Introduccin:

El agua es un recurso natural necesario para el desarrollo de un gran nmero de actividades humanas. Su
creciente degradacin por disminucin de su calidad implica la reduccin del nmero de usos que se le da;
es por ello, lo que se hace necesario la realizacin de estudios que permitan determinar la calidad de esa
agua. Los anlisis microbiolgicos determinana la presencia de microorganismos patgenos como las
Bacterias coliformes y Escherichiacoli(E. coli), los Enterococos, Clostridium perfringens y salmonela que
son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades
como clera gastroenteritis aguda y diarrea.

Anlisis Microbiolgico del Agua
Se puede definir el anlisis microbiolgico como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los
microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.
El inters se centra en los microorganismos patgenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus,
protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades.
Normalmente estos microbios llegan al agua en las heces y otros restos orgnicos que producen las
personas infectadas






Fecha
22/ 05 / 14
ANALISIS INDUSTRIAL
Prof. Ing. Qum. Eduardo Caballero Ferreira

ANALISIS
MICROBIOLOGICO
DEL AGUA
Integrantes:
-Sara Crdenas - Vanina Pertile
-Ftima Caete -Braulio Vantrate
-Cristian Domnguez
Bachillerato Tcnico en Qumica Industrial

Toma de muestras para anlisis microbiolgicos:
Las muestras que se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder determinar as
su calidad microbiolgica.
Su anlisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 horas desde el momento de la toma
de muestras.
En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a una temperatura de 4C
durante un periodo mximo de 24 hs antes de su anlisis.
Para su recogida debe utilizarse frascos estriles y debe recolectarse cantidades comprendidas
entre 500 y 1000 ml.
Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloramina u ozono, ser
necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo.
Se aadir una cantidad suficiente de tiosulfato sdico. Para un volumen de 250 ml son suficientes
0,2 ml de una solucin acuosa al 3% de tiosulfato sdico
Mtodos de anlisis:
1. Bacterias coliformes y Escherichiacoli(E. coli):
2. Enterococos
3. Clostridium perfringens (incluidas las esporas)

Otros tests complementarios:
Salmonelas
Estafilococos patgenos
Bacterifagos fecales
Enterovirus
Protozoos
Animlculos (gusanos-larvas), Invertebrados bntico

CARACTERSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS:
Enterococos fecales:
Los enterococos pueden considerarse como indicadores de contaminacin fecal. Algunos enterococos
presentes en las aguas pueden proceder de otros hbitats. Se pueden detectar y cuantificar las especies:
Enterococcus faecalis, E. faecium, E. duransy E. hirae. Como enterococos intestinales se consideran
aquellos microorganismos capaces de reducirel cloruro de trifeniltetrazolio(TTC) y de hidrolizar la esculina.
Clostridium perfringens (incluidas esporas):
Los bacterias incluidas en el gnero Clostridium tienen morfologa bacilar, son Gram positivas, anaerobias
estrictas y capaces de formar esporas.
La especie C. perfringens estn normalmente presente en heces. Sus esporas son resistentes al calor, a los
procesos de desinfeccin y a los tratamientos de depuracin habituales de las aguas (cloracin), por lo que
su supervivencia en agua es mayor.
La diferenciacin de C. perfringens de otras especies de Clostridium, se basa en su capacidad de fermentar
la sacarosa con produccin de cido, en su incapacidad de fermentar la celobiosa y en la produccin de
fosfatasa cida.
Bacterias aerobias:
Son organismos que slo pueden desarrollarse en presencia de oxgeno atmosfrico, del que precisa para
la respiracin. La atmsfera puede ser area o subacutica, ya que existe aire disuelto dentro de las masas
de agua (los peces son organismos aerobios que respiran aire disuelto). La atmsfera area contiene, al
menos, 20 veces ms oxgeno que la acutica, lo que condiciona el diseo de los rganos respiratorios de
los animales de vida area o acutica.



Bacterias coliformes:
Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de
morfologa bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y
que fermentan la lactosa con produccin de cido a 37Cen 24-48 horas
Del grupo coliformes forman parte varios gneros:
Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter.
-Escherichia coli produce dolor abdominal, diarrea, nauseas, vmitos y fiebre.
-Klebsiella produce enfermedades respiratorias.
-Citrobacter produce alteraciones a nivel del colon y a nivel intestinal

DETERMINACIN INSTRUMENTAL:

Coliformes fecales: Mtodo de filtracin de membrana.
Fundamento:
Las bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior (coliformes
totales), que adems son capaces de fermentar la lactosa, con produccin de cido y de gas a 44C, en un
tiempo mximo de 24h.2.
Mtodo:
El mtodo consiste en la determinacin del n de coliformes mediante filtracin de volmenes
determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubacin sobre medio de lactosa
enriquecido(agar de lactosa TTC con heptadecilsulfato de sodio) y una temperatura de 44,5C(+/-0,2C).3.
Toma de muestra y almacenamiento:
Se utiliza la muestra de agua tomada para el anlisis de coliformes totales que se encontraba guardada en
frigorfico a 4C
Equipos y materiales:
1. Equipo de filtracin: embudo y latina porosa que se puedan trabar entre si y sean autoclavable;
bomba de vaco; kitasato de 1litro; trampa de agua entre el kitasato y la bomba de vaco.
2. Balanza con una sensibilidad de por lo menos 10mg.
3. Incubadora de 44,5C 0.2C.
4. Equipo de recuento: microscopio binocular con un aumento de 10 a 15x (de referencia).
5. Autoclave
6. Mecheros
7. Placas de Petri estriles de plstico descartable (o de vidrio) de 50 mm de dimetro
aproximadamente u otro tamao adecuado.
8. Filtro de nitrocelulosa cuadriculados estriles de 0.45 0.02 m de dimetro e poros. Libre de
glicerina i sin reas hidrofbicas.
9. Pinza de filtro de acero inoxidable sin extremidades rugosas.
10. Tubos de ensayo de vidrio estriles para disoluciones con tapa de algodn o de rosca.
11. Pipetas de vidrio graduadas estriles.
12. Materiales de vidrio para precipitacin de los medios de cultivo.
13. Termmetros calibrados para calibrar las colonias de coliformes.

Procedimiento:
1. Preparacin de las placas de Petri. Si las placas son de plstico pueden ser reutilizados despus de
lavadas si se tratan con hipoclorito y posteriormente con etanol al 70% durante 30 minutos y luego
se comprueba su esterilidad.
2. Preparacin de los medios de cultivo.
El medio e cultivo debe ser preparado como lo indica el envase, sin necesidad de ser autoclavado,
agregndole Agar al 15%y fundir.
Una vez de fundido y termostatizado a 44C se reparte en las placas de Petri a un atmosfera
asptica, colocando aproximadamente 3ml de medio por placa de 50mm e dimetro.
3. Preparacin de la muestra.
El volumen de la muestra a ser filtrado se determina de acuerdo a la densidad bacteriana esperada
y el origen de la muestra. En caso de ser necesario se repara las diluciones en agua peptonada
estril. Se recomiende filtrar 3 volmenes de muestra en mltiplos de 10 a las diluciones realizadas:
4. Filtracin e incubacin de la muestra.
Descontaminar los embudos de decantacin al inicio del procedimiento de cada muestreo,
humedeciendo el embudo con alcohol y luego flambearlo una vez que el alcohol se consume hacer
pasar suficiente agua estril para lavar el sistema y enfriarlo ms rpidamente.
Colocar un filtro de nitrocelulosa estril con la superficie cuadriculada hacia arriba contra el porta
filtro poroso del embudo, utilizando pinzas humedecidas con alcohol, flambeadas y a temperatura
ambiente. Verter el volumen a filtrar y filtrar, luego destrabar el sistema retirar el filtro con pinzas
estriles y colocarlo sobre la placa con medio de cultivo M-FC evitando la formacin de burbujas de
aire.
5. Recuento:
Las colonias tpicas de coliformes fecales desarrolladas en el medio selectivo indicados son de
distintos tonalidades de AZUL.
Las colonias GRISES o CREMA son consideradas no coliformes, aunque existen colonias E. COLI
atpicas que se presentan de color crema por lo que se recomienda verificar la verificacin.
Para el recuento utiliza preferentemente un microscopio binocular con un aumento de 10 a 15x y
una fuente de luz fluorescente posicionada formando un ngulo de 60-80 con respecto al filtro.

Ecuacin:

Total de colonias coliformes fecales =

Colonias de coliformes contadas x 100
ml de muestra filtrada.

Lectura e interpretacin:
La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias aparecidas sobre la membrana y el examen
de los halos en la capa de agar subyacente a la membrana.
La fermentacin de la lactosa provoca la formacin de un halo amarillo.
Se considera coliformes aquellas colonias que presentan halo amarillo, halo amarillo con centro
naranja(Escherichia y Citrobacter) halo amarillo con centro rojo ladrillo(Klebsiella y Enterobacter).
La densidad se estima como el total de coliformes totales por 100ml, utilizando aquellos filtros de
membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no ms de 200.

