Utilizao de algas para a

produo de biocombustveis
















Dezembro 2010

Raquel Antunes
Ins Cristvo Silva
Examinadoras de patentes


C Cl l u us st t e er r d do o C Co on nh he ec ci i m me en nt t o o
E En ne er rg gi i a as s R Re en no ov v v ve ei i s s
2
ndice

1. Introduo3
2. Biocombustveis Enquadramento legal...5
3. Utilizao de algas para a produo de biocombustveis...7
3.1 Potencial das algas para a produo de energia7
3.1.1 Bioetanol.8
3.1.2 Hidrognio..9
3.1.3 Metano..11
3.1.4 Biodiesel...12
3.2 Cultura de microalgas...15
3.3 Extraco e processamento dos leos..20
3.4 Engenharia gentica.23
3.4.1 Engenharia gentica de microalgas....24
3.4.2 Engenharia gentica do metabolismo lipdico26
4. A inovao na rea dos biocombustveis: tendncias de patenteamento.30
5. Consideraes Finais..34
6. Referncias...35











3
1. Introduo

A procura de recursos limpos que permitam assegurar as necessidades
energticas futuras constitui um dos maiores desafios da actualidade. O
crescente preo dos combustveis e o foco internacional sobre o impacto
ambiental das emisses gasosas tm vindo a conduzir procura de recursos
renovveis e ao desenvolvimento de tecnologias verdes que suportem a
indstria e as necessidades do mercado mundial.
Na Unio Europeia, o sector dos transportes responsvel por cerca de
um quarto das emisses de gases com efeito de estufa
1
, pelo que de
importncia primordial procurar formas de reduzir as emisses poluentes deste
sector, quer atravs de veculos mais limpos e eficientes, quer atravs da
utilizao de biocombustveis que permitam reduzir a dependncia energtica
dos combustveis fsseis. Os biocombustveis constituem recursos no-txicos,
biodegradveis e renovveis, e esto associados a vantagens ambientais uma
vez que permitem a reduo das emisses poluentes, nomeadamente de
gases com efeito de estufa, pelo que, no panorama actual, representam uma
alternativa energtica cada vez mais explorada. Contudo, a actual gerao de
biocombustveis com recurso a culturas alimentares, como canola, milho, soja,
acar e colza tm conduzido a um aumento do preo dos alimentos e
desflorestao agravada, alm de produzirem elevadas emisses de gases
com efeito estufa.
Na busca de alternativas para fornecer energia mais verde, forte
entusiasmo tem vindo a ser gerado em torno do grande potencial oferecido
pelas algas como fonte energtica. Neste domnio, as microalgas afiguram-se
como uma alternativa auspiciosa para a prxima gerao de biocombustveis,
apresentando um potencial considervel para a produo de biocombustveis
e, em particular, de biodiesel
2
, uma vez que tm a capacidade de duplicar sua
biomassa vrias vezes por dia e produzir pelo menos 15 vezes mais leo por
hectare do que as culturas alimentares concorrentes.
A maior parte do petrleo no mundo de hoje foi formada pela
decomposio de algas que datam de h milhes de anos atrs. Este processo
pode ser replicado para nos proporcionar uma energia mais limpa, tendo
unicamente como input a luz solar, a gua e dixido de carbono, durante o
4
processo de fotossntese. O grande desafio actual consiste na optimizao dos
processos de produo e extraco dos leos, e na identificao e
manipulao dos recursos biolgicos com maior potencial de explorao com
vista valorizao desta fonte energtica no futuro.






























5
2. Biocombustveis Enquadramento legal

Em Portugal, no mbito do Decreto-Lei n 62/2006 (que transpe a Directiva
n 2003/30/CE de 8 de Maio), so considerados biocombustveis os seguintes
produtos:

1. Bioetanol: etanol produzido a partir de biomassa e/ou da fraco
biodegradvel de resduos para utilizao como biocombustvel;
2. Biodiesel: ster metlico e/ou etlico, produzido a partir de leos vegetais
ou animais, com qualidade de combustvel para motores diesel, para
utilizao como biocombustvel;
3. Biogs: gs combustvel produzido a partir de biomassa e/ou da frao
biodegradvel de resduos, que pode ser purificado at qualidade do
gs natural, para utilizao como biocombustvel ou gs de madeira;
4. Biometanol: metanol produzido a partir de biomassa para utilizao
como biocombustvel;
5. Bioter dimetlico: ter dimetlico produzido a partir de biomassa para
utilizao como biocombustvel;
6. Bio-ETBE (bioeteretil-terc-butlico): ETBE produzido a partir do bioetanol,
sendo a percentagem em volume de bio-ETBE considerada como
biocombustvel igual a 47%;
7. Bio-MTBE (bioetermetil-terc-butlico): combustvel produzido com base
no biometanol, sendo a percentagem em volume de bio-MTBE
considerada como biocombustvel de 36%;
8. Biocombustveis sintticos: hidrocarbonetos sintticos ou misturas de
hidrocarbonetos sintticos produzidos a partir de biomassa;
9. Bio-hidrognio: hidrognio produzido a partir de biomassa e/ou da
fraco biodegradvel de resduos, para utilizao como biocombustvel;
10. leo vegetal puro produzido a partir de plantas oleaginosas: leo
produzido por presso, extraco ou processos comparveis, a partir de
plantas oleaginosas, em bruto ou refinado, mas quimicamente
inalterado, quando a sua utilizao for compatvel com o tipo de motores
e os respectivos requisitos relativos a emisses.

