UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA UFBA

SALVADOR-BA

Bruno Torres e Maria do Carmo Sales

Relatrio de Prtica

Relatrio prtico apresentado como

requisito parcial para obteno de
aprovao na disciplina ICSA 13
Bioqumica, Turma P01, do Curso de
BI em Sade, da Universidade
Federal da Bahia.
Prof. Dr. Daniele Takahashi Bernal

Salvador, 2014

COLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA

1 INTRODUO
Nessa aula prtica de Bioqumica, a turma teve contato com o
espectrofotmetro com cubetas. Esse equipamento foi utilizado para medir os
valores de absorbncia de energia radiante ou luz e de transmitncia da luz a
partir da utilizao de gua destilada, sem utilizao de corante e com o corante
alaranjado de metila.
A colorimetria e espectrofotometria um procedimento analtico que
determina a concentrao de espcies qumicas atravs da absoro de luz,
considerando luz uma forma de energia, de natureza ondulatria, que apresenta
propriedade de interagir com a matria. A absoro depende da natureza da
substncia, da sua concentrao e da sua espessura.

2 OBJETIVO

A aula tem como objetivo a dosagem de espcies qumicas

mediante a absoro de luz, construindo um espectro de absorbncia e
transmitncia.

3 MATERIAL, MTODOS E RESULTADOS

3. 1. EQUIPAMENTOS
Espectrofotmetro com cubetas
Pipetas de 5ml graduadas
Estante com tubos de ensaio
3. 2. REAGENTES
Alaranjado de Metila na contrao de 1 mg em 100ml

3. 3. MTODOS
Os dados foram coletados para construo do espectro de absoro
do Alaranjado de Metila, a partir da leitura do nvel de absorbncia e
transmitncia do reagente, buscando-se apurar a densidade tica (DO).
Foram empregados os seguintes comprimentos de onda: 420, 470, 520, 570,
620 e 680nm. Partimos do princpio de que o grau de absorbncia do H2O
0.00 e que seu grau de trasmitncia 100%.

3. 3. TABELA DE ABSORBNCIA DO CORANTE ALARANJADO DE METILA

TABELA 1
nM

Leitura
T (%)

Absorbncia

420

62.8

0,177

470
520*

0,348
38.1

0,385

570

0,037

620

0,029

680

96.0

0,025

*Comprimento de onda que corresponde ao pico de absoro do composto 520 nM

Absorbncia

3. 4. GRAFICO DE ABSORBNCIA

0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0

Absorbncia

200

400

600

Comprimento de Onda (nM)

800

Y = leitura da absorbncia
X= comprimento de onda em (nM)
Pico de Absorbncia: 520 nM

3. 5. DEMONSTRAO DA LEI DE LAMBERT-BEER

Para a demonstrao da lei de Lambert-Beer que trata da relao entre a
transmisso e absoro de luz e a espessura e concentrao molecular do
soluto ou camada do meio absorvente A intensidade da luz emitida decresce
exponencialmente medida que a espessura do meio absorvente aumenta aritmeticamente foram preparados 06 tubos, enumerados de 0 a 6. O de nmero 6 contendo uma
soluo do corante Alaranjado de Metila, com concentrao desconhecida, a ser
determinada.

Clculo da espessura do meio absorvente concentrao da soluo:

Frmula
P = Po . 10 x
P = Intensidade da luz transmitida
Po = Intensidade da luz incidente
X = constante denominada coeficiente de absoro e que depende do meio absorvente
empregado
1 = espessura do meio absorvente

TABELA 2
Tubo

gua
(ml)

Corante
(ml)

Concentrao
obtida (ug-ml)

0,32

Transmitncia
(T%)

Absorbncia
(Abs ou D.O.)

100

59,1

0,213

0,48

49,3

0,291

0,58

43,2

0,341

0,69

37,9

0,397

0,78

35,4

0,441

0,56

46,3

0,332

3. 6. GRFICO DE CONCENTRAO

Absorbancia

0.5
0.4
0.3
Srie 1

0.2
0.1
0
1

3
4
Concentrao
(ml/l)

4 - DISCUSSO E CONCLUSO

Verificamos ao termino do experimento que a absorbncia diretamente proporcional

concentrao da espcie absorventes de luz, e inversamente proporcional a
transmitncia da espcie qumica.

6 - REFERENCIAS
LEHNINGER, A.L.; Nelson, D.L.; Cox, M.M. (2007) Lehninger: Princpios de
Bioqumica, 4a. Edio, Editora Sarvier.
STRYER, Lubert. Bioqumica, 4a. Edio, Editora Guanabara,1995.