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Tinciones ms habituales en Citopatologa

Tincin de Papanicolaou

La tncin de Papanicolaou es la que se utliza de forma rutnaria en citologa y, aunque requiere
un gran nmero de pasos, suele realizarse en unos 20 min. Es una tncin polcroma, es decir,
utliza ms de un colorante (Hematoxilina de Harris, reactvo Ea y el Orange G). Al presentar en
su desarrollo varios colorantes, es capaz de revelar diferentes tpos de clulas. Estas
caracterstcas son las que la hacen ptma para estudios de tpo citolgico. La valoracin de los
ncleos con la Hematoxilina de Harris, al ser
esta una solucin acuosa, requiere una
hidratacin previa de las muestras. Adems,
es una coloracin regresiva, eliminndose el
exceso de colorante con una solucin acuosa
de cido clorhdrico (HCl) al 0.5% o,
simplemente, agua. La solucin de
Hematoxilina debe prepararse en el
laboratorio a partr de una solucin madre,
debiendo prestar especial atencin a las
modifcaciones de su concentracin, fltrado y
caducidad.
La coloracin de los citoplasmas se hace con el Orange G 6 y con el reactvo Ea por lo que, al ser
soluciones alcohlicas, se deben deshidratar previamente las muestras. El reactvo Ea es una
mezcla de 3 colorantes:
- Eosina: te de rosa-anaranjado los citoplasmas de las clulas escamosas maduras, de
algunas clulas ciliadas y de los eritrocitos.
- Verde luz: te de color verde-azulado las clulas escamosas no superfciales, inmaduras
o parcialmente maduras.
- Pardo Bismarck: no te el citoplasma pero s la mucina (moco).
Este reactvo Ea puede ser Ea 36 o Ea 65, en base al porcentaje existente de Verde luz. Gracias a
este reactvo, se logra una transparencia de los citoplasmas sin superposicin de colores,
mostrndose bien los detalles de maduracin celular, queratnizacin

Procedimiento

1. Hidratacin: mediante pases sucesivos en OH de 96807050agua (20-30 seg).
2. Coloracin: con Hematoxilina de Harris (3 min).
3. Lavado: en agua (1 min).
4. Agua clorhdrica: al 0.5% (3-4 inmersiones).
5. Agua: slo si se realiza el paso 4.
6. Deshidratacin: mediante pases sucesivos en OH 50708096.
7. Coloracin: con Orange G (3 min).
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8. Lavado: etanol 96% (3-4 inmersiones).
9. Coloracin: con Ea. El Ea 36 se3 utliza para frots citolgicos y orina, mientras que el Ea
65 para esputos y lquidos.
10. Deshidratacin y aclaramiento.
11. Montaje.

Resultados

Los ncleos se ten de una tonalidad azul-violeta, aprecindose muy bien los detalles de la
cromatna.
Los citoplasmas aparecen de colores verde-azulados, rosados o de color naranja
(queratnizacin) segn su composicin.

Tincin de Dif-quick

Dif-Quick es una tncin que nos permite diferenciar reas basflas y acidflas en una
preparacin para su estudio citolgico. Tiene como principal ventaja sobre otros tpos de
tnciones similares la sencillez y la rapidez en su utlizacin. Adems, no es imprescindible fltrar
los colorantes con regularidad. Esta tcnica es una tncin de Giemsa modifcada.
No es una tncin metacromtca, por lo que
en ocasiones no permite observar los grnulos
de los basflos y las clulas cebadas (en
mastocitomas).
Normalmente, las tnciones utlizadas en los
laboratorios hematolgicos son las
denominadas de tpo Romanowsky, las cuales
se basan en el uso combinado de los
colorantes eosina y azul de metleno. El Dif-
Quick es una de estas tcnicas de tpo
Romanowsky. La tcnica Dif-Quick se realiza
en tres pasos, tras el secado de la
preparacin.