6
A Directiva 2003/30/CE, que visa tambm criar mecanismos para promover
a colocao no mercado de quotas mnimas de biocombustveis, estabeleceu
um valor de incorporao de biocombustveis de 5,75% at 2010 e de 20% at
2020. O Decreto-Lei 62/2006 de 21 de Maro, que constituiu um dos
documentos de apoio Estratgia Nacional para a Energia, RCM n 169/2005
de 24 de Outubro de 2005, veio antecipar as metas europeias ao estipular uma
meta de 10% em 2010 para os biocombustveis utilizados nos transportes,
meta esta que se mantm na nova Estratgia Nacional para a Energia (ENE
2020).
Adicionalmente, o Decreto-Lei 66/2006 de 22 de Maro, que altera o Cdigo
dos Impostos Especiais sobre o Consumo, constitui tambm um incentivo
utilizao de biocombustveis, consagrando a iseno de Imposto sobre os
Produtos Petrolferos aos biocombustveis integrados na gasolina e no gasleo.





















7
3. Utilizao de algas para a produo de biocombustveis
3.1 Potencial das algas para a produo de energia

O biodiesel o combustvel derivado das algas que tem vindo a receber
maior ateno dada a sua elevada potencialidade para substituir a
dependncia dos combustveis fsseis, principalmente no domnio dos
transportes. Contudo, diversas formas alternativas de energia podem ser
obtidas a partir desta matria-prima, nomeadamente etanol, hidrognio,
metano, biomassa para combusto e gaseificao e outras variantes de
hidrocarbonetos combustveis. Na figura 1 encontram-se representados os
principais produtos energticos provenientes das algas e as respectivas vias de
produo.


Figura 1 Vias de obteno de diversos produtos energticos derivados das algas
3



8
3.1.1 Bioetanol

O etanol pode ser obtido a partir das algas atravs da converso do
amido e da celulose. Uma vez que so ricas em polissacridos e possuem
paredes celulares finas, as algas so a fonte ideal para o bioetanol de segunda
gerao. A problemtica actual prende-se com o facto de haverem diversos
produtos de elevado valor que podem adicionalmente ser obtidos a partir desta
matria-prima (e.g. carrageno, agar), pelo que a obteno de um produto de
baixo valor como o etanol no prioritrio.

Entre as espcies que se apresentam como as mais promissoras para a
produo de etanol contam-se fundamentalmente macroalgas, nomeadamente:
Sargassum
Glacilaria
Prymnesium parvum
Euglena gracilis

O processo de produo de etanol a partir das algas baseia-se,
fundamentalmente, na fermentao dos acares, e engloba diversas etapas
4
:

1. Crescimento das algas em meio de aquacultura.
2. Colheita das algas, de modo a constituir uma reserva de biomassa.
3. Incio da decomposio (para que ocorra ruptura das paredes celulares e
libertao dos polissacridos).
4. Sacarificao do amido.
5. Fermentao da biomassa em decomposio; os microorganismos utilizados
so, normalmente, as leveduras da cerveja (Saccharomyces cerevisiae e
Saccharomyces uvarum) ou bactrias geneticamente modificadas.
6. Separao do etanol formado da restante soluo de fermentao.

Alternativamente, o etanol poder tambm ser produzido a partir de
algas aps extraco do seu contedo oleaginoso. De um modo geral, a
biomassa das algas compreende trs componentes principais: hidratos de
carbono, protenas e lpidos. Aps a extraco dos lipdica para a produo de
9
biodiesel, os hidratos de carbono existentes no bolo vegetal remanescente
podem ser utilizados como substrato de fermentao para a produo de
etanol, o que permite uma optimizao da biomassa potencialmente energtica
das algas.



Figura 2 Produo combinada de biodiesel e bioetanol
4
.


Adicionalmente, o dixido de carbono resultante do processo de
fermentao pode, por sua vez, alimentar a produo de nova biomassa, o que
permite o funcionamento em sistema fechado (Fig. 2). A produo combinada
de biodiesel e etanol apresenta-se, portanto, como uma alternativa com
elevado potencial relativamente qual alguns ensaios esto j a ser levados a
cabo
4
.


3.1.2 Hidrognio

O hidrognio visto como a energia no futuro, pois constitui um recurso
renovvel, no contribui para o "efeito estufa", liberta grandes quantidades de
energia por unidade de peso na combusto, e facilmente convertida em
energia elctrica em clulas de combustvel.
10
A produo biolgica de hidrognio apresenta vrias vantagens sobre a
produo de hidrognio por processos fotoeletroqumicos ou termoqumicos,
uma vez que a produo de hidrognio por microrganismos fotossintticos por
exemplo, requer o uso de um reactor solar simples (e.g. uma caixa
transparente fechada), com requisitos de baixa energia, enquanto que
processos electroqumicos requerem o uso de baterias solares de alta energia
5
.
Existem trs mtodos de produo de hidrognio a partir das algas: Processos
bioqumicos, gaseificao e reformao a vapor de metano
5
.
Sob condies especficas, as algas produzem hidrognio, atravs de
processos biolgicos e fotobiolgicos. As microalgas e cianobactrias,
juntamente com as plantas superiores, so capazes de fotossntese aerbica
de acordo com a seguinte reaco
5
:
CO
2
+ H
2
6 [CH O =
2
O] + O
2

A fotossntese consiste na converso de energia luminosa em energia
bioqumica numa reaco fotoqumica, e na reduo de CO
2
a compostos
orgnicos, tais como fosfatos de acar, atravs da utilizao desta energia
bioqumica pelas enzimas do ciclo de Calvin. Sob certas condies, porm, em
vez de reduo de CO
2
, alguns grupos de microalgas e cianobactrias
consomem energia bioqumica para produzir hidrognio molecular, atravs da
aco de hidrogenases e nitrogenases.
O hidrognio pode tambm ser produzido por gaseificao da biomassa
das algas. Durante a gaseificao a biomassa convertida numa mistura
gasosa (CO e H
2
), pela aplicao de calor sob presso, na presena de vapor
e de uma quantidade controlada de oxignio. Diversas metodologias tm vindo
a ser desenvolvidas com vista separao do H
2
a partir do gs de sntese
5
.
11

Figura 3 Gaseificao da biomassa algal
6
.

