SUMRIO 1. INTRODUO ........................................................................................................ 3 2. OBJETIVOS ............................................................................................................. 4 3. REVISO BIBLIOGRFICA .................................................................................. 5 3.1 Microrganismos ................................................................................................... 5 3.2 Meios de Cultura ................................................................................................. 5 3.2.1 Classificao dos Meios de cultura: ............................................................... 7 3.3. Esterilizao em meios de cultura ....................................................................... 8 3.3.1 Agentes fsicos ............................................................................................ 10 3.3.2 Agentes qumicos: ....................................................................................... 11 4. MATERIAL E MTODOS ..................................................................................... 12 4.1. Preparo de Meios de Cultura ............................................................................ 12 4.1.1. gua Peptonada ......................................................................................... 12 4.1.2. Caldo Lauril Sulfato Triptose ..................................................................... 12 4.1.3. Agar Padro para Contagem (PCA) ............................................................ 12 4.2. Esterilizao dos Materiais ............................................................................... 13 4.2.1. Esterilizao de Pipetas .............................................................................. 13 4.2.2. Esterilizao das Placas de Petri ................................................................. 13 5. RESULTADOS E DISCUSSES ........................................................................... 14 6. CONCLUSO ........................................................................................................ 15 7. REFERNCIA BIBLIOGRFICA ......................................................................... 16 8. PERGUNTAS ......................................................................................................... 17
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1. INTRODUO
Diferentes micro-organismos podem exibir exigncias nutricionais extremamente distintas. Assim, para obter-se sucesso no cultivo de qualquer micro- organismo, necessrio o conhecimento de suas necessidades nutricionais, a fim de que os nutrientes sejam fornecidos na forma e propores adequadas a um meio de cultura. Se os meios de cultura forem preparados cuidadosamente, o cultivo laboratorial de diferentes tipos de micro-organismo torna-se uma tarefa relativamente fcil (MADIGAN, M. T. et al, 2010). O meio de cultura necessrio para o crescimento in vitro de micro-organismos interfere em seu desenvolvimento. O mesmo ocorre com outros fatores, como temperatura (micro-organismos psicrfilos, mesfilos e termfilos) e tenso de oxignio (micro-organismos aerbios, anaerbios, microaerfilos e anaerbios facultativos) (BROOKS, G.F. et al, 2012). Uma vez que um meio de cultura tenha sido preparado e tornado estril, a fim de tornar-se desprovido de qualquer micro-organismo, ele pode ser inoculado (isto , acrescido de organismos) e incubado em condies que permitam o crescimento. Em um laboratrio, normalmente a inoculao ser de uma cultura pura, uma cultura contendo apenas um nico tipo de micro-organismos (TORTORA, G.J.; et all, 2004). Quando inoculamos um micro-organismo em um meio de cultura que apresente fatores ambientais favorveis, ele inicia seu desenvolvimento, passando pelas diversas fases da cultura de crescimento: de latncia, logartmica, estacionria e de declnio ou morte (HOFLING, J.F., et al, 2008). Alguns agentes eliminam totalmente o crescimento microbiano por meio da esterilizao - a morte ou remoo de todos os organismos viveis presentes em um meio de cultura. Frequentemente, no entanto, a esterilidade no alcanvel, mas os micro-organismos podem ser efetivamente controlados limitando-se seu crescimento, um processo denominado inibio (MADIGAN, M. T. et al, 2010).
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2. OBJETIVOS
Proporcionar a compreenso sobre os mtodos de esterilizao e propiciar conhecimento sobre o preparo de meios de cultura.
