Guia de Practica Bioquimica Unid PDF

CARRERA ACADMICO PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUMICA

Docentes Responsables:
Dr. Q.F. Mario A. Bolarte Arteaga.
Dr. Q.F. Enrique A. Len Meja.

Apellidos y Nombres:
..
Horario de Prctica:
Mesa de Trabajo:
2014
GUA DE PRCTICA DE BIOQUMICA

PROGRAMACIN DE PRCTICAS

PRCTICA DESARROLLO
PRCTICA 01 Determinacin de pH en fluidos biolgicos
PRCTICA 02 Enzimas y Actividad enzimtica.
PRCTICA 03 Obtencin de DNA de bazo.
PRCTICA 04 Introduccin a la Espectrofotometra
PRCTICA 05 Determinacin de Glucosuria.
PRCTICA 06 Determinacin Cuantitativa de Glucosa en sangre.
PRCTICA 07 ndice Glicmico y Glucosa Postprandial.
PRCTICA 08 Determinacin Cuantitativa de Colesterol.
PRCTICA 09 Determinacin cuantitativa de Triglicridos
PRCTICA 10
Determinacin cuantitativa de Protenas Totales y
Albmina en Suero
PRCTICA 11 Determinacin cuantitativa de Urea en Orina.
PRCTICA 12 Medidas Antropomtricas


NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO

1. Realizar las prcticas de laboratorio con el debido inters y responsabilidad.
2. Presentarse vestido correctamente con su correspondiente guardapolvo y distintivo de
la Universidad.
3. Poner maletines y mochilas en el estante, llevar a las mesas solo lapiceros y cuadernos.
4. Est terminantemente prohibido beber o comer dentro del laboratorio.
5. Leer cuidadosamente la gua de prctica y tener en cuenta las indicaciones de los
profesores de prctica sobre el uso del material y equipos de laboratorio, as como el
orden, limpieza y seguridad que debe mantenerse.
6. Por cada prctica de laboratorio cada mesa de trabajo presentar un nico informe, el cual
consta de las siguientes partes:
- Cartula.
- Objetivos.
- Marco Terico.
- Desarrollo Experimental.
- Discusin de los resultados.
- Conclusiones.
- Cuestionario.
- Bibliografa
Dicho informe se presentar en la siguiente prctica en el horario y grupo respectivo.
7. El inicio de la prctica es en la hora exacta programada. Se tendr una tolerancia
de 10 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se podr ingresar al laboratorio, por lo
tanto se le considerar como una inasistencia y no tendr derecho a nota de informe de
prcticas.
8. Las inasistencias en las prcticas no son recuperables en ninguno de los grupos,
calificndose al alumno con nota cinco (05). Aquel alumno que acumule 30% de
inasistencias no tiene derecho a nota prctica.
9. Cada alumno ser integrante de una mesa de trabajo, a la cual pertenecer a lo largo
del semestre acadmico.
10. Por mesa de trabajo, ser nombrado un responsable que se har cargo del material y
equipos recibidos as como de la presentacin de los informes.
11. En caso de dao, deterioro o prdida del material y/o equipos, el responsable de mesa
informar del hecho al profesor de prcticas, TODO GRUPO ES RESPONSABLE DEL DAO
CAUSADO, y deber repararlo a la brevedad posible, no ms de una (01) semana despus
del incidente.
12. Al final de la prctica, se proceder a limpiar el material usado, con el fin de entregarlo en
las mismas condiciones en las que fueron recibidos, caso contrario se le descontar un
punto en la nota de informe a todo el grupo.
13. Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolver a la persona encargada del
laboratorio.
14. El laboratorio deber quedar completamente limpio, las mesas secas y limpias, debiendo
arrojar todos los desechos al tacho de basura.

PRCTICA 01:
Determinacin de pH en fluidos biolgicos
COMPETENCIAS:
Aplica los conceptos fundamentales sobre el pH.
Utiliza las tcnicas para medir el pH.

MATERIALES Y EQUIPOS:
POTENCIMETRO ANARANJADO DE
METILO
BURETA 25ML ESTANDAR DE
pH 10
PIPETA 1ML
BEACKER 100ML PAPEL DE TORNASOL
AZUL
SOPORTE
UNIVERSAL
AC. ACTICO
0,1N
PIPETA 2ML
MATRAZ 100ML PAPEL DE TORNASOL
ROSADO
PINZA PARA
BURETA
NA(OH) 0,1 N PIPETA 5ML
ESTANDAR DE pH
4
INDICADOR DE pH 1-14 TUBOS 13X100ML AGUA
DESTILADA
PIPETA 10ML
ESTANDAR DE pH
7
GRADILLAS VASO
DESCARTABLE
FENOLFTALEINA HCL 0,1N

FUNDAMENTO TERICO:
METODOS DE DETERMINACION DEL pH:
Existen varios procedimientos:
Mediante indicadores.
Mediante cintas o papel de pH universal.
Mediante el potencimetro o pHmetro.

DETERMINACION DEL pH MEDIANTE EL USO DE INDICADORES:
Indicadores.-Son soluciones o cuerpos qumicos que se agregan a los lquidos para dosar,
con el fin de ver el momento preciso del trmino de la reaccin; manifestndose por la
aparicin, desaparicin o modificacin del color.


DETERMINACIN DEL pH MEDIANTE EL USO DEL PAPEL INDICADOR:
Papel Indicador: Es un papel especial que contiene absorbidos indicadores en serie o a lo
largo, que al ponerse en contacto con la solucin a evaluar da un color que corresponde al
pH aproximado de la solucin problema.

DETERMINACIN DE pH MEDIANTE EL POTENCIMETRO O pHMETRO:
Se fundamenta en la generacin de una diferencia de potencial que se establece cuando
se emplean dos soluciones ionizadas de diferente concentracin en las cuales se hace
pasar una corriente elctrica, es decir la diferencia de potencial es proporcional a la
diferencia de concentracin(es) entre las soluciones.

METODO OPERATIVO:
1. Identificacin de pH con Papel Tornasol:

Con la ayuda de un gotero o una bagueta coloca en una placa de toques unas gotas de
cada muestra.
Enfrenta la solucin al papel de tornasol (rojo/azul) y tabula tus resultados.

2. Identificacin de pH con Reactivo Indicador de Fenolftalena:

En tubos de ensayo coloca 01 mL de muestra problema y dilyela con 01 mL de agua
destilada.
Adiciona a cada tubo II gotas de Reactivo Indicador de Fenolftalena.
Tabula tus resultados.

M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
Papel Rojo

Papel Azul

NATURALEZA
cido / Base

M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
Resultado
(Incoloro Grosella)

NATURALEZA
cido / Base


3. Identificacin de pH con Papel Indicador 1-14:

Con la ayuda de un gotero o una bagueta coloca en una placa de toques unas gotas de
cada muestra.
Enfrenta la solucin al Papel Indicador y con la ayuda de la cartilla de referencia
identifica la naturaleza cida o bsica de las soluciones.
Tabula tus resultados.

4.- Identificacin de pH con el uso del pHmetro.
Con los estndares de pH verifica la calibracin del pHmetro.
En un beacker limpio y seco, coloca una muestra de 150 mL de orina y sumerge el
electrodo del pHmetro.
Anota el pH de la muestra y comprala con los resultados anteriores.

