INTRODUCCION

De los 20 aminocidos, 11 son sintetizados de intermediarios del ciclo del

cido ctrico y otras vas metablicas mediante reacciones sim!les"
#as bacterias, tal como la E. coli, !$eden sintetizar los 20 aminocidos,
mientras la es!ecie %$mana solamente !$ede sintetizar 11 de ellos no as
los & restantes, estos deben ser obtenidos de la dieta, !or lo '$e se
denominan aminocidos esenciales"
(l ob)etivo del seminario taller realizado *$e la disc$sin de res$ltados de $n
traba)o bio'$mico realizado en el laboratorio, dic%o e+!erimento *$e
realizado en la d,cada de los -0 del si.lo !asado" (n el !resente in*orme, a
!artir de los res$ltados obtenidos se m$estran las vas de la biosntesis de
aminocidos, en $n c$ltivo de E. coli, al c$al se le a/adi .l$cosa marcada
con
1-
C y $n s$strato carbonado o $n aminocido no radiactivo" Des!$,s de
crecer !or $na .eneracin, los or.anismos *$eron lisados, aislando l$e.o
*racciones de l!idos, cidos n$cleicos y !rotenas resid$ales, l$e.o las
*racciones !roteicas *$eron %idrolizadas y los aminocidos *$eron se!arados
!or cromato.ra*a bidimensional" 0osteriormente estos *$eron el$dos
individ$almente determinndose s$ concentracin y midi,ndose la
radioactividad en $na alc$ota de la m$estra" Donde se !$do observar '$e
los s$stratos carbonados y los aminocidos no radiactivos a/adidos
a*ectaron la radioactividad de los aminocidos aislados de la bacteria1 '$e
estos s$stratos a/adidos com!iten sobre la incor!oracin de
1-
C .l$cosa en
la sntesis de aminocidos"
2inalmente se lle. a concl$ir '$e los aminocidos com!etidores son
!rec$rsores de la biosntesis de otros aminocidos" 3s se !$do a.r$!ar
estos aminocidos en *amilias, obteniendo tres4 2amilia del cido as!rtico,
*amilia del cido .l$tmico y la *amilia de la serina"
56TODO7
1" #a actividad es!ec8ca de cada aminocido debera calc$larse como
$n !orcenta)e del valor control, encontrando de esta manera el
!orcenta)e de in%ibicin de cada $no de los aminocidos y s$stratos
carbonados no radioactivos sobre la .l$cosa marcada"
2" Del conocimiento '$e !osee sobre el metabolismo de la .l$cosa
constr$ya $na va de la r$ta tomada !or el marcador, $sando los
s$stratos carbonados '$e se enc$entran en la col$mna de la
iz'$ierda en la tabla I"
9" 0ost$le las reacciones de transaminacin '$e !$edan llevarse a cabo"
-" :;ay aminocidos '$e a*ectan la cantidad de radioactividad en s$s
!ro!ias manc%as y no en otras< (stos aminocidos terminan $na va"
=" 7eleccione los aminocidos '$e a*ectan la cantidad de radioactividad
en ellos mismos y en otros aminocidos" 0or lo .eneral, mientras ms
tem!rano se enc$entra $na s$tancia en la va biosint,tica, mayor
n>mero de aminoacidos !odran ser sntetizados a !artir de esta"
?" (labore $na tabla del e*ecto in%ibitorio de los aminocidos
com!etidores sobre la incor!oracion de
1-
C !roveniente de la .l$cosa
en la sntesis de aminocidos de !rotenas"
@" 3.r$!e estos aminocidos en *amilias y ord,nelos dentro de las
*amilias
A" Constr$ya $n ma!a total $tilizando la in*ormacin obtenida
desarrollando los !$ntos anteriores"
R(7U#T3DO7
Tabla de !orcenta)es4
7$strato
Carbonado
o
3minocid
o no
Radioactiv
o
3ctividad es!eci8ca de los aminocidos
B!orcenta)e en base al controlC
3l
a
ar
.
as
!
cy
s
.l
$
.ly il
e
le
$
lys me
t
!r
o
se
r
T%
r
val
3cetato && D A9 D ?0 D D D D D ?0 D A9 D
3lanina 20 D D &A D 10
0
D 10
0
D D D 10
0
D &A
3r.inina 10
0
= 10
0
D 10
0
D D D D D && D D D
3cido
as!rtico
&& D 2= D @0 D ?
0
D ?0 -= @2 D 2= D
3cido
.l$tmico
&A 12 -? D A 10
0
D D D D A D =0 D
semialde%
do
.l$tmico
10
0
&& && D && D D D D D A D D D
Elicina 10
0
10
0
10
0
10
0
10
0
=0 D && D D 10
0
10
0
D 10
0
%omoserin
a
&A D 10
0
D D D 9
=
D 10
0
20 D D = D
isole$cina 10
0
D 10
0
D D D 9
?