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3. REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 Microrganismos
Os microrganismos so organismos microscpicos, impossvel de serem observados a olho nu, como os vrus, bactrias, e fungos microscpicos que contm respectivamente 1nn, 1m, 100m de dimetro. Os microrganismos habitam os mais diversos locais e esta propriedade denominada de ubiquidade. Habitam os diferentes ecossistemas fazendo parte da microbiota normal do corpo humano, dos animais e das plantas, aos milhes, em termos de quantidades. Entre estes organismos so estabelecidas relaes em diferentes graus de parasitismo, mutualismo e comensalismos. So tambm patgenos causadores de doenas e provocam deteriorao de equipamentos e alimentos, quando no so devidamente limpos e mal armazenados (NASCIMENTO, J. S, 2010). Os microrganismos assim como outros organismos vivos necessitam obter os nutrientes apropriados do seu meio ambiente. Assim, se queremos cultivar e manter microrganismos vivos em laboratrio, necessitamos colocar em meios de cultura, contendo os nutrientes apropriados para o seu crescimento. Os meios de cultura so utilizados com o propsito de fornecer nutrientes para os microrganismos sobreviver, fornecendo dessa forma condies ideais mnimas para seu cultivo, do ponto de vista nutricional (RUIZ, R. L., 2000).
3.2 Meios de Cultura
Os meios de cultura inicialmente eram lquidos, hoje eles so classificados como meios de enriquecimento. O cultivo na superfcie de meio slido foi introduzido por Roberto Koch (1843-1910), que foi quem coordenou os estudos de tcnicas laboratoriais na dcada de 1860. Algumas dessas tcnicas so utilizadas nos laboratrios at hoje, com pequenas modificaes. Koch introduziu a rotina de visualizar clulas coradas em lminas no microscpio e, assim, estudar melhor a sua morfologia e verificar se a cultura era ou no pura. Partiu de observaes em batatas cozidas, nas 6
quais visualizou colnias isoladas de um nico tipo microbiano, chegou a um meio de cultura contendo gelatina como agente solidificante. A gelatina se mostrou imprpria, pois alm de possuir um ponto de fuso muito baixo, alguns microrganismos produzem gelatinase. Deste modo, mais tarde surgiu o uso do gar (proveniente da alga marinha Gelidium corneum) em substituio gelatina e com isso a microbiologia sofreu grandes progressos, pois dessa forma possvel cultivar uma srie de microrganismos sem alterar a consistncia do meio (RUIZ, R. L., 2000). O gar funde a 94 C e volta a solidificar a 42C e costuma ser adicionado ao meio lquido para ento torna-lo slido. Hoje ainda utilizamos o gar como agente solidificador de meios de cultura. O gar um composto orgnico, contendo 0,4% a 0,9% de nitrognio total; 0,03% a 0,009% de amino nitrognio, 70% a 75% de polissacardeos, 11% a 22% de umidade e 2% a 4% de cinzas e alm disso galactose, arabinose, xilose e uma pequena quantidade de aminocidos livres fazem parte do gar. Em escala comercial o gar e produzido a partir de algas vermelhas de diferentes gneros (Gracilaria, Gelidium, etc), portanto o gar utilizado na preparao de meios slidos, semi-sldos e meios desidratados (RUIZ, R. L., 2000). Assim, para obter-se sucesso no cultivo de qualquer microrganismo, necessrio o conhecimento de suas necessidades nutricionais, a fim de que os nutrientes sejam fornecidos na forma e propores adequadas a um meio de cultura. (MADIGAN, M. T. et al, 2010) Portanto, h uma grande variedade de meios de cultura, pois a composio de cada meio depende diretamente da sua finalidade. Existem meios de cultura para bactrias, fungos (que exigem maior quantidade de acar e pH reduzido), protozorios (microrganismos mais exigentes) e algas (dependendo se so foto ou heterotrficas). Em razo dessa grande variedade de meios de cultura possvel classific-los de diferentes formas. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)
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3.2.1 Classificao dos Meios de cultura:
Quanto ao estado fsico: Lquidos, utilizados para cultivo e armazenamento de culturas microbianas puras; Semisslidos, utilizados para identificao microbiana por meio de provas bioqumicas especficas; Slidos, utilizados para isolamento, identificao e visualizao de colnias microbianas. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013) Quanto ao Emprego: Os meios de cultura podem ser subdivididos em quatro categoriais gerais: 1) Meios no seletivos de enriquecimento Estes foram desenvolvidos para permitir o crescimento da maioria dos organismos que no possuem exigncias nutricionais muito complexas (fastidiosas) de crescimento e podem ser: Agar sangue: contm dois componentes principais, um meio base e outro sangue, que tem por finalidade isolamento de bactrias e fungos. O meio usa uma base rica, em que oferece timas condies de crescimento para maioria dos microrganismos. Agar chocolate: tem por finalidade isolamento de bactrias, incluindo o cultivo de microrganismos exigentes. A base do meio adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemcias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes, que so por exemplo: Haemophilus spp., Neisseria spp, etc. Agar Mueller-Hinton: um meio para teste de sensibilidade bacteriana. (MURRAY, P. R. et al; 2013)
2) Meios seletivos So aqueles acrescidos de componentes que inibem o crescimento de determinados microrganismos, selecionando aqueles que tero condies de 8
crescer com esses componentes. Um exemplo disso, tornar um meio de cultura seletivo pela adio de um determinado acar como nica fonte de carbono, em que somente bactrias capazes de metaboliz-lo crescero. Um exemplo de meios seletivos comercializados: gar Mitis salivarius para isolamento de streptococos grupo mutans. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)
3) Meios diferenciais So aqueles acrescidos de componentes qumicos e/ou reagentes que possibilitam um crescimento diferenciado, permitindo que se diferenciem espcies bacterianas distintas. Um exemplo a inoculao de diferentes bactrias em gar sangue, em algumas bactrias so capazes de hemolisar hemcias, e meios para testes bioqumicos de fermentao de carboidratos. Um meio pode reunir caractersticas que permitam classific-lo como seletivo e diferencial ao mesmo tempo, ou seja, seletivo para determinado grupo de bactrias e permite a diferenciao de gneros e espcies dentro daquele grupo. (SPOLIDORIO, D. M. P. et al, 2013)
4) Meios especializados Permitem a deteco de organismos especficos que podem ser fastidiosos ou tipicamente presentes em grandes misturas de organismos. (MURRAY, P. R. et al; 2013)
Porm, alm desses existem muitos outros meios de cultura, como os, meios de transporte, meios de identificao e meios de conservao.
3.3. Esterilizao em meios de cultura
No sentido de impedir a contaminao das culturas microbianas com que se pretendem desenvolver os trabalhos prticos de microbiologia, deve proceder-se desinfeco e esterilizao dos objetos necessrios e do ambiente. (SCHULLER, D., et al, 2004) 9
DESINFECO: consiste na destruio, inibio ou remoo de agentes microbianos causadores de doenas ou de outros problemas, como por exemplo, a degradao de alimentos. A desinfeco na maior parte das vezes conseguida pelo uso de substncias qumicas chamadas desinfetantes, que so destinadas a destruir os germes potencialmente patognicos, mas que so ineficientes contra a maioria dos esporulados. Portanto, neste processo so eliminadas as clulas vegetativas, mas no se promove a destruio de esporos. Muitos dos produtos de limpeza domstica tais como a amnia e a lixvia, so desinfetantes. Os desinfetantes domsticos, na sua grande maioria, so fortes agentes oxidantes. Outros agentes como os lcoois promovem a desnaturao de protenas e a solubilizao de lipdios. (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009) Esterilizao: significa a destruio completa de toda e qualquer clula viva em crescimento ativo, numa forma vegetativa ou em latncia, incluindo os esporos. Os processos usados envolvem o recurso a agentes fsicos e qumicos. (SCHULLER, D., et al, 2004) Assepsia: conjunto de procedimentos que impedem a penetrao de microrganismos em local que no os contenha. (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009) Antissepsia: o conjunto de meios usados para evitar a proliferao de germes, inativando ou destruindo-os. A antissepsia obtida pela ao de substncias qumicas chamadas antisspticos, que so substncias utilizadas nos tecidos animais, para impedir a proliferao de bactrias, seja inativando-as (bacteriosttico) ou destruindo-as (germicidas). (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009) Saneamento: mantm a microbiota dentro dos valores populacionais previamente estabelecidos por instituies de sade. (MONTEIRO, C. L. B. M, et al, 2009) Sanitizao: usada em restaurantes e indstrias de alimentos, refere-se eliminao dos microrganismos em utenslios e equipamentos para impedir deteriorao ou transmisso de infeces pelos produtos alimentares.
