1.

Ttulo y nmero de prctica: Supreficie y Ambiente Prctica N 10

2. Fecha, da, temperatura: Mircoles, 10 de octubre de 2012 28 C.
3. Objetivos del anlisis:

Desarrollar tcnicas de muestreo para superficie y ambiente.

Determinar microorganismos presentes en el aire y en superficies de materiales.

Realizar el conteo de los microorganismos encontrados.

4. Principio o fundamento
Los microorganismos se encuentran sobre sobre partculas inertes, por ejemplo polvo y gotas
de agua, que sirven como medio de transporte y pueden encontrarse aislados o agregados. La
tcnica de muestreo a utilizarse depende de la naturaleza del lugar, el grado de contaminacin
y la informacin microbiolgica que se desea obtener.
Anlisis microbiolgico del aire: se realiza por sedimentacin. Implica la exposicin de las
placas rellenas con un medio del gar al aire, dejndolas sin tapar por un tiempo fijo en los
lugares donde se desea hacer el muestreo.
Anlisis microbiolgico de superficies:

Mtodo del hisopado: para superficies planas y no planas. Adems se pueden estudiar
superficies muy contaminadas ya que a partir de la solucin salina estril se puede
realizar las diluciones decimales precisas.
Mtodo RODAC: para superficies planas por placas de contactos.
Mtodo esponjado: para superficies muy amplias.
Mtodo de bioluminiscencia: se basa en la medicin del ATP presente.

5. Definicin de la muestra
Para el anlisis microbiolgico del aire, las muestras se tomaron de uno de los baos de la
Facultad de Ciencias Qumicas de la UNA, el cual se encontraba en condiciones no muy
higinicas.
Para el anlisis microbiolgico de superficies por el mtodo del hisopado, las muestras se
tomaron de la superficie de un plato limpio de la cantina de la Facultad de Ciencias Qumicas,
adems del teclado de una computadora ubicado en la sala de informtica, tambin de la
facultad.
6. Descripcin de materiales, mtodos y reactivos
Petrifilm: Las placas Petrifilm HSCC contienen un medio de cultivo selectivo listo para usar, un
agente gelificante soluble en agua fra y un indicador de tetrazolio que facilita la enumeracin
de colonias. El film superior atrapa el gas producido por la fermentacin de la lactosa por los
coliformes. El tiempo y la temperatura de incubacin, as como la interpretacin, vara segn el
mtodo seguido.

Hisopo Quick Swab: El hisopo o escobilln se utiliza para la toma de muestras de origen
biolgico. Son un sistema de monitoreo ambiental listo para usarse, el cual consiste de un
hisopo de rayn de 13 cm. de largo, que contiene caldo letheen que facilita la recuperacin de
la bacterias.
Los hisopos pueden utilizarse secos o hmedos para muestrear superficies e inocular rpida y
directamente 1.0 ml de la muestra sobre una placa Petrifilm de 3M. Quick Swab; es uno de
los mtodos disponibles para hisopado ambiental ms eficiente, rentable y econmico.
Clean-Trace: La prueba de deteccin de ATP para superficies Clean-Trace de 3M es un
dispositivo de un solo uso que contiene un hisopo para obtener muestras de una superficie. El
hisopo est prehumedecido con una sustancia catinica para facilitar la obtencin de residuos
de suciedad y de trifosfato de adenosina (ATP) procedente de clulas intactas. Una vez
activada la prueba, el reactivo del tubo de ensayo del dispositivo reacciona con el ATP recogido
en el hisopo y emite luz. La intensidad de la luz es proporcional a la cantidad de ATP, y, por
tanto, al grado de contaminacin existente. La medicin de la luz requiere el uso de un
Luminmetro Clean-Trace de 3M, y los resultados aparecen en unidades relativas de luz
(URL).
7. Descripcin de la metodologa de trabajo
Toma de muestra:
-

Para el anlisis de ambiente se procedi a la colocacin de las placas petrifilm durante

un tiempo de 15 minutos en el lugar seleccionado para el anlisis.
En el caso del hisopado se realiz directamente sobre la superficie utilizando el hisopo
Quick Sab y el 3M Clean-Trace Surface Protein Plus.
Para el anlisis por contacto directo se procedi de la forma establecida cuidando que
no haya contacto de la mano con la superficie seleccionada.

Preparacin de la muestra:
-

Las placas petrifilm fueron pre hidratadas con anticipacin con 1 ml de agua estril.
Se realiz una dilucin 1:3 del contenido del hisopo Quick Swab inoculando luego 1 ml
en las placas para aerobios, coliformes (E.Coli), y sthapylos. Cada placa fue incubada a
37 C por 48 horas.
Las placas utilizadas para anlisis de ambiente y superficie directa fueron incubadas a
37 C luego de la toma de muestra.

Anlisis microbiolgico:
-

Recuento de colonias de coliformes en placa petrifilm 3M

Recuento de colonias de sthapylos en placa petrifilm 3M
Recuento de colonias aerobios totales en placa petrifilm 3M
Recuento de mohos y levaduras en placa petrifilm 3M
Ausencia o presencia de protenas por hisopado 3M Clean-Trace Surface Protein Plus.

8. Resultados de la prctica
Muestra

Descripcin

Criterio

Resultado

Microbiolgico
Bao pblico
mujeres
(Ambiente)

Teclado + mouse

Hongos y levaduras
Aerobios Mesfilos
Totales
Aerobios Mesfilos
Totales
Staphylococcus
Coliformes (E. Coli)
ATP

Plato

Aerobios

presencia/ausencia
en placa
presencia/ausencia
en placa
presencia/ausencia
en placa
presencia/ausencia
en placa
presencia/ausencia
en placa
presencia/ausencia
presencia/ausencia
en placa

No se observ la
presencia de
colonias en placa
10 UFC/placa
16 UFC/placa
6 UFC/placa
No se observ la
presencia de
colonias en placa
Ausencia
77 UFC/placa

9. Conclusin
Las muestras tomadas del aire del bao de mujeres de la Facultad de Ciencias
Qumicas mediante placas petrifilm para determinacin de:
-

Hongos y levaduras, dieron un resultado que indicaron la ausencia en placa de los

microorganismos buscados, como puede observarse en la siguiente imagen.

Placa Petrifilm para

determinacin
de hongos y levaduras

Aerobios Mesfilos Totales, dieron un resultado que indic la presencia de los

microorganismos buscados en la placa petrifilm utilizada.

Placa Petrifilm para

determinacin
de aerobios
Las muestras tomadas del teclado y mouse de una de las computadoras de la sala de
informtica de la Facultad de Ciencias Qumicas indicaron la presencia en placa de
aerobios y staphylos, no as la presencia de coliformes.

Placa Petrifilm para determinacin

de Staphylos

Placa Petrifilm para determinacin

de aerobios

La muestra tomada del plato dispuesto para la utilizacin del cliente en el comedor de
la Facultad de Ciencias Qumicas mediante el 3M Clean-Trace Surface Protein Plus
indic la limpieza del material, no observndose ningn cambio de color en el
indicador del instrumento. Mientras que la muestra tomada por contacto directo con
una placa petrifilm para recuento de aerobios indic la presencia de los
microorganismos buscados.

Placa Petrifilm
para recuento
de aerobios