disponer de extensor, el
proceso a seguir es el siguiente:
1.
2.
3.
4.
5.

Mezclar en un Erlenmeyer el agua y el adsorbente.

Agitar enrgicamente.
Extender la papilla sobre el soporte de vidrio.
Hacer oscilar la papilla de un lado a otro.
Golpear con el dedo la parte inferior del soporte.

Las placas, normalmente, se dejan reposar un corto espacio de tiempo

despus de cubrirlas; luego se colocan en bandejas metlicas. En este
momento puede activarse el agente adsorbente, bien dejando las placas
reposar toda la noche a temperatura ambiente, bien calentndolas
durante 30-60 minutos a 105-110 C (las placas de celulosa no deben
calentarse ms de 10 minutos a 105 C) para expulsar as el aire. Es
conveniente dejar secar las placas inicialmente al aire, para evitar los
agrietamientos que se produciran por efecto del cambio de
temperatura.
Aplicacin de las muestras
Los productos a examinar se disolvern, cuando sea posible, en un
disolvente orgnico no polar que tenga un punto de ebullicin lo
suficientemente bajo para que se evapore despus de la aplicacin.. Sin
embargo a menudo se necesitan disolventes polares; la mezcla
cloroformo:metanol (1:1) es efectiva. Frecuentemente se emplean
disoluciones al 1%, de manera que al aplicar 2 l resulta en la carga 20
g de producto slido. Muchos reactivos de revelado llegan a detectar
0.1 g de material; por esto con esta carga puede llegarse a observar
un 5% de impurezas.
Existen una gran variedad de micropipetas y microjeringuillas para
realizar el proceso de siembra de la muestra a analizar. Tambin pueden
usarse tubos capilares. El proceso de siembra se realiza tocando con la
punta del capilar (micropipeta, jeringuilla, etc) sobre la placa preparada.
Dejando una distancia al borde inferior de un centmetro
aproximadamente. El punto de aplicacin de la muestra se denomina
toque.
Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente, de
forma que en la placa solo quedar la muestra a analizar.
Eleccin del eluyente
La eleccin del eluyente depender lgicamente del componente que se
va a separar y del material en que la separacin se lleva a cabo.
Principales eluyentes en orden creciente de polaridad:
Eter de petrleo.
Eter dietlico.

Ciclohexano.
Acetato de etilo.
Tetracloruro de carbono.*
Piridina.
Benceno.*
Etanol.
Cloroformo.*
Metanol.
Diclorometano.
Agua.
cido actico.
*compuestos cancergenos.
En la eleccin del eluyente influyen varios factores:

Precio.
Pureza.
No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).
No utilizar compuestos muy voltiles.
Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).

La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar

la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos
polares.

a) Toque de la muestra sin aplicar ningn eluyente.

b) Aplicando un eluyente poco polar.
c) Aplicando un eluyente ms polar.

Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir

utilizando la misma placa para aplicar otros eluyentes ms polares,
hasta dar con el ms apropiado.
Otra tcnica para realizar la eleccin del eluyente consiste en sembrar
varias muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo
capilar distintos eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto
permite desarrollar cada eluyente radialmente por capilaridad, de forma
que se aprecie el eluyente con el cual la separacin se realiza de una
manera ms eficaz.
Desarrollo de la cromatografa
El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente
por el mtodo ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda
por una placa casi en vertical, por la accin de la capilaridad. La
cromatografa se realiza en una cubeta. Para conseguir la mxima
saturacin posible de la atmsfera de la cmara, las parades se tapizan
con papel impregnado del eluyente. A veces pueden obtenerse
separaciones mejores sin poner papeles en las paredes, cosa que no
debe olvidarse.
Generalmente el eluyente se introduce en la cmara una hora antes del
desarrollo, para permitir la saturacin de la atmsfera. El tiempo de
desarrollo, por lo general, no llega a los 30 minutos. El tiempo de una
cromatografa cualitativa suele ser de un par de minutos, mientras que
el tiempo de una cromatografa preparativa puede llegar a un par de
horas.
Las placas pueden desarrollarse durante un tiempo prefijado, o hasta
que se alcance una lnea dibujada a una distancia fija desde el origen.
Esto se hace para estandarizar los valores de RF. Frecuentemente esta
distancia es de 10 cm.; parece ser la ms conveniente para medir
valores de RF. Despus del desarrollo, las placas pueden secarse
rpidamente con una corriente de aire caliente.
La mejor posicin de desarrollo para un componente es el punto medio
entre el origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las
impurezas que se desplazan con mayor y menor velocidad. El frente del
eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa.
Si la placa se estropea por accin del aire o de la luz, se secar en una
cmara que contenga un gas inerte o aislada de la luz.

