ARCHIVOS DE LA SOCIEDAD ESPAOLA DE OFTALMOLOGA www. el sevi er . es/ of t al mol ogi a Artculo original Mediadores alrgicos en lgrimas de ni nos con conjuntivitis alrgica estacional y perenne R. Martnez a , A. Acera b, , J. Soria b , N. Gonzlez b y T. Surez b a Servicio de Oftalmologa, Hospital de Cruces, Baracaldo, Espa na b Departamento de I+D, Bioftalmik, Derio, Espa na I NFORMACI N DEL ART CULO Historia del artculo: Recibido el 17 de noviembre de 2010 Aceptado el 11 de enero de 2011 On-line el 17 abril 2011 Palabras clave: Conjuntivitis alrgica estacional Conjuntivitis alrgica perenne ELISA Lgrima R E S U M E N Objetivo: Evaluar la concentracin de diferentes molculas mediadoras de alergia en lgrima de ni nos con conjuntivitis alrgica estacional (CAE) y conjuntivitis alrgica perenne (CAP) frente a controles. Mtodos: Se incluyeron 20 ni nos con conjuntivitis alrgica (17 CAE y 3 CAP), y 16 ni nos sanos utilizados como controles. Las muestras de lgrima se obtuvieron mediante una hemosteta de acetato de polivinilo (OASIS, 0525) colocndola en el canto externo. Se eluy la lgrima de la hemosteta utilizando un tampn y centrifugacin a 20.000rpmdurante 30 minutos a 4
C. Una vez cuanticadas las muestras se determinaron las concentraciones de histamina
(HIS), triptasa (TPS), factor quimiotctico del eosinlo (ECF), protena bsica (MBP), protena catinica del eosinlo (ECP), neurotoxina (EDN), IgE y E-selectina mediante la tcnica ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Los resultados se compararonconel test noparamtrico U de Mann-Whitney (p<0,05) y se realizaron anlisis multivariantes mediante regresin logstica. Resultados: Presentaron diferencias estadsticamente signicativas la TPS (p=0.014), MBP (p =0,032), ECP (p=0,0041), IgE (p=0,014) y EDN (p=0,00077), cuando se compar la lgrima de ni nos con CAE y CAP frente a la de ni nos control. Conclusiones: El anlisis simultneo de mediadores alrgicos en la lgrima de ni nos con CAE y CAP indica que existe una alteracin en la lgrima referida principalmente a un aumento signicativo de la concentracin de EDN, ECP, MBP, y disminucin de IgE y TPS. Los anlisis estadsticos revelan una exactitud diagnstica del 94,4%usando el panel de las 8 molculas analizadas. 2010 Sociedad Espaola de Oftalmologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados.
Autor para correspondencia.
Correo electrnico: arantxa.acera@bioftalmik.com(A. Acera). 0365-6691/$ see front matter 2010 Sociedad Espaola de Oftalmologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados. doi:10.1016/j.oftal.2011.01.002 Documento descargado de http://zl.elsevier.es el 18/07/2014. Copia para uso personal, se prohbe la transmisin de este documento por cualquier medio o formato. Journal Identication = OFTAL Article Identication = 95 Date: July 5, 2011 Time: 6:24pm 188 ARCH SOC ESP OFTALMOL. 2011;86(6):187192 Allergic mediators in tear from children with seasonal and perennial allergic conjunctivitis Keywords: Seasonal allergic conjunctivitis Perennial allergic conjunctivitis ELISA Tears a b s t r a c t Purpose: To evaluate the concentration of allergic mediators in tears of children with seaso- nal allergic conjunctivitis (SAC) and perennial allergic conjunctivitis (PAC) compared with controls. Methods: Twenty children with allergic conjunctivitis (17 SAC, and 3 PAC) and sixteen healthy children were included in this study. Tear samples were collected using a Merocel sponge (Oasis, 0525), and immediately eluted by incubation in elution buffer and subsequent centri- fugation at 20,000rpmfor 30min at 4
C. Concentrations of histamine (HIS), tryptase (TPS),
