VIROLOGIA VEGETAL

Tulipa variegada, infectada por um vrus

INTRODUO
- vrus significa veneno;
- descoberta vrus: plantas de fumo com mosaico;
- 1892: seiva permanecia infecciosa mesmo aps a
passagem em filtro capaz de reter bactrias;
- 1937: constatao vrus formado por protena
e cido nuclico;
- 1939: desenvolvimento do 1o Microscpio Eletrnico
de Transmisso;

VRUS
- conjunto formado por uma ou mais molculas de cido
nuclico (RNA ou DNA), de fita simples ou dupla,
protegido por uma capa protica ou lipoprotica;
- replicao dependente do sistema de sntese de protenas
da clula do hospedeiro;
-Tamanho e morfologia:
- 104 a 105 nucleotdeos;
- 30 a 80 nm dimetro (isomtrico);
- 500 a 2000 nm comprimento (alongados);

Partculas virais: (A) Tobacco masaic virus, 36.000X;

(B) Maize dwarf mosaic virus, 80.000X; (C) Cowpea
chlorotic mottle virus, 100.000X; (D) Broccoli necrotic
yellow virus, 28.000X. Lin & Campbell, 1972.

Conceitos importantes
CAPSDEO = capa protica do vrus;
NUCLEOCAPSDEO = capsdeo + cido nuclico
(terminologia usada para vrus que apresentam envelope);
ENVELOPE = camada dupla, lipoprotica, que envolve o
capsdeo de alguns vrus;

VRUS FITOPATOGNICOS

- predominam os de RNA fita simples, polaridade

positiva = ssRNA (+), perfazendo 76% do total;
- mono, bi ou tripartidos (necessidade de todas as
molculas na clula hospedeira para causar infeco);
- tamanho: 104 105 nucleotdeos (bactria = 106 107);

VIRIDES

- pequena molcula de RNA circular, sem capa protica;

promove a prpria replicao;
- menores agentes infecciosos (< 400 nt);
- estruturas secundrias de pareamento bases:
proteo contra RNAses da planta;
Ex.: viride afilamento tubrculo da batata;
viride da exocorte citros;

Classificao dos vrus

Critrios para a classificao dos vrus

FAMLIAS:
- tipo cido nuclico, nmero fitas;
- estratgia replicao;
- morfologia da partcula;
- presena ou ausncia de envelope;
GNEROS:
- gama de hospedeiros;
- formas de transmisso;
- caractersticas fsicas, qumicas;
ESPCIE:
- homologia entre cidos nuclicos;
- especificidade por uma espcie de vetor;

Exemplos:
Famlia Banyviridae
- comporta todos os vrus com RNA de fita simples e polaridade
negativa, (-) ss RNA, que so tripartidos e que apresentam
envelope e morfologia isomtrica;

Gneros dentro dessa famlia:

a) Bunyovrus
b) Hantavrus
c) Tospovrus: hospedam plantas e so transmitidos por tripes;

Espcie-tipo dentro de Tospovrus = Tomato spotted wilt virus

Famlia Potyviridae:
- vrus RNA fita simples e com polaridade positiva,
(+) ss RNA;
- sem envelope;
Gneros:
a) Potyvirus: vrus transmitidos por pulges;
b) Ipomovirus: vrus transmitidos por mosca-branca;
c) Rymovirus: vrus transmitidos por caros;
d) Bymovirus: vrus transmitidos por fungos;

Ortografia
International Committee on Virus Taxonomy
- o nome do vrus dado em funo do hospedeiro e de
um sintoma importante provocado;
- o nome escrito em ingls e em itlico (portanto, no
segue a nomenclatura dos demais seres vivos);
Exemplos:
- Tobacco mosaic virus TMV
- Tomato spotted wilt virus TSWV
- Citrus tristeza virus CTV
- Potato virus Y PVY
- Bean golden mosaic virus BGMV
- Passionfruit woodness virus - PWV

SEQNCIA GERAL REPLICAO (ssRNA+)

- vrus penetra a clula (necessidade de um vetor);

- liberao cido nuclico = desnudamento;
- sntese RNA polimerase e molculas proticas;
- RNA polimerase sintetizar fitas ( ) e posteriormente
fitas + de RNA;
- acoplamento dos componentes novas partculas virais.