Localizacin de sustancias
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la
posicin de dichos compuestos, para ello existen dos tipos de mtodos:

Mtodos qumicos.
Mtodos fsicos.

Mtodos qumicos
Consisten en ralizar una reaccin qumica entre un reactivo revelador y
los componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los
reactivos reveladores con la ayuda de un pulverizador de vidrio y una
pera de goma, o mediante un dispositivo que proporcione aire
comprimido.
Es preferible pulverizar con las placas en posicin horizontal. Si el
reactivo revelador es peligroso o muy corrosivo, la pulverizacin deber
realizarse en una vitrina de gases bien ventilada.
La pulverizacin se realizar poco a poco. En cromatografa en capa fina
no puede realizarse el baado del cromatograma (en cromatografa en
papel s).
Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma
complejos coloreados con los componentes orgnicos (con tonos
amarillo-marrn), pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo
que es conveniente sealar las manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que
reacciona con los componentes orgnicos produciendo manchas negras.
El tamao de las manchas no est relacionado con la cantidad de
componente separado.
Adems de estos reveladores generales, existen otros especficos:

2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas).

Verde de bromocresol (para cidos carboxlicos).
Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas).
Ninhidrina (para aminocidos).

Mtodos fsicos.
El ms comn consiste en aadir al adsorbente un indicador
fluorescente. De tal forma que al colocar la placa bajo una lmpara
ultravioleta, y dependiendo del indicador y de la longitud de onda,
aparecen manchas fluorescentes en las zonas en las que hay
componentes, o en otros casos aparece toda la placa fluorescente
excepto donde hay componentes.
Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal)
con lo que pueden ser detectados directamente en una lmpara de
ultravioleta.
Constantes Rf Y Rx
La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de
expresar la posicin de un compuesto sobre una placa como una
fraccin decimal, mide la retencin de un componente. Se define como:

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el

centro de la mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10.
Para que los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de
condiciones (Espesor de la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad
de muestra). El mximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, lo
ideal es un RF entre 0.65 y 0.7.
Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre
la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez
desarrollados se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con
toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario
si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.
Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre
la misma placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta
apreciar una separacin mnima. En este caso no se pueden usar
reveladores qumicos, ya que alteraran los compuestos, sino indIcador
ultravioleta.
Tambin se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un
compuesto (X), que tenga una posicin de desarrollo conveniente; todos

los dems compuestos sobre la placa se relacionan con ste. De esta

manera se tiene el , RX , ya que:

La polaridad es el mayor efecto que afecta la Kc en una columna

cromatogfica, o TLC.
La polaridad es la separacin de cargas generadas por la diferencia de
electronegatividad entre dos atomos, lo que genera un dipolo.
Cuando un compuesto es muy polar es porque tiene mayor afinidad por
la fase estacionaria polar que aquellos compuestos que son menos
polares (atraccion polar con polar).
Compuestos no polares tienen gran afinidad por fases estacionarias no
polares mas que los compuestos polares (atraccin no polar con no
polar).
La polaridad relativa esta en relacin con los frupos funcionales. La serie
elutrpica siguiente:
RCO2H > ROH > RNH2 > RR`C=O > RCO2R`> ROR`> C=C > R-X
Acido carboxilico > alcohol > amina> cetona > ster > ter > alqueno > halogenuro de alquilo

De Izquierda a derecha:
Disminuye la polaridad
Disminuye el tiempo de retencin en una columna o TLC
Invrementa el factor de retencin o Rf de columna o TLC
Disminuye la afinidad
3. MATERIAL REACTIVOS Y EQUIPO
CANTIDAD
1
2
2

MATERIAL Y EQUIPO
Embudo simple
Papel filtro
Vaso de precipitado
de 100 ml
Matraz erlenmeyer
Esptula
Papel filtro
Mortero

REACTIVOS
Acetona
Etanol
Agua

CANTIDAD
Suficiente
Suficiente
Suficiente

Hexano o eter Suficiente

de petroleo
Acetato de etilo Suficiente
Tinta de pluma
roja, negra y
azul
Extracto
de
jamaica
Chocolates
confitados
de

marca
extranjera
Chocolates
confitados
de
marca nacional
c. s. : Cantidad Suficiente
4. PARTE EXPERIMENTAL

Prctica 3a. CROMATOGRAFA EN CAPA

COLORANTES NATURALES Y ARTIFICIALES.

