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UNIVERSIDAD NACIONAL

DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERA

E.A.P:
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
CURSO:
MICROBIOLOGA GENERAL
ESTUDIANTE:
CRISTHIAN CORTEZ CRUZ
DOCENTE:
ETERIO ALVA MUOZ
GRUPO:
B
NVO CHIMBOTE, Diciembre de !"#

PRACTICA 06
$METABOLISMO DE LAS PROTEINAS%
OB&ETIVOS GENERALES
Demostrar la accin de las bacterias frente a
compuestos polimricos nitrogenados, como
protenas, urea, etc.
Demostrar que no todas las bacterias tienen
capacidad de degradar ciertos compuestos.
Observar la presencia de algunos compuestos de la
degradacin de protenas por medio de reactivos de
lectura.

INTRODUCCI'N
Las bacterias son muy verstiles en la degradacin de
polmeros. Si embargo, eisten microbios que son mas activos
frente a ciertos compuestos. Los proteolticos, se caracteri!an
por ser degradadores de protenas en forma mas activa que
otras, de igual manera los amiloliticos, los lipoliticos,
"emolticos, etc. #isten microorganismos que se comportan
como proteolticos, amiloliticos, lipoliticos, etc., debido a que
tienen un sistema en!imtico muy verstil.
La degradacin se puede demostrar por la aparicin de
unidades monomericas derivados de los compuestos
polimricos, asi, de las protenas, se obtendrn aminocidos,
y a partir de estos derivados como indol, escatol, acido
sul$"idrico, amoniaco, etc. La degradacin de compuestos
nitrogenados se evidencia por la aparicin de amoniaco u
otros compuestos. Siempre que eistan las condiciones
adecuadas, el microorganismo y el sustrato a degradarse,
aparecern compuestos productos de la degradacin.
A continuacin presentare un informe acerca del
procedimiento que se llev a cabo en el laboratorio
para la siembra de bacterias en medios de cultivo y su
incubacin.
MARCO TE'RICO
LA GELATINA
La gelatina es una me!cla coloide %es decir, una sustancia
semislida&, incolora, transl'cida, quebradi!a e inspida, que
se obtiene a partir del colgeno procedente del te(ido
conectivo de animales "ervidos con agua.
)ambin eiste una gelatina vegetal conocida como agar*
agar.
La gelatina es una protena comple(a, es decir, un polmero
compuesto por aminocidos. +omo sucede con los
polisacridos, el grado de polimeri!acin, la naturale!a de los
monmeros y la secuencia en la cadena proteica determinan
sus propiedades generales. ,na notable propiedad de las
disoluciones de esta molcula es su comportamiento frente a
temperaturas diferentes- son lquidas en agua caliente y se
solidi$can en agua fra.
LA UREA
La urea es un compuesto qumico cristalino e incoloro. de
frmula +O%/01&1. Se encuentra abundantemente en la orina
y en la materia fecal. #s el principal producto terminal del
metabolismo de protenas en el "ombre y en los dems
mamferos. La orina "umana contiene unos 12 g por litro, un
adulto elimina de 13 a 45 g diariamente.6cita requerida7 #s
uno de los pocos compuestos orgnicos que no tienen enlaces
+*+ o +*0.
La ureasa es una en!ima que eiste de forma natural que
catali!a la "idrlisis de la urea en cido carbamico inestable.
La descomposicin rpida del cido carbamico ocurre sin
catlisis en!imtica para formar diido de carbono y
amoniaco. #l amoniaco es probable que escape de la
atmosfera a menos que reaccione con agua para formar
amonio.
MATERIAL ( M)TODOS
ATERIALE!
8. 9aterial biolgico-
+ultivos puros de #. coli, , :seudomonas y proteus
vulgaris.
;. 9edio de cultivo-
+aldo triptonado
9edio urea
9edio gelatina
+. 9aterial de vidrio-
:lacas :etri
)ubos de ensayo
D. <eactivos-
<eactivos de =ovac>s.
8cetato de plomo
Lugol