eosinophil chemotactic factor (ECF), major basic protein (MBP), eosinophil cationic protein (ECP), eosinophil-derived neurotoxin(EDN), IgE and E-selectinwere measured using enzyme linked immunosorbent assays (ELISA). Data were compared with the Mann-Whitney U test (P<.05), and multivariate analyses were also performed. Results: Tear levels of TPS (P=.014), MBP (P=.032), ECP (P=.0041), IgE (P=.014) andEDN(P=.00077) showed signicant differences in children with SAC and PAC compared to controls. Conclusion: The simultaneous analyses of allergic mediators inthe tears of childrenwithSAC and PAC showed a signicant elevated concentration in EDN, ECP and MBP in allergic group and decreased levels in IgE and TPS. Statistical analyses showed a diagnostic accuracy of 94.4% using the eight molecules panel. 2010 Sociedad Espaola de Oftalmologa. Published by Elsevier Espaa, S.L. All rights reserved. Introduccin El ojo y sus estructuras anejas participan de las reacciones de hipersensibilidad inmunolgica del organismo. Las con- juntivitis alrgicas forman un grupo de inamaciones de la supercie ocular que han mostrado un notorio incremento en los ltimos a nos. El 25%de la poblacingeneral presenta algn tipo de enfermedad alrgica y la mayora de pacientes alr- gicos presentan manifestaciones en diversos rganos diana, siendo frecuente la afectacin alrgica a nivel ocular 1,2 . En la infancia se presentan 3 formas bsicas de presenta- cin: la conjuntivitis alrgica estacional (CAE) normalmente por hiperreactividad a plenes, la perenne (CAP), a caros y epitelios y la forma ms severa por la afectacin corneal que es la queratoconjuntivitis vernal (CAV). Esta ltima se trata de una forma de reaccinalrgica ocular especca de la infancia, que la mayor parte de las veces cede en la adolescencia, pero que cursa de forma crnica con reagudizaciones muy severas que pueden llegar a producir afectacin corneal grave. La CAE es una forma de conjuntivitis aguda, que tiene su manifestacin por brotes en relacin con la poca de poli- nizacin. Con frecuencia la clnica ocular se acompa na de sntomas nasales yfarngeos, destacandoel picor, lasensacin de quemazn y fotofobia. Puede haber secrecin mucnica, quemosis conjuntival, edema palpebral y ms infrecuente- mente, afectacin de la crnea 3 . En cuanto a la CAP, se consideran dentro de este grupo las conjuntivitis alrgicas de ms de 3 semanas de evolucin 4 . Es el resultado de una exposicin antignica poco intensa y con- tinuada. Puede tener exacerbacin estacional, generalmente por alergia a plenes, pero suele tener duracin anual por alergia al polvo, caros, hongos, pelos de animales y otros alr- genos. Su inicio es progresivo, pudiendo ser agudo o subagudo despus de una infeccin bacteriana o viral o con motivo de un traumatismo crnico como el uso de lentes de contacto. Su evolucin es inicialmente intermitente para hacerse des- pus crnica. Cursan con picor, escozor, sensacin de cuerpo extra no y lagrimeo de intensidad moderada, que se agravan con la humedad, la luz, las atmsferas cargadas y el aire acondicionado. Su diagnstico a veces se hace difcil por su similitud con otras causas de conjuntivitis crnica, con las que tambin pueden asociarse. Tambin se debe conside- rar la mayor susceptibilidad a las infecciones secundarias a los pacientes atpicos. Las pruebas son positivas para neu- moalrgenos (dan una reaccin inmediata), polvo y caros (produciendo una reaccin doble) en el 80% de los casos. En este tipo de afecciones la IgE se encuentra elevada en el 60% de los casos 4 . En todas las formas existe una fase inicial de sensibiliza- cin y tras sucesivas exposiciones al alrgeno se desencadena la reaccinalrgica consufase precoz mediada por mastocitos e histamina, y la tarda mediada por eosinlos y neutrlos. Prcticamente todas las protenas y clulas implicadas en la inamacin se hallan presentes en la alergia ocular 5 . Cuando se sospecha de una entidad alrgica, el paciente debe someterse a pruebas cutneas seguidas por niveles sri- cos de IgE especcos y totales, y un hemograma con cuenta de eosinlos. Entre las herramientas diagnsticas oculares encontramos la prueba de provocacin conjuntival (PPC), en la que se administra una gota de alrgeno sobre la conjun- tiva para observar la respuesta conjuntival local-especca 6 . La limitacin de esta prueba de provocacin est relacionada con la escasa disponibilidad y los altos costes de los alrgenos solubles en agua y libres de conservantes. Otros test alrgicos miden la presencia de diferentes mediadores de alergia en la lgrima como la IgE, la histamina, la triptasa, la protena catinica del eosinlo y diferentes Documento descargado de http://zl.elsevier.es el 18/07/2014. Copia para uso personal, se prohbe la transmisin de este documento por cualquier medio o formato. Journal Identication = OFTAL Article Identication = 95 Date: July 5, 2011 Time: 6:24pm ARCH SOC ESP OFTALMOL. 2011;86(6):187192 189 citoquinas 7 . En la mayora de los test sus determinaciones se realizan in vitro, en laboratorios especializados, ya que necesitan de equipos caros o sosticados para analizar la con- centracin. Existenmtodos de diagnstico in vivo de la alergia ocular basados en la presencia de la IgE en lgrima, utili- zando unas tiras de papel que se colocan directamente sobre el frnix inferior de la conjuntiva. Dentro de la tira estnancla- dos anticuerpos anti-IgE y mediante un sistema colorimtrico se determina la presencia o ausencia de IgE en cuestin de minutos. Sin embargo, este test no es muy sensible en las con- juntivitis alrgicas (20%) y no es muy utilizado en la prctica clnica 8 . A pesar de que existen muchos mtodos de diag- nstico de inamacin ocular, algunos son muy costosos y difciles de realizar y otros son poco sensibles. Por ello pen- samos que es necesario desarrollar nuevos tests diagnsticos para la alergia ocular que sean diferenciales, sencillos y eco- nmicos y se puedan utilizar directamente en las consultas por los especialistas. El objetivo del presente estudio fue evaluar la concentra- cinde diferentes molculas mediadoras de alergia enlgrima de ni nos conalergia estacional y perenne frente a la lgrima de ni nos control para dise nar un sistema diagnstico de alergia ocular en lgrima basado en biomarcadores. Sujetos, material y mtodos Se analizaron muestras de lgrima de 20 ni nos con CAE y CAP, y 16 ni nos sanos utilizados como controles en el Servicio de Oftalmologa del Hospital de Cruces, Baracaldo. Los tutores de todos los ni nos implicados en el estudio rmaron el consen- timiento informado dando su autorizacin para la toma de muestras de lgrima. Los sujetos alrgicos fueron incluidos en el estudio bajo los siguientes criterios: historia clnica de alergia diagnosticada con brote sintomtico subclnico: picor y lagrimeo leve, ras- cado y/o parpadeo e hiperemia conjuntival. Los alerglogos tras remitir al Servicio de Oftalmologa los casos de sospe- cha de CAE (manifestacin por brotes en relacin con la poca de polinizacin) o CAP (ms de tres semanas de evolucin), la enfermedad fue conrmada mediante lmpara de hendi- dura. Las edades de los ni nos fueron comprendidas entre 5 y 14 a nos. Los criterios de exclusin fueron la coexistencia de otra dolencia ocular, administracin concomitante de fr- macos tpicos, la realizacin de intervenciones quirrgicas oftalmolgicas (6 meses previos) y la existencia de enferme- dades sistmicas con repercusin en la supercie ocular. La CAV se excluy del estudio por ser mucho ms severa y la pre- sencia de papilas permita que no existieran problemas en el diagnstico diferencial. El grupo control estaba formado por ni nos de 5 a 14 a nos sin clnica ocular alguna, sin dolencias de la supercie ocular y sin ninguna alergia sistmica diagnosticada. La toma de muestras fue realizada por personal cualicado siguiendo estrictamente los principios de la declaracin de Helsinki y tras aprobacin del Comit tico de Investigacin del Hospital de Cruces. Se tomaron muestras de lgrima de ambos ojos, sin pre- via anestesia empleando hemostetas de acetato de polivinilo (PVA ref. 0525, OASIS, USA). Para ello, se coloc la hemos- teta en el borde del prpado inferior sin tocar la supercie ocular para no provocar irritacin. La punta de la hemosteta se recort, y se eluy para obtener las protenas contenidas en ella. Posteriormente se centrifug a 20.000rpmdurante 30 minutos. La lgrima obtenida se cuantic con el mtodo EZQ (Protein Quantication Kit, Biorad), para conocer la concen- tracin de protena total en cada muestra de lgrima. Una vez cuanticada se congel a -80