FINA

DE

EXPERIMENTO 1: SEPARACIN DE COLORANTES ARTIFICIALES.

1. Consiga un paquete de chocolates confitados de marca extranjera,
y qutele muy cuidadosamente la capa de color, poniendo en 1 ml
de agua varias lentejas de chocolate confitado hasta quitarle el
color. Cuidando que no salga una capa blanca.
2. Recortar papel filtro de 5 cm de ancho por 12 cm de largo, dibujar
una linea a 1 cm del origen y poner sobre la lnea 5 puntos
equidistantes.
3. Aplicar cuidadosamente la muestra de colorante en un punto, y
hacer as con cada color.
4. Antes de meter el papel filtro dobla el papel en la parte superior y
ponle un palillo con el fin de sostener el papel)
5. Meter el papel filtro en un vaso de precipitado con agua pero el
agua debe de tener unos 0.5 cm de alto y tapar con un vidrio de
reloj (No debe de rebasar la lnea de aplicacin de las muestras y
el papel no debe de doblase y tampoco debe de tocar las paredes
del vaso de precipitado).
6. Y dejar correr el disolvente hasta que llegue 0.5 cm antes de que
acabe el papel. (Ver figura 1)
7. Observa que es lo que ocurre y dibuja lo que obtuviste.
8. Realizar el mismo procedimiento desde el paso 1 hasta el 6, pero
ahora utiliza los chocolates confitados nacionales.
9. Observa que es lo que ocurre y dibuja lo que obtuviste.
10.
Realizar el mismo procedimiento desde el paso 1 hasta el 6,
pero ahora utiliza el extracto de jamaica. Prepara 3 muestras de
papel filtro con la muestra de extracto de jamaica, la aplicacin de
la muestra hazlo a todo lo ancho del papel y utiliza para la primera
cromatografa agua, para la segunda cromatografa utiliza una
mezcla de H2O:AcAc (10:1), y para la tercer cromatografa utiliza
una mezcla de H2O:AcAc (1:1). (ver figura 2)

11.

Observa que es lo que ocurre y dibuja lo que obtuviste.

NOTA: LA RELACIN (1:1) INDICA QUE SE HACE UNA MEZCLA DE

IGUAL CANTIDAD, EJEMPLO 1 ML DE AGUA Y 1 ML DE ACIDO
ACTICO, PARA UNA RELACIN (10:1) IMPLICA UNA RELACION DE
10 ML DE AGUA Y 1ML DE CIDO ACTICO.

Figura 1
Rf = distancia recorrida del inicio al final/ distancia recorrida por la
muestra

Figura 2
EXPERIMENTO 2: SEPARACIN DE CLOROFILA DE ESPINACAS.
1. Poner las hojas de espinacas con acetona y etanol en un mortero y
moler las hojas.
2. Filtrar el liquido sobrenadante, y ese lquido es el que se usar
para aplicar en papel.
3. Del experimento anterior realizar los mismos pasos, correr el
cromatograma en EtOH.
4. El la figura de abajo representan cromatogramas de clororofila.