Por ltimo, o hidrognio pode tambm ser obtido a partir do metano
resultante da fermentao de biomassa das algas, atravs de tcnicas
tradicionais de reformao a vapor (SMR). A reformao a vapor o mtodo
mais comum de produo de hidrognio comercial, e constitui tambm o
mtodo menos dispendioso. A altas temperaturas (700 - 1100C) e na
presena de um catalisador metallico (nquel), o vapor reage com o metano
para produo de monxido de carbono e hidrognio, atravs da reaco
7
:
CH
4
+ H
2
O CO + 3H
2
.


3.1.3 Metano

O metano importante para gerao de energia elctrica em turbinas a
gs ou caldeiras a vapor, sendo que a sua queima produz menos CO
2
por
unidade de calor libertado do que outros hidrocarbonetos. Adicionalmente,
12
verifica-se que o metano produz mais calor por unidade de massa do que
outros hidrocarbonetos complexos. Em muitas cidades, o metano canalizado
em residncias para aquecimento domstico e para cozinhar, contexto no qual
geralmente conhecido como gs natural, sendo tambm utilizado na forma de
gs natural comprimido como combustvel para veculos
8
.
Teoricamente, o metano pode ser produzido a partir de qualquer um dos
trs componentes de algas hidratos de carbono, protenas e lpidos. Para a
produo de metano, os bio-reactores fechados para cultivo de algas
constituem uma alternativa promissora para a obteno de biomassa para a
produo de bio-metano. Estes sistemas permitem o cultivo de microalgas em
grandes quantidades (150-300 toneladas por hectare por ano), o que
corresponde, teoricamente, a um rendimento 200,000-400,000 m de metano
por ha por ano
8
.
A digesto anaerbia constitui o mtodo mais directo de produo de
metano a partir de algas, envolvendo as seguintes etapas sucessivas
8
:
- Pr-tratamento das algas para despolimerizao da matria slida, formando-
se uma suspenso de partculas finas.
- Passagem da suspenso num leito fluidizado com enzimas que convertem a
biomassa em acar, e bactrias capazes de transformar os acares em
cidos gordos volteis.
- Decantao da suspenso, de modo a eliminar quaisquer partculas slidas
que possam permanecer.
- Passagem do lquido decantado num leito fixo contendo bactrias
metanognicas.


3.1.4 Biodiesel

O biodiesel refere-se a qualquer biocombustvel equivalente ao diesel e
obtido a partir de materiais biolgicos renovveis, tais como leos vegetais ou
gorduras animais, e consiste em hidrocarbonetos saturados de cadeia longa.
Pode ser usado na forma pura (B100) ou pode ser misturado ao diesel em
qualquer concentrao
9
.
13
Culturas como a soja, palma, canola e colza so considerados como
matrias-primas de primeira gerao, visto terem sido as primeiras culturas
utilizadas para a produo de biodiesel. A maior parte das matrias-primas de
primeira gerao podem igualmente ser utilizadas como culturas alimentares.
Contudo, uma vez que este tipo de culturas, quando utilizadas para a produo
de biodiesel, esto associadas a um rendimento muito inferior
comparativamente ao das algas
10
(tabela 1), muito dificilmente a primeira
gerao de biocombustveis ter uma produtividade suficiente sem que haja
alocao exclusiva de grandes extenses de terra arvel para culturas
destinadas produo de combustveis.
Matrias-primas de origem biolgica mas no alimentar so utilizadas na
produo de biodiesel de segunda gerao. Estes produtos podem ser
convertidos em combustvel atravs de mtodos standard de transesterificao,
ou usando tecnologias de biomass-to-liquid (BTL), tais como o processo de
Fischer-Tropsch ou o processo de pirlise rpida. Este tipo de matrias-primas
permite eliminar a concorrncia relativamente aos recursos alimentares, reduzir
a utilizao de terra arvel, alm de que so obtidos subprodutos que podem
ser reaproveitados noutros processos qumicos ou queimados para gerao de
calor e energia. Contudo, tal como no caso dos combustveis de primeira
gerao, estas matrias-primas oferecem modestas redues relativamente ao
uso de combustveis fsseis e s emisses de gases de efeito estufa com os
mtodos de processamento actualmente existentes.
As algas, constituindo a terceira gerao de biocombustveis,
apresentam-se, teoricamente, como a nica fonte de biocombustvel que pode
vir a substituir a dependncia do petrleo no futuro de uma forma econmica e
socialmente vivel. Uma das principais razes pelas quais as algas so cada
vez mais exploradas como matria-prima, particularmente para a produo de
biodiesel, o seu elevado rendimento, uma vez que a produo de algas gera
30 vezes mais energia por hectare do que as culturas terrestres. As microalgas
representam os organismos unicelulares fotossintticos com crescimento mais
acelerado, podendo completar um ciclo de crescimento em poucos dias.
Algumas espcies de microalgas tm alto teor de leo (at cerca de 80% de
leo por peso seco, tabela 2) e podem produzir at 137.000 litros de leo por
hectare por ano, em condies ptimas
10
.
14
Tabela 1 Comparao entre fontes de biodiesel
10
Cultura
Produo de leo
(L/ha)*
rea cultivvel necessria
(Mha)
a

Milho 172 1540
Soja 446 594
Colza 1190 223
Coco 2689 99
leo de palma 5950 45
Microalgas (70%
leo/peso seco)
136900 2
Microalgas (30%
leo/peso seco)
58700 4.5

*valor de referncia para cumprir 50% das necessidades energticas dos transportes nos
Estados Unidos.