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3.3.1 Agentes fsicos
Os agentes fsicos mais utilizados na esterilizao e desinfeco de ambientes e objetos so: o calor mido, o calor seco e as radiaes. Estas so, sobretudo, muito teis para esterilizao de espaos, salas, instrumentos e materiais que no suportam as temperaturas exigidas pelas tcnicas do calor. Calor mido A esterilizao por calor mido pode ser conseguida atravs da fervura, autoclavagem ou pasteurizao. O calor mido conduz destruio rpida de organismos por coagulao das protenas constituintes das suas clulas. O aparelho mais utilizado na esterilizao de materiais e meios de cultura o autoclave. Geralmente os autoclaves de laboratrio funcionam sob a presso de 1 atm e temperatura de 121C. A durao do tempo de esterilizao est relacionada no s com a temperatura, como tambm com a relao superfcie/volume da massa do material a esterilizar, ou seja, com o tempo de penetrao do calor. Para a mesma temperatura, os tempos de tratamento trmico so tanto maiores quanto maior for o volume do material esterilizar. De uma forma geral, os materiais ficam esterilizados em 20-40 minutos. O material a esterilizar deve ser devidamente preparado. Assim, os frascos a esterilizar devem ser tapados com rolhas de algodo. Se apresentarem tampas com roscas, estas devem ser pouco apertadas para que haja sada de ar quente e entrada de vapor, de modo a evitar o seu rebentamento no autoclave. (SCHULLER, D., et al, 2004) Calor seco A esterilizao pelo calor seco pode ser alcanada pelos seguintes mtodos: flamejao, incinerao ou estufa de ar quente. As estufas de ar quente atingem temperaturas da ordem de 160-180C, que provocam a oxidao e a desnaturao das protenas destruindo as clulas vegetativas e os esporos. Contudo deve-se ter ateno que o uso de temperaturas muito elevadas e um tempo de exposio muito prolongado podem interferir na estabilidade de alguns materiais (ao), ou causar a sua deteriorao, como o caso de materiais como a borracha e os tecidos. Como o poder de penetrao 11
do calor seco baixo, este mtodo s deve ser utilizado quando o contato com o vapor inadequado, isso ocorre especialmente com materiais de vidro, outros materiais slidos termoestveis ou alguns componentes do laboratrio. (SCHULLER, D., et al, 2004) Radiaes As radiaes so muito teis para a esterilizao de espaos, de salas, de instrumentos e de materiais que no suportam as temperaturas exigidas pelas tcnicas do calor. A esterilizao por radiao ionizante uma tcnica altamente eficiente, econmica e segura. As radiaes de alta energia so utilizadas na esterilizao de materiais cuja sensibilidade ao calor exige condies particulares de tratamento. A radiao ionizante promove a quebra das cadeias moleculares e induz reaes dos fragmentos com o oxignio atmosfrico ou com compostos oxigenados, originando a morte das clulas. As radiaes utilizadas incluem os raios gama, produzidos a partir de cobalto-60 ou csio-139, e de raios catdicos produzidos em geradores e aceleradores de eltrons. Os raios gama so radiaes com poder ionizante que promovem a alterao de compostos celulares. Estes raios tm elevado poder de penetrao sendo ideais para aplicao em objetos volumosos. Problemas tcnicos dificultam ainda a sua aplicao corrente em microbiologia. A irradiao com luz ultravioleta (UV) uma forma pouco satisfatria de esterilizao devido fraca capacidade de penetrao nos materiais e produtos a esterilizar. A energia das radiaes absorvida por molculas como o DNA, conduzindo a alteraes da estrutura molecular que podero ser letais para os microrganismos. Os raios UV so frequentemente utilizados na diminuio do nvel de contaminao de espaos pequenos. Deve ter-se sempre presente que a lmpada UV s deve estar ligada na ausncia de pessoas no laboratrio. (SCHULLER, D., et al, 2004)
