BACTERIOLOGA Y MICOLOGA

INFORME DE LABORATORIO # 5




CAMILA APACHE
ANDREA ARAUJO
LORENA GOMZ






UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
MEDICINA VETERINARIA
BOGOTA D.C
2014
Mtodos de conteo bacteriano
El crecimiento de las poblaciones se mide estimando los cambios en el nmero de clulas,
en la cantidad de algn componente de las mismas (por ejemplo, protena) o en el peso
total seco de las clulas. Existen diversos mtodos para evaluar el tamao de la poblacin
bacteriana presente en una muestra determinada, adecuados para diferentes organismos o
diferentes situaciones. Algunos de ellos son directos y otros indirectos, en funcin de que
cuenten microorganismos o calculen otros parmetros a partir de los cuales se puede
inducir la magnitud de la poblacin microbiana. (Schaechter, 2004)
Para estimar el numero de bacterias presentes en la muestra bacteriolgica de E.coli y
Salmonella spp se utilizaron dos de los mtodos mas comunes y sencillos, que son el
mtodo del numero mas probable (NMP) y el de unidades formadoras de colonias (UFC)
respectivamente.
El numero mas probable (NMP)
Es una estimacin estadstica basada en el hecho de que cuanto mayor sea el numero de
bacterias en una muestra mayor ser la dilucin necesaria para disminuir la densidad hasta
el punto que no se desarrolle ninguna bacteria en una de las diluciones realizadas.
(Gerard & Tortota, 2007)
Cuando este metido es utilizado en bacterias coliformes como la E.coli se El mtodo se
basa en la fermentacin de lactosa que deja como resultado la produccin de acido y de
gas, lo cual se manifiesta en las campanas de Durham y tambin el la presencia de turbidez
en el medio.
(Gallardo, 2011)
Unidades formadoras de colonias (UFC)
Tambin conocido como recuento de placas, es el nmero mnimo de clulas separables
sobre la superficie, o dentro, de un medio de agar semi-slido, usualmente es el agar Plate
count, que da lugar al desarrollo de una colonia visible del orden de decenas de millones
de clulas descendientes.
(Lippincott, 2000)

Materiales
9 medios verde brillante con campana de Durham
Muestra bacteriolgica de Escherichia coli
Muestra bacteriolgica de Salmonella spp
Solucin salina amortiguadora de fosfato (SSAF)
Agar plate count
3 pipetas
6 tubos de ensayo
3 cajas de petri
Mechero de Bunsen

Metodologa
Una vez encendido el mechero de Bunsen para garantizar la zona estril en donde se
llevaran a cabo la siembras y montajes, y as asegurar la bioseguridad durante la practica
de laboratorio, se llev a cabo el siguiente procedimiento:
Mircoles 23 de abril del 2014, 7:10 am 9:00 am
1. Se tomaron los seis tubos de ensayo vacos, con ayuda de una pipeta se les
adicionaron 4,5 mL de solucin salina amortiguadora de fosfato (SSAF),
posteriormente se tomaron solo tres de los seis tubos, se marcaron respectivamente
con -1, -2 y -3, al tubo 1 se le adicionaron, con ayuda de otra pipeta 0,5 mL de la
muestra bacteriolgica de Escherichia coli, con la misma pipeta se extrajeron 0,5 mL
los cuales se le adicionaron al tubo -2 y finalmente nuevamente se extrajeron 0,5 mL
del tubo -2, para agregarlos al tubo -3.
2. Se procedi a marcar los nueve medios verde brillante de la siguiente manera, tres
tubos con -1, otros tres con -2 y los tres ltimos tubos con -3. Con la misma pipeta
anteriormente empleada se tomaron del tubo de ensayo -3, 3 mL, para
posteriormente adicionarle 1mL a cada uno de los medios marcados con -3, del tubo
-2 tambin se tomaron 3 mL, para agregarle a cada uno de los medios -2, 1mL y por
ultimo se repiti el mismo procedimiento con el tubo de ensayo -1 y los tres medio -
1. Antes de adicionarle la solucin obtenida en los tubos de ensayo a los medios, se
aseguro que la campana de Durhan no tuviera aire que alterara los resultados.
3. Se tomaron los tres tubos de ensayo restantes y se hicieron las mismas diluciones
hechas en los primeros tubos, pero con la muestra bacteriolgica de Salmonella spp.
4. Luego se procedi a tomar las 3 cajas de petri, en una de ellas se vertieron 1mL de
a dilucin -1, en la otra 1mL de la dilucin -2 y por ultimo de la dilucin -3 se
vertieron 1mL en la ultima caja de petri.
5. Finalmente en cada una de las cajas de petri se verti 1/3 del agar plate count
despus de asegurarse que estuviera a una temperatura adecuada, se esperaron
aproximadamente 10 minutos, a que el agar retomara su estado normal.
6. 6. Por ultimo se tomaron todos los medios respectivamente marcados, se llevaron al
cuarto de incubacin donde se guardaron por 24 horas a 40C para su posterior
anlisis.
Jueves 25 de abril del 2014, 9:10 am 9:30 am
1. Se tomaron los medios verde brillante, se observo si haba turbidez y formacin de
gas, lo cual era quera decir que el crecimiento bacteriano era positivo, se
compararon los resultados obtenidos con la tabla 1.1 (anexada en los resultados),
para as hacer el conteo bacteriano utilizando el mtodo de el numero mas probable
(NMP)
2. Se analizaron los resultados obtenidos con la muestra bacteriolgica de Salmonella
spp, contando cada una de las colonias que haban crecido en los agares, para as
realizar mtodo de conteo bacteriano unidades formadoras de colonias (UFC).

Resultados
El nmero ms probable (NMP) E.coli
Antes Despus
Dilucin -3



Dilucin -2

Dilucin -1


En los tres tubos de las diluciones se vio la turbidez y la fermentacin, resultados positivos
para la presencia de bacterias, segn la tabla 1, el numero de bacterias obtenidos en la
dilucin es >2400.

Tabla 1.
Unidades formadoras de colonias (UFC) Salmonella spp
Antes Despes
Dilucin -1

Nmero de colonias= 280.000

Dilucin -2


Nmero de colonias= >300.000
Dilucin -3

Nmero de colonias= >300.000


Discusin de resultados
Durante este laboratorio se pudieron conocer los dos mtodos ms importantes para
el conteo bacteriano en E -coll y salmonella, los cuales son en primer lugar
NMP(numero ms probable)para E-Coll el cual consiste en la estimacin de
densidades especialmente cuando una evaluacin cuantitativa de clulas
individuales no es factible .la tcnica se basa en la determinacin de presencia o
ausencia en replicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de
microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes (Lippincott
2000).
En segundo lugar se encuentra la UFC (unidad formadora de colonias) para
salmonella esta consiste en es un valor que expresa el nmero relativo de
microorganismos de un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de
muestra. (Lodish, 2005).
Los agares utilizados en esta prctica fueron el agar verde brillante y plate count el
agar en tubo verde brillante en el caso de E coll proporciona un ambiente adecuado
para su crecimiento pudiendo determinar en l la produccin de gas y presencia de
turbidez, en el caso de salmonella plate count junto con el caldo de cultivo permite el
crecimiento de bacterias y su inmovilidad pada poder identificar as mas fcilmente
el crecimiento de colonias (Carrillo, 2007).
En los nueve agares en tubo verde brillante con sus respectivas diluciones (-1,-2,-3)
se presento en todos la produccin de gas lo que se vio reflejado en las campanas
de Druham donde se logro apreciar la fermentacion ocasionada por la E.coli,
resultados que concuerdan con la revision bibliografica a cerca de cmo actuan las
bacterias coliformes en este medio, tambin se observo la turbidez presente en
todos los tubos, que se presento con un color mas oscuro del agar y la presencia de
burbujas en la superficie. Al dar los tres tubos positivos en cada una de las
diluciones, en cuanto al crecimietno bacteriano en los medios de verde brillante,
segn la tabla 1 se pudo decir que el numero mas probable de bacterias presentes
fue mayor a 2400.
En cuanto a los tres agares de plate count con Salmonella spp, se puede decir que
el numero de colonias en cada uno de los tres fue muy alto, lo cual significa que se
podrian haber hecho otras diluciones para lograr estimar un numero mas preciso en
cuanto a las unidades formadoras de colonias.


Conclusiones
o En primer lugar se conocieron las dos formas ms utilizadas en el conteo
bacteriano (NMP y UFC), y se puede decir que aunque estas metodologias
no son exactas si son muy precisas, y los resultados que arrojan a pesar del
margen de error presente son confiables.

o Se puede concluir que las mediciones realizadas en las diluciones son la
clave para que los resultados sean precisos y confiables, si se presenta un
error, por pequeo que sea puede cambiar drasticamente los resultados
obtenidos, lo cual puede presentar confuciones graves de estos.

o Se puede decir que esto metodos son utilies para hacer los controles de
calidad de empresas productoras de alimentos de consumo publico, en
donde, por ejemplo en el metodo de el numero mas problable un solo tubo
diera las caracteristicas correrspondientes de el positivo crecimietno
bacteriano ya seria obligacion de la empresa empezar a emplear medidas de
sanidad.











Bibliografa
I. Schaechter, M. (2004). Encipledia de escritorio de microbiologa. Nueva York: Elsevier
Academic Press. Retrieved from http://veterinaria.uaemex.mx/_docs/607_970_MP
Bacteriologa y Micologa.pdf
II. Gerard, J., & Tortota, B. (2007). Introduccin a la microbiologa. Buenos Aires: Medica
Panamericana. Retrieved from http://books.google.com.co/books?.
III. Gallardo, M .(2011). Evolucin el curso de la vida, hemolisis alfa .Espaa: primera
edicin panamericana mdica.
IV. Lippincott,W.etal. (2000). Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. Characteristics
of PSI. Texas.
V. Lodish, H. et a. (2005). Biologa celular y molecular, tabla (unidad formadora de
colonias), Espaa, Quinta edicion, panamericana medica.
VI. Carrillo, C. (2007). Biologa, Agar verde brillante, Espaa, primera edicion, Santillana.