"R#$E%IIENT#&
I. %EGRA%A$I'N %E "R#TEINA!&
Licuefaccin de la (elatina. La gelatina es una
protena capa! de dar consistencia solida al medio de
cultivo a temperaturas cercanas a los ?2@+. los
microorganismos capaces de degradar la gelatina quitan
la propiedad solida a la temperatura mencionada.
#n los tubos conteniendo medio gelatina se "a sembrado
pseudomonas y #. coli y se lleva a incubar a 4A@+B1C".
Luego "acemos las lecturas de licuefaccin de la
gelatina.
II. "R#%U$$I#N %E IN%#L ) * + !
+iertos microbios son capaces de degradar al triptfano
en indol, otros en degradar los aminocidos a!ufrados y
producir la liberacin del acido sul$"idrico %01S& y
$nalmente otros producen las dos cosas.
Sembramos #. coli y proteus vulgaris y se lo llevamos a
incubar a 4A@+B1C".
0acemos las lecturas.
#l indol es un compuesto que se genera mediante la
desaminacin reductiva del triptfano y esta reaccin es
llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las
en!imas denominadas en su con(unto triptofanasas. :ara
detectar la produccin de indol se utili!a el medio +aldo
triptfano y la lectura de la prueba se reali!a con el
reactivo de =ovacs %alco"ol isoamilo, p*
dimetilaminoben!alde"do y cido clor"drico
concentrado& con el que el indol producido reacciona
generando una coloracin rosa intensa.
III. %EGRA%A$I'N %E $#"UE!T#! AINA%#!&
*idrolisis de la urea. De la "idrolisis de la urea se
libera el amoniaco y como resultado el medio se torna
alcalino "aciendo variar el indicador de p0 al color
grosella.
Se "a sembrado #. coli, proteus y pseudomonas y
llevado a incubar a 4A@+B1C".
0acemos las lecturas.
La "idrlisis de la urea se lleva a cabo por medio de la
siguiente reaccin-
+uando una bacteria contiene la en!ima ureasa puede
descomponer la urea. Los productos de esta reaccin de
"idrlisis son el amoniaco y el diido de carbono. :or s
mismo, esto no sera perceptible. +uando la reaccin se
produce en presencia de indicadores de p0, sin
embargo, produce un color perceptible. #l amonaco
provoca un p0 bsico %alcalino& a desarrollar y el
indicador de p0 cambiar, por lo tanto, de color. #l
indicador ms com'nmente utili!ado para esta prueba
es de color ro(o fenol, que se vuelve de color rosa
despus de la eposicin al amoniaco.
RESULTADOS
%EGRA%A$I#N %E "R#TEINA! EN AGAR
GELATINA&
Luego de incubar los dos tubos sembrados en agar gelatina
con #. coli y pseudomonas obtuvimos los siguientes
resultados-
"R#%U$$I#N %E IN%#L ) * + !
&
&
"odemos observar que ,a ocurrido un cambio de
color de naran-a a amarillo y verde respectivamente.
!u proceso es de ./ ,oras0 +. de las cuales estuvo
en reposo al i(ual que los otros tubos de ensayo0 y
despu1s se tuvo q llevar a refri(eracin un promedio
de 2 a . ,oras. $uando vimos los resultados0
simplemente se not la diferencia de consistencias
que ten3an ambas0 es decir que slo la muestra de E.
coli 0 tom la consistencia caracter3stica de la
(elatina 0 sin embar(o el de la pseudomona 0 4no4 0
esto es producto de la licuefaccin de la (elatina con
lo que se pudo comprobar que la bacteria
Luego de incubar los dos tubos sembrados en caldo
triptonado con #. coli y proteus vulgaris obtuvimos los
siguientes resultados-
PSEUDOMONA
S
E. COLI
Indol& !e incubo a 256$ durante +. ,oras y tras la
incubacin0 a7adimos unas (otas de reactivo de
8ovacs. !i se ,a producido indol aparecer9 un
anillo rosa fucsia en la super:cie del caldo
triptonado. "odemos observar que en las muestras
con E. coli y proteus vul(aris se forma un anillo
rosa con lo cual se demuestra que estas bacterias
son indol positivas0 al romper el indol del
%EGRA%A$I'N %E $#"UE!T#! AINA%#!&
Luego de incubar los dos tubos sembrados en agar urea con
#. coli, proteus y pseudomonas obtuvimos los siguientes
resultados-
;cido sulf,3drico& Incubamos durante +. ,oras a
256$. Tras la incubacin observamos la produccin
o no del precipitado de color ne(ro. Este color es
el testimonio de la desinte(racin de las peptonas
y sus amino9cidos a<ufrados& cistina0 ciste3na0
(lutatin y metionina. El desprendimiento de *+!
se pone de mani:esto (racias a una sal de ,ierro
que actua como indicador0 usualmente citrato
f1rrico amoniaco0 provocando un enne(recimiento
en el medio por la formacin de !=e. En este caso
las muestras resultaron ne(ativas0 con lo que se
demuestra que las bacterias E. coli y proteus no
PRUEBA NEGATIVA
PRUEBA POSITIVA
DISCUSIONES
Seg'n %onald >oet? @udit, G.0 A=undamentos de
bioqu3micaB& considera que el metabolismo de los
aminocidos comprende un amplio con(unto de
reacciones sintticas y degradativas por las cuales los
aminocidos se agrupan como precursores de