C hasta su posterior anli-
sis. Las molculas analizadas fueron histamina (HIS), triptasa (TPS), factor quimiotctico del eosinlo (ECF), protena bsica (MBP), protena catinica del eosinlo (ECP), neurotoxina del eosinlo (EDN), IgE y E-selectina. El anlisis se realiz mediante la tcnica cuantitativa de ELISA(enzyme-linked immu- nosorbent assay) tipo sndwich. En todos los casos el reactivo colorimtricoempleadofue TMBpor loque la longitudde onda empleada para la determinacin de las concentraciones en todos los ensayos fue de 450nm. El estudio estadstico se rea- lizempleandoel test noparamtricoUde Mann-Whitney con un nivel de signicacin de p<0,05. Los valores crticos de los mediadores se hallaron mediante representaciones grcas basadas endiagramas de puntos y los niveles de sensibilidad y especicidad se determinaron mediante anlisis de regresin logstica multivariante (PEJ SPSS 18.0, Chicago, IL EE.UU.). Resultados Se hananalizado20 muestras de lgrima de ni nos (17 padecan CAE y 3 CAP) y se han comparado con 16 muestras de lgrima de ni nos controles. Las muestras de lgrima del grupo de aler- gia se recogieron entre marzo y junio de 2009 y las muestras de lgrima del grupo control se recogieron en noviembre de 2009, fuera de la poca de mayor afeccin alrgica. La edad media del grupo de alergia fue de 93,21 (85% ni nos, 15% ni nas), y la edad media del grupo control fue de 10,253,02 (81% ni nos, 19% ni nas). No hubo diferencias esta- dsticamente signicativas entre la edad del grupo de alergia ocular frente al grupo control (p=0,275). Los niveles en lgrima de TPS (p=0.014), MBP (p=0.032), ECP (p=0.0041), IgE (p=0.014) y EDN (p<0,001) presentaron diferencias estadsticamente signicativas en el grupo de aler- gia comparado con el grupo control (tabla 1). Para determinar la concentracin crtica de cada media- dor se emplearon representaciones mediante diagramas de puntos (Interactive Dot Diagram). Mediante este tipo de repre- sentaciones se puede obtener el valor crtico de concentracin que nos proporcione una sensibilidad y una especicidad mxima (g. 1). Los valores crticos obtenidos para cada mediador consu especicidad y sensibilidad, indicado a modo de porcentajes, se muestran en la tabla 2. En el anlisis de las curvas ROC comparativas (g. 2) muestran la relacin que hay entre la sensibilidad y la especicidad para un mediador dado. Cuando se hace un anlisis comparativo entre distin- tos mediadores, se puede visualizar cul de ellos, de manera individual, dar mejores resultados como herramienta de diagnstico. Este ser el que tenga mayor rea bajo la curva. Segn nuestros resultados el mediador de alergia ocular en lgrima que presenta una mayor rea bajo la curva es el EDN (95%de sensibilidady 68,7%de especicidad). Sinembargo, los anlisis de regresin logstica multivariantes, que actan a su Documento descargado de http://zl.elsevier.es el 18/07/2014. Copia para uso personal, se prohbe la transmisin de este documento por cualquier medio o formato. Journal Identication = OFTAL Article Identication = 95 Date: July 5, 2011 Time: 6:24pm 190 ARCH SOC ESP OFTALMOL. 