Cuestionario

1.-Mencione el pH normal de: Sangre, orina, lquido seminal, lquido cefalorraqudeo, lquido
amnitico, saliva y su correlacin con alguna patologa.

M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
Resultado
Numrico

NATURALEZA
cido / Base


PRCTICA 02:
Enzimas y Actividad enzimtica

COMPETENCIAS:
Identifica la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.
Relaciona la accin de la temperatura con la actividad enzimtica.
Identifica la accin hidroltica del enzima amilasa.

MATERIALES Y EQUIPOS:
GRADILLAS
TUBOS DE ENSAYO
MECHERO
PIPETA 2 Ml
PIPETA 5 mL
BEACKER 250 mL
TRIPODE
MALLA DE ASBESTO
BURETA
PROPIPETA
TROZOS DE PAPA
TROZOS DE HGADO DE POLLO
MORTERO Y PILON
PEROXIDO DE HIDRGENO
AGUA DESTILADA
BEACKER 50 Ml
ACIDO CLORHIDRICO 0.5 N
ARENA FINA
SOLUCION DE ALMIDON 1%
REACTIVO DE LUGOL
REACTIVO DE BENEDICT
PINZA DE MADERA

FUNDAMENTO TERICO:

Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas,
siempre que sea termodinmicamente posible. En estas reacciones, las enzimas actan
sobre una molcula denominada sustrato; las cuales se convierten en molculas
diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en la clula necesitan
enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por
enzimas se les denomina reacciones enzimticas.

METODO OPERATIVO:

1. RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA:
La catalasa es un enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y
vegetales.
La funcin de sta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo
celular, se forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno. (H
2
O
2
)

Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona
el problema.
La reaccin de la catalasa es la siguiente:

La existencia de la catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua
oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas
bacterias son anaerbicas (no pueden vivir con oxgeno), mueren con el
desprendimiento de oxgeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta
sobre el agua oxigenada.
DESARROLLO:
Rotula tres tubos de prueba con las letras A,B y C.
Colocar en el tubo A un pedazo de hgado del tamao de un frijol, en el tubo B
un tamao similar de papa y en el C arena.
Anadir 03 mL de agua oxigenada a cada tubo.
Observa, anota e interpreta los resultados.

2. REUTILIZACIN DEL ENZIMA:

Rotula dos tubos con las letras D y E.
Sacar 02 mL del sobrenadante del tubo A.
Verter 01 mL de dicho sobrenadante en D y 01 mL en E.
Anadir al tubo D un pedazo de hgado fresco y al tubo E 01 mL de agua
oxigenada.
Observa, anota e interpreta los resultados.

3. DESNATURALIZACION DE PROTENAS:

Colocar en un tubo de ensayo un trocito de hgado entero.
Poner el tubo a bao mara con agua en ebullicin durante 05 minutos.
Retirar el tubo
Aadir 02 mL de agua oxigenada.
Observar anotar e interpretar los resultados.
Repetir la experiencia con papa.


4. HIDRLISIS DEL ALMIDON POR ACTIVIDAD DE LA AMILASA.
COLECCIN DE SALIVA: Antes de la coleccin se proceder a un enjuague simple de la
cavidad oral con agua; manteniendo la boca cerrada esperar entre 5 a 7 minutos
evitando hablar y pasar la saliva. La coleccin se realizar en un recipiente de boca ancha
(beacker) dejando caer por gravedad la saliva, evitando as la formacin de espuma.
DILUCIN DE LA SALIVA: En un tubo de ensayo colocar 01 mL de saliva y agregar 04
mL de agua destilada. Mezclar por inversin. Se obtiene as la saliva diluida.
TUBOS DE DIGESTION 01 02
mL de Almidn 1% 2.0 2.0
mL de Agua 1.0 -
mL de HCl 0.5 N - 1.0
mL de Saliva Diluida 1.0 1.0

Incubar a bao Mara de 37 C por 10 minutos. Luego retirar el tubo y agitando
previamente los tubos de digestin preparar las siguientes bateras:
REACCIN DE LUGOL:
TUBOS 01 02
DIGERIDO 1 01 mL -
DIGERIDO 2 - 01 mL
HCl 0.5 N 0.5 mL 0.5 mL
Lugol
IV
gotas
IV
gotas

Mezclar, observar, anotar e interpretar los resultados.


REACCIN DE BENEDICT.
TUBOS 01 02
DIGERIDO 1 01 mL -
DIGERIDO 2 - 01 mL
RVO. BENEDICT 0.5 mL 0.5 mL

Colocar a Bao de agua hirviente por 05 minutos. Observe, anote e interprete los
resultados.
CUESTIONARIO

1. Cules son los productos finales de la digestin del almidn por la amilisa?
2. Qu funcin cumple el HCl 0.5 N en el tubo de digestin?


PRCTICA 03:
Obtencin de DNA de bazo.

COMPETENCIA:
Extrae DNA del bazo.

MATERIALES:
SOLUCIN DE CITRATO 0.01 M
SOLUCION DE NaCl 0.14 M.
CENTRIFUGA
TUBOS DE CENTRFUGA
HIELO SECO
SOLUCIN DE NaCl 2.6 M.
ALCOHOL ETILICO 95 %
BAGUETAS
BEACKER 250 mL
BEACKER 50 mL
GRADILLA
PAPEL FILTRO
ARO DE METAL
SOPORTE UNIVERSAL
PINZA Y NUEZ.
EQUIPO DE DISECCIN.
LICUADORA.
EMBUDO DE VIDRI

FUNDAMENTO TERICO:
Cuando se desea purificar una sustancia se deben seleccionar las clulas o tejidos que
se van a utilizar como materia prima. En el caso del DNA esta seleccin es en especial
importante porque el contenido de DNA es pequeo en la mayor parte de las clulas. La clula
ideal ser aquella que tenga una relacin ncleo/citoplasma alta, como en los linfocitos y
clulas del tumor asctico de Ehrlich. Sin embargo, no es fcil obtener este tipo de clulas
por lo que frecuentemente se usan rganos tpicamente linfoides como el timo y el bazo.

El primer paso en la extraccin del DNA es la homogeneizacin del tejido. Este
paso puede degradar en parte la molcula del DNA si no se toman las precauciones
necesarias, la solucin reguladora es de citrato 0.01M y NaCl 0.14M, a pH de 7.2 a 7.4; la
fuerza inica de esta solucin hace insoluble a la desoxirribonucleoprotena. Si se centrifuga
este homogeneizado, en el residuo quedarn los restos celulares y las
desoxirribonucleoprotenas insolubles. En el sobrenadante se encuentran compuestos
solubles como la mayor parte de los cidos ribonuclicos.

Al homogeneizar el tejido se liberan las enzimas de los lisosomas, entre ellas la
DNAasa, la cual hidroliza el DNA. Se sabe que el Mg
++
es indispensable para la actividad de
esta enzima; si en la solucin existe citrato, ste se une al Mg
++
e impide la accin de la
DNAasa. Otra forma de evitar la accin hidroltica de la enzima es trabajar a temperaturas
bajas (0C a 2C).

El siguiente paso en la purificacin est basado en que las
desoxirribonucleoprotenas y el DNA son solubles en soluciones salinas concentradas,
mientras que la mayor parte de las protenas precipitan en estas condiciones. Si el residuo se
suspende en solucin de NaCl 2.6M y se centrifuga, el residuo insoluble estar formado
fundamentalmente por protenas, mientras que el DNA permanecer en solucin. Este DNA
se puede precipitar selectivamente por la adicin selectiva de 2 volmenes de alcohol etlico
al 95% formndose un precipitado blanco fibroso, el cual se puede recoger por rotacin de un
agitador de vidrio con pequeos salientes.

METODO OPERATIVO:

La muestra de bazo se coloca en un mortero, previamente enfriado y se secciona lo
ms finamente posible con una tijera. Se colocan 450 mL de la solucin reguladora de
citrato 0.01M NaCl 0.14M, a pH de 7.2 fra, en una licuadora cuyo vaso haya sido
previamente enfriado.
Se hace funcionar la licuadora a baja velocidad y se van aadiendo los trozos de bazo
de todos los equipos, esperando a que se homogeneice completamente el primero
antes de aadir el segundo y as sucesivamente.
Una vez terminada la adicin, contine homogeneizando por 30 60 segundos ms.


Utilizando la centrifuga automtica refrigerada, se coloca el homogeneizado en tubos de
centrfuga apropiados teniendo cuidado de tarar perfectamente los tubos opuestos.
PRECAUCIN! (CONSULTE AL PROFESOR).
Se centrifuga por 15 minutos a 5 000 rpm. El sobrenadante se desecha.
El residuo insoluble se lava en el mismo tubo con 15 mL de citrato 0.01M NaCl 0.14M,
pH 7.2, agitando hasta volver a resuspender con ayuda de una varilla de vidrio, si es
necesario.
Se vuelve a centrifugar a 5 000 rpm por 5 minutos y el sobrenadante se desecha.
Al residuo insoluble que contiene el DNA y residuos celulares se le aaden 15 mL de
NaCl 2.6M fro y se homogeneiza por agitacin.
El cido desoxirribonuclico es soluble en esta solucin mientras que la mayor parte de
las protenas son insolubles.
Centrifugue a 8 000 rpm por 30 minutos. El lquido sobrenadante contiene el DNA en
solucin y el sedimento, que contiene restos celulares y protenas insolubles, se
desecha.
La solucin salina sobrenadante se coloca en un vaso de precipitados y se aaden
lentamente dos volmenes de alcohol etlico al 95%, procurando que la fase alcohlica
quede en la parte superior.
Se deber observar la formacin de un precipitado blanco, denso, en la interfase.
Utilizando un agitador con pequeos salientes, agite esta mezcla lentamente
procurando enrollar sobre el agitador las fibras del DNA precipitadas.

CUESTIONARIO

1. Explique por qu se utiliz bazo como materia prima y no otro rgano cualquiera.
2. Sera conveniente utilizar solucin reguladora de fosfatos para la extraccin del DNA?
Por qu?
3. Por qu es conveniente trabajar durante toda la extraccin a baja temperatura?


PRCTICA 04:
INTRODUCCIN A LA ESPECTROFOTOMETRIA

GENERALIDADES:
Se denomina Anlisis Colorimtrico al conjunto de mtodos de anlisis cuantitativos que
se fundamentan en la medicin de la intensidad de la luz transmitida a travs de una
solucin coloreada, ya sea que se trate de sustancias naturalmente coloreadas que se
han hecho de tal calidad mediante reacciones qumicas adecuadas.
Cuando una haz de luz (luz incidente, Io) atraviesa una solucin, una parte de la
radiacin queda absorbida por las molculas del soluto coloreado, sufriendo una
reduccin de su intensidad (Luz transmitida, I), proporcional a la capacidad de
absorcin de dichas molculas.

Casi todas las sustancias en solucin tienen la capacidad de absorber en forma selectiva
determinadas radiaciones luminosas unas ms que otras dejndolas pasar. La longitud
de onda en la que las molculas de dicha sustancia absorbe con mayor intensidad la
luz, se denomina longitud de mxima absorcin o lambda mximo.

Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada cantidad de luz, la
intensidad de la luz transmitida por una solucin disminuir en relacin con el aumento
del nmero de molculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador.
Este nmero vara de acuerdo con la concentracin del soluto y el espesor del
recipiente que contiene la solucin, estos factores estn considerados en la Ley de
Lambert y Beer, que rige los principios de la Espectrofotometra y cuyas formas de
expresin son:

Log (Io/I) = E. b. c = A = D.O.


Donde:
Io = Intensidad de la luz incidente.
I = Intensidad de la luz transmitida.
E = Coeficiente de extincin molar, valor constante dependiendo de la naturaleza de la
Sustancia y de la longitud de onda
I = Espesor del recipiente en cm.
C = Concentracin de la solucin.
A = D.O. = Absorbancia (A) aumenta conforme disminuye la Transmitancia (T) y la
relacin entre ambas es logartmica.

CALCULO DE LA CONCENTRACIN DE UNA SOLUCION PROBLEMA:

Para calcular la concentracin de una solucin problema con el empleo de un
Espectrofotmetro, existen dos formas:
- Mtodo de la curva standard o curva de calibracin.
- Factor de calibracin.

a) CURVA STANDARD.- Este mtodo consiste en utilizar varios estndares de
concentraciones conocidas y progresivas para luego construir un grfico en un sistema
de coordenadas en el que se colocan las lecturas en las ordenadas (Eje Y) y las
concentraciones en las abscisas (Eje X). En la recta obtenida (Funcin lineal), se puede
extrapolar la absorbancia o densidad ptica de la muestra problema, hallando la
concentracin de la misma en el eje de las abscisas.

b) FACTOR DE CALIBRACIN.- (Fc), El factor de calibracin es un trmino que se
relaciona con la concentracin de una sustancia con su absorbancia, es decir la
intensidad que absorbe una sustancia de concentracin conocida (Standard o Patrn).

As tenemos:

Fc = [ Standard ] / A

Donde:
Fc = factor de calibracin.
A = absorbancia del tubo standard.
[Standard] = concentracin del standard.


Con el factor de calibracin se puede fcilmente determinar la concentracin de una
muestra desconocida o problema (MP), conociendo su absorbancia.
Si la muestra problema y el standard son procesados de la misma manera (diluciones)
se podr usar directamente la siguiente frmula:

[ MP ] = A. Fc

Si la muestra problema sufre diluciones previas se encontrar el factor de dilucin (Fd)
que es matemticamente la inversa de la dilucin (dil) y esta a su vez es:

Dil = Vol / Vol o

Donde:
Vol = Volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilucin.
Vol o = Volumen total.

Para este segundo caso cuando se quiere saber la concentracin de una muestra
problema se proceder usando la siguiente frmula:

[ MP ] = A. Fc. dil

Donde:
A = Absorbancia de la muestra problema.
Fc = Factor de calibracin.
Dil = Factor de dilucin.
[MP] = Concentracin de la muestra.