3.3.2 Agentes qumicos: Os agentes qumicos so apresentados em grupos que tenham em comum, ou as funes qumicas, ou elementos qumicos, ou mecanismo de ao. O xido de etileno o gs mais frequentemente usado para a esterilizao, pois ele penetra na maioria dos materiais e mata todos os microrganismos por desnaturao das protenas. (TORTORA, G.J, et al, 2004) 12
4. MATERIAL E MTODOS 4.1. Preparo de Meios de Cultura
4.1.1. gua Peptonada - utilizada como soluo diluente. Pode-se utilizar uma soluo salina. - Pesa-se 0,05g de peptona e diluir em 50 mL de gua destilada; -Ajusta-se o pH prximo a 7,0, com papel tornassol; - Distribui 9 mL do meio em tubos de ensaio com tampa de rosca, e so esterilizados em autoclave a 121C/15 min. 4.1.2. Caldo Lauril Sulfato Triptose um meio utilizado no teste presuntivo de coliformes totais, termotolerantes e Escherichia coli pela tcnica dos tubos mltiplos. - Pesa-se 1,78 g do caldo lauril sulfato triptose comercial e diluir em 50 mL de gua destilada; - Distribui 10 mL do meio nos tubos de ensaio contendo tubos de Duhran invertidos; - Tampa-se os tubos com buchas de algodo e so levados para esterilizar em autoclave a 121C/ 15min. 4.1.3. Agar Padro para Contagem (PCA) um meio de enriquecimento utilizado para a contagem total de microrganismos em placas, ou para a manuteno de culturas bacterianas. - Pesa-se 2,35g de PCA e diluir em 100 mL de gua destilada; -Aquece em micro-ondas, parando a cada 30 s para agitar o frasco, at que o meio esteja completamente dissolvido; - Tampa-se o frasco com bucha de algodo e este levado para esterilizar em autoclave a 121C/15min.
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4.2. Esterilizao dos Materiais A esterilizao compreende a destruio de todas as clulas viveis (incluindo esporos) que possam ser enumeradas por tcnicas apropriadas de semeadura. Em alimentos muito comum utilizarmos o termo esterilizao comercial, indicando a mesma finalidade. A esterilizao compreende processos fsicos (calor mido, seco e radiao) e qumicos (agentes qumicos).
4.2.1. Esterilizao de Pipetas - Colocar algodo no bocal da pipeta; - Enrolar individualmente em papel pardo; - Enrolar em pacotes separados, identificando a turma, o nmero e volume das pipetas; - Esterilizar em autoclave a 121C/15min.
4.2.2. Esterilizao das Placas de Petri - Passar algodo embebido em lcool 70% dentro e fora das placas; - Enrolar as placas individualmente em papel pardo; - Enrolar em pacotes separados, identificando a turma e o nmero de placas; - Esterilizar em autoclave a 121C/15min.
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5. RESULTADOS E DISCUSSES
Nesta aula prtica preparamos meios de cultura tais como gua peptonada, caldo lauril sulfato triptose e Agr padro para contagem (PCA). Alm do preparo dos meios de cultura foi feita a esterilizao de materiais tais como pipetas e placas de petri.
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6. CONCLUSO
Conclumos que o preparo dos meios de cultura tais como gua peptonada, caldo lauril sulfato triptose e Agr padro para contagem (PCA), e a esterilizao de materiais tais como pipetas e placas de petri, foram executados com eficcia. Os objetivos da prtica foram alcanados e percebeu-se que tanto o preparo de meios de cultura quanto a esterilizao de materiais no so simples de executar, pois requerem muitos cuidados a fim de evitar contaminaes.
