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UNIVERSIDAD INSURGENTES
PLANTEL TLALPAN
I.- Datos Generales
Ciclo escolar: 2012-2013 INSTITUCION: CLAVE:
Asignatura: Temas Selectos de Biologa Clave: 1711
Profesor Titular:
Laboratorista:
Grupo: 6020 rea II Seccin: B
Horario de Lab. :

Practica No. 5 Unidad 3 Temtica: Microbiologa
Nombre de la Prctica: Metodos de Tincion
Numero de sesiones que se utilizaron para esta prctica: 4 Sesiones


Coordinador:
III.- Planteamiento del Problema
En qu consisten las tcnicas de tincin?

IV.- Marco Terico
Las tinciones son mtodos utilizados donde altermaos el estado de la celula, la matamos e
intentamos mantenerla con las caractersticas parecidas a su estado natural.
El tamao de las mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver en el
microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la celula y el medio que
la rodea, y el medio mas simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.
Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la
presencia determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, capsulas,
paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas generalmente son
tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para
bacterias, la fijacin por el calor es lo mas corriente, aunque tambin puede fijarse con
sustanciasquimicas como formaldheido, acidos y alcoholes. Despues de la fijacin si se aade
el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin se
realiza habitualmente es clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus
este con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincion. La fijacin
produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincion, por el contrario, hace que las
clulas aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las
celular que han sido fijadas o teidas no pueden realizarce con mucha precisin. La mayora
de los colorantes son compuestos organicos que tienen alguna afinidad especifica por los
materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas
positivamente y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados

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negativamente, tales como los acidos nucleicos y los polisacridos acidos. Ejemplos de
colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes
son molculas cargadas negativamente y se combinan con los constituyentes cellares
cargados positivamente, tales como muchas protenas.
Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina acida y el rojo Congo. Otros grupos de
colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los
materiales lipdicos de la celula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las
goticulas o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el degro Sudan.
Algunos colorantes teirn mejor solo despus de que la celula haya sido tratada con otra
sustancia qumica que no es un colorante por si mismo. Esta sustancia se denomina
mordiente; un mordiente habitual es es acido tnico. El mordiente se combina con un
constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora si podr atacar el colorante. Si se desea
simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopia, son suficientes los
procesos simples de tincion. El azul de metileno es un buen colorante simple que actua sobre
todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un colos tan intenso que
escurezca los detalles celulaes. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias
en muestras naturales, puesto qye la mayor parte del material no celular no se tie.
La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin
teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil
delas clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene
afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta
china (que es una suspensin de particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante
negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el
contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la
presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaucin, ya
que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante forman en ocasiones precipitados
o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones
completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan
artefactos, y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos
estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente.
Los procesos de tincion cuentan con los siguientes pasos:
1.- Frotis o extensin. Consiste en extender por toda la superficie del portaobjetos la muestra
de los microorganismo que queremos ver.
2.- Fijacin. Se utilizan diferentes compuestos, aunque la mas utilizada es la fijacin con calor
suave, que mata al organismo pero mantiene las estructuras que se quedan pegadas al
portaobjetos. La fijacin propiamente dicha consiste en que colocamos agua en el portaobjetos
(si es solido) y con el asa de siembra cogemos una muestra y la extendemos sobre esa gita de
agua (o sibre la muestra si es liquida). Mas tarde, calentamos suavemente con un mechero
hasta que el agua se seque.
3.- Tincin. Aplicamos sustancias que se fijan a diferentes estrucutras, tiene color, pudiendo
ver si asi las estrucutras teidas. Tipos de colorante:
*Cromogenos: coloreados por si mismo
*Auxocromos: sin color, pero al entrar en contacto reaccionan y se colorean.