2011;86(6):187192 Tabla 1 Valores de concentracin de los mediadores alrgicos en lgrima de ni nos con conjuntivitis alrgica estacional y conjuntivitis alrgica perenne comparados con los valores en lgrima de ni nos control Mediadores alrgicos Concentracin de mediadores de alergia en lgrima de CAE/CAP (ng/mL) Concentracin de mediadores de alergia en lgrima de controles (ng/mL) p <0,05 TPS 26,6 13,79 32,9 15,12 0,014 MBP 43,68 37,2 24,92 20,38 0,03 HIS 56 130 4 11 0,09 ECP 143,8 209,9 5,5 11,6 0,0041 EDN 322,5 380,75 8,25 12,25 0,0007 E-Selectin 8,95 4,46 9,16 6,60 0,456 ECF 9,28 5,91 5,74 7,45 0,06 IgE 8,97 12,04 22,12 19,9 0,014 Valor de signicacin p<0,05. TPS (ng/mL) 1 0,1 10 100 1 0,1 0,01 10 100 0,1 0,01 TPS (ng/mL) Grupo ECF (pg/mL) MBP (pg/mL) IGE (pg/mL) HIS (ng/mL) E-selectin (ng/mL) EDN (ng/mL) ECP (ng/mL) Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo 10000 1000 100 10 1000 10 1 0,1 0,01 0,0001 10 100 1000 10 100 0,1 1 100 10 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 <=0,34 Sens:75,0 Spec:68,7 >0,3 Sens:80,0 Spec:81,2 >251 Sens:85,0 Spec:50,0 >0,14 Sens:95,0 Spec:68,7 >6,8 Sens:70,0 Spec:87,5 >97,3 Sens:40,0 Spec:75,0 >0 Sens:50,0 Spec:87,5 <=26,9 Sens:90,0 Spec:56,2 <=0,34 Sens:75,0 Spec:68,7 Figura 1 Se representa la concentracin crtica de cada mediador alrgico mediante diagramas de puntos (Interactive Dot Diagram). Mediante este tipo de representaciones se puede obtener el valor crtico de concentracin que proporciona una sensibilidad y una especicidad mxima. Grupo 0: grupo control; grupo 1: grupo con alergia ocular. Tabla 2 Valores crticos obtenidos para cada mediador con su especicidad y sensibilidad, indicado a modo de porcentajes Mediadores alrgicos Concentracin en lgrima (ng/mL) Sensibilidad (%) Especicidad (%) TPS 23,8 75 68,7 MBP >12,55 85 50 HIS >5 50 87,5 ECP >3 80 81,2 EDN >3,5 95 68,7 E-Selectin >9,7 40 75 ECF >6,8 70 87,5 IgE 13,45 90 56,2 Documento descargado de http://zl.elsevier.es el 18/07/2014. Copia para uso personal, se prohbe la transmisin de este documento por cualquier medio o formato. Journal Identication = OFTAL Article Identication = 95 Date: July 5, 2011 Time: 6:24pm ARCH SOC ESP OFTALMOL. 2011;86(6):187192 191 100 80 TPS (ng/mL) MBP (pg/mL) IGE (pg/mL) EDN (ng/mL) ECP (ng/mL) ECF (pg/mL) 20 0 0 40 80 100-Specificity S e n s i t i v i t y 40 60 Figura 2 Anlisis de las curvas ROC comparativas. Se muestra la relacin que hay entre la sensibilidad y la especicidad para un mediador dado. Este ser el que tenga mayor rea bajo la curva. Se puede observar que el mediador de alergia ocular en lgrima que presenta una mayor rea bajo la curva es el EDN. Tabla 3 Tabla de clasicacin utilizando el mtodo ENTER. Empleando todas las muestras de lgrimas analizadas se confecciona un modelo predictivo que indica cmo utilizando los 8 mediadores analizados como herramienta de diagnstico, es posible diagnosticar correctamente el 94,4% de los pacientes, tanto sanos como alrgicos Grupo predictor % correcto Y=0 Y=1 Y=0 15 1 93,75% Y=1 1 19 95% 94,44% Y=0: casos controles; Y=1: casos con alergia ocular. vez como un modelo predictivo, nos indicanque utilizando los 8 mediadores analizados como herramienta de diagnstico, es posible diagnosticar correctamente el 94,4% de los pacientes, tanto sanos como alrgicos (tabla 3). Discusin La alergia ocular tiene una alta prevalencia en la poblacin en general siendo una de las dolencias ms frecuentes de la supercie ocular en la consulta oftalmolgica. Los snto- mas que producen los diferentes tipos de alergia ocular son comunes a muchas otras dolencias de la supercie ocular y sistmicas siendo los brotes leves en la infancia en muchas ocasiones mal diagnosticados como tics, es por esto que en algunos casos de duda o dicultad enel diagnstico es necesa- rio recurrir a mtodos alternativos o complementarios, sobre todo por parte de pediatras de Atencin Primaria 7 . Muchos mediadores inamatorios pueden ser medidos en lgrima tanto para diagnstico como pronstico y/o con propsitos experimentales. La mayora determinan la concentracin de IgE especca de forma indirecta mediante pruebas in vivo realizadas sobre el mismo paciente, o bien de forma directa mediante tcnicas de laboratorio. As la prueba de provoca- cin conjuntival analiza la presencia de IgE especca sobre la conjuntiva 6 y el lacrytest que es un mtodo directo, mide la cantidad de IgE presente enla lgrima 8 . Dentro de los mtodos in vitro se encuentras pruebas muy sosticadas que analizan diferentes mediadores alrgicos