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7. REFERNCIA BIBLIOGRFICA
1. MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J.M.; DUNLAP, P.V.; CLARK, D.P. Microbiologia de Brock. 12 Edio. 2010. 2. HOFLING, J.F.; GONALVES, R.B. Microscopia de luz em microbiologia: Morfologia bacteriana e fngica. Porto Alegre: Artmed, 2008. 3. BROOKS, G.F.; CARROLL, K.C.; BUTEL, J.S.; MORSE, S.A. Microbiologia Mdica de Jawetz, Melnick e Adelberg. 25 edio. 2012, 828 p. 4. TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, C.L. Microbiologia. 10 edio. So Paulo, 2004. 5. ALCNTARA,F.; CUNHA, M.A.; ALMEIDA, M.A. Microbiologia: Prticas Laboratoriais. 2 edio. Universidade de Aveiro, Portugal. 6. PELCZAR, M.; REID, R.; CHAN, E. C. S. Microbiologia Volume 1. So Paulo: McGraw Hill do Brasil, 1980, 566 p. 7. NASCIMENTO, J. S.; Introduo Microbiologia Unidade 1, 2010. 8. RUIZ, R. L.; Manual Prtico de Microbiologia Bsica. 1 Edio, So Paulo, 2000. 10. SPOLIDORIO, D. M. P.; DUQUE, C.; Microbiologia e Imunologia Geral e Odontolgica Volume 1. So Paulo, 2013. 11. MURRAY, P. R.; ROSEN.THAL K. S.; PFALLER, M. A.; Microbiologia Mdica. Traduo 6 edio, 2013. 12. SCHULLER, D.; CASAL, M.; RODRIGUES, G.; PAIS, C.; Mtodos convencionais em microbiologia - Unidade 1, 2004. 13. MONTEIRO, C. L. B. M.; COGO, L. L.; GALARDA, I.; BORTOLOZZI, F. C.; Microbiologia Mdica - Manual terico-prtico de procedimentos bsicos em microbiologia mdica - 3 Edio, Curitiba, 2009.
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8. PERGUNTAS
1. Quais os procedimentos de assepsia usuais em um laboratrio de microbiologia, a fim de evitar contaminao? Cite exemplos e situaes.
Segundo ALCNTARA,F.; CUNHA, M.A.; ALMEIDA, M.A., a preparao de culturas microbianas envolvem uma srie de procedimentos asspticos que devero ocorrer em condies apropriadas. H certas precaues que devem ser tomadas durante a inoculao de uma cultura microbiana de modo a evitar a contaminao das culturas, das pessoas ou do ambiente: Certificar-se de que ao dar incio s operaes, todo o material necessrio est ao alcance imediato, de forma a realizar o trabalho o mais rapidamente possvel; Desinfectar e arrumar convenientemente a bancada de trabalho; Os recipientes devem estar abertos o mnimo tempo possvel e, enquanto abertos, todo o trabalho deve ser realizado junto chama do bico de Bunsen; Uma vez abertos os recipientes, como tubos, bales e frascos, o seu bocal deve ser flamejado de imediato; A fim de evitar as contaminaes durante as manipulaes que envolvam caixas de Petri, a exposio das superfcies internas estreis deve durar o mnimo de tempo possvel; A extremidade das pipetas estreis que vai ser colocada em contacto com as culturas celulares, ou com os recipientes estreis, no deve ser tocada nem entrar em contacto com superfcies no estreis, como o caso da roupa, superfcie da rea de trabalho, o exterior de tubos, de bales ou quaisquer outros materiais. A utilizao das ansas, pipetas e espalhadores, assim como a manipulao de frascos, bales e tubos de ensaio, em condies de assepsia, envolve alguns cuidados particulares.