Tabela 2 Contedo oleaginoso de algumas espcies de microalgas
10
Microalga
Contedo oleaginoso
(% peso seco)
Botryococcus braunii 25-75
Chlorella sp. 28-32
Crypthecodinium cohnii 20
Cylindrotheca sp. 16-37
Dunaliella primolecta 23
Isochrysis sp. 25-33
Monallanthus salina >20
Nannochloris sp. 20-35
Nannochloropsis sp. 31-68
Neochloris oleoabundans 35-54
Nitzschia sp. 45-47
Phaeodactylum tricornutum 20-30
Schizochytrium sp. 50-77
Tetraselmis sueica 15-23
15
Embora, no que diz respeito ao teor lipdico (% de lpidos relativamente
ao peso seco), as algas sejam equivalentes biomassa de outras culturas
oleaginosas, a grande vantagem da sua utilizao reside efectivamente na
elevada produtividade, sendo que o aumento do teor de leo por unidade de
rea obtido a partir das algas constitui um dos temas mais pesquisados
actualmente.


3.2 Cultura de microalgas

A produo de biomassa algal , de um modo geral, mais dispendiosa
do que as culturas alimentares terrestres visto que a manuteno dos
parmetros fsico-qumicos mais difcil em meio aqutico. O crescimento
fotossinttico requer a presena de luz, dixido de carbono, gua e sais
inorgnicos, assim como a manuteno da temperatura entre os 20-30C. No
que se refere produo de microalgas a reduo de custos assenta
essencialmente na utilizao de luz natural, embora as variaes dirias e
sazonais constituam uma limitao inevitvel.
Os meios de crescimento de microalgas devem fornecer todos os
elementos inorgnicos que constituem as clulas das algas, sendo que os
elementos essenciais incluem azoto, fsforo, ferro e silcio. Os requisitos
nutricionais mnimos podem ser estimados usando a frmula molecular
aproximada da biomassa algal CO
0.48
H
1.83
N
0.11
P
0.01
11
. Geralmente o meio
utilizado gua do mar suplementada com fertilizantes comerciais, o que
constitui um recurso pouco dispendioso.
A biomassa das algas contm cerca de 50% de carbono por peso
seco
12
, na sua maioria derivado da metabolizao de dixido de carbono. Este
gs dever ser fornecido em regime constante durante o perodo diurno, mas
sob condies controladas para manuteno do pH dentro dos valores ptimos.
Uma das vantagens da produo de biodiesel a partir de microalgas poder ser
a utilizao de CO
2
proveniente da queima de combustveis fsseis em centrais
trmicas, o que constitui um recurso disponvel a baixo custo
10
.
A produo de algas em larga-escala geralmente recorre ao cultivo
contnuo durante o perodo diurno, com adio de meio de cultura a uma taxa
16
constante e remoo de uma quantidade equivalente de biomassa algal.
Durante a noite mantm-se apenas a agitao do meio de cultura para evitar o
assentamento das algas. Cerca de 25% da biomassa produzida no perodo
diurno pode ser perdida durante a noite devido respirao, sendo que a
proporo de perda de biomassa depende do nvel de luminosidade, e
temperatura durante a fase de crescimento, assim como a temperatura durante
a noite
10
.
Actualmente os nicos mtodos praticveis para produo de microalgas
em larga-escala compreendem a utilizao de tanques abertos (raceway
ponds) ou de fotobioreactores tubulares fechados
10
.
Os raceway ponds so usados para o cultivo de microalgas desde os
anos 50, pelo que os conhecimentos inerentes a esta tecnologia esto j bem
consolidados. Os tanques utilizados so geralmente constitudos por canais de
recirculao independentes, os quais formam um loop fechado, tipicamente
com cerca de 20-30 cm de profundidade, e com recirculao e agitao
promovidos pela aco de ps. Em termos de rea, este tipo de instalaes
ocupa entre 0.5-1 ha at 200 ha no caso de cultivos extensivos (e.g. cultivo de
D. salina na Austrlia)
13
.


Figura 4 Raceway pond
6


17
O cultivo de microalgas para a produo de biodiesel em raceway
ponds (Fig. 4) tem sido largamente avaliado em estudos financiados pelo
Departamento de Energia dos Estados Unidos
10
visto que constitui uma
metodologia menos dispendiosa que os fotobioreactores em termos de custos
de construo e manuteno. Contudo, este tipo de cultivo, embora apresente
produtividades geralmente superiores a 10 g de peso seco/m
2
d, mantm-se
aqum do rendimento dos fotobioreactores
10
. Uma vez que um sistema
aberto est sujeito a flutuaes dirias e sazonais da temperatura, e as perdas
para a atmosfera por evaporao tornam tambm a utilizao do CO
2
menos
eficiente, o que conduz a uma produtividade sub-ptima. Adicionalmente, a
contaminao por algas e microorganismos que se alimentem de algas afecta
tambm a eficincia da produo de biomassa. No obstante, este tipo de
sistema geralmente encarado como a base para a cultura de microalgas em
larga escala para a produo de biodiesel, embora estejam ainda a ser
optimizadas as condies para cultura das espcies-chave para a produo de
biodiesel
10
.
Por sua vez, os fotobioreactores permitem essencialmente monoculturas
de microalgas, tendo vindo a ser usados com sucesso para a produo de
biomassa microalgal
10
. Um fotobiorector consiste numa srie de tubos
transparentes, geralmente feitos de plstico ou vidro, os quais actuam como
colectores solares (Fig. 5).