D 10
0
&A D D && D
FD
ceto.l$tar
ato
10
0
D @0 D ?2 D D D D D =& D @2 D
#e$cina &A D D 10
0
D 10
0
D 0 D D D &A D 10
0
o+alacetat @? D @1 D ?= D D D D D ?= D @0 D
o
0rolina 10
0
&A 10
0
D 10
0
10
0
D D D D = D D D
0ir$vato -1 D A= &A @- D D -1 D D @2 10
0
A9 -=
7erina ?0 D D = D -& D @= D D D ? D @=
Treonina && D && D D D 9
=
D 10
0
10
0
D D = D
Galina 10
0
D D 10
0
D 10
0
D -0 D D D 10
0
D 1
Tabla de in%ibicin4
3minocido
com!etidor
3minocid
os
a*ectados
In%ibici
n BHC
Otros aminocidos
si.ni8cativos no
a*ectados
cido
as!rtico
3s! @=
T%r @=
5et ==
Ile -0
#ys -0
%omoserina T%r &=
5et A0 as!
Ile ?= lys
Treonina T%r &= as!
Ile ?= met
lys
cido
.l$tmico
El$ &2
0ro &2
3r. AA
3s! =-
T%r =0
semialde%do
.l$tmico
0ro &2 ar.
.l$
7erina Cys &=
7er &-
Ely =1
3la -0
#e$ 2=
Gal 2=
Galina Gal && ala
#e$ ?0 Cys
Ely
7er
2amilias de aminocidos4
#$e.o $bicadas en el ciclo de Irebs4
3NJ#I7I7 D( R(7U#T3DO7
7e %izo $n est$dio realizado en (" coli !ara las vas de biosntesis de
aminocidos1 a la c$al se le a/adi .l$cosa marcada con
1-
C y $n s$strato
carbonado o aminocidos no radioactivos, en donde se dem$estra la
radioactividad de estos com!$estos sobre los aminocidos"
7e trato de %allar la actividad es!ec8ca de aminocidos sintetizados a
!artir de la radiactividad del carbono 1-"
Com!arado con la m$estra control se observan los si.$ientes res$ltados4
D 7e observaron rayas, '$e si.ni8ca '$e no se %allo s$ determinacin,
esto debido a m$c%as razones, !or e)em!lo '$e $n aminocido esta
)$nto a otro aminocido y no se los !$ede se!arar"
D #os valores cercanos de las incor!oraciones al valor del control no
a*ecta a la actividad del aminocido" (n cambio valores ms ba)os al
valor control si a*ecta a la actividad del aminocido"
7e cambio la tabla de re*erencia !ara %acer ms *cil la inter!retacin" De
c!mKLmol a valores en !orcenta)e"
3 !arte de conocer '$, !orcenta)e de valor control se tiene en re*erencia a
la incor!oracin de .l$cosa marcada con carbono 1- en aminocidos,
tambi,n se !$ede conocer el !orcenta)e de in%ibicin de cada com!etidor
sobre la incor!oracin de la .l$cosa"
(l !orcenta)e de in%ibicin seria la inversa al valor de !orcenta)e de la
actividad del aminocido sobre el com!etidor" 0or e)em!lo !ara la actividad
de la alanina de .l$cosa radiada con
1-
C sobre el com!etidor de alanina no
radiada seria de 20H, el !orcenta)e de in%ibicin del com!etidor, sobre la
sntesis de alanina a !artir de la .l$cosa marcada con
1-
C, sera del A0H"
Con !revio conocimiento del metabolismo de la .l$cosa se constr$yo $na
va de la r$ta tomada !or el marcador, $sando los s$stratos carbonados de
la col$mna de la iz'$ierda de la tabla" #$e.o se a.re.aron las reacciones de
transaminacin"
;ay aminocidos '$e terminan $na via4 alanina, ar.inina, isole$cina, le$cina
y !rolina" (stos act>an sobre s$ !ro!ia manc%a"
#os aminocidos se sintetizan a !artir de aDcetocidos, y ms tarde
transaminados de otro aminocido, !or lo .eneral .l$tamato" #a enzima '$e
!artici!a en esta reaccin es $na aminotrans*erasa"
Con los datos de la tabla inicial, se !$do crear di*erentes caminos mediante
com!etencia e in%ibicin de aminocidos, los c$ales nos brindan valiosa
in*ormacin !ara saber '$e aminocidos son los '$e *orman $na *amilia y
*orman $na r$ta sint,tica"
1C #os aminocidos se!arados *$eron el$dos individ$almente,
determinndose s$ concentracin y midi,ndose la radioactividad en
$na alc$ota de la m$estra"
2C #a actividad es!ec8ca de cada aminocido debera calc$larse como
$n !orcenta)e del valor control, encontrando de esta manera el
!orcenta)e de in%ibicin de cada $no de los aminocidos y s$stratos
carbonados no radiactivos sobre la .l$cosa marcada"
#os aminocidos '$e terminan en $na va no son !rec$rsores como !or
e)em!lo la alanina no es !rec$rsor de cys,cly,le$,ser,val1 y solo !$eden o no
