Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
BUCARAMANGA-SANTANDER
UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER
ESCUELA DE INGENIERIA QUMICA
05 DE FEBRERO DEL 2014
MTODOS DE EXTRACCIN
1. Mtodo de extraccin con solventes
Es una tcnica de tratamiento que consiste en usar un solvente para
separar o retirar compuestos de una fase homognea. Se podrn
obtener aceites y grasas a partir de muestras vegetales y animales
utilizando tcnicas de extraccin slido lquido. Y lquido-lquido. La
eficiencia de estos mtodos depende tanto del pre-tratamiento de la
muestra como de la seleccin del disolvente.
La preparacin de la muestra depende del tipo de alimento y el tipo y
naturaleza de los lpidos que contiene.
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
Mtodo de Gerber:
Se utiliza para determinar el contenido de grasa de la leche y
otras sustancias dentro de un recipiente medidor, llamado
Butirmetro, y medir el volumen expresando el resultado en tanto
por ciento en masa. Est usa cido sulfrico y alcohol amlico.
Mtodo de Rose-Gottlieb:
En este mtodo la separacin de la grasa es lograda por
amoniaco y etanol con un posterior efecto de deshidratacin
sobre los fosfolpidos. Este mtodo es particular para leche fresca
que no contiene cidos grasos libres, los cuales en disolucin
alcalina forman sales de amonio y esto es insoluble en ter.
Glicina:
Treonina:
Aspartato:
Serina:
Lisina:
Prolina:
Aminoacido Phe Lys His Leu Lys Thr Glu Ala Glu Ala Glu Met Lys Ala Ser Glu Asp carga neta
PKa predominante 9.31 10.5 6.04
10.5
4.07
4.07
10.5
10.5
4.07 1.99
Carga
1 1 -1 0 1 0 -1 0 -1 0 -1 0 1 0 0 -1 -2 -3
Lys
Glu
Pka1
2.16
2.1
Pka2
9.06
9.47
Lys-Asp-Arg-Gln-HSl
Phe-Asp-Trp-Ser-Ala
Asn-Arg-Ile-Glu-HSl
Trp-Val-Arg-Leu-HSL
Asp-Glu-Try-Lys-HSL
Cul sera la carga neta de cada pptido a PH=7.0 y que pasos deberamos
tomar para determinar la secuencia del pptido original?
a). Por medio de las tablas (ANEXO 2) obtenemos las cargas para cada
aminocido, haciendo las respectivas sumas tenemos que:
1) Lys-Asp-Arg-Gln-HSl
PASOS
1. Aislamiento y purificacin de una protena: sta se puede realizar por
varias tcnicas, entre ellas la dilisis o la ultra centrifugacin.
2. Determinacin de la masa molecular (MM): uno de los mtodos ms
directos es la espectrometra de masas, aunque tambin se pueden
utilizar la electroforesis.
3. Comprobar si posee ms de una cadena y determinar su nmero:
consiste en la identificacin del grupo N-terminal, este paso se puede
realizar con diferentes reactivos entre ellos estn: reactivo de Edman,
entre otros.
4. Separacin de las cadenas: sta se puede llevar a cabo con PH
extremos, alta concentracin de sales, urea 8M, entre otros. Aqu
tambin se da la rotura de puentes di sulfuro, sta se puede realizar con
Ditioteitol, la ruptura de atracciones electrostticas, sta se hace con
cromatografa de intercambio inico, y por ultima la ruptura de
interacciones
hidrofbicas
que
se
realiza
con
agentes
desnaturalizantes.
5. Escisin de las cadenas en pptidos ms pequeos: Enzimas
especficas que cortan las cadenas peptdicas.
6. Determinacin de la secuencia de stos pptidos ms pequeos: aqu
tambin se aplica el reactivo de Edman.
7. Hidrlisis total: se da para determinar la composicin de aminocidos
presentes: se realiza una hidrlisis total con CIH 6M
9. Un pptido tiene la siguiente composicin de amino cido: Ala, Arg, Asp2,
Glu2, Gly3, Leu, Val3. Los siguientes pptidos se aislaron despus de una
hidrolisis acida parcial y se determin su secuencia:
Asp-Glu-Val-Gly-Gly-Glu-Ala
Val-Asp-Val-Asp-Glu
Val-Asp-Val
Glu-Ala-Leu-Gly-Arg
Val-Gly-Gly-Glu-Ala-Leu-Gly-Arg
Leu-Gly-Arg
RTA:
Val-Asp-Val-Asp-Glu-Val-Gly-Gly-Glu-Ala-Leu-Gly-Arg
Fumarato
2,0
3,3
5,0
10,0
)( )
[ ]
( )
Concentracin de la enzima:
Fumarato=sustrato
S
1/S
velocidad de
formacin del
producto
1/V0
0.5
2.5
0.4
3.3
0.303
3.1
0.322
0.2
3.6
0.277
10
0.1
4.2
0.238
(S)
M
3
5
10
30
90
Velocidad (mol/min)
Sin inhibidor
Con inhibidor
10,4
4,1
14,5
6,4
22,5
11,4
33,8
22,6
40,5
33,8
)(
Dnde:
[ ]
[ ]
SIN INHIBIDOR
x
1/3
1/10,4
1/5
1/14,5
1/10
1/22,5
1/30
1/33,8
1/90
1/40,5
Usando la regresin de la
calculadora se obtiene que:
CON INHIBIDOR
x
1/3
1/4,1
1/5
1/6,4
1/10
1/11,3
1/30
1/22,6
1/90
1/33,9
Usando la regresin de la
calculadora se obtiene que
para
todas
las
concentraciones
del
) es
inhibidor
ANEXO 2 TABLAS