en lgrima como la tcnica ELISA utilizando anticuerpos especcos contra los mediado- res a analizar con un marcador enzimtico o el RAST que presenta unos principios bsicos idnticos a la ELISA pero uti- lizando istopos radioactivos. Otras tcnicas indirectas son el test de liberacin de histamina (TLH) o el test de liberacin de baslos (TDBH). Estas pruebas no aportan mayor utilidad para el diagnstico clnico. Sin embargo, su uso es til para estudios experimentales o de investigacin 9 . Estos mtodos en muchos casos son poco sensibles y en otros muchos casos se necesita de un laboratorio para su anlisis con mtodos muy caros y sosticados. Por todo esto, se evidencia la necesidad de un test que se pueda realizar en la consulta directamente sobre el paciente, especco, sensible y econmico. Eneste estudio se ha encontrado que el anlisis simultneo de determinados mediadores alrgicos en la lgrima de ni nos indicaunaalteracinensus concentraciones enni nos conCAE y CAP respecto a los ni nos controles. Los mastocitos siempre han sido considerados la principal clula implicada en la reaccin alrgica. Adems del efecto bien conocido inducido por el entrecruzamiento de los anti- cuerpos tipo IgE con receptores IgE de alta anidad por el antgeno y por la liberacin de variados mediadores, como la histamina, que produce la inmediata degranulacin de los mastocitos, es conocido que estas clulas tambin producen y liberan otros factores como la triptasa 6,10 . De forma similar, los eosinlos y sus protenas txicas estn incrementados y activados en la lgrima, conjuntiva y suero de todas las enfer- medades oculares alrgicas y son responsables de los da nos corneales producidos en estas enfermedades. Otras clulas inamatorias como los neutrlos participan tambin en la respuesta alrgica y contribuyen a la inamacin a travs de la reclusin de otras clulas y mediadores inamatorios. Las molculas que se han analizado derivan de todas estas clu- las implicadas en la respuesta alrgica. As, la histamina es el mediador ms importante y mayoritario encontrado en la fase inicial de una reaccin analctica. Puede activar el supresor de las clulas T y por lo tanto puede inhibir la produccin de IgE. Esto explicara los bajos niveles de IgE en individuos pato- lgicos obtenidos en este estudio, puesto que los niveles de histamina en lgrima de ni nos con CAE y CAP se encontra- ban elevados. Este proceso de retroalimentacin en el que la molcula efectora, en este caso la HIS, causa una inhibicin de la molcula responsable de su liberacin podra explicar cmo niveles altos en lgrima de HIS podra relacionarse con niveles bajos de IgE y viceversa 5 . Asimismo, en este estudio, tambin aparecen valores de concentracin de TPS menores en lgrima de ni nos con alergia ocular que los encontrados en la lgrima de ni nos controles, al contrario de lo esperado. No obstante, se ha descrito la posibilidad de que ocurra una acti- vacin no especca de los mastocitos debido a un aumento de los niveles de las molculas causantes de su activacin, como la triptasa, y en una segunda fase, una vez activados los mastocitos los niveles de triptasa disminuiran y se produci- ra la liberacin de HIS 11 . Por otra parte, en el presente estudio Documento descargado de http://zl.elsevier.es el 18/07/2014. Copia para uso personal, se prohbe la transmisin de este documento por cualquier medio o formato. Journal Identication = OFTAL Article Identication = 95 Date: July 5, 2011 Time: 6:24pm 192 ARCH SOC ESP OFTALMOL. 