EXPERIMENTO

1. Preparar la siguiente batera de tubos:

Solucin stock: Bicromato de Potasio 80 mg%.
Calcular la concentracin en mg% de bicromato de K en cada uno de los tubos
Standard (I-II-II-IV).
Leer las absorbancia de los cuatro tubos a 350 nm de longitud de onda () en el
espectrofotmetro contra el H2O destilada (Abs. H2O=0).
2. Con los datos obtenidos construir en un papel milimetrado la grfica de
absorbancia en el eje de las Ordenadas vs concentracin de bicromato de K en el
eje de las Abscisas.
3. Una vez obtenida la curva de calibracin, medir la absorbancia de la muestra
problema (Problema X).
4. Obtener el factor de calibracin (Fc) promedio con las soluciones standard y sus
Absorbancia utilizadas para construir las curvas de calibracin ajustadas.
5. Calcular la concentracin de la muestra problema por los siguientes mtodos:
A.- Grficamente extrapolando su absorbancia en la curva de calibracin.
B.- Usando Factor de Calibracin, multiplicando su absorbancia por el factor de
calibracin del standard.

CUESTIONARIO:

1.- Explique el mecanismo de funcionamiento de un espectrofotmetro.
2.- Qu diferencias existen entre un fotocolormetro y un espectrofotmetro?.
3.- Grafique el espectro de luz, tanto en el rango visible como no visible con sus
respectivas longitudes de ondas.
4.- Qu relacin matemtica existe entre Absorbancia y Transmitancia?


5.- Construya una curva de calibracin con los siguientes valores:

Con la curva obtenida hallar la concentracin de las siguientes muestras, sabiendo que
sus absorbancia fueron:
Muestra A........................0.015
Muestra B........................0.125
Muestra C........................0.350


PRCTICA 05:

DETERMINACIN DE GLICOSURIA

FUNDAMENTO TEORICO

En estado normal no existen cantidades detectables de glucosa en orina, por lo menos
con los mtodos habitualmente utilizados en el laboratorio. La glucosuria (presencia de
glucosa en orina) se presenta en la diabetes Mellitus pero cuando se supera el umbral
renal de glucosa que ocurre cuando la glicemia es mayor de 180 mg/dl.
Para la deteccin cualitativa de glucosa en orina se basa en la accin de la glucosa, que
reduce las sales de cobre en medio alcalino por ebullicin. Para ello utilizaremos el
reactivo de Benedict el cual contiene: sulfato de cobre, citrato de sodio y carbonato de
sodio.

MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo de 20 ml.
Pipetas.
Mechero de Bunsen.
Reactivo de Benedict.
Pinzas porta tubos.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Calentar directamente a la llama de un mechero hasta la ebullicin de la mezcla en
cuestin. Si la orina contiene glucosa, se observa un precipitado color verde, amarillo
rojo ladrillo dependiendo de la cantidad en que se halle presente la glucosa en la orina.
De ser negativa la reaccin permanecer de color azul.


CUESTIONARIO:

1.- Qu es la diabetes Mellitus y como se diagnostica desde el punto de vista del
laboratorio?
2.- Explique en qu consiste el umbral renal y la tasa de reabsorcin de la
glucosa.
3.- Describa los mtodos que existen para el dosaje de la glicemia.
4.- Explique el mecanismo de accin de los reactivos de Benedict y de Fehling.
5.- Qu son la hemoglobina glicosilada y la fructosamina y cul es su importancia en la
diabetes?

PRCTICA 06:


Determinacin Cuantitativa de Glucosa en sangre.

FUNDAMENTO TERICO
Como se ha indicado, la diabetes dependiente de insulina cursa con un aumento de la
concentracin de glucosa en sangre (glicemia), que se produce de manera repentina y
adems es severa. Una hiperglucemia superior a 124 mg/dl detectada en ms de una
ocasin en ayunas, adems se considera tambin un valor mayor a 200 mg/dl en
cualquier momento son indicativos de posible diabetes, diagnstico que debe
confirmarse con otras pruebas.
La determinacin de glucosa sangunea es una prueba muy frecuente en bioqumica y
se puede llevar a cabo tanto por mtodos qumicos como enzimticos, siendo estos
ltimos los ms especficos.

Hay dos tipos de mtodos qumicos:

a. Reducimtricos, que se basan en la capacidad reductora de la glucosa. Debido a la
presencia en la muestra de otros compuestos reductores, estos mtodos dan cifras
superiores a las correspondientes a la glucosa verdadera. Ejemplos son el mtodo de
Folin-Wu y el de Somogy-Nelson.
b. Furfurlicos: se basan en la capacidad de la glucosa para formar furfural al sufrir
deshidratacin en un medio cido. Un ejemplo es el mtodo que emplea orto-toluidina.

En cuanto a los mtodos enzimticos:

a. Mtodo de la hexoquinasa: emplea las enzimas hexoquinasa y glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa. Por cada molcula de glucosa se forma una de NADPH, que puede
medirse espectrofotomtricamente a 340 nm. Es el mtodo de referencia recomendado
por las organizaciones internacionales.
b. Mtodo de glucosa oxidasa y peroxidasa (GOD-POD): es el que se utiliza en esta
prctica para medir los niveles de glucosa sangunea de la muestra problema y de los
estndares. Se explica a continuacin:

En el mtodo GOD-POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de
la D-glucosa a cido D-glucnico con formacin de perxido de hidrgeno. ste es
utilizado por la peroxidasa para oxidar a la 4-aminofenazona y al fenol, dando lugar a
una quinonaimina coloreada. La intensidad de color ser proporcional a la
concentracin de glucosa presente inicialmente. El esquema de la reaccin es el
siguiente:


Pipetas.
Espectrofotmetro.
Agua destilada.
Solucin patrn de glucosa (100 mg/dl).
Reactivo de color de glucosa, que contiene: Glucosa oxidasa, peroxidasa, 4-
aminofenazona, fenol, tampn fosfato pH: 7.0

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

La muestra de sangre extrada del paciente ser centrifugada y se separar el suero.
Hacer una dilucin del suero midiendo exactamente en un tubo de ensayo 0.2 ml de
suero y agregar 4.8 ml de agua destilada, mezclar hasta homogenizar. Luego se
preparan los siguientes tubos:


Incubar los tres tubos en Bao Mara de 37C por 10 minutos. Mezclar bien la solucin.
Leer las absorbancias en el espectrofotmetro a 505 nm.

CALCULOS
Encontrar la concentracin de glucosa en la muestra utilizando el mtodo del factor de
calibracin.

VALORES NORMALES
La glicemia normal en ayunas es de 70 a 110 mg/dl.


PRACTICA 7:
NDICE GLICMICO Y GLUCOSA POST PRANDIAL

Definicin de DM
La diabetes Mellitus es un grupo de enfermedades metablicas caracterizadas por la
presencia de hiperglucemia resultante de un defecto en la secrecin de insulina, en la
accin insulnica, o en ambas.