5. CUESTIONARIO
1. Qu significa cromatografa?
2. Qu significa Rf y para que nos sirve conocer el Rf de una
sustancia?
3. Calcula el Rf de cada una de las muestras
4. Cual muestra tiene un Rf mayor y cual un Rf menor?
5. Que tipo de cromatografa se llev acabo?
6. Qu es un cromatograma?
7. Que es adsorbente y eluente?
8. Para el experimento que realizaste: quien es tu adsorbente y
quien es tu eluente?
9. Para muestras inorgnicas que tipo eluente se utiliza? Se
utilizarn los mismos disolventes para muestras orgnicas?
10.
Que significa la polaridad de un disolvente?
11.
Para que nos sirve la constante dielctrica?
12.
Si el cromatograma es transparente que se hace para
identificarlo?
13.
Investigue que reactivos existen para revelar cromatografa
en capa fina.
14.
Cuantos mtodos cromatogrficos existen.
15.
Cual es la diferencia de hacer cromatografa en columna y
cromatografa en capa fina?
16.
Tipos de Cromatografa en columna.
17.
Que tipos de reveladores existen para revelar cromatografa
en capa fina?
18.
Como funciona una Cromatografa de intercambio ionico?
19.
Como funciona una Cromatografa de filtracin en gel?
20.
Como funciona una Cromatografa de afinidad y de
inmunoafinidad?
21.
Electroforesis en geles de poliacrilamida
22.
En donde son empleados los geles de poliacrilamida
23.
De que tamao deben ser el dimetro de las partculas del
soporte en cromatografa?
6. EXPERIMENTOS COMPLEMENTARIOS
Usa las siguientes muestras para hacer cromatografa en papel:
1) Chocolates confitados de marca nacional.
2) Tinta de pluma: roja, azul y negra
3) Flores de jamaica y (Pon unas cuantas flores en 10 ml de agua
para obtener los colorantes)
a) Pon un punto de tinta de cada color y haz la cromatografa

b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)

Haz la cromatografa con slo agua, y con slo etanol.

Prueba con diferentes mezclas de agua y etanol (1:1 y 5:1)
Que observaste?
Calcula el Rf de cada muestra.
Cuantos componentes tienen las muestras?
Estn puras las muestras?
Escribe tus conclusiones

Prctica 3b. CROMATOGRAFA

COMPUESTOS ORGNICOS

EN

CAPA

FINA

DE

Para la siguiente prctica se recomienda:

Para el profesor:
1. Deber de solicitar los reactivos, y emplear la cantidad que se marca
para cada equipo de alumnos. Es decir, si son 4 equipos deber de
considerar entonces 0.05 g de cada reactivo.
2. Colocar cada reactivo en un tubo de ensayo con una etiqueta del
nombre del reactivo.
3. Diluir cada tubo con la muestra con 2 ml de EtOH y llenar a del
tubo con CH2Cl2, para asegurar la completa dilucin de las muestras.
4. Para el caso del acido saliclico y del cido benzoico diluir solamente
con EtOH. Considerar que para cada 0.01 g de muestra se emplearn 4
ml de volumen total de disolventes.
5. Repartir a cada equipo de alumnos una cantidad proporcional ms
uno, ya que stas muestras contendrn las soluciones patrn de las
muestras conocidas.
6. Colocar las muestras patrn para que todo el grupo tome sus
muestras de alli.
7. NO DESECHAR LAS MUESTRAS YA QUE ESTAS SERN EMPLEADAS EN
LA PRACTICA DE CRISTALIZACIONES PARA OBTENER LOS PUNTOS DE
FUSIN DE LAS MUESTRAS SLIDAS (PRACTICA 4)
3. MATERIAL REACTIVOS Y EQUIPO
CANTIDAD MATERIAL Y EQUIPO
5
Placas
de
cromatografa
5
Vaso de precipitado
de 100 ml
8
Tubos de ensaye
Papel alumninio
2

Pipetas pasteur

REACTIVOS
ACETONA

CANTIDAD
Suficiente

ETANOL

Suficiente

AGUA
HEXANO O
ETER DE
PETROLEO
ACETATO DE

Suficiente
Suficiente
Suficiente

1
1
1

Lampara de UV-vis
Cmara de UV-vis
Gradilla para tubos
de ensaye

ETILO
Fenol
Benzaldehido
Acido benzico
Anilina
Naftaleno
Acetanilida
Acido saliclico
Cloruro de
paratoluensulfonilo
Alcohol
benclico
Anhidrido
succinico