DETERMINACIN NO INSTRUMENTAL:
Anlisis Microbiolgico: Determinacin de vibrios choleroe en aguas
El gnero de Vibrio se encuentra dentro de la familia vibrionaceae junto con tres gneros ms, Aeromonas,
Photobacterium y Plesiomonas.
Las cepas de Vibrio chelerae que reaccionan con el antisuero somtico 01, se denominan V. cholerae 01,
las restantes o variedades se denominan no 01, siendo las primeras las causantes de la enfermedad del
clera.
Equipos y materiales:
1. Equipo de filtracin: embudo y platino poroso que se puedan trabar entre s y sean autoclavable.
Bomba de vaco, kitasato e 1 litro, trampa y agua entre el kitasato y la bomba de vaco.
2. Balanza con sensibilidad de por lo menos 10mg.
3. Incubadora de 37C-35 0.5C.
4. Autoclave.
5. Equipos para medir el PH bajo sensibilidad de 0.1 unidades de PH.
6. Mecheros.
7. Placas de Petri estriles, de plsticos descartables a de vidrio.
8. Filtro de nitrocelulosa de 0.22m a 0.45m 0.02m de dimetro de poro. Libre de glicerina y sin
reas hidrofbicas.
9. Pinzas para filtros, de acero inoxidable sin extremidades rugosas, humedecido de alcohol y
flambeados antes de su uso.
10. Tubos de ensayos de vidrios, estriles con tapa.
11. Pipetas de vidrios graduadas estriles.
12. Frascos de muestreos estriles.
13. Bidones estriles de 5 litros ara muestreos.
14. Materiales de calibradas para preparacin de medios de cultivos.
15. Termmetros calibrados para controlar la incubadora.
16. Pre filtro estriles.

Procedimiento:
1. Procesamiento de muestra:
a) Enriquecimiento directo
Una vez llegada a la muestra al laboratorio, se coloca el volumen de muestreo (500ml) en un recipiente
conteniendo el mismo volumen de agua peptonada alcalina (APA) a PH 0.6 de borde concentracin.
Incubar a 37C durante 6 a 8 hs.
Alternativamente puede incubarse 450ml de muestra en 50ml de APA 10 veces concentrada, o relacin de
muestra y APA de simple concentracin.
b) Filtracin por membrana
La filtracin se realiza como esta descripta en la diferencia 2.1 pero colocando un per filtro estril sobre la
membrana ara las muestras muy turbias. Una vez filtradas se colocan todas las membranas y los pre filtros
de la muestra en un recipiente con 100 ml de APA simple concentracin. Incubar 6 a 8 hs a 37C.
c) Hisopo de Moore
Colocar el hisopo en frasco de boca ancha con APA simple concentracin e incubar a 37C a 6 por 8 hs.
2) aislamiento de Vibrio cholerae
Independientemente del mtodo de procedimiento empleado, posteriormente a la incubacin en APA,
sembrar un ansado de la pelcula superficial del agua peptonada alcalina en placas de Petri con medio
TCBS, e incubar por 24hs a 37C.
Seleccionar colonias sospechosas es decir, colonias amarillas (porque fermenta la sacarosa), placas
ligeramente convexas de 2mm de dimetro con centro opaco y bordes translucidos. No todas las colonias
amarillas desarrolladas en este medio son de V. cholerae. Replicar las colonias seleccionadas
(aproximadamente un nmero de 8 a 10). En placas con medio TSA e incubar a 24hs a 37C.
A partir de TSA realizar las pruebas de oxidasa, tincin de Gran, TSI de carboxilasas (lisina, argina, arginina)
Conclusin:
El anlisis Microbiologico es de uso fundamental para las personas, ya que a traves del mismo se pueden
detectar la presencia de estos microorganismos como Bacterias coliformes y Escherichiacoli(E. coli),
Enterococos, Clostridium perfringens y dems microorganismos presentes en una muestra de agua.
El agua que contenga pocos patgenos por litros puede estar lo suficientemente contaminada para causar
enfermedades como clera gastroenteritis aguda y diarrea.
Estos anlisis son llevadas a cabo por analistas cualificados, quienes estn capacitados para utilizar
instrumentos analticos de alta sofisticacin ya que recibe una slida formacin .
Fuentes Consultadas:
Analisis microbiolgico. Concepto. Objeto de estudio. Microorganismos presentes en el agua.
Disponible en lnea: http://www.upct.es/~minaeees/analisis_microbiologico_aguas.pdf
Toma de muestras para anlisis microbiolgicos. Caractersticas. Disponible en lnea:
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/11-
metodos%20analiticos%20generales.htm
Coliformes. Caractersticas . Tipos. Disponible en lnea:
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/11-
metodos%20analiticos%20generales.htm
Caractersticas de los microorganismos: Enterococos fecales. Bacterias aerobias. Clostridium
perfringens (incluidas esporas). Caractersticas. Disponible en lnea: http://microorganismos-
microempresa.blogspot.com/2010/02/caracteristicas-de-los-microorganismos.html
Anexo: