UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA

BIOQUMICA GERAL

QUMICA DE CIDOS NUCLICOS

Prof. DSc. Marcondes Viana da Silva

mviana@hotmail.com

INTRODUO
TRANSFERNCIA DA INFORMAO
GENTICA PARA NOVAS CLULAS

CIDOS NUCLICOS
RESERVATRIOS MOLECULARES
DA INFORMAO GENTICA

FORNECEM O ROTEIRO PARA TODAS

AS ATIVIDADES CELULARES

NICA MOLCULA COM SISTEMA BIOQUMICO

DE REPARO, (MUTAO
CARCINOGNESE E ENVELHECIMENTO) ALTERAES IRREVERSVEIS DO DNA ??!

GENOMA HUMANO: 3 BILHES DE PARES DE BASES.

COMPONENTES DOS CDOS NUCLICOS

CIDOS NUCLICOS

NUCLEOTDEOS

PIRIMIDINAS

RIBOSE OU DESOXIRRIBOSE

FOSFATO

ESTRUTURA GERAL DOS NUCLEOTDEOS

PENTOSE E BASES NITROGENADA DIFERENCIAM A ESTRUTURA PRIMRIA DOS CIDO NUCLICO

DNA - presente no ncleo das clulas eucariticas, mitocndrias, cloroplastos e no citosol das clulas
procariticas.

7
6

PURINAS

4
9
3

Adenina (A)

Guanina (G)

BASES HETEROCCLICAS NITROGENADASGENADAS

4
3

PIRIMIDINAS

6
1

Citosina (C)

Timina (T)
DNA

Uracil (U)
RNA

LIGANDO OS COMPONENTES = NUCLEOTDEOS

FUNES DOS NUCLEOTDEOS

TRANSPORTADORES DE ENERGIA QUMICA
REAES QUMICAS

- HIDROLISE DO ATP FAVORECE A FORMAO DO PRODUTO

A
T (U no RNA)
G
C

14 kJ/mol ()
30 kJ/mol (,)

ESTRUTURA GERAL DOS CIDOS NUCLICOS

OH no RNA e
H no RNA

COMPONENTES DE COFATORES ENZIMTICOS

NAD+ NICOTINAMIDA ADENINA DINUCLEOTDEO

RIBOFLAVINA

FAD FLAVINA ADENINA DINUCLEOTDEO

Coenzima A

INTERMEDIRIOS DA COMUNICAO CELULAR

REGULADOR DAS FUNES CELULARES

LIGAO FOSFODIESTER

NUCLEASES: HIDLISE
LIGAO FOSFODISTER

ESTRUTURA PRIMRIA DOS CIDOS

NUCLICOS (POLINUCLEOTDEOS)

ESTRUTURA SECUNDRIA DOS CIDOS NUCLICOS

(FITAS ANTIPARALELAS)
2 LIGAES DE HIDROGNIO

3 LIGAES DE HIDROGNIO

A DESCOBERTA DA ESTRUTURA DO DNA

1869 FRIEDRICH MIESCHER mdico suo (ncleo clula pus de ataduras cirrgicas
descartadas).
1878 ALBRECHT KOSSEL Isolamento cido nuclico puro, (cinco bases nitrogenadas).
1943 OSWALD AVERY, COLIN MACLEOD E MACLYNMCCARTY
(identificou o DNA como o portador da informao gentica).
1952 ROSALIND FRANKLIN - estrutura cristalina DNA - Raio-X .

Configurao molecular
R. Franklin, and R. G. Gosling,
Nature171, 740-741 (1953)

Molecular Structure of Nucleic Acids: A Structure for Deoxyribose

Nucleic Acid, Nature(April 25,

1962 James D. Watson e Francis HC Crick - Deduziram a estrutura em dupla hlice do DNA
(Prmio Nobel de Medicina ).

DESCOBERTA DO MODELO DO DNA

WATSON-CRICK HLICE DUPLA (1953)
1. As 2 cadeias nucleotdicas so dispostas em torno de um
eixo comum, e possuem sentidos opostos;
2. Bases esto voltadas para o interior da hlice e as pentosefosfato est no exterior;
3. Plano das bases perpendicular e o plano das pentoses
quase paralelo ao eixo da hlice;
4. Dimetro da hlice 20 e bases adjacentes/
separadas por 3,4 com ngulo de rotao de 36;
5. Cadeias so unidas por ligaes de H, pareamento
ocorre entre purina e pirimidina T e A (2 ligaes) C e G
(3 ligaes);
6. Informao gentica reside na sequncia de bases
nitrogenadas.

ESTRUTURA DO DNA

DNA DUPLA HLICE

DNA
Dupla hlice
DESNATURAO

ANELAMENTO

DNA parcialmente
desnaturado
Separao das fitas

Separao das fitas

por pareamento de bases

Fitas reparadas do DNA com alas aleatrias

ETAPAS NA DESNATURAO REVERSVEL E NO ANELAMENTO (RENATURAO) DO DNA

REPLICAO DO DNA

CROMOSSOMOS

CROMOSSOMOS
Clula humana normal 46
cromossomos, cada um contm uma
longa sequncia de DNA enovelado
por protenas bsicas, HISTONAS.
DNA DUPLA HLICE

HISTONAS

Manuteno da estabilidade estrutural do

cromossomo/encurtamento perde capacidade
parcialmente a capacidade/diviso

GENES: Segmento especfico de DNA, em um cromossomo (unidade bsica/ hereditariedade).

Agem direcionando a produo de RNA, que determina a sntese/protenas que compem a
matria viva. Clulas humanas ~ 25.000 genes.

REPLICAO DO DNA

DNA ligase

Processo/autoduplicao do
DNA/DNA POLIMERASE.
TRANSCRIO - Sntese de
uma molcula de RNA a partir
de um molde de DNA.
Replicao Semiconservativa:
DNA conserva como metade
de cada molcula-filha.
Cpias/DNA, numa clula em
diviso, so
dotadas do
mesmo material gentico/
clula-me portava.

DNA polimerase

1
1 ETAPA: HELICASE catalisa a hidrlise do DNA em um ponto especfico chamado de
forquilha de replicao.
2 ETAPA: DNA polimerase, DNA replicado ao longo do eixo que cresce em direo
forquilha de replicao. Segmentos de DNA (fragmentos de Okazaki) so sintetizados pela
DNA polimerase ao longo da cadeia como os movimentos da forquilha de replicao.
3 ETAPA: Fragmentos de Okazaki so unidos pela DNA ligase, resultando em duas novas
molculas de DNA.

REAO POLIMERASE CADEIA (PCR)

Procedimento analtico REAO EM CADEIA DA POLIMERASE
(PCR) simula o processo natural de replicao.

PRIMERS Fragmentos de cidos nuclicos que serve como ponto de

partida para a sntese do DNA/DNApolimerase.
Detecta todos os tipos de mutaes associadas com doenas genticas.
usado para detectar a presena de DNA indesejados (infeco bacteriana
ou viral).
APLICAO (Pesquisas mdicas e biolgicas)
Sequenciamento/genes, diagnstico de doenas hereditrias, identificao
de fingerprint gentico (usado em testes de paternidade e na medicina
forense), deteco/diagnstico de doenas infecciosas e criao de
organismos transgnicos.

RNA
RNA - Polmero ramificado constitudo de nucleotdeos unidos por ligaes
fosfodiester (3 pontes 5);
RNA apresenta > 73 milhares de nucleotdeos;
DNA - encontrado somente no Ncleo,
RNA encontrado em todo clulas: ncleo, citoplasma e mitocondria.

ESTRUTURA SECUNDRIA DE RNA

Molculas de RNA fita nica, embora muitos contm regies de estrutura de
dupla hlice. (A :: U, G::: C).

TIPOS DE RNA
Atua como uma "cpia de trabalho", criado a partir do molde de DNA.

RNA mensageiro (mRNA)

RNA ribossomal (rRNA)

RNA de transferncia (tRNA)

(mRNA): Funciona como um transportador/informao gentica do DNA/

ncleo da clula para o local da sntese de protenas no citoplasma;
Bases do mRNA esto em uma seqncia complementar seqncia de
bases de uma das fitas/DNA nuclear;
(tRNA): a chave para o cdigo: Fornece/aminocidos individuais para o
local da sntese protica. Clulas contm pelo menos um tipo especfico
de tRNA para cada um dos 20 aminocidos.
(rRNA): Principal componente dos ribossomos, se combina com um
conjunto de protenas para formar/ribossomos, que tem stios para ligao
(fatores proteicos, RNAm e RNAt). Ribossomos ligados aos tRNAs e
protenas especficas podem se mover sobre molculas de RNAm para
traduzir as informaes codificadas.

RNA de transferncia (tRNA)

tRNA regies de ligao/H entre os pares de bases complementares.
DUAS REGIES /RNA tm funes importantes:
Anticdon: seqncia de trs bases que permite ligar ao mRNA durante a
sntese de protenas. (Ela complementar a um dos codons no mRNA).
3 extremidade da molcula/liga a um aminocido com ligao ster p/
transporta-lo ao site da sntese protica. Corresponde molcula de tRNA
para o aminocido especfico.

2a. Letra do cdon

1a. Letra do cdon

Degenerao do cdigo
gentico

CDON DE INICIAO (AUG)

CDONS DE FINALIZAO (UAA,UGA e UAG)

CARACTERSTICAS GERAIS DO CDIGO GENTICO

CARACTERSTICA

Cdon trs letras

O cdigo degenerado

EXEMPLO

CGA = alanina
CGA, GCC, GCG, GCU todos
representam alanina
O cdigo preciso
GCC representa somente Alanina
Codifica da cadeia de iniciao AUG
Codifica a cadeia de terminao UAA, UAG e UGA
O cdigo quase universal
GCA alanina, talvez/todos os
organismos

BIOSNTESE DE PROTENA TRADUO

SEDE DA
INFORMAO

CIDO
DESOXIRRIBONUCLICO

Biossntese de protenas
insere-se no dogma central
da biologia molecular

Processo
comprovado
CIDO
RIBONUCLICO

Processo no
comprovado

BIOSNTESE DE PROTENA TRADUO

1 ETAPA : INICIAO DA CADEIA POLIPEPTDICA
mRNA e uma pequena subunidade ribossomal liga-se, cdon de iniciao (AUG)
alinhado com o stio P (peptidil) da subunidade;
tRNA traz METIONINA (eucariontes) ou N-FORMILMETIONINA (procariontes).
Complexo resultante liga-se subunidade ribossmica grande para formar uma unidade
chamada complexo de iniciao.

RIBOSSOMO
Vermelho= Subunidade maior
Azul= Subunidade menor

2 ETAPA: ALONGAMENTO DA CADEIA

O prximo tRNA recebido com um anticdon complementar ao mRNA no
local A (aminoacil) do mRNA.
Um peptdeo formado entre os segmentos/aminocidos, (catalisada pela
eptidiltransferase), que libera a cadeia de aminocidos a partir do stio P.

2 ETAPA: ALONGAMENTO DA CADEIA, CONT.

tRNA vazio liberado, o ribossomo desloca um cdon ao longo do mRNA no
sentido da extremidade 3 '(translocao).
Outro tRNA liga-se ao sitio A, o processo de alongamento repetido.

3 ETAPA: TERMINAO DE SNTESE DE POLIPEPTDEOS

Alongamento continua at que o complexo ribossomo alcana um cdon de
finalizao (UAA, UAG, ou UGA);
Fator/terminao-se liga-se a protena para encerrar o cdon, e separa a
protena do tRNA final.
Ribossomo pode ento sintetizar outra molcula de protena.
Vrios ribossomos podem se mover ao longo de um nico fita de mRNA,
produzindo diversas protenas idnticas simultaneamente.
Cadeia polipeptdica crescente a partir do final do ribossomo enovelam-se
espontaneamente dando forma caracterstica 3D a protena.

TRADUZINDO O CDIGO GENTICO (SIMPLIFICADO)

Duplicao da molcula/DNA
Cpia de uma parte relevante do DNA, na forma de mRNA (simples fita).

(Principal enzima do complexo

enzimtico responsvel transcrio
do DNA RNA)

Formao do mRNA a partir do DNA - TRANSCRIO

SNTESE DE PROTENA
Migrao/mRNA para os ribossomos onde atuam como molde para a sntese;
Cdigo para a sntese lido ao longo de uma sequencia de bases do mRNA, sendo
os aa especficos conduzidos um a um protena por molculas de tRNA.

(Molde para a sntese)

MUTAES, DNA RECOMBINANTE, ENGENHARIA GENTICA

MUTAES - Alteraes, que resulta em uma seqncia de bases
incorretas na molcula do DNA, resultando mudanas na sequncia de aa
de uma protena.
Mutaes ocorrem naturalmente durante a replicao, podendo ser
induzidas por fatores ambientais:
Ionizante (raios-X, ultravioleta, raios gama);
Mutagnicos (agentes qumicos)

DNA RECOMBINANTE
DNA recombinante produzido quando segmentos de DNA de um
organismo so introduzidos no material gentico de outro organismo.
ENGENHARIA GENTICA: incluso de gene humano na E.coli (produo
comercial de insulina humana).
ALGUMAS SUBSTNCIAS PRODUZIDAS POR ENGENHARIA GENTICA
SUBSTNCIA
USO
Insulina humana
Tratamento do diabetes mellitus
Hormnio do
crescimento humano
Interferon
Hepatite B (vacina)
Malria (vacina)
Ativao plaminognio

Tratamento do nanismo
Combate a infeces virais
Agente de proteo da hepatite
Agente protetor da malria
Promove a dissoluo de cogulos de sangue

ENZIMAS DE RESTIO
Encontradas em uma ampla variedade de clulas bacterianas, catalisam a
clivagem de DNA molculas, so normalmente parte de um mecanismo que
protege certas bactrias a partir de invaso de DNA estranho, como vrus.
Algumas das bases em seu DNA tem grupos metil.

As enzimas de restrio
atuar em locais de DNA chamados palndromos, onde duas vertentes tm o mesmo
seqncia, mas ocorre em direes opostas:

Enzimas de restrio so usadas para clivar DNA em fragmentos de tamanho e

seqncia de nucleotdeos conhecidos, que podem ser emendados pela DNA ligases.

PLASMDIOS
Introduo de um novo seguimento de DNA (gene) em uma clula
bacteriana requer um vetor carreador, o qual frequentemente um
fragmento duplo de DNA cirlular (plasmdio).
Plasmdeos funcionam como acessrios para cromossomos por ser
portadores de genes para a inativao de antibiticos e a produo de
toxinas. Eles tambm so capazes de se replicar independentemente do
DNA cromossmico.
DNA BACTERIANO

PLASMDIO

FORMAO DO DNA RECOMBINANTE

Um plasmdio isolado de bactrias, sendo suas molculas clivadas em stos especficos
por enzimas de restrines.

Quando o DNA circular cortada, duas extremidades ligantes so produzidas, que tm

bases no pareadas.
O terminal ligaante so fornecidos com sees complementares para o emparelhamento
de um cromossomo humano para o qual a enzima de restrio foi utilizada.

PLASMDIOS
Plasmdio isolado

Bactria

Plamdio clivado c/
enzimas de restrino

Recombinao do DNA
Bactria c/ DNA
recombinante

Fitas clivadas so unidas pela DNA ligase, o plasmdeo torna-se uma

estrutura circular de dupla fita de DNA, recombinante.
Quando bactrias se multiplicam, novos plasmdeos so produzidos com o
DNA recombinante.