0.01 g
0.01 g
0.01 g
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01

g
g
g
g
g

0.01 g
0.01 g

Para el alumno:
1. Cada vez que vayas a aplicar tu reactivo a la placa cromatografica en
capa fina, hacerlo con un ligero toque, en el punto de aplicacin.
2. No es neceario apoyarse firmemente en la placa con la punta de la
pipeta, ya que se corre el riesgo de descascarar la placa de
cromatografa, ya que no te darn ms para la prctica. CUIDALAS!
3. La cantidad de muestra con disolvente es solamente la necesaria que
suba por capilaridad por la punta de la pipeta, si la succionas, corres el
riesgo de que tu placa se manche con exceso de reactivo, y heches a
perder tu placa cromatogrfica.
4. Cada vez que vaya a aplicar nueva muestra, debers lavar tu pipeta
pasteur sumergiendola en un tubo de ensaye que solamente contenga
una mezcla de etanol-CH2Cl2 (1:1), para ello sumerges tu pipeta
pastuer, la sacas y la secas con un trozo de papel secante o algodn, y
repites este proceso por lo menos tres veces antes de aplicar
nuevamente una muestra a tu placa cromatografica.
5. Cuando hayas terminado tu cromatografa, para lavar las placas
cromatograficas , es decir, recuperarlas para ser utilizadas nuevamente;
debers de sumergirlas en MeOH, y esperar a que suba el disolvente
hasta el tope de la placa. Sacar la placa para que se seque, y repetir ese
procedimiento
6. No se te olvide usar guantes durante toda la practica ya que estars
empleando la lampara de UV-vis.
7. NO DESECHAR LAS MUESTRAS YA QUE ESTAS SERN EMPLEADAS EN
LA PRACTICA DE CRISTALIZACIONES PARA OBTENER LOS PUNTOS DE
FUSIN DE LAS MUESTRAS SLIDAS (PRACTICA 4)

Actividades a realizar dentro de la practica: Identificacin de Rf

de muestras conocidas.
1. Los alumnos debern de poner 5 muestras por placa de
cromatografa de las muestras conocidas y etiquetadas (muestras
patrn).
2. Los alumnos debern de correr las placas de cromatografa en
Hexano, AcOEt, CH2Cl2, acetona, etanol y metanol (en ese orden,
ya que van en orden creciente de polaridad) para ir revisando la
polaridad de cada muestra e ir realizando las anotaciones
correspondientes de Rf de cada muestra.
3. Puede el alumno realizar las anotaciones en milmetros o realizar
directamente su conversin a Rf.
4. En caso de que las muestras hayan llegado al tope, se sugiere
realizar pruebas con mezcla hexano: AcOEt (1:1)
5. Se muestra a continuacin una tabla con las relaciones entre
disolventes para probar la polaridad y Rf de las muestras, en la
parte superior se considera no polar la mezcla, hacia la parte
inferior se considera una mezcla polar.
Disolvente no
polar
HEXANO
9
5
2

Disolvente
polar
AcOEt
1
1
1

1
1
1

2
5
9

Actividades a realizar dentro de la practica: Identificacin de Rf

de muestras desconocidas.
1. El profesor reacomodar los tubos de ensaye de tal forma que
solamente l sepa a que muestras corresponden.
2. La tarea del alumno ser identificar cada muestra a partir del
conocimiento previo de las muestras conocidas por su Rf.
3. Al final de la prctica el alumno deber de darle al profesor la
relacin correcta de las muestras y con ello se calificar el nmero
de aciertos de la misma.

4. Contestar:
i. Dibuje una escala relativa de eluyentes de una fase
mobil (donde se tiene una fase estacionaria polar) y la
serie elutrpica de grupos funcionales.
ii. Que ocurre si la fase movil y la fase estacionaria
estan en equilibrio (Kc=0) en una mezcla de solutos?
iii. Qu ocurre si la fase movil tiene un Kc menor que la
fase estacioria en una mezcla de solutos?
iv. Qu ocurre si la fase movil tiene un Kc mayor que la
fase estacionaria enuna mezcla de solutos?
v. Qu ocurre si en una mezcla de solutos A y B ; el
soluto A migra mas rpido que B?
5. Basado en la realizacin de sta prctica:
a) Determine el color de cada pigmento derivados de la espinaca en
base en los grupos funcionales.
b)Determine el orden de polaridad de los nueve pigmentos: clorofila
a, clorofila b, feofitina a, feofitina b, carotenos, -carotenos,
xantofilas, luteina, licopeno.
6. Con respecto, a la cromatografa obtenida en la prctica, determine
y seale cada uno de los anteriores pigmentos y determine los Rf de
cada uno.