Clasificacin de DM

Diagnstico
Es muy importante el diagnstico temprano de la enfermedad debido a que niveles
elevados de glucosa, an cercanos al lmite superior normal, producen daos en la
microvasculatura de retina y rin


Existen otras entidades fisiopatolgicas relacionadas con hiperglucemia que no llegan a
cumplir los criterios de diabetes pero que son muy importantes ya que deben ser
vigiladas ya que estos pacientes presentan riesgo elevado de evolucionar a diabetes.
Estas son la tolerancia disminuida a la glucosa y la glucosa en ayunas anormal.
Tolerancia disminuida a la glucosa es aquel caso cuando despus de una prueba
de tolerancia con 75 g de glucosa se obtienen a las dos horas valores mayores a 140 y
menores a 200 mg/dl.
La glucosa anormal en ayunas es aquel caso en que los valores en ayunas son
mayores a 110 pero menores a 126 mg/dl.


Experimento A: TEST DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA Y GLUCOSA
POSTPRANDIAL

FUNDAMENTO TERICO

Las pruebas de tolerancia a la glucosa oral fueron utilizadas por mucho tiempo para
diagnstico de Diabetes Mellitus o intolerancia disminuida, pero ya no se utilizan de
rutina, pero si pueden servir tanto para la Diabetes como para la intolerancia.
Importante es recalcar que los niveles importantes en ambos casos son los obtenidos a
las dos horas, y que la cantidad de glucosa a ingerir debe ser de 75 gramos. El disolver
75 gramos en por lo menos 300 ml de agua hace la solucin ms agradable al paladar y
por lo tanto tendrn ms aceptacin por parte del paciente.

En caso de la prueba de tolerancia de 75 gramos en adultos en nios se debe utilizar
una cantidad de glucosa correspondiente al peso del nio (1,75 g de glucosa por Kg de
peso). Es de suma importancia recordar que antes de iniciar cualquier prueba de
tolerancia a la glucosa oral, se debe pedir una muestra de orina al paciente, para
hacerle un anlisis cualitativo glucosa. Esto debido a que si el paciente presenta
glucosuria, no se debe realizar la prueba de tolerancia, ya que la glucosuria indica en la
gran mayora de los casos, niveles sanguneos de glucosa elevados y la ingesta de altas
concentraciones de glucosa le podra provocar al paciente un shock hiperglicmico.
Existen otras pruebas de tolerancia que son aceptadas tanto por la Organizacin
Mundial de la Salud como por la American Diabetes Association, estas son las
relacionadas con la Diabetes Mellitus Gestacional.
La curva de tolerancia a la glucosa para tamiz de la DMG consiste en la ingesta en
ayunas de 50 gramos de glucosa, se mide la glicemia a la hora, si los niveles son
menores a 140 mg/dl se desecha la DMG, si los niveles son iguales o mayores a 140
mg/dl se debe proceder a hacer la prueba confirmatoria para DMG. Esta consiste en
ingerir en ayunas 100 gramos de glucosa y hacer una curva de tres horas. Si dos de los
niveles obtenidos en dicha curva sobrepasan los valores indicados en la siguiente tabla,
se hace el diagnstico de DMG.


La prueba de glucosa postprandial viene a ser una prueba de tolerancia a la glucosa
acortada, donde solo se considera el valor basal y el de las dos horas.


Micro pipetas automticas de 10 ul.
Espectrofotmetro.
Solucin patrn de glucosa (100 mg/dl).
Reactivo de color de glucosa, que contiene: Glucosa oxidasa, peroxidasa, 4-
aminofenazona, fenol, tampn fosfato pH: 7.0

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Se determinar la glicemia en muestras obtenidas a una persona en forma basal, a los
30 min, 60 min y 120 min. Luego de tomar la muestra sangunea basal se le da de
tomar al paciente 75 gr de glucosa disuelto en 300 mL de agua con unas gotas de
limn. Las muestras de sangre extradas de la persona sern centrifugadas y se
separarn los sueros. Para la determinacin de las glicemias se utilizar el mtodo de
la glucosa oxidasa peroxidasa (GOD-POD).


Incubar los tubos en Bao Mara de 37C por 10 minutos. Leer las absorbancias para
cada una de los tubos en el espectrofotmetro a 505 nm.

CALCULOS
Encontrar la concentracin de glucosa en cada una de las muestras utilizando el
mtodo del factor de calibracin.

CUESTIONARIO:
1.- Con los datos de glicemia obtenidos en el experimento construir en un papel
milimetrado una grfica de tiempo vs. Glicemia y apreciar la curva de tolerancia a la
glucosa.
2.- Como sera esta curva en el caso de una persona normal, un diabtico y un
intolerante a la glucosa.
3.- Qu importancia tiene la deteccin de micro albuminuria en una persona?
4.- Qu son y en qu casos se hace un dosaje de pptido C y de insulina en un
paciente diabtico.
5.- Cules son las complicaciones agudas y crnicas de la diabetes?


PRACTICA N 8:

DETERMINACIN CUALITATIVA DE COLESTEROL

El nivel srico de colesterol ha sido objeto en los ltimos aos de numerosas
investigaciones tanto en individuos sanos como enfermos.
Desde un punto de vista mdico la determinacin de colesterol en forma aislada tiene
utilidad diagnstica limitada. Sin embargo, su concentracin vara de manera ms o
menos predecible en un gran nmero de condiciones clnicas. Se ha visto que el
colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formacin de ateromas dado que
las complicaciones arterioesclerticas prevalecen en individuos hipercolesterolemicos.

Diversos estudios epidemiolgicos han permitido observar adems, que el riesgo de
contraer enfermedad cardaca coronaria (ECC) para los individuos (varones de ms de
40 aos) con colesterolemia menor igual a 200 mg% es 3 veces menor que entre
individuos con ms de 230 mg% y 6 veces menor que entre individuos con ms de 260
mg%.

Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer adems la distribucin de
las lipoprotenas encargadas del transporte: HDL (lipoprotenas de alta densidad),
considerada como el factor protector y LDL (lipoprotenas de baja densidad),
consideradas como el verdadero factor de riesgo. Las funciones biolgicas inherentes
a los distintos grupos de lipoprotenas, las variaciones en su composicin y los
resultados de los diversos estudios epidemiolgicos, indican que los valores aislados de
colesterol HDL y colesterol LDL no pueden tomarse como ndices predicativos de riesgo,
sino que es necesario conformar un perfil Lipidico con los valores de colesterol total,
colesterol LDL y colesterol HDL.


Experimento A:
DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SUERO
FUNDAMENTOS DEL METODO:

El colesterol es oxidado enzimticamente por la colesterol oxidasa (CHOD), previa
hidrlisis enzimtica de los esteres mediante una lipasa de origen fungal. El agua
oxigenada generada en la oxidacin, produce la copulacin oxidativa del fenol con la 4-
aminofenazona (4-AF) mediante una reaccin catalizada por la peroxidasa. El producto
es una quinonaimina roja con absorbancia mxima a 505 nm.

REACTIVOS:
Standard: solucin de colesterol 200 mg%
Enzimas: suspensin conteniendo lipasa fungal (300 U/ml), colesterol oxidasa (3 U/ml)
y peroxidasa (20 U/l).
Reactivo 4-AF: solucin de 4-aminofenazona (25 mmol/l).
Reactivo Fenol: solucin de fenol (55 mmol/l).
Reactivo de trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo colocar en una probeta 50
partes de agua destilada, 5 partes de reactivo 4-AF, 5 partes de reactivo fenol y llevar a
100 partes con agua destilada. Agregar 2 partes de enzimas previamente
homogenizadas. Mezclar por inversin, sin agitar.