18

Figura 5 Fotobioreactor
6


Os biorreatores para cultivo de microalgas apresentam vantagens
tcnicas, em termos de minimizao da contaminao, maiores densidades de
cultura e maior controlo sobre as condies fsico-qumicas.
Numerosas tipologias destes bioreactores tm sido descritas na
literatura cientfica
13
e em patentes, sendo que apenas uma pequena parte foi
comercializada at data. Esta tecnologia envolve fundamentalmente a
produo fotoautotrfica, com iluminao natural ou artificial, embora
os fermentadores convencionais possam tambm ser usados para a cultura de
algumas espcies de microalgas de forma heterotrfica em altas
densidades, sem a presena de luz
13
(Fig. 6). Os fotobioreactores incorporam
geralmente os seguintes componentes
13
:
- Reservatrio de cultura, geralmente permevel luz,
- Sistema de fornecimento de luz, geralmente com lmpadas fluorescentes
ou que fornecem radiao fotossinteticamente activa (=400-700 nm). No
caso dos reactores exteriores utilizada simplesmente luz natural incidente
ou dispositivos colectores de energia solar de complexidade varivel.
- Sistema de trocas gasosas, para fornecer CO
2
e remover o oxignio
gerado fotossinteticamente, para impedir a inibio do metabolismo celular
- Sistema de recolha de biomassa.

19

Figura 6 Fermentador
6



Os fotobioreactores mais sofisticados so projectados de forma a
oferecer
um percurso ptico curto sob iluminao externa, principalmente atravs de
sistemas tubulares ou placas planas, de forma a minimizar a atenuao
luminosa entre a superfcie e o centro do reservatrio de cultura, utilizando para
tal tubos ou placas com dimetro/espessura de aproximadamente 0.05m
13
. A
configurao dos fotobioreactores tubulares varivel, incluindo dispositivos
horizontais, verticais, helicoidais, enquanto que as placas planas so
normalmente cmaras rectangulares finas posicionadas na vertical ou
orientadas de acordo com a radiao solar, podendo tambm ser constitudas
por canais internos que fornecem rigidez estrutural e permitem um eficaz fluxo
do meio de cultura.
Actualmente, os elevados custos de construo e operacionalidade
destes reactores limitam o nmero de sistemas comerciais em larga-escala,
sendo que os fotobioreactores fechados no apresentam condies para
suportar de forma economicamente vivel o cultivo de microalgas em grande
escala necessria para a produo de biocombustveis. Representam, contudo,
uma importante tecnologia para produo de inculos sem contaminantes para
20
alimentao de grandes tanques em circuito aberto
13
. Adicionalmente, a
investigao actual procura, portanto, promover a combinao entre a
tecnologia dos fotobioreactores e raceway ponds, para reduzir a
contaminao e a durao dos ciclos de cultivo nos tanques abertos,
optimizando a produo de biomassa em tanques exteriores, de forma a que se
apresentem como uma alternativa competitiva no mercado dos
biocombustveis.


3.3 Extraco e processamento dos leos

A extraco e processamento dos produtos obtidos das microalgas
constituem as reas mais problemticas relativamente utilizao de algas
para a produo de biocombustveis, principalmente devido ao custo do
processo de recuperao dos produtos a partir de solues diludas.
Diversas metodologias podem ser utilizadas para a colheita de
microalgas. No passado, pouca ateno tem sido dada ao desenvolvimento de
tcnicas de colheita que maximizem o valor dos produtos obtidos
a partir das microalgas (biorefinao). Os leos representam apenas um dos
muitos produtos com valor comercial, sendo que a escolha do organismo a
cultivar requer a avaliao de todas as matrias potencialmente produzidas. A
figura 7 ilustra a implementao do conceito de biorefinaria, em que o petrleo
produzido em paralelo com outros extractos teis e com reciclagem dos
nutrientes e gua utilizados no processo (Fig. 8).
21


Figura 7 Representao esquemtica de uma biorefinaria para obteno de produtos
teis a partir das microalgas
13







Figura 8 Secagem da biomassa da microalgas
6



22

Figura 9 Extraco dos leos
6



Os custos de colheita da biomassa representam
cerca de 20-30% do custo total
13
. Actualmente, a recolha da biomassa de
microalgas baseia-se em processos de sedimentao em campo gravitacional,
centrifugao, flutuao e filtrao
13
. Seguidamente, para que haja uma
extraco eficaz dos materiais contidos no interior das clulas, necessrio
proceder disrupo celular. Embora existam diversas metodologias para
disrupo celular, o critrio fundamental a maximizao do
valor dos materiais obtidos. A disrupo mecnica das clulas geralmente o
mtodo por excelncia uma vez que evita contaminao qumica da
preparao, preservando simultaneamente a maior parte da funcionalidade do
material celular. A etapa final no processo de extraco consiste no
fraccionamento dos extractos, geralmente com recurso a solventes orgnicos,
e recolha dos leos
13
(Fig. 9).






