Microbiologa

BACTERIAS COLORACION GRAM.

I.

OBJETIVOS:
Identificar bacterias gran positivas y negativas de inoculo conocidos en
los medios selectivos.

II.

INTRODUCCIN

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan

difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta
de contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple
de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las clulas para la
microscopa, son suficientes los procedimientos que usan un solo
colorante llamados de tincin simple. Sin embargo, a menudo se utilizan
mtodos que no tien de igual modo todas las clulas, es el proceso
denominado tincin diferencial. Uno muy usado en microbiologa es la
tincin Gram. Basndose en su reaccin a la tincin Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos: gram positivas y gram negativas. Esta
tincin tiene gran importancia en taxonoma bacteriana ya que indica
diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.
Mientras que las bacterias gram negativas son constantes en su reaccin,
los microorganismos Gram positivos pueden presentar respuestas
variables en ciertas condiciones (son Gram lbiles). Por ejemplo, los
cultivos viejos de algunas bacterias Gram positivas pierden la propiedad
de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tien por la safranina
apareciendo como gram negativas. Anlogo efecto se produce en
ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras
modificaciones en la ejecucin de la tcnica. Por este motivo, es preciso
atenerse,
en
la
prctica,
al
procedimiento
establecido.
Para explicar el mecanismo de la tincin de gram se han propuesto varias
hiptesis fundadas en la naturaleza qumica de las paredes celulares de
los microorganismos.

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III.

MARCO TEORICO

BACTERIAS DEL YOGURT

El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la
leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis
del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus
bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto,
observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el
tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque
no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio
Tincin gram
La tincin Gram es una tincin muy utilizada para la identificacin y
clasificacin de las bacterias. La tincin Gram es una tincin diferencial que te
permite clasificar las bacterias en dos grupos Gram positivo y Gram negativas.
La tcnica de tincin Gram fue descubierta por Hans Christian Gram en el
1884, cuando el intento teir celular y encontr que algunas perdan el color
cuando se le quitaba el exceso de tinte.
La tcnica de tincin Gram consiste de los siguientes pasos:
1. Aplicar el tinte primario (cristal violeta) por 30 segundos. Toda la bacteria se
teir de este tinte violeta bsico.
2. Aplicar el mordiente (yodo de Gram) por 10 minutos. El yodo combinado con
el cristal violeta en la clula forma el complejo cristal violeta-yodo.
3. aplicar el agente decolorizador (alcohol etlico) de 10 a 20 segundos. El tinte
primario es decolorizado en algunas bacterias, mientras otras no se afectan.
4. Aplicar el tinte secundario o contratnte (sufrarina) por 30 segundos. Este tinte
bsico tie las bacterias decolorizadas color rosa.

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GRAM +
Clulas color violeta
Se forma el complejo CV-I. Las
clulas continan teidas de color
violeta.
Se deshidratan las paredes
celulares. Se contraen los poros.
Disminuye la permeabilidad. El
complejo CV-I no sale de las
clulas que continan teidas de
color violeta.
IV.

GRAM Clulas color violeta

Se forma el complejo CV-I. Las
clulas continan teidas de color
violeta.
Eliminacin por extraccin de
grasas de las paredes celulares.
Aumenta la porosidad. El
complejo CV-I se separa de la
clula.

MATERIALES Y REACTIVOS

Leche

Lamina cubre objetos esterilizadas

Yogurt

agua destilada

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Cristal violeta

V.

Lugol

mechero

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Todos los materiales que se utilizamos para la prctica deben ser

esterilizados.
2. Verter una gota de la muestra de leche con yogurt, fermentados a la
placa. extender sobre toda la superficie de la placa.

3. Verter una gota de cristal violeta sobre la muestra esparcida.

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4. Verter los demas reactivos utilizados en el primer laboratorio en la

misma secuencia indicada.
5. Enjuagar con unas cuantas gotas de agua destilada y observar el color
resultante.
VI.

RESULTADOS

Despus de haber seguido cada uno de los pasos indicamos en el procedimiento

llegamos a deducir que las bacterias presentes en nuestra muestra de leche
fermentada con yogurt natural, son bacterias GRAM POSITIVAS.

Bateras: lactobacillus (bulgaricus, acidofilus), lactococcus y el leuconostoc.

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VII.

CONLUSIONES
A pesar de la gran utilidad de la tincin de Gram, este mtodo debe ser
valorado con precaucin, ya que la reaccin puede variar segn la edad
de las clulas y la tcnica empleada, por ella junto a la muestra deben
teirse controles con gram positivas y gram negativas.
En la presente experiencia identificamos las una sola clase de Bacterias
( Gram (+) cuyo color se torn azul purpura)

VIII.

RECOMENDACIONES
Tener mucho cuidado con el uso de materiales de vidrio
Al realizar la experiencia debemos esparcir la muestra por toda la lmina
porta objetos.
Limpiar bien la mesa de trabajo con desinfectante antes y despus de la
prctica.
Usar la indumentaria adecuada para la experiencia, en este caso mandil,
guantes para evitar la contaminacin de la muestra y el contacto con las
bacterias.

IX.

BIBLIOGRAFIA
Gladwin, Mark; Bill Trattler (2007). Clinical Microbiology made
ridiculously simple. Miami, FL: MedMaster, Inc. pp. 45. ISBN 978-0940780-81-1.
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Microbi
olog%C3%ADa%20ambiental/I.%20Estructura%20y%20Funci%C3%B3n
.pdf

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