COLORACAO DE GRAM

Experimento I. Cultura bacteriana meio slido e cultura meio liquida.

Introduo:

A tcnica de colorao de Gram possibilita a separao de acordo com

a estrutura da parede celular, sendo denominadas: Gram-positivas ou Gramnegativas. O mtodo baseado na capacidade das paredes celulares de
bactrias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta(que ficam roxas),
no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto as paredes
celulares de bactrias Gram-negativas no retm(ficam rosa). A parede celular
est presente em praticamente todas as bactrias e possuem caractersticas
diferentes que podem ser diferenciadas nesse grupo: As Gram-positivas
possuem uma parede celular espessa. J as Gram-negativas possuem uma
parede celular de superfcie mais complexa e espessura mais fina, por isso
ocorre essa diferena de colorao de uma para a outra.

Objetivo.

Esta tcnica teve por objetivos determinar e interpretar o mecanismo

de reao de Gram, como um mtodo de colorao diferencial a fim de
distinguir o tipo de bactria.

Materiais:

-Alas e agulhas
-Cultura bacteriana meio slido e liquido
-Lminas de vidro para microscopia;
-bateria de colorao de gram (soluo de cristal violeta, soluo de
lugol, soluo de fucsina
-lcool 95;
-Frasco com gua;
-Bico de Bunsen;
-Papel toalha;
-Microscpio ptico;
-leo mineral.

Procedimento metodolgico.
Colorao de gram bactria gram positiva. O mtodo em questo usado
para identificao das caractersticas morfolgica de bactrias que as subdividem em
gram positiva e gram negativa.
Utilizar uma lmina de vidro e limp-la com lcool. Depositar uma gota de
H2O na lmina. Com a ala de platina aps ser flambada no bico de bunsen foi
coletado uma pequena poro do inculo bacteriano do meio de cultura slido e
realizado o esfregao na lamina. Realizado a fixao do material flambando na
lmina.
Com a lmina inclinada. Colorido o esfregao com cristal violeta e aguardado
um minuto. Utilizado a soluo de lugol para cobrir a lamina e aguardamos mais um
minuto. Gotejado o lcool etlico 95% para o desprendimento de corante. Em seguida,
lavado a lmina com gua e gotejado soluo de fucsina e aguardado trinta segundos.
Aps analisado em microscpio, realizado a lavagem e secagem da lamina.
Resultado e discusso.
Aps gotejar uma gota de leo mineral (imerso) sobre a lmina o mesmo foi
posicionado nas lentes do microscpio. Utilizando a mesma sequencia de materiais foi
realizado o experimento II. Cultura meio liquida, inoculando a bactria gram positiva
Lactobacillus do Yakult apresentou as seguintes caracterstica; morfologia de bacilos e
colorao roxa.
Com a anlise da lamina 4x10 foi identificado quem ambas a bactria gram
positiva apresentou morfologia bacilos e colorao roxa em razo grande quantidade
de peptidoglicano (protenas + carboidratos) na sua parede celular capaz de reter o
corante violeta durante o tratamento com lugol.
Morfologia bacilos

MICRORGANISMO DO AMBINTE
Microbiota do solo

Introduo.
Os microrganismos esto presentes em todos os ambientes que contenha
vida, do local mais simples para o mais complexo, No solo os microrganismos
predominantes so bactrias, fungos, protozorios e actinomicetos.
Os microrganismos formam as microbiotas que no solo que influencia o
desenvolvimento de plantas (pela matria orgnica) e torna os nutrientes necessrios
para a raiz. Na gua o microrganismo presente geralmente indica os nveis de
nutrientes na gua, sendo afetada pelo oxignio e luz, mas muito necessrios. Sem
um organismo vivo os microrganismos no tem a capacidade de crescer, mas
permanecem no ar por segundos, horas, dias, meses e ate anos.
Diante disso, nesse trabalho utilizaremos o solo como fonte de microbiota em
para nosso experimento. E os procedimentos metodolgicos de nossa amostra sero
baseados no preparo da diluio seriada que consiste no sequenciamento de uma
soluo adicionado repetidas vezes ao mesmo solvente e medida que a diluio
seriada ocorre a soluo diminui a sua concentrao da mesma possibilitando
obtermos resultado de uma soluo homognea.

Objetivo.

Observar a presena de diferentes microrganismos de um mesmo local

do ambiente.

Materiais e reagentes:

-Microbiota do solo
-Placa de petri contendo meio de cultivo
-Preparao salina 0,9
-Tubos de ensaio
-Bico de Bussen
-Pipeta volumtrica
-Cotonete para swab

Procedimento metodolgico.
1 Pesar 1gr de solo
2 Colocar em tubo de ensaio (10 ) contendo 9 ml de soluo salina 0,9%
3 Transferi 1ml para outro tubo (10) contendo 9ml da soluo salina;
4 A parir do tubo (10) transferir 1 ml para terceiro tubo (diluio 10 ) e assim
sucessivamente at a diluio desejada; comumente, utilizado 10 tubos de ensaio;
porem, nesse experimento utilizaremos amostra com 6 tubos de diluio.
Selecionado 6 tubos de ensaio e identificado (t ; t ; t ; t ; t ; t ) com a
pipeta volumtrica, adicionamos 1ml da substancia diluda ao tudo de ensaio
subsequente.

(t1) 1gr da
substncia a 9
ml solvente :
soluo salina
e
levemente
agitamos

(t2) 1g da
substncia a 9
ml
soluo
salina
e
levemente
agitamos

(t3) 1gr da
substncia a 9
ml
soluo
salina
e
levemente
agitamos

(t4) 1gr da
substncia a 9
ml
soluo
salina
e
levemente
agitamos

(t5) 1gr da
substancia a 9
ml
soluo
salina
e
levemente
agitamos

(t6)1gr
da
substancia a 9
ml
soluo
salina
e
levemente
agitamos

Posteriormente constamos que o (t4; t5; t6) apresentaram maior diluio. Em

seguida flambaram-se as trs amostras (t4; t5; t6) e utilizado o swab com tcnica do
esfregao o microrganismo foi inoculado em trs meio de cultura: gar sabouraud
(t4; t6) e gar nutriente (t5). Aps esse procedimento, a placa levada a estufa a
temperatura de 37C e aps 48 horas acondicionado na geladeira a 4C.
Resultado e discusso.
Com mtodo da diluio seriada foi possvel realizarmos a quantificao e o
isolamento de um numera limitado de uma nica espcie de microrganismo utilizando
meio de cultura sabourabd inoculado pela amostra (t-6) apresentou uma nica forma
de colnia de microrganismo e a quantificao apesar de que O ideal que cada placa
escolhida para contagem contenha um nmero considerado significativo no mtodo
em questo, o que para bactrias em geral seria de 30 a 300 colnias.

TESTE DE SENSIBILIDADE