23
3.4 Engenharia gentica

Embora as microalgas se apresentem como uma alternativa promissora
no futuro dos biocombustveis, vrias barreiras tcnicas tm ainda que ser
ultrapassadas para que este tipo de matria-prima possa ser utilizada de forma
economicamente vivel. As dificuldades apresentam-se fundamentalmente ao
nvel de
14
:
- Desenvolvimento de mtodos de recolha com baixo consumo
energtico,
- Produo de biomassa em larga-escala em sistemas exteriores,
- Presena de espcies invasivas nos tanques de cultura,
- Baixa penetrncia luminosa em culturas de elevada densidade,
- Optimizao de mtodos de extraco de baixo consumo energtico
- Fracas propriedades de escoamento a frio da maior parte do biodiesel
derivado de microalgas.

Para que haja um incentivo utilizao de microalgas na produo de
biocombustveis, importante que sejam desenvolvidas solues para
optimizar a produtividade dos sistemas de cultivo de microalgas, e desenvolver
esforos de bioprospeco para identificao de estirpes com caracteres
desejveis para a produo de combustveis. Estima-se que existem mais de
50.000 espcies de microalgas, embora apenas uma fraco de cerca de
30.000 espcies tenha sido estudada e analisada
15
. Durante as ltimas
dcadas extensas coleces de algas tm vindo a ser criadas em diversos
pases, sendo a coleco de algas de gua doce da Universidade de Coimbra
um dos maiores repositrios do mundo, com mais de 4000 estirpes e 1000
espcies
15
.
Embora estes esforos demonstram que muitas espcies de microalgas
tm propriedades que so desejveis para a produo de biocombustveis, a
maioria apresenta condicionantes que impediram, at data, o surgimento de
uma indstria economicamente vivel de biocombustveis a partir de algas. As
culturas alimentares tradicionalmente usadas tm vindo a ser optimizadas ao
longo dos anos atravs da seleco dos caracteres mais favorveis, enquanto
que no caso das bioalgas este processo est ainda em fase muito incipiente.
24
Por esse motivo, a engenharia gentica afigura-se como a soluo para
ultrapassar a morosidade do processo de seleco. Contudo, apesar dos
recentes avanos nas abordagens biotecnolgicas, o potencial da engenharia
gentica s seria completamente alcanado se as tcnicas de reproduo das
espcies mais significativas estiverem solidamente estabelecidas de forma a
permitir a combinao dos caracteres e mutaes genticos mais desejveis
14
.


3.4.1 Engenharia gentica de microalgas

Na ltima dcada tm sido alcanados progressos significativos na
genmica das microalgas, nomeadamente com a criao de bases de dados
de marcadores de sequncias expressos (EST) e a sequenciao do genoma
de diversas espcies. Historicamente, a alga verde Chlamydomonas reinhardtii
tem sido o foco de investigao gentica e molecular pelo que
a maioria das ferramentas para a expresso ou knockdown de genes e
so especficas para esta espcie. Contudo, esto tambm a ser rapidamente
desenvolvidas ferramentas adaptadas a espcies de maior interesse
comercial
14
.

25


Figura 10 Vias metablicas das microalgas relativamente s quais esto a ser
optimizadas estratgias de optimizao da produo de leos
14



Descodificao do genoma
No que se refere descodificao do genoma, vrios projectos de
sequenciao do genoma nuclear encontram-se j concludos, nomeadamente
para C. reinhardtii, Phaeodactylum, Thalassiosira pseudonana,
Cyanidioschyzon merolae, Ostreococcus, Ostreococcus tauri, e Micromonas
pusilla
14
. Por sua vez, encontram-se em cursos projectos para sequenciao de
Fragilariopsis cylindrus, Pseudo-nitzschia, Thalassiosira rotula, Botryococcus
braunii, Chlorella vulgaris, Dunaliella salina, Micromonas pusilla, Galdieria
sulphuraria, Porphyra purpurea, Volvox carteri, e Aureococcus
anophageferrens
14
.
26

Mtodos de transformao e expresso
A transformao gentica foi j conseguida para diversas espcies,
nomeadamente algas verdes (Chlorophyta), vermelhas (Rhodophyta) e
castanhas (Phaeophyta), diatomceas, euglenfitas e dinoflagelados
14
.
Os mtodos primariamente desenvolvidos para C. reinhardtii
demonstram que a estabilidade da expresso pode ser melhorada atravs de
utilizao de codes adequados e promotores endgenos fortes, da incluso
de terminaes 5,3 especficas de cada espcie e da utilizao de sequncias
de intres
14
. A eficincia de transformao parece estar fortemente
correlacinada com a espcie usada, e os mtodos de transformao tm de ser
cuidadosamente seleccionados e optimizados para cada microalga. Entre os
mtodos de transformao que tm sido utilizados para a transferncia de DNA
em clulas de microalgas encontram-se, fundamentalmente, a agitao na
presena de esferas de vidro, eletroporao, o bombardeamento com
micropartculas de biobalstica e transferncia de genes mediada
Agrobacterium tumefaciens
14
.


3.4.2 Engenharia gentica do metabolismo lipdico

Nas algas, a biossntese e catabolismo de lpidos e catabolismo, assim
como as vias que determinam o comprimento e saturao dos cidos gordos
no foram ainda exaustivamente estudados como nas plantas terrestres. No
entanto, muitos dos genes envolvidos no metabolismo lipdico
nas plantas terrestres possuem homlogos nos genomas das microalgas.
Portanto, pelo menos algumas das estratgias utilizadas para
modificar o teor lipdico em plantas superiores afiguram-se tambm eficazes
nas microalgas.