a*ectar s$s la cantidad de radiactividad en s$s !ro!ios aminocidos
terminando en $na va y son4
3lanina
3r.inina
Elicina
#e$cina
0rolina
isole$cina
(+isten ciertos aminocidos com!etidores '$e solo a*ectan la sntesis de
ellos mismos, ya '$e al %acer el anlisis de radioactividad solo a*ectan s$s
!ro!ias manc%as y no las de los dems aminocidos1 como alanina,
ar.inina, .licina, isole$cina y !rolina, estos aminocidos son considerados
como aminocidos '$e terminan $na va"
5ientras ms tem!rano se enc$entra $na s$stancia en la va biosint,tica,
mayor n>mero de aminocidos !odrn ser sintetizados a !artir de esta" 0or
e)em!lo al com!arar los aminocidos in%ibidos al a.re.ar !ir$vato y
o+alacetato observamos '$e el !ir$vato in%ibe en cierta medida la sntesis
de @ aminocidos4 alanina, acido as!rtico, acido .l$tmico, le$cina,
!rolina, treonina y valina1 mientras '$e el o+alacetato act>a como in%ibidor
de la sntesis de = aminocidos los c$ales son4 alanina, acido as!rtico,
acido .l$tmico, !rolina y treonina" 3l observar en la 8.$ra 2 notamos '$e
el !ir$vato se enc$entra antes '$e el o+alacetato en la va metablica de la
.l$cosa"
#os aminocidos com!etidores !rod$cen $n e*ecto in%ibitorio en la sntesis
de aminocidos !roteicos a !artir de la incor!oracin de .l$cosa marcada
con 1-C" 0or e)em!lo BTabla 9C, el cido as!rtico, aminocido com!etidor,
in%ibe a ,l mismo en $n @=H, a la treonina en $n @=H, a la metionina en $n
==H, a la isole$cina en $n -0H, a la lisina en $n -0H, al cido .l$tmico
slo en $n 90H y a la !rolina tan slo en $n 2=H" 0ero estos dos >ltimos,
.l$tamato y !rolina no estn directamente relacionados con el as!artato
c$ando se observa el ma!a o es'$ema '$e se elabor" (ntonces si se
observa la Tabla 2 se ve '$e la MDceto.l$tarato in*l$ye ms en el .l$tamato
y en la !rolina" (l MDceto.l$tarato in%ibe al .l$tamato en $n 9AH y el
.l$tamato a la !rolina en $n &2H"
CONC#U7ION(7
#os aminocidos )$e.an $n !a!el vital en el metabolismo"
#as mezclas de aminocidos obtenidas de la dieta no estn !resentes en las
!ro!orciones e+actas re'$eridas !or el or.anismo, !ero se interconvierten a
trav,s de diversas reacciones metablicas"
#a mayor !arte de los aminocidos no esenciales se sintetizan a trav,s de
vas metablicasm$y sim!les con $na sec$encia de $nas !ocas reacciones"
#os s$stratos iniciales son metabolitosintermediarios del ciclo del cido
ctrico, de la .l$clisis o de la r$ta de las !entosasD*os*ato"
(stas mol,c$las a!ortan el es'$eleto carbonado e incor!oran el nitr.eno
or.nico, *$ndamentalmente,del .l$tamato o de la .l$tamina"
#as r$tas biosint,ticas son m$y variadas, al.$nas re'$ieren $na >nica
reaccin y otras son de$na .ran com!le)idad"
7in embar.o, las r$tas !$eden ser ms com!le)as, y !ara clasi8carlas se
a.r$!a a los aminocidos!or *amilias, de!endiendo del metabolito
!rec$rsor"
#os aminocidos '$e se de.radan !ara *ormar acetilDCo3 o acetatoacetilD
Co3 se le llaman ceto.enicos ya '$e se !$eden convertir a acidos .raso o
c$er!os cetonicos"
#os aminocidos '$e se de.radan a !artir de !ir$vato o de $n intermediario
del ciclo de Nrebs y '$e l$e.o se !$eden $sar en la .l$co.,nesis se llaman
.l$co.,nicos"
#a transaminacines catalizada !or transaminasas '$e trans8eren el
.r$!o amino desde el aminocido a $n cetocido"
Destino de los esqueletos carbonados 7i el or.anismo no necesita
ener.a los aminocidos !$eden trans*ormarse en .l$cosa o en cidos
.rasos !ero tambi,n !$eden se.$ir la r$ta catablica y tran*ormarse en
3cetilDCo3 o en ciertos intermediarios del ciclo de Irebs" (n c$al'$iera caso,
a trav,s del ciclo de Irebs se o+idan totalmente a CO2 y ;2O"
OIO#IOER32P3
Gillavicencio N$/ez 5arino" Oio'$mica Osica, Oio'$mica 5etablica"
7e.$nda edicin 2010" (ditado !or Concytec" #ima, 0er>"