BIOTECNOLOGIA
Aplicao em grande escala dos avanos cientficos e tecnolgicos, a partir
de organismos vivos (clulas e/ou molculas) para produo racionalizada de
substncias, que resultam em produtos comercializveis.
APLICAES IMPORTANTES
Indstria (qumica, petroqumica, alimentos, farmacutica);
Agricultura/Pecuria;
Sade;
Preservao do meio ambiente.
Biotecnologia termo utilizado desde 1919, o crescimento dessa rea somente
ocorreu a partir da dcada de 70 com o desenvolvimento da tecnologia do
(DNA) recombinante.

solos

TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE

TRANSGNICOS

DEFINIO
Organismos geneticamente Modificados (OGM) adquiriram,
pelo uso de tcnicas modernas de Engenharia Gentica,
caractersticas de outro organismo.
O termo OGM tem sido utilizado para descrever a aplicao da
tecnologia do DNA recombinante para a alterao gentica de
animais, plantas e microorganismos.
Transgnicos - Para ter opinio tem que ter informao!

PROCEDIMENTOS PARA A OBTENO

DE VEGETAIS TRANSGNICOS
 Um gene de interesse;
 Uma tcnica para transformar clulas vegetais atravs da
 introduo do gene de interesse, gerar uma planta inteira a
partir de uma s clula transformada.
Planta transgnica - contm, alm dos genes naturais, um gene
adicional proveniente de outro organismo, que pode ser uma planta,
bactria ou at um animal.

TRANSFERNCIA DOS GENES DE INTERESSE

Transferncia dos genes se d diretamente na clula vegetal, sendo o
processo mais utilizado (especialmente para o caso de
monocotiledneas) ou atravs de agrobactrias.
METODOLOGIAS:
 Eletropropagao de protoplastos de clulas vegetais
(Clula vegetal s/ parede celular
choque eltrico
dos genes no genoma).
 Biobalstica
(Microprojteis Au ou W + gens de interesse

integrao

tecidos vegetais).

COMO REALIZADA A CLONAGEM CELULAR?

Ovcito enucleado
(Scottish Blackface)
Clula liberada na
ovulao do ovrio

Reproduo assexuada
m.o/vegetal/animal

Ncleo de clula
mamria
(Finn Dorset)
Injetado
ncleo doado

Eletrofuso

Clula nova
Transferncia
para uma fmea
receptora

FONTE: Nature, vol. 407, p. 86-90, 2000.

CONSIDERAES !
As reaes de desconfiana e medo dos frankenfoods
As aplicaes nutricionais e a sade;
As evidncias, aps 20 anos e milhes de hectares...
Precauo sem preconceito;
A sociedade precisa de fatos; aos cientistas cabe fornec-los e explic-los;
No existe Risco Zero. Risco tolervel o alvo!
Conhecimento do genoma e as possveis modificaes na composio nutricional e
funcional dos alimentos
perspectiva futura para diagnstico e tratamento das
patologias:
Fenilcetonria, intolerncia lactose, doena celaca, doenas crnico- degenerativas
no transmissveis (diabetes, cncer, obesidade, DCV, mal de Parkinson e doena de
Alzheimer).

LINKS SUGERIDOS PARA LEITURA

Ministrio da Cincia e Tecnologia Comisso Tcnica Nacional de Biosegurana - CNTbio
http://www.ctnbio.gov.br/
PROGRAMA EDUCACIONAL EM BIOLOGIA MOLECULAR - UNIFESP
http://www.virtual.epm.br/cursos/biomol/biom.htm
POSICIONAMENTO DO CFN SOBRE ALIMENTOS TRANSGNICOS
http://www.cfn.org.br/variavel/destaque/pgdestaque2.htm
ROTULAGEM DE TRANSGNICOS
http://www.agrosoft.org.br/index.php?q=node/23783

TUTORIAL

Animao: Sntese Proteica

http://www.wisc-online.com/objects/index_tj.asp?objID=AP1302

http://pharmaxchange.info/animations/biotechnology/dna_recombinant.html

GRUPO DE DISCUSSO Material fornecido pelo professor.

BOM ESTUDO!