Biossntese lipdica
A figura 10 apresenta uma viso simplificada das vias de sntese de
lpidos, ao nvel das quais podero ser levadas a cabo manipulaes genticas
27
para aumentar o contedo oleaginoso das algas. Em particular, o fornecimento
de cidos gordos parecem ser determinantes para a regulao da sntese de
leos
14
, pelo que grande nfase foi inicialmente dado aos estudos focados no
aumento da expresso de enzimas envolvidas nas vias de sntese de cidos
gordos, embora com pouco sucesso. Mais recentemente, a sobre-expresso de
genes envolvidos na formao de triacilgliceris (TAG) parece revelar-se a
abordagem de maior sucesso
14
. Outra abordagem alternativa para aumentar o
contedo celular lipdico consiste em bloquear as vias metablicas
responsveis pela acumulao de compostos energticos, tal como o amido. A
disrupo do gene da ADP-glucose-pirofosforilase ou isoamilase em algas
parece revelar-se particularmente eficaz para a acumulao de triacilglicerol
14
.


Catabolismo lipdico
Uma estratgia complementar para aumentar a acumulao de lpidos
consiste na reduo do seu catabolismo. Os genes envolvidos na activao do
triacilglicerol e dos cidos gordos livres, assim como os genes envolvidos na -
oxidao dos cidos gordos, foram j alvo de estudos de inactivao,
resultando em aumento do contedo lipdico celular. Contudo, grande parte do
conhecimento disponvel neste domnio provm de estudos em plantas
superiores. Por esse motivo, e para ultrapassar a falta de recombinao
homloga eficiente em microalgas, a inactivao gentica ter que ser
promovida atravs de mutagnese aleatria ou atravs do silenciamento de
RNA
14
.


28


Figura 11 Vias metablicas da biossntese lipdica em microalgas
14



Adicionalmente, importa considerar os ciclos dirios, uma vez que vrias
microalgas iniciam o armazenamento de TAG durante o dia, mas consomem
essas reservas durante a noite para suportar os requisitos energticos e a
diviso celular. Consequentemente, a inibio da -oxidao iria impedir a
perda de TAG durante a noite, mas com a consequente reduo da taxa de
crescimento. Por esse motivo, esta estratgia poder no ser vivel para
microalgas cultivadas em tanques abertos exteriores, mas pode ser uma
estratgia vlida para aumentar a produo lipdica em microalgas cultivadas
em fotobiorreatores com fontes exgenas de carbono e/ou luz contnua
14
.


29
Modificao das caractersticas dos lpidos
Alternativamente engenharia gentica direccionada para a produo
aumentada de lpidos, uma estratgia que se poder afigurar tambm
auspiciosa visa o aumento da qualidade dos lpidos com vista sua
adequabilidade como matria-prima para biodiesel, nomeadamente no que se
refere ao comprimento das cadeias. O comprimento da cadeia dos cidos
gordos determinado por acil-ACP tioesterases, que libertam os cidos gordos
da sua cadeia de sntese. Existem vrias tioesterases obtidas a partir de uma
grande variedade de organismos e que so especficas para determinados
comprimentos de cadeia dos cidos gordos, pelo que a sua sobreexpresso
trangnica poder ser usada para optimizar os leos obtidos a partir de
microalgas
14
.


O Potencial para a modificao do contedo lipdico em microalgas
razovel pensar que algumas das estratgias que resultam no
aumento do contedo de leo nas sementes de plantas terrestres podero ser
tambm aplicveis em microalgas. Muitas microalgas no produzem uma
grande quantidade de lpidos de armazenamento durante o seu crescimento.
Em vez disso, quando esto sobre stress ambiental, como a falta de azoto, elas
diminuem a sua proliferao e comeam a produzir produtos energticos de
armazenamento, tais como lpidos e/ou amido. assim interessante verificar
como a sobre-expresso de genes responsveis pelas vias de sntese de
lpidos pode afectar a proliferao de microalgas. Um resultado possvel ser o
aumento da sntese lipdica conduzir reduo da diviso celular.









30
4. A inovao na rea dos biocombustveis: tendncias de patenteamento

Efectuou-se uma anlise ao patenteamento na rea dos biocombustveis
obtidos a partir de microalgas. Esta anlise teve como objectivo identificar
quais as principais empresas/instituies (requerentes) que fizeram pedidos de
patente nesta rea tecnolgica, e tambm quais os principais pases
intervenientes nesta mesma rea. Analisou-se ainda a evoluo do nmero de
publicaes de documentos ao longo da presente dcada, bem como a
evoluo do nmero de publicaes por pais de origem.
















Figura 12 Nmero de publicaes das principais empresas/requerentes que fizeram
pedidos de patente na rea dos biocombustveis obtidos a partir de microalgas no perodo de
2000 a 2010 (2010-12-22).


Como se pode constatar pela observao da figura 12, no existe um
requerente principal, que se destaque dos restantes, na rea dos
biocombustveis obtidos a partir de microalgas. Pode-se no entanto salientar os
seguintes: Sapphire Energy Inc, Chevron USA Inc, Eni SPA, UOP LLC e a
Universidade de Tsinghua.

31




















Figura 13 Evoluo do nmero de publicaes, por requerente, no perodo de 2000 a
2010 (2010-12-22).