PROCEDIMIENTO:

En tres tubos colocar:
Incubar 15 minutos en Bao Mara a 37C.
Leer en el espectrofotmetro a 505 nm.


CALCULO DE RESULTADOS:

Calcular la concentracin de colesterol total en suero, aplicando el mtodo del factor de
calibracin.
Recordar que la concentracin del standard de colesterol es de 200 mg%

VALORES DE REFERENCIA:

Los valores de colesterol en sangre fluctan segn edad, sexo y hbitos de dieta y de
ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer referencia a valores normales, pues la
norma promedio de una poblacin no necesariamente refleja ausencia de riesgo
patolgico en el caso de colesterol.
Menos de 200 mg% valor deseable
200 a 239 mg% valor frontera
Mayor de 240 mg% valor alto

Experimento B:
DETERMINACIN DE COLESTEROL HDL EN SUERO
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) se separan precipitando selectivamente las
lipoprotenas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de
Sulfato de Dextrn de PM 500,000 en presencia de iones Mg++.
En el sobrenadante separado por centrifugacin, quedan las HDL y se realiza la
determinacin del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema ms
conveniente.

REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Contiene una solucin de Sulfato de Dextrn y de
Cl2Mg.H2O

PROCEDIMIENTO:
En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml (50 ul) de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 30-40 minutos en refrigeracin (4-10C). No colocar en el congelador.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.



CALCULOS:
De acuerdo al mtodo del factor de calibracin, considerando que la concentracin del
standard es de 45.7 mg%.

VALORES NORMALES:
40 65 mg%

Experimento C:
DETERMINACIN DE COLESTEROL LDL EN SUERO

Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) se separan del suero precipitndolas
selectivamente mediante el agregado de polmeros de alto peso molecular. Luego de
centrifugar, en el sobrenadante quedan las dems lipoprotenas (HDL y VLDL), el
colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema ms conveniente.
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene
el colesterol unido a las LDL.

REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Solucin de sulfato de polivinilo disuelto en polietilenglicol
(PM 600).

PROCEDIMIENTO:
En un tubo, colocar 0.2 ml (200 ul) de suero problema y aadir 0.1 ml (100 ul) de
Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 15 minutos en un bao de agua a 20-25C.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.


Incubar 15 minutos en bao de agua a 37C.

CALCULOS:

LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de calibracin)
La concentracin del standard es de 62.4 mg%.

VALORES NORMALES:

Riesgo bajo o nulo: Menor de 140 mg%
Riesgo moderado: 140 a 190 mg%
Riesgo elevado : Mayor de 190 mg%

CUESTIONARIO:

1.- Qu es RIESGO CORONARIO y como se calcula?
2.- Explique que diferencias hay entre la arterioesclerosis y la ateroesclerosis?
3.- Describa como se produce la biosntesis de colesterol dentro del organismo.
4.- Explique que es el colesterol VLDL y como se calcula.
5.- Que rol cumplen los triglicridos y como se realiza su metabolismo.


PRACTICA N 9:

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE TRIGLICERIDOS
Los triglicridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo, constituyendo
por lo tanto una potente forma de almacenamiento de energa.
El movimiento de cidos grasos entre los distintos compartimientos del organismo, se
produce con gran rapidez en respuesta a diversos estmulos (dieta, actividad fsica,
stress, edad, etc.). Por este motivo es de esperar que los triglicridos (uno de los ms
importantes vehculos para el transporte de cidos grasos) varen tambin su
concentracin en respuesta a estos factores fisiolgicos.
Sin embargo, el equilibrio de estos mecanismos puede verse alterado, conduciendo a
niveles anormales de triglicridos circulantes. La persistencia de esta condicin, se
asocia con numerosas patologas, tales como enfermedad heptica, renal,
Hiperlipidemias esenciales, etc.
Un caso que resulta de particular inters es el aumento de triglicridos en individuos
obesos, en los cuales tiene importancia pronostica, respecto a la probabilidad de
desarrollar enfermedad cardaca coronaria. Alrededor del 50% de los lpidos de las
lesiones ateromatosas que ocurren en las arterias coronarias son triglicridos, por lo
que es posible relacionar a los triglicridos con la patognesis de la arteriosclerosis
coronaria. Este punto de vista est sustentado por el hecho de que un gran porcentaje
de pacientes con infarto de miocardio tambin exhiben Hipertrigliceridemia.

Para la determinacin de triglicridos en suero se usar la determinacin enzimtica de
glicerol a partir de glicridos.
Los mtodos enzimticos se basan en la determinacin del glicerol contenido en las
molculas de los triglicridos, tras la hidrlisis (qumica enzimtica) para remover los
cidos grasos. La determinacin enzimtica del glicerol ha sido usada durante muchos
aos; sin embargo, en estos mtodos se empleaba la hidrlisis alcalina de los
triglicridos. El reciente desarrollo del uso de enzimas (lipasa, usualmente combinada
con una proteasa) para catalizar la hidrlisis, ha posibilitado el empleo de mtodos
directos, rpidos y especficos. Los sistemas totalmente enzimticos eliminan el uso de
reactivos custicos, extraccin con solventes, baos de altas temperaturas y mezclas
de adsorcin para la remocin de Fosfolpidos. Estudios recientes se han concentrado
en desarrollar reactivos con lipasas, que hidrolizan completamente los triglicridos.


Experimento A:
DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS EN SUERO


Se producen reacciones qumicas basadas en la determinacin qumica de glicerol a
partir de glicridos.
La primera etapa consiste en que los triglicridos son hidrolizados enzimticamente por
una lipoprotena lipasa especfica, produciendo glicerol y cidos grasos.

Lipoprotena lipasa
Triglicridos Glicerol + 3 cidos grasos

En una segunda etapa el glicerol se fosforila a glicerol-1-fosfato en presencia de
glicerolkinasa.

Glycerol kinasa
Glycerol + ATP Glicerol-1-P + ADP

En una tercera etapa el derivado fosforilado se oxida mediante la glicerol fosfato
oxidasa (GPO), con produccin de agua oxigenada.

GPO
Glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato

Finalmente el agua oxigenada as formada produce la unin oxidativa del fenol y la 4-
aminofenazona, en reaccin catalizada por la peroxidasa (POD), con formacin de una
quinonaimina roja.

POD
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol 4-(p-benzoquinona monoimino) fenazona + 4 H2O

REACTIVOS PROVISTOS:

- Standard: solucin acuosa de glicerol equivalente a 200 mg% de triglicridos.
- Buffer: solucin de buffer conteniendo clorofenol a pH 7,5.
- Enzimas: Viales conteniendo lipoprotena lipasa, glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato
oxidasa (GPO), peroxidasa (POD), adenosina trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4-
AF).


INSTRUCCIONES DE RECONSTITUCION Y MEZCLADO:

- Standard: listo para usar.
- Reactivo de trabajo:
*5/10 x 20 ml: agregar 20 ml de Buffer a un vial de Enzimas.
Mezclar hasta disolucin completa. Homogenizar y fechar.
*4 x 50 ml: reconstituir el contenido de un vial de Enzimas con una porcin de Buffer
y luego transferir al frasco de Buffer enjuagando varias veces. Homogenizar y fechar.