2011;86(6):187192 los valores de ECP, EDN y MBP se vieron incrementados en la lgrima de ni nos conalergia ocular frente a la lgrima de ni nos controles, sanos. La ECP, EDNy MBP son las mayores protenas mediadoras derivadas de los eosinlos activados. La ECP y la EDN se encuentran en la matriz de los grnulos de los eosi- nlos mientras que la MBP se encuentra en el corazn de los grnulos. La ECP est incrementada signicativamente en las lgri- mas de todas las formas de conjuntivitis alrgica, incluso en pacientes con pruebas negativas para IgE total y especca 12 . La ECP correlaciona con la severidad del compartimento cor- neal durante las fases agresivas de la enfermedad, en el cual la protena es liberada de eosinlos activados y es un fuerte indicador en la patognesis del da no producido al epitelio cor- neal en formas severas de alergia ocular 12 . Niveles altos de EDN tambin se han encontrado en la lgrima de pacientes con alergia ocular debido a la activacin de los eosinlos conjuntivales. Aunque la EDN tiene una alta homologa en secuencia con la ECP, la EDN tiene 100 veces ms actividad ribonucleasa que la ECP. Esta neurotoxina puede ser unmedia- dor de la activacin de los eosinlos y de la degranulacin 12 . Dentro de todos los mediadores analizados, hay algunas molculas que nos proporcionan buenos valores de sensibi- lidad (EDN, IgE, MBP) y otras que nos proporcionan buenos valores de especicidad(HISyECF), peronohayningnmedia- dor que pueda actuar por si solo como una buena y efectiva herramienta de diagnstico para alergia ocular debido a las altas desviaciones estndar producidas por las variaciones en la concentracin de estos mediadores entre individuos de un mismo grupo. Sin embargo, tras realizar un anlisis multiva- riante mediante regresin logstica mltiple, se comprob que el estudio conjunto de varios de estos mediadores a modo de panel de mediadores de alergia ocular, puede llevar a porcen- tajes de acierto superiores al 94%. Enconclusin, el anlisis de mediadores alrgicos de forma conjunta en lgrima de ni nos, constituye una herramienta diagnstica importante y complementaria con la evaluacin clnica, sobretodo enaquellos casos enlos que exista similitud con otras causas de conjuntivitis crnica y/o tics de parpadeo. El sistema diagnstico utilizando los 8 biomarcadores de aler- giaque se presentaeneste estudioes muysensible yespecco y pensamos que al ser un sistema multivariante permite un mayor xito en el diagnstico que los tests que existen en la actualidad que slo analizan un marcador. El porcentaje de xito en el diagnstico es muy alto (94%) por lo que lo hace un sistema ms efectivo que los tests que haba hasta la actua- lidad ya que presentaban porcentajes de acierto mucho ms bajos. En la actualidad, nuestro grupo est investigando un dispositivo para anclar los 8 biomarcadores de alergia, que d una lectura del resultado en unos minutos para que pueda ser utilizado directamente en la consulta sin necesidad de labo- ratorios externos. Este mtodo tendr que ser sencillo, rpido y econmico. La evaluacin clnica debe prevalecer, guiando la ejecucin adjunta de pruebas de laboratorio que puedan conrmar un diagnstico presuntivo u orientar hacia una hiptesis alterna- tiva. Financiacin IEI08-003-BIOMICS (ETORGAI 2008: Proyectos integrados de investigacin industrial). Conicto de intereses Los autores declaran no tener ningn conicto de intereses. Agradecimientos Nuestros agradecimientos al Servicio de Alergologa del Hos- pital de Cruces por su colaboracin en los casos de ni nos incluidos en este estudio procedentes de su Servicio. B i b l i o g r a f a 1. Van Gysel D, Govaere E, Verhamme KM, Doli E, De Baets F. Messages fromthe Aalst Allergy Study. World J Pediatr. 2009;5:18290. 2. Lundbck B. Epidemiology of rhinitis and asthma. Clin Exp Allergy. 1998;28:310. 3. Wong AH, Barg SS, Leung AK. Seasonal and perennial allergic conjunctivitis. Recent Pat InammAllergy Drug Discov. 2009;3:11827. 4. Dart JK, Buckley RJ, Monnickendan M, Prasad J. Perennial allergic conjunctivitis: denition, clinical characteristics and prevalence. A comparison with seasonal allergic conjunctivitis. Trans Ophthalmol Soc UK. 1986;105: 51320. 5. McGill JI, Holgate ST, Church MK, Anderson DF, Bacon A. Allergic eye disease mechanisms. Br J Ophthalmol. 1998;82:120314. 6. Butrus SI, Abelson MB. Laboratory evaluation of ocular allergy. 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