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Este documento presenta un preinforme de laboratorio sobre los factores que afectan la actividad de las enzimas. El objetivo es estudiar la relación entre la velocidad de reacción y la concentración de la enzima manteniendo otros factores constantes. Se explican los efectos del pH y la temperatura en la actividad enzimática. Luego se detallan los materiales y procedimiento para medir la actividad de la catalasa en función de su concentración y calcular la velocidad de reacción. Finalmente se presentarán los resultados en tablas y gráfic
Este documento presenta un preinforme de laboratorio sobre los factores que afectan la actividad de las enzimas. El objetivo es estudiar la relación entre la velocidad de reacción y la concentración de la enzima manteniendo otros factores constantes. Se explican los efectos del pH y la temperatura en la actividad enzimática. Luego se detallan los materiales y procedimiento para medir la actividad de la catalasa en función de su concentración y calcular la velocidad de reacción. Finalmente se presentarán los resultados en tablas y gráfic
Este documento presenta un preinforme de laboratorio sobre los factores que afectan la actividad de las enzimas. El objetivo es estudiar la relación entre la velocidad de reacción y la concentración de la enzima manteniendo otros factores constantes. Se explican los efectos del pH y la temperatura en la actividad enzimática. Luego se detallan los materiales y procedimiento para medir la actividad de la catalasa en función de su concentración y calcular la velocidad de reacción. Finalmente se presentarán los resultados en tablas y gráfic
PRACTICA DE LABORATORIO- PREINFORME ASTRID CONTRERAS ISABEL VARGAS JESICA ROJAS CAROLINA BIOQUMICA FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS OBJETIVOS El desarrollo de este laboratorio permitir corroborar, con la prctica, lo aprendizajes tericos logrados hasta el momento. En forma especfica, esta experiencia le permitir: 1. Establecer la relacin entre la velocidad de reaccin y la concentracin de la enzima, manteniendo constante los factores de la actividad enzimtica. 2. Confrontar la fundamentacin sobre la cintica de la actividad enzimtica con los resultados obtenidos en el laboratorio. 3. Identificar la funcin de la catalasa en los seres vivos como la oxidoreductasa. FUNDAMENTACIN TERICA FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMTICA. Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimtica. Destacaremos dos: el pH y la temperatura. EFECTO DEL pH. La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente. Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de unos lmites estrechos De ah Universidad Industrial de Santander Tecnologa en Regencia de Farmacia
la conocida importancia biolgica de los sistemas tampn.
En la mayor parte de los casos el pH ptimo est prximo a la neutralidad, en consonancia con el pH intracelular, pero existen enzimas con pH ptimo muy diverso segn sea el pH del medio en el que habitualmente actan (los enzimas proteolticos del jugo gstrico tienen pHs ptimos prximos a 2 ya que este es el pH de dicho jugo). Por ltimo existen algunos enzimas a los que el pH no afecta en absoluto. -EFECTO DE LA TEMPERATURA. Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la temperatura es diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en otras reacciones qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica. Este efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima cuando se alcanza dicha temperatura. Si representamos grficamente la variacin de la actividad de los enzimas en funcin de la temperatura da la impresin de que existe una temperatura "ptima" Universidad Industrial de Santander Tecnologa en Regencia de Farmacia
anloga al pH ptimo estudiado anteriormente;
hay que resaltar que esa aparente temperatura ptima no es ms que el resultado de dos procesos contrapuestos: 1) el incremento habitual de la velocidad de reaccin con la temperatura y 2) la desnaturalizacin trmica del enzima.
MATERIALES UTILIZADOS I pipeta 5 tubos de ensayo 1 bureta 3 vasos de precipitado 1 probeta pequea Muestra de sangre (enzima catalasa) cido sulfrico H2SO4 (5 ml por tubo) Permanganato de potasio KMnO4 0.005 N Perxido de Hidrgeno H2O2 al 0.24% pH 7 Agua destilada Preparacin de la catalasa (se hace previamente) La catalasa puede ser preparada de la sangre humana as: Universidad Industrial de Santander Tecnologa en Regencia de Farmacia
1. Colocar en un tubo de ensayo 25 ml de agua destilada y enfriarla sobre hielo picado. 2. Obtener 0.02ml de sangre de la punta del dedo y para ello se hace un pinchazo con lanceta estril. 3. Dejar caer 0.02 ml de la sangre sobre el agua destilada y lavar varias veces la pipeta en el agua. 4. Mantener la solucin en agua helada para evitar el deterioro de la enzima. Procedimiento 1. Tomar 5 tubos de ensayo y numerarlos 2. A cada tubo agregar 3 ml de H2O2 al 0.24% y pH 7 3. A cada uno de los tubos agregar solucin enzimtica de catalasa as: Tubo 1 0.0ml Tubo 2 0.1 ml Tubo 3 0.2ml Tubo 4 0.3ml Tubo 5 0.4ml Tubo 6 0.8ml 4. Dejar reposar por 5 min 5. Aadir 3 ml de H2SO4 2N a cada tubo de la reaccin enzimtica. 6. Proceder a titular el contenido de cada tubo agregando KnMO4 0.005N (hasta obtener un color rosado muy ligero y que permanezca) 7. Calcular: el micro moles H2O2 destruidos en 5 min, la velocidad de reaccin y la relacin con la concentracin enzimtica. 8. Graficar la velocidad de reaccin vrs concentracin de la enzima en el papel milimetrado.
RESULTADOS
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Tubo Ml de H2O2 MICROMOL DE H2O2 ML DE ENZIMA ML DE H2SO4 MICROMOLREMANEN MICROMOL DESTRUIDO EN 5MIN VELOCIDAD MMOL DESTR.1MIN 1 0.0
2 0.1
3 0.2
4 0.4
5 0.8
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