MATERIAL REQUERIDO:

- Espectrofotmetro.
- Probeta, micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
- Frasco de vidrio color mbar.
- Cubetas espectrofotomtricas.
- Bao de agua a 37C.
- Reloj timer.

PROCEDIMIENTO:
Homogenizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos.
En tres tubos de ensayo marcados B (Blanco), S (Standard) y M (Muestra), colocar:
Mezclar.
Enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua
destilada.

CALCULO DE LOS RESULTADOS:
Corregir las lecturas con el blanco y usar las lecturas corregidas para los clculos.
Para hallar la concentracin de triglicridos en el suero problema, se debe utilizar el
mtodo del factor de calibracin.
Triglicridos (mg%) = M x Fc


El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los
siguientes valores de triglicridos:
Deseable: < 150 mg%.
Moderadamente elevado a elevado: 150 199 mg%.
Elevado: 200 499 mg%.
Muy elevado: > 500 mg%.

CUESTIONARIO:

1.- Describa las caractersticas principales de los lpidos y su clasificacin.
2.- Explique la importancia biolgica de los triglicridos.
3.- Cmo se produce la digestin y absorcin de los triglicridos?
4.- Mencione la proporcin de triglicridos dentro de las lipoprotenas y la accin de la
lipasa lipoproteca.
5.- Enumere los diferentes mtodos tanto qumicos como enzimticos para el dosaje de
triglicridos.


PRCTICA N 10

DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES Y ALBMINA EN SUERO


Determinacin de Protenas Totales:
Los enlaces peptdicos de las protenas reaccionan con el in cprico, en medio alcalino,
para dar un complejo color violeta con mximo de absorcin a 540 nm, cuya intensidad
es proporcional a la concentracin de protenas totales en la muestra.

Determinacin de Albmina:
La albmina reacciona especficamente (sin separacin previa) con la forma aninica de
la Bromo Cresolsulfon Ftalenas (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en
medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm respecto al blanco de
reactivo, es proporcional a la cantidad de albmina presente en la muestra.

REACTIVOS:

Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil aril
poli ter (AAP).
Reactivo BCF: solucin de Bromo Cresolsulfon Ftalenas (en polioxietiln lauril ter).
Suero Patrn: solucin de albmina y globulinas en estado nativo con ttulo conocido
de protenas (Biuret Kjeldhal) y albmina (unin BCF).

MATERIAL REQUERIDO:

Espectrofotmetro.
Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo.
Bao Mara a 37C.
Reloj timer.

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES:

Mezclar los tubos.
Incubar durante 15 minutos en Bao Mara a 37C.
Leer en espectrofotmetro a 540 nm.


PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIN DE ALBMINA:
Mezclar los tubos.
Mantenerlos a temperatura ambiente durante 10 minutos.


Protenas totales (g/dl) = M x fc fc = P.T. (g/dl) / S
Albmina (g/dl) = M x fc fc = Alb. (g/dl) / S
Albmina (g/dl)
Relacin A/G = ---------------------------------------
Prot. Tot. (g/dl) - Alb. (g/dl)


PROTENAS TOTALES: 6,1 a 7,9 g/dl.
ALBMINA: 3,5 a 4,8 g/dl.
RELACION A/G: 1,2 a 2,2


Experimento B: DETERMINACIN DE CREATININA URINARIA

La Creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado, previa
desproteinizacin con cido pcrico, obtenindose un cromgeno que se mide a 510 nm.

REACTIVOS:
Reactivo 1: cido pcrico 41,4 mmol/l.
Reactivo 2: buffer glicina/NaOH 1 mol/l, pH final 12,4.
Standard: solucin de Creatinina 2 mg%

MATERIAL REQUERIDO:
Espectrofotmetro.
Tubos de ensayo.
Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
Reloj timer.

PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Medir la diuresis, tomar una alcuota y efectuar una dilucin 1:50 de la misma.
Luego en tres tubos de ensayo preparar lo siguiente:

Mezclar por inversin.
Incubar 20 minutos a temperatura ambiente.


M
Creatinina en orina (mg/24 horas) = ------ x 20 mg/l x 50 x V
S
Siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
M = Absorbancia neta del tubo muestra.
S = Absorbancia neta del tubo standard.


900 a 1,500 mg/24 horas.

VALORACIN DEL ESTADO NUTRICIONAL

CUESTIONARIO:

1.- Con los datos obtenidos en los experimentos, realizar la valoracin nutricional de
dicha persona sabiendo que es varn, pesa 60 Kg, su talla es 1,56 m y su volumen
urinario en 24 horas fue de 1000 ml.
2.- Cmo hubiera sido la valoracin nutricional en el caso que la persona hubiera sido
mujer?
3.- Mencione las caractersticas generales de las protenas y su clasificacin.
4.- Qu son las globulinas y cules son sus clases?
5.- Describa los mtodos de dosaje tanto qumicos como enzimticos para protenas
totales, albmina, globulina y Creatinina.


PRCTICA N 11

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE UREA EN ORINA
El producto final ms importante del metabolismo proteico es la UREA. Esta es
excretada en la orina en mayor cantidad que cualquier otra sustancia.
Concentraciones elevadas de urea en sangre son indicador de una inadecuada funcin
excretora y por consiguiente de la funcin renal.
La urea sangunea puede aumentar por otras razones adems de excrecin renal
insuficiente, dichas causas se clasifican en: Pre-renal, son los estados en los cuales se
altera la circulacin por el rin y Post-renal por obstruccin de las vas urinarias. Por
ello la informacin ms exacta con respecto a la habilidad excretora de la urea por los
riones requiere de una comparacin de la concentracin de urea en sangre (BUN) y en
la orina. Fisiolgicamente la urea se eleva debido a una dieta hiperproteica o con la
edad y disminuye durante una dieta de bajo valor proteico.


La urea presente en la muestra es hidrolizada hasta amonaco y dixido de carbono,
mediante una reaccin catalizada por la enzima ureasa:

Ureasa
Urea + H2O CO2 + 2 NH3

El amonaco en presencia de una base reacciona con fenol e hipoclorito de sodio
formando azul de indo fenol. La intensidad de color azul es proporcional a la cantidad
de urea en la muestra.

REACTIVOS:

Reactivo 1.- Solucin de fenol y nitro prusiato de sodio.
Reactivo 2.- Solucin de hipoclorito de sodio en NaOH 0.625N
Enzima.- Solucin de ureasa.


PROCEDIMIENTO:

Se diluye la orina a 1:50 con agua destilada.

Preparar los siguientes tubos:

Mezclar e incubar los tubos en un Bao Mara a 37C por 5 minutos.
Asegurarse que los reactivos no se hayan quedado en las paredes de los tubos.
Luego agregar en cada tubo, 1 ml del Reactivo 1, y posteriormente 1 ml del Reactivo 2.
Mezclar el contenido de los tubos e incubarlos en un bao de agua a 37C por 5
minutos.
Transcurrido este tiempo agregar 4 ml de agua destilada en cada tubo.
Mezclar los tubos por inversin y proceder a leer la absorbancia en un
espectrofotmetro a 540 nm vs el blanco.