Movimento e distribuio na planta

a) Clula a clula
- Movimento lento;
- Passagem para as clulas vizinhas atravs dos
plasmodesmas;
- Protenas de Movimento virais: aumentam o limite
de excluso de tamanho dos plasmodesmas;
b) Movimento a longas distncias
- Tecido vascular (floema);
- Percurso viral:
ponto de infeco razes folhas jovens planta toda

- 10 a 100 vezes mais rpido;

Movimento clula-a-clula (plasmodesmas)

ESQUEMA MOVIMENTAO VIRAL

ESQUEMA MOVIMENTAO VIRAL

DIAGNOSE EM VIROLOGIA VEGETAL

1) Sintomatologia

SINTOMAS PROVOCADOS NAS PLANTAS

- Mosaico = o mais comum, acompanhado por bolhas,

amarelecimento internerval;
- clareamento nervuras;
- clorose, deformao foliar;
- endurecimento, deformao em frutos; nanismo;
sintomas em anis;

Bolhosidade

Bronzeamento
(vrus do enrolamento da folha videira)

Clareamento de nervuras

CUIDADO !!!
- deficincias ou toxidez nutricionais, toxemias por insetos,

toxidez por herbicidas, caractersticas genticas da planta

podem resultar em sintomas semelhantes;

DIAGNOSE EM VIROLOGIA VEGETAL

2) INDEXAO
Utilizao de plantas indicadoras para se detectar um
vrus vegetal.

Planta suspeita

Planta indicadora

(inoculao mecnica,
enxertia)

Sintomas
Caractersticos

INDEXAO - Exemplos

a) Em Datura stramonium, o vrus do vira-cabea do tomateiro

provoca sintomas de anis;

b) Chenopodium quinoa mostra leses locais quando

inoculada com PWV (vrus que causa doena no maracujazeiro);

DIAGNOSE EM VIROLOGIA VEGETAL

3) Crculo hospedeiros: avaliao do quadro geral;

4) Estudo do modo transmisso (mecanicamente,

sementes, insetos);

DIAGNOSE EM VIROLOGIA VEGETAL

5) Efeitos citopticos (microscopia eletrnica):
alteraes organelas;
aparecimento incluses = agregados virais;
Ex.: incluso citoplasmtica do tipo cata-vento
tpica de Potyvirus.

6) Testes serolgicos DASDAS-ELISA

ANTICORPO

CONJUGADO

AMOSTRA

SUBSTRATO

6) Testes serolgicos: ELISA (Enzyme(Enzyme-Linked

ImmunoSorbent Assay)

Placa de ELISA

Vantagens do teste ELISA

- boa sensibilidade: detecta 1 ng vrus/ml;
- rapidez na obteno dos resultados (6 a 24 h);
- anlise de vrias amostras de cada vez;
- possibilidade de quantificar os resultados;
- custo relativamente baixo (reagentes estveis, baratos,
utilizados em pequenas quantidades);
- no exige mo-de-obra altamente especializada;

7) Testes moleculares PCR (Polymerase Chain Reaction)

Reao: (termociclador)
- amostra cido nuclico (planta suspeita)
- primers especficos
- nucleotdeos
- polimerase
- tampo
(30 40 ciclos)
Produtos amplificados

Eletroforese em gel agarose

7) Testes moleculares RT PCR

Etapas da PCR
Cada - denaturao das fitas
ciclo - anelamento primers
- alongamento das fitas de DNA

Eletroforese em gel de agarose dos produtos amplificados

por PCR

- Eletroforese = separao fragmentos DNA amplificados

- Visualizao em transiluminador de U.V.