Procedimiento

1. Fijacin en metanol.
2. Tincin de elementos formes con eosina.
3. La tncin de elementos nucleares y con basoflia utlizando el azul de metleno.
Sin embargo, este tpo de tnciones rpidas presentan ciertos inconvenientes, como la
formacin de precipitados, si se utliza sangre con heparina como antcoagulante, o la
incapacidad de distnguir ciertos elementos intracelulares como parsitos hemtcos, etc.
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Otras tnciones de tpo Romanowsky ms especfcas a las que podemos acudir para apreciar
determinados cambios morfolgicos, o bien
para la identfcacin de ciertos parsitos o
componentes celulares, son las siguientes:
Tincin de Giemsa: muy buena para
valorar la morfologa celular y
permite la identfcacin de ciertos
hemoparsitos.
Tincin de Wright: ideal para valorar
la morfologa celular y muy buena
para identfcar grnulos
citoplasmtcos.

Tincin del cido perydico de Schif (PAS)

Esta tncin suele ser muy tl para demostrar componentes del tpo de los Mucopolisacridos
en las clulas. En histologa te muy bien las membranas basales.
La tncin PAS consttuyen uno de los mtodos qumicos ms empleados en histologa. El
material se trata con cido perydico, que
oxida determinados azucares formando
grupos aldehdo. Con el reactvo de Schif,
los aldehdos reaccionan formando un color
rojo luminoso. Con polisacridos no
susttuidos, Mucopolisacridos neutros,
mucoprotenas, glucoprotenas, glucolpidos
y fosfolpidos, la tncin de PAS da una
reaccin de color especfca. Combinando la
tncin de PAS con azul alcin pueden
identfcarse adems mucosustancias cidas
(reciben el nombre de
glucosaminoglicanos). Como material de partda se pueden emplear cortes de tejido fjado en
formalina e incluido en parafna o bien extensiones celulares.
La tncin de PAS es una coloracin indirecta, ya que requiere el paso previo de oxidacin de los
Mucopolisacridos por el cido perydico, para posteriormente ser teidos por el reactvo de
Schif.

Procedimiento

1. Hidratacin, en alcoholes de graduacin decreciente y pasar por agua.
2. Solucin de cido perydico al 0,8 % en agua, durante 5 min.
3. Lavar en agua corriente al grifo durante 10 min.
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4. Reactvo de Schif durante 15 min.
5. Agua corriente durante 15 min.
6. Tincin con hematoxilina de Harris durante 1 min (ncleos).
7. Lavar con agua corriente durante 15 min.
8. Deshidratacin (alcoholes en concentracin creciente) y aclaramiento (xilol).
9. Montaje.
Resultado

Los compuestos a demostrar aparecen de color rosa fuerte o purpura, mientras que los ncleos
aparecen azules.

Preparacin del reactvo de Schif

1. Disolver 0,5 gramos de Pararosaniln o fucsina bsica en 15 ml de cido clorhdrico 1 N.
2. Aadir una solucin de 0,5 gramos de Metadisulfto potsico en 85 ml de agua.
3. Dejar la solucin a temperatura ambiente (r.t) durante 24 h.
4. Aadir 300mg de carbn actvado y agitar durante 2-3 min.
5. Filtrar.
6. Guardar el reactvo en un frasco mbar y preservarlo de la luz. Conservar en nevera.

Hematoxilina-Eosina (bloques celulares)

Para la confeccin de bloques celulares, lo primero que hay que hacer es centrifugar la muestra
para obtener un sedimento celular. A dicho sedimento se le aadiran 4-5 gotas de plasma y el
mismo nmero de gotas de Trombina. Con
esto, se favorece la formacin de un cogulo
del sedimento celular. Una vez que vemos que
el cogulo ya est formado, se fja con
formaldehdo al 4% y, transcurrido unos 30
min, se le aade OH del 96%. Una vez que el
cogulo est en fotacin, se recoge
cuidadosamente y se coloca sobre un casete
histolgico procesndolo como cualquier
muestra tsular.
Una vez confeccionado, se podr cortar al
micrtomo y teir con Hematoxilina-Eosina, as
como realizar tcnicas de inmunohistoqumica.
Con esto, se facilita el diagnstco de la patologa.