Relativamente evoluo do nmero de publicaes por requerente,
observa-se que s em 2009 e 2010 as empresas comearam a ter uma maior
expresso nas publicaes de documentos de patente. Nos anos anteriores,
apenas as Universidades efectuaram publicaes de documentos de patente,
tendo no entanto este nmero diminudo em 2010 para valores semelhantes a
2005. Estes resultados mostram o papel importante que as Universidades e os
Centros de Investigao tm no s no desenvolvimento cientifico como
tambm no desenvolvimento econmico, ao iniciarem os estudos de I&D e
identificarem reas tcnicas onde o investimento financeiro leva a um claro e
substancial desenvolvimento econmico.







32


















Figura 14 Evoluo do nmero de publicaes de patentes no perodo entre 2000 e
2010 para a rea tecnolgica dos biocombustveis obtidos a partir de microalgas.


Analisando a figura 14, referente evoluo do nmero de publicaes
de patentes no perodo entre 2000 e 2010, verifica-se um aumento substancial
a partir de 2008. Estes dados mostram um clara tendncia no aumento da
significncia tecnolgica e econmica desta rea de investigao e
desenvolvimento.
Uma anlise em maior detalhe desta evoluo (figuras 15 e 16), atravs
da identificao do nmero de pedidos por pas/via de proteco, mostra que a
subida descrita pela figura 14 essencialmente devida ao grande aumento dos
pedidos internacionais. O aumento dos pedidos provenientes dos Estados
Unidos da Amrica merece tambm ser salientado, apesar de no ser to
significativo como o aumento dos pedidos WO. no entanto de referir que
muitos destes pedidos WO tm uma prioridade norte-americana,
provavelmente devido ao facto de 8 dos 10 requerentes identificados no top
10 serem tambm de nacionalidade norte-americana.




33
















Figura 15 Evoluo do nmero de publicaes de patentes no perodo entre 2000 e
2010, de acordo com a via de proteco (WO via internacional; US Estados Unidos da
Amrica; CN China; FR Frana; GB Gr-Bretanha).


















Figura 16 Nmero de publicaes por pas de patentes na rea dos biocombustveis
obtidos a partir de microalgas no perodo de 2000 a 2010 (2010-12-22).

34
5. Consideraes Finais

As crescentes preocupaes sobre a diminuio da disponibilidade dos
combustveis fsseis, juntamente com os problemas ambientais resultantes da
sua explorao, produo e utilizao, tm estimulado a investigao cientfica
de forma a desenvolver e melhorar a sntese de biocombustveis a partir de
recursos renovveis.
A substituio dos combustveis ditos tradicionais por biocombustveis
acarreta no s vantagens ambientais, mas tambm poltico-econmicas.
Desta forma, a nvel poltico-econmico, uma grande vantagem tornar as
naes mais independentes dos combustveis fsseis esgotveis e tambm
dos prprios fornecedores, no ficando assim sujeitas s variaes de
mercado. Uma outra vantagem resulta na gerao de desenvolvimento rural
costeiro, em especial nos pases em desenvolvimento, e que tm grande
potencial para a produo de biomassa. o caso dos pases africanos, latino-
americanos e asiticos.
As algas, e em particular as microalgas, apresentam grande potencial
para a produo simultnea de biodiesel, bioetanol, hidrognio e metano,
assim como de produtos qumicos de elevado valor, pelo que grande foco e
investimento tm sido dados optimizao das metodologias de produo e
extraco de produtos energticos a partir de algas.
No que diz respeito importncia da Propriedade Industrial nesta rea
especfica, a partir do diagnstico tecnolgico apresentado no ponto 4., conclui-
se que se trata de uma rea tecnolgica em crescimento, onde previsvel um
aumento do investimento em I&D, visto que os pedidos de patente feitos por
empresas comeam agora a surgir. O facto de existirem vrias empresas,
directamente relacionadas com os combustveis, a desenvolver trabalho
cientfico nesta rea, leva a crer que a proteco de direitos de incidncia
tecnolgica assuma uma posio relevante neste domnio tecnolgico.
Os biocombustveis obtidos a partir de microalgas representam
claramente uma alternativa promissora para o futuro. Contudo, o grande
desafio actual prende-se ainda com a necessidade de reduzir os custos de
produo para que esta fonte energtica se torne economicamente vivel
relativamente aos combustveis tradicionais.
35
6. Referncias

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31-09-272-EN.PDF
2. Budiman, M. Algae Fuel. Condensed Matter - Materials Engineering
Newsletter, McMaster University. Hamilton: McMaster University,
Department of Materials Science and Engineering, 2009. Vol. 1, 4
3. http://mse.mcmaster.ca/Condensed%20Matter/November2009.pdf
4. http://www.oilgae.com/ref/report/report.html
5. http://www.oilgae.com/algae/pro/eth/eth.html
6. http://www.oilgae.com/algae/pro/hyd/hyd.html
7. http://cnode3.slideboom.com/presentations/159830/engineering-in-algae-
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8. http://www.oilgae.com/algae/pro/hyd/pro/pro.html
9. http://www.oilgae.com/algae/pro/met/met.html
10. http://www.oilgae.com/algae/oil/biod/biod.html
11. Chisti, Y. 2007. Biodiesel from microalgae. Biotechnology Advances, 25:
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microalgal culture: biotechnology and applied phycology. Blackwell. Pp 97-
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Shear stress tolerante and biochemical characterization of Phaeodactylum
tricornutum in quasi steady-state continuous culture in outdoor
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technological challenges. Journal of the Royal Society Interface, 7:703-726.
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engineering of algae for enhanced biofuel production. Eukaryotic cell, 9 (4):
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production and other applications: a review. Renewable and sustainable
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