CALCULOS:
Abs muestra
Urea (mg/dl) = --------------------- x 60 x Factor de dilucin
Abs standard

Dato: Urea x 0.466 = Nitrgeno ureico.

VALORES NORMALES:

Nitrgeno ureico.- 7 a 14 gr/24 hrs.
Urea.- 15 a 30 gr/24 hrs.

BN = Ingesta nitrogenada (N ureico + N creatinnico + 2)

BN = ...................... gr/24 hrs.


CUESTIONARIO:

1.- Con los datos obtenidos en la prctica, calcular el balance nitrogenado del paciente
sabiendo que ingiri 8 gr de protenas en 24 horas.
2.- De donde proviene la Creatinina?
3.- A qu se denomina uremia y que consecuencias trae?
4.- A qu se llama BUN y que representa?
5.- Para qu sirve la depuracin de Creatinina en orina de 24 horas?


PRCTICA N 12

Medidas Antropomtricas.

COMPETENCIA:
Realiza una evaluacin nutricional de un nio.
Calcula las medidas antropomtricas.
MATERIALES:
CINTA CIMDER O BRAZALETE DE
SALUD
BALANZA DE
PI
CINTA MTRICA TENSIMETRO
BALANZA CON TALLMETRO ESTETOSCOPIO

FUNDAMENTO TERICO:

La evaluacin nutricional de un individuo es el conjunto de procedimientos destinados a
determinar las condiciones fsicas y orgnicas en que se encuentra en determinado momento
de su vida. Estas condiciones se ven afectadas por factores ambientales, sociales,
econmicos, etc., los cuales deben ser incluidos para la evaluacin.

Para realizar la evaluacin nutricional de un ser humano o de un grupo humano ms o menos
homogneo, se precisa de ciertas normas, que aplicadas debidamente pueden proporcionar
datos tiles sobre el estado nutricional de dicha persona o grupo de personas.

Para esta clase de evaluaciones existen muchas tcnicas, algunas complejas y otras simples.
Sin embargo, toda evaluacin nutricional debe considerar los siguientes aspectos:

1. Aspectos geogrficos y socioeconmicos.
2. Estado sanitario y epidemiolgico.
3. Antropometra.
4. Estudio Clnico.
5. Estudios de laboratorio.
6. Encuestas alimenticias.


METODO OPERATIVO:

1. Determine el peso y talla del nio, paro tomar estas medidas deben encontrarse con
prendas de vestir ligeras y sin zapatos, anote lo datos.
2. Pregunte usted sobre sus datos de procedencia, socioeconmicos y sanitarios del
paciente evaluado.
3. A travs de la observacin, realice una evaluacin clnica del paciente tomando como
referencia las pautas establecidas en el cuadro adjunto.
4. Con los datos obtenidos elabore un informe sobre el estado nutricional del nio.

DATOS CRITERIOS RESULTADOS
PERSONALES
Nombres y Apellidos
Edad
Sexo
Raza
GEOGRAFICOS Y
SOCIOECONOMICOS
Procedencia familiar
Ubicacin domiciliaria
Tipo de construccin
Gastos diarios en alimentos
ESTADO SANITARIO
Agua y desague
Disposicin de excretas
Disposicin de basura
Luz elctrica
Problema epidemiolgico
ANTROPOMETRIA
Peso
Talla
Superficie corporal
Permetro braquial.
Pliegue cutneo


DATOS CRITERIOS RESULTADOS
ESTUDIO CLINICO
Cabellos: anotar si falta brillo, pigmentacin, grosor,
fragilidad de arrancarlos.

Cara: Pigmentacin de la piel, presencia de dermatitis
seborrica en la regin naso-labial, inflamacin

Labios: palidez, queilosis y estomatitis angular.
Lengua: Color, atrofia papilar, edema, glositis
Ojos: Palidez conjuntival, manchas de Bitot, xerosis de la
conjuntiva y de la cornea, queratomalacia

Dientes: Esmalte moteado, caries, nmero de dientes.
Encias: Esponjosas, sangrantes, inflamacin
Glndulas del cuello: Aumento de tamao de la tiroides y
glndulas salivales partidas

Piel y uas: Xerosis, petequias, hiperqueratosis,
dermatitis pelgica, aspecto de pintura cuarteada,
inflamacin, ausencia de grasa, edema subcutnea,
erupciones

Tejido subcutneo: Edema, cmulos, grasos
Tejido muscular esqueltico: Atrofia muscular,
incremento de las protuberanciasfrontales, occipitales y
de las epfisis seas. Ndulos costales. Deformaciones
torxicas y de las piernas

Abdomen: Hepatomegalia, Esplenomegalia
Cardiovascular: Frecuencia cardiaca, presin arterial,
edema, especialmente en miembros inferiores

Sistema nervioso: Reflejos rotuliano y aquleo.
Parlisis.
Parestesia, Confusin mental.

ENCUESTA
ALIMENTICIA
N de veces que come al da
Alimentos que ms consume en : a) Desayuno
b) Almuerzo
c) Lonche
d) Cena
N de caloras al da
RESULTADO DE LA
EVALUACION

ESTADO NUTRICIONAL RECOMENDACIONES


INDICE DE MASA CORPORAL (IMC)

Se usa como indicador nutricional y se halla dividiendo el Peso (en Kilogramos) entre la
estatura al cuadrado (en metros).

Masa (Kg)
(altura (m))
2

IMC REFERENCIA POSIBLES IMPLICACIONES Y RIESGOS
0 - 4,9 Delgadez III Postracin, astenia, adinamia, enfermedades
degenerativas y peligro de muerte
5 - 9,9 Delgadez II Anorexia, bulimia, osteoporosis y autoconsumo de masa
muscular
10-18,5 Delgadez I Trastornos digestivos, debilidad, fatiga crnica, estrs,
ansiedad y difusin de las hormonas.
18,6-24,9 Peso Normal Estado normal, buen nivel de energa, vitalidad y buena
condicin fsica
25-29,9 Sobrepeso Fatiga, enfermedades digestivas, problemas
circulatorios, mala circulacin en piernas y vrices.
30-34,9 Obesidad I Diabetes, hipertensin, enfermedades cardiovasculares,
problemas articulares, rodilla y columna, clculos
biliares.
35-39,9 Obesidad II Diabetes, cncer, angina de pecho, infartos,
tromboflebitis, arteroscelrosis, embolias, alteraciones en
la menstruacin
40+ Obesidad III Falta de aire, apnea, somnolencia, trombosis pulmonar,
lceras varicosas, cncer de prstata, de colon, uterino
y mamario, reflujo esofgico, discriminacin social,
laboral y sexual.

El IMC, a pesar que no hace distincin entre los componentes grasos y no grasos
de la masa corporal total, es el mtodo ms usado para evaluar el grado de
riesgo de la salud asociado a la obesidad.


APELLIDOS Y NOMBRES

EDAD

SEXO

TALLA

PESO

IMC

CONDICIN

Guia de Practica Bioquimica Unid PDF

Caricato da

Informazioni sul documento

Titolo originale

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Guia de Practica Bioquimica Unid PDF

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

CARRERA ACADMICO PROFESIONAL DE

Potrebbero piacerti anche