Prueba: Venereal Disease

Research Laboratory
U.S.R. (V.D.R.L.)
29/03/2012
C.B.T.i.s. # 168
Laboratorio Clnico
Inmunohematologa
Profr.: Dr. Sergio Alczar Hernndez

Autor: Equipo 5
Janeth Alejandra Morales Flores
Juan Andrs Navarro Robledo
Vctor Sosa Morales
Sebastin Zermeo Briones

Objetivo:

Que nosotros, los alumnos, comprendamos la importancia, la trascendencia, la aplicacin y el

fundamento de la prueba inmunoserolgica de Investigacin de Laboratorio para Enfermedad
Venrea mejor conocida como V.D.R.L.

La ciencia no es sino una perversin de s misma a menos que tenga como objetivo
final el mejoramiento de la humanidad.
Nikola Tesla (1856-1943) Fsico, matemtico e ingeniero elctrico croata.

Introduccin:
El examen V.D.R.L.; cuyo significado es Venereal Disaese Research Laboratory, el cual es el
nombre de este trabajo, en espaol quiere decir: examen de Investigacin de laboratorio para
enfermedad venrea, y es precisamente una prueba serolgica de sensibilidad especfica que nos
permite detectar si existe una alta probabilidad de que nuestro paciente est contagiado de la
enfermedad de la sfilis. Esta prueba tiene un nombre muy general en cuanto al fundamento, pero
la prueba que se hace realmente es la U.S.R. (Unheated-serum reagin) reagnina srica no
calentada.
La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual (ETS), que ha afectado al hombre
durante siglos. La primera prueba diagnstica para esta enfermedad, fue el test de Wassermann,
que se desarroll en 1906, valindose de una extraccin alcohlica a partir de tejidos sifilticos. Lo
que se pretenda demostrar con esta prueba, era la presencia de anticuerpos sricos mediante una
tcnica de fijacin de complemento, ms tarde se demostr que estas reacciones eran
inespecficas y se producan con extractos de otros tejidos. Aos despus se purific dos sustancias
reactivas, a partir de msculo de corazn de vacunos, la cardiolipina y la lecitina, lo cual condujo a
la obtencin de un antgeno ms especfico, que es utilizado desde 1946 en la prueba de VDRL
Venereal Disease Research Laboratory.
Para el diagnstico de la sfilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de pruebas.
Por examen directo mediante microscopa en campo oscuro y por fluorescencia directa, mediante
serologa y por cultivo en clulas epiteliales de conejo. Por serologa se tienen dos tipos de
pruebas, las pruebas no treponmicas como VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas
treponmicas como FTAABS (Fluorescent treponemal antibody absorption) o como MHA-TP
(Microhemaglutinacin para T pallidum)1.
Las nuevas pruebas diagnsticas para la sfilis, incluyen enzimo inmunoensayo (ELISA),
Western bloty Reaccin en cadena a la polimerasa (PCR).
Por razones obvias en el presente trabajo abordaremos nicamente la prueba V.D.R.L.,
aunque cabe aclarar que dicha prueba es muy similar a la prueba llamada RPR, que ya antes se ha
mencionado.

Fundamento:
La sfilis es causada por una espiroqueta delgada con forma de sacacorchos con motilidad
rotatoria lenta, esta bacteria, que es Gram (-), mide de 5 a 20 micras de largo y 0.5 de dimetro. La
espiroqueta tiene el nombre de Treponema pallidum y es causante, por subespecies diferentes, de
distintas enfermedades en el ser humano; Existen por lo menos tres subespecies bien conocidas:
T. pallidum pallidum, causante de la sfilis; T. pallidum pertenue, causante de la frambesia
(tambin llamada buba o pian); y T. pallidum endemicum, causante del bejel (sfilis endmica o
dichuchwa). A veces se incluye tambin como subespecie al Treponema carateum (o Treponema
pallidum carateum), causante de la pinta (mal de pinto).
1

Es una bacteria bastante frgil. Fuera del cuerpo, no soporta los climas secos o las
temperaturas superiores de 42C. No resiste la penicilina, siendo esta ltima uno de los mejores
antibiticos que pueden utilizarse contra esta bacteria.
Para la prueba U.S.R se utiliza un reactivo de lectura macroscpica utilizado para el
diagnstico serolgico de reaginas, ests son Anticuerpos sricos que pertenecen a las
inmunoglobulinas IgE que aparecen espontneamente en individuos genticamente predispuestos
y que estn presentes en el suero de personas sifilticas o que padezcan enfermedades agudas o
crnicas. Va a fijarse sobre los mastocitos y basfilos de la sangre, donde al encontrarse con
el antgeno desencadena una manifestacin de alergia (asma, urticaria, etc.).
La prueba se hace con plasma o suero no inactivado,( en la U.S.R. no es necesario inactivar
el complemento en bao mara a 56C).
Cuando se mezcla un suero que contiene reaginas con el antgeno U.S.R. las partculas en
emulsin floculan (juntan partculas que forman parte de un coloide) formando agregados visibles
en un microscopio con un objetivo de 10x y ocular de 10x.
Por el contrario, un suero sin reaginas no flocula alas partculas antignicas, las cuales
permanecern dispersas.

Material:
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9.

Antgeno USR (VDRL)

Suero control positivo
Suero control negativo
Placas de reaccin
Agitador rotatorio de 180 r.p.m.
Microscopio ptico
Pipeta semiautomtica 50L
Gradilla

Muestra de sangre venosa sin

anticoagulante
10. Material necesario para obtener
dicha muestra sangunea

Tcnica:
Procedimiento (cualitativo)

Coloque 50 L (por cada pocito o circulo) de suero en una placa serolgica de vidrio
transparente circulo negro o en pocito.

Para corroborar que el reactivo funciona colocar tambin, 50l de cada control (+ y -).

Tomar el ltex (antgeno U.S.R) y colocar una gota a cada una de las/ la muestra de suero
y los controles, colocando la jeringa antes, procurando atravesar en principio el orificio
tapado del envase ltex con al aguja (como se observa).
Perforar aqui

Coloque la las lminas en un rotor a mezclar durante 4 minutos.

Observe el resultado en un microscopio ptico.

Interpretacin de los resultados:

3

 Si las partculas observadas son en forma de

filamentos cortos dispersos, el suero es no reactivo.
Si las partculas se presentan agrupadas en flculos
pequeos el suero es dbil reactivo.
Si las partculas se presentan agrupadas en flculos
grandes el suero es reactivo.

Procedimiento (cuantitativo) OPTATIVO

Si es: dbil reactivo o reactivo:
1) Para cada muestra a ser testada, colocar 50 l de NaCl al 0,9 % en los crculos 2 a 5.
2) Colocar 50 l del suero a testar en los crculos 1 y 2.
3) Mezclar la solucin salina y el suero en el crculo 2 utilizando la pipeta automtica, por
aspiracin y eliminacin, 8 veces. Evitar la formacin de burbujas.
4) Transferir 50 l del crculo 2 (1:2) al crculo 3 (1:4), mezclar como en el paso 3.
Transferir 50 l del crculo 3 (1:4) al crculo 4 (1:8), mezclar como en el paso 3.
Transferir 50 l del crculo 4 (1:8) al crculo 5 (1:16), mezclar como en el paso 3 y descartar 50 l.
5) Resuspender suavemente la suspensin antignica. Sosteniendo el frasco del antgeno en
posicin vertical, dispensar 1 2 gotas a fin de liberar el pico vertedor de aire, y luego
Colocar exactamente una gota (1/60 ml) de la suspensin antignica dentro de cada crculo de
prueba con una aguja no descartable sin bisel de calibre 18.

7) Anotar los resultados en trminos de la mayor dilucin de suero que produzca un resultado
Reactivo.

8) Si la ms alta dilucin probada (1:16) es reactiva, proceder como sigue:

a) Preparar una dilucin 1:16 de la muestra por adicin de 100 l del suero a 1,5 ml de NaCl al 0,9
%. Mezclar.
b) Colocar 50 l de la solucin de NaCl 0,9 % en los crculos 2, 3, 4 y 5 de la placa.
c) Colocar 50 l de la dilucin 1:16 en los crculos 1 y 2.
d) Con la misma pipeta, realizar diluciones seriadas dobles a partir del crculo 2 y completar la
prueba como se describi antes en los pasos 3 a 6.
e) Leer los resultados como se describi previamente.

Bibliografa:

http://www.redbioquimicasf.com.ar/redes/ets/tecnicas_procedimientos_sifilis_2010.pdf
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/VDRL
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003515.htm
http://www.clinicadam.com/salud/5/003515.html
http://www.onsalus.com/diccionario/enfermedad-mediada-por-reaginas/12015
http://exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/documentos/Introduccion_TPN6.pdf
http://www.youtube.com/watch?v=8SuJxsQRnfw Treponema pallidum song
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/sifilis.html ... Y otras pginas.
Folleto de uso de la tcnica que brinda la marca LAFONMR con la compra del reactivo.

Agradecemos especialmente a los laboratoristas y trabajadores de la U.M.F. No. 7 por sus atenciones y
comodidades que nos brindaron al explicarnos esta prctica, y a todos en general.