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Ansas: As ansas so esterilizadas pela passagem na chama do bico de Bunsen, antes e depois de serem utilizadas. Devem ser aquecidas at ficarem ao rubro para assegurar que todos os esporos sejam destrudos. Devem ser agarradas quase pelo topo num ngulo praticamente vertical. O dedo mindinho deve ficar livre para segurar a tampa do recipiente. Espalhadores: Os espalhadores so usados para distribuir inculos sobre a superfcie de placas j preparadas com meios de cultura. Podem ser esterilizados em estufa uma vez empacotados, ou por flamejao com lcool.
2. O que so meios de enriquecimento? E meios de identificao? E meios de conservao/manuteno? Cite exemplos e aplicaes.
Meios de Enriquecimento Proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos nmeros ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios tm a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que tambm podem inibir o crescimento de outros. Exemplos: Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos), Caldo Tioglicolato (meio de enriquecimento maioria das bactrias) para Clostridium perfringens.
Meios de Identificao Prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes fisiolgicas de organismos submetidos a identificao. Exemplos: meios Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo nitrato, meio semi-slido, caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade.
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Meios de Conservao/Manuteno Utilizados para conservao de microrganismos no laboratrio, i.e. garantem a viabilidade de microrganismos. Exemplos: gar Sabouraud, Meios com leite, gar suco de tomate, gar sangue (meio no seletivo, crescimento de bactrias gram + e -), gar Simples, meio semi-slido.
3. Defina os seguintes constituintes de meios de cultura: extrato de carne; peptona; Agar-gar; Extrato de levedura. Quais suas funes no meio de cultura? Extrato de carne um meio adicionado de substncias altamente nutritivas. um preparado de carne fresca especialmente selecionado para fornecer um crescimento mximo de microorganismos exigentes adicionado ao meio de determinadas substncias para favorecer o desenvolvimento de certas linhagens. Fonte de carbono orgnico, nitrognio, vitaminas e sais minerais e, nesse caso de energia.
Peptona Protena semi-digerida que serve como fonte de nitrognio. Usada na preparao de meios nutriente, sendo altamente nutritiva, suporta bom crescimento de ampla variedade de microorganismos. Usada em meios diagnsticos para identificao de bactrias atravs de testes bioqumicos como produo de indol e produo de sulfito de hidrognio. Pode ser usada em meios gerais de laboratrios e para produo comercial de enzimas, vacinas, antibiticos, esterides e outros produtos. gar-gar Sulfato de cido poligalacturnico extrado de vrias espcies de algas do gnero Gellidum e outras algas afins. O gar-gar muito empregado em microbiologia para culturas slidas de bactrias. especialmente til por manter-se slido (na verdade com densidade de um gel firme) em temperaturas comumente empregadas para cultura de bactrias (37C), temperatura tima para seu desenvolvimento. Alm disso, no metabolizado por bactrias de interesse clnico. 20
Extrato de Levedura Os extratos de levedura so excelentes substratos para muitos microrganismos. Ele produzido a partir da plasmlise de clulas de levedura de panificao com altas concentraes de NaCl ou mediante autlise a 50-55C. O extrato contm aminocidos, peptdeos, protenas, vitaminas solveis em gua e carboidratos. O glicognio e a treolose das clulas da levedura se hidrolisam com a glucose durante a produo do extrato. Ocorre tambm uma variao de na composio devido ao substratos que foram utilizados no crescimento da biomassa das leveduras (PELCZAR, M.; REID, R.; CHAN, E. C. S., 1980).
4. Como pode ser verificada a esterilidade de um meio de cultura (prova de esterilidade)? Para realizar a prova de esterilidade usada a fita adesiva para autoclave, que confeccionada com dorso de papel crepado base de celulose. Recebe, em uma de suas faces, massa adesiva base de borracha natural, xido de zinco e resinas e, na outra face, uma fina camada impermeabilizante de resina acrlica. ideal para o fechamento de pacotes que sero esterilizados em autoclave, funciona como indicadora de esterilizao, pois possui listras diagonais de tinta termoreativa que, quando submetidas esterilizao, mudam sua colorao de branco para preto. Algumas fitas adesivas para autoclave disponveis no mercado mostram a palavra "esterilizado", em letras garrafais aps o processamento em autoclave.