polipeptidos y otros compuestos, y se degradan para
recuperar la energa metablica. Las transformaciones
qumicas de los aminocidos se diferencian de las de los
carbo"idratos o de los lpidos porque involucran el
elemento de nitrgeno. :or consiguiente, debe
eaminarse el origen del nitrgeno en los sistemas
biolgicos y su disposicin $nal.
#n cuanto a de(radacin de prote3nas, considera que
los componentes de las clulas vivas se encuentran en
constante renovacin. La vida 'til de las protenas va
desde tan solo unos minutos "asta semanas o ms. #n
$uando una bacteria contiene la en<ima ureasa
puede descomponer la urea. Los productos de esta
reaccin de ,idrlisis son el amoniaco y el diCido
de carbono. "or s3 mismo0 esto no ser3a
perceptible. $uando la reaccin se produce en
presencia de indicadores de p*0 sin embar(o0
produce un color perceptible. El amon3aco provoca
un p* b9sico DalcalinoE a desarrollar y el indicador
de p* cambiar90 por lo tanto0 de color. El indicador
m9s comFnmente utili<ado para esta prueba es de
color ro-o fenol0 que se vuelve de color rosa
despu1s de la eCposicin al amoniaco. "odemos
observar lo s(tes resultados
"roteus vul(aris& positivo.
E. coli& ne(ativo
"or lo tanto se comprueba
que la bacteria proteus
vul(aris ,idroli<a a la
urea ya que contiene la
en<ima ureasa0 en cambio
E. coli y pseudomonas
todos los casos las clulas sinteti!an continuamente
protenas a partir de aminocidos y las degradan a estas.
#ste proceso aparentemente derroc"ador tiene 4
funciones-
?. 8lmacenar nutrientes ba(o la forma de protenas y
degradarlas en momentos de necesidad
metablica, procesos signi$cativos al mimo en el
te(ido muscular.
1. #liminar protenas anormales, cuya acumulacin
sera per(udicial para la celular
4. :ermitir la regulacin del metabolismo celular
mediante la eliminacin de en!imas y protenas
reguladoras que resultan superDuas.
:or consiguiente, el control de la velocidad de
degradacin de una protena es tan importante para la
economa celular y del organismo como el control de su
velocidad de sntesis.
CONCLUSIONES
#n esta prctica se pudo demostrar que la bacteria
pseudomonas es capa! de producir en!imas de tipo
proteoltico %gelatinasas& que licuan la gelatina y
tambin se comprob que el #. coli es una bacteria no
proteoltica ya que no logro "idroli!ar la gelatina.
)ambin pudimos identi$car bacterias como #. coli y
proteus vulgaris, que poseen la en!ima triptofanasa y
pueden romper el indol del triptfano, en cambio no son
capaces de producir cido sul$"ridico.
Seguidamente se demostr que la bacteria proteus
vulgaris contiene la en!ima ureasa y es capa! de
"idroli!ar la urea, en cambio bacterias como #. coli y
pseudomonas no.
+oncluida la prctica se pudo observar que no todas las
bacterias tienen capacidad de degradar ciertos
compuestos.
CUESTIONARIO
1. Qu importancia tiene el estudio de la
degradacin de las protenas?
#s importante-
:ara eliminar protenas anormales cuya
acumulacin puede ser peligrosa para la vida
celular
:ara permitir la regulari!acin del metabolismo
celular eliminando protenas reguladoras.
2. Fundamente la hidrolisis de las protenas en la
formacin de indol y cido sulfhdrico.
;cido sulf,3drico&
La mayor parte de las protenas tienen aminocidos
sulfurados. 8lgunos microorganismos tienen en!imas
que desprenden el tomo de a!ufre de estos
aminocidos, el cual es luego reducido con "idrgeno %de
los substratos&, para formar cido sulf"drico, en este
proceso los microorganismos cumplen con la actividad
que puede catalogarse como fermentacin proteica, que
es la produccin de cido sulf"drico.
Indol&
#l indol se combina con el p*dimetilamino ben!alde"do
presente en el reactivo y se forma una quinona de color
ro(o violceo.

<eaccin positiva- color ro(o.
<eaccin negativa- amarillo.
3. !pli"ue el cam#io de color en la hidrolisis de la
urea.
La urea o cabarmida es una diamida que se degrada por
medio de una amidasa llamada ureasa. Se rompe el
enlace del nitrgeno con el carbono, con liberacin de
amoniaco y +O1.
#l medio con urea es adicionado de un indicador de p0
%ro(o de fenol& el amoniaco libre alcalini!a el p0 y el
indicador vira a color violeta.
#l cambio de color del medio naran(a a violeta indica la
"idrolisis de la urea.
$F$%&'() *'*+',-$(F'&()
9at"eEs, +. =. Fan 0olde, =. #.- Gl'cidos #n;ioqumica
1Hed. 9c GraE 0ill Interamericana.9adrid ?55J. K3A*KK3
Le"ninger, 8. L. :rincipios de bioqumica. ;arcelona- #d.
Omega, 1H ed., ?554.
8sp, /.G., Fan 8melsvoort, L.9.9. M 0autvast,L.G.8.L.
%?55K&. /utricional implications of resistantstarc". /utr.
<es. <ev
;ioqumica. D. Foet y L.G. Foet, #diciones:anamericana,
122K