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*Acidos: raccionan con estructuras basivas de la celula (la mayora en clulas
bacterianas).
*Basicos: reaccionan con estructuras acidas. En las clulas cuyo acido nucleico esta
distribuido por todo el citoplasma, se usan colorantes bsicos como el azul de metileno.
En funcin de colorantes habr 2 tipos de tinciones.
1.- Simple. Es la mas sencilla y solo utilizamos un tipo de colorante. Las mas sencilla es la
que se utiliza con azul de metileno.
2.- Diferencial. Vemos diferencias entre organismos. Utilizaremos 2 tipos de diferentes de
colorantes, siendo el mtodo mas utilizados la tincin de Gram.
Tincion de gram. Nos da como resultado 2 tipos de organismos Gram + y Gram -;en funcin
de la estrucutra de la pared celular, da la forma a la bacteria que es rigida. La estrucutra es
diferente, mas no la composicin. Los organismos con gram + tienen un 90% de
peptidoglicano
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, mientras que los Gram- cuentan nicamente con un 20% del mismo.
La tincin de gram es uno de los mtodos de tincin mas importantes y con el que el
estudiante debe estar pefectamente familiarizado. Su utilidad practica es indiscutible y en el
trabajo microscpico de rutina del laboratorio de microbiologa las referencias a la morfologa
celular bacteriana como son los cocos, bacilos, positivos negativos basados justamente en
este mtodo.
Las bacterias gram-positva y gram-negativa tien de forma distinta debido a las diferencia
constitutivas en la estructura de las paredes celulares. La pared de la celula bacteriana sirve
para dar su tamao y forma al organismo asi como para prevenir la lisis osmtica. El material
de la pared bacteriana que confiere la rigidez es es peptidoglicano. La pares de la celula gram-
positiva es gruesa y consistye en varias capas interconectadas de peptidoglicano asi como
alfgo de acido teicoico.
El color dela coloracin de microorganismos gram-positivo aparecen teidos en color azul
violeta y de gram-negativos aparecen en color rojo-rosado.
Las formas bsicas en las que se puede visualizar la morfologa bacteriana en una tincin
gram son los cocos (diplococos, estresptococos, estafilococos), bacilos (fusiformes,
estreptobacilos, cocobacilos) espirales (treponemas, borelias).


V.- Objetivo
El alumno identificara con la ayuda de la tincion simple y la tincion de gram que tipo de bacteria se
esta observando.
VI.- Hiptesis
Con una muestra de exudado faringeo observaremos diversas bacterias y las identificaremos.




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VII.- Plan de Investigacin
Tipo de Investigacin: Experimental
Lugar de Investigacin: Laboratorio de Temas selectos de Biologa
Instrumentos de Investigacin: cuaderno de prcticas, bolgrafo, libro de qumica,
computadora.
Programa de actividades
Actividad Fecha
1.- Protocolo 20/03/2013
2.- Desarrollo 27/03/2013 y 6/03/2013
3.- Exposicin 13/03/2013
VIII. Materia equipo y sustancias












3IX- Procedimiento
TINCIN SIMPLE:
Realizamos el frotis y enseguida el barrido para secarlo pasndolo por el fuego 2 veces. Se le coloca
la safranina, se deja secar unos 2 minutos y le ponemos el cubreobjetos. Encima se le pone el aceite
de imersin o se observa en el microscopio.,
portaobjetos Mechero de bunsen
Asa de siembra Cultivos de bacterias
Cubeta de tincion Cristal violeta
Lugol Alcohol-acetona (1:1)
Safranina



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TINCIN DE GRAM:
Realizamos el frotis enseguida el barrido para secarlo pasndolo por el fuego 2 veces. Poner una
gota de cristal violeta, lavar el exceso y dejar secar. Colocar una gota de safranina, pasarlo 2 veces
por el fuego para secarlo y colocar encima el cubreobjetos. Por ltimo colocar una gota de aceite de
inmersin y observar al microscopio.
X.- Resultados



















XI.- Analisis y discusin de resultados
Por medio de nuestra muestra del exudado farngeo logramos observar las diferentes
bacterias encontradas en nuestra garganta de acuerdo a su forma.
XII.- Conclusiones

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La hiptesis fue correcta ya que gracias a nuestra muestra del exudado farngeo observamos
diversas bacterias y las identificamos
XIII.- Manejo y disposicin de desechos
BASURA ORGANICA BASURA INORGANICA LIQUIDOS (en tarja)
No hay
Asa de siembra o torunda
esteril en tubo.
No hay


XIV.- Bibliografa
http://www.slideshare.net/andresricote/tincin-simple-presentation
http://es.scribd.com/doc/2747420/Tecnicas-de-tincion

XV.- Evaluacin