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COLEGIO GUERRERENSE DE QUMICOS CLNICOS A.C.

Y
COMERCIALIZADORA INTERNACIONAL MACEDONIO S.A. DE C.V.

Mxico D.F. a 18 de Mayo de 2013.


ESTANDARIZACIN DEL ANLISIS BSICO DE
SEMEN: ACTUALIZACIN DEL MANUAL
DE LA OMS 2010.
Biol. Gerardo Cerezo Parra

Director de LABORATORIO FERTIMEXICO S.A. DE C.V.
Director de PRO-SEMEN.
Secretario General de PLEAS.
Mxico D. F.

www.fertimexico.com
2
El PROBLEMA DE LA INFERTILIDAD:
15% de las
Parejas son
Infrtiles
Factor Masculino
40%
Factor Femenino
40%

Factor Masculino
+
Factor Femenino
10%

Causas Desconocidas
10%
3

! Disfuncin sexual y/o
eyaculatoria.
! Causa inmunolgica.
! Anormalidades del
plasma seminal.
! Anormalidades congnitas.
! Varicocele.
! Dao testicular adquirido .
! Causas endocrinas.

CAUSAS DE LA INFERTILIDAD MASCULINA

! Exposicin a Txicos.
! Estilo de Vida.

! Causas no demostrables.
4
LA CALIDAD DEL SEMEN
La ca||dad de| eyacu|ado depende de |a
mov|||dad, v|ta||dad, concentrac|n, morfo|og|a y
e| vo|umen (I|u|dos sem|na|es), estos son
|mportantes para |a func|n de| espermatozo|de
y que |ogre |a fern||zac|n.

La ca||dad de| eyacu|ado tamb|n va a depender
de |a forma en que se obtenga, e| |ugar (2avos y
Goodpasture, 1989), |a acnv|dad sexua| (Cooper
et a|., 1993), |a edad de| pac|ente (Ng et a|.,
2004), e| tamao de| tesncu|o (no|ste|n et a|.,
2003) y |os d|as de absnnenc|a sexua| (Cooper et
a|., 1993) (1y|er et a|., 1982a).
ESTUDIOS DEL LABORATORIO DE ANDROLOGIA
ANALISIS 8ASICC DL
SLMLN
1LCnlCAS uL
l8ACMLn1AClCn uL
Aun
1LCNICAS DL
CAACI1ACICN
LSLkMA1ICA

1LCNICAS DL
CkICkLSLkVACICN
5 Edicin del Manual para el Anlisis de Semen
de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), 2010.
1999
"#$#
7
5 %
lubricacin
70%
5 %
20%
EL SEMEN HUMANO
8
-Peso promedio de cada testculo: 34 g.

-Produccin espermtica diaria por gramo de testculo :
4.4 millones de espermatozoides.

-Produccin espermtica diaria por los 2 testculos:
150 millones.
PRODUCCION ESPERMATICA
q q
!"#$%&$' )#*'&+$' ,* '*)*%
'* ,*-*% $%$./0$+1
-Lx|ste una var|ab|||dad b|o|g|ca en |a ca||dad de| semen.
(Casn||a et. A|. 2006.).

-Ls |mpos|b|e caracter|zar |a ca||dad de| semen a| eva|uar so|o
una muestra de| pac|ente. La hgura 2.1 muestra var|ac|ones en
e| semen a| eva|uar S hombres sanos.


-Ls recomendable examlnar 2 3 muesLras para obLener daLos
conables y una medla. (oland eL. al. 1983, 8erman eL. Al.
1996, Carlsen eL al., 2004 Casulla eL al., 2006, keel, 2006).

io
INSTRUCCIONES AL PACIENTE
2$345678796: '8;<:= >8 ?2@ >A:4B

2$48C 9C7 :D<: E F:3G7 >8 D8765:=84B

2&CH: >8 H<845I: 87 JI8: 84K896:= 87
8= =:3CI:5CI6CB

2"C=8996G7 >8 H<845I: KCI
H:45<I3:96G7B

2%C 48 K8IH658 8= 9C65C 6758II<HK6>CB

2%C 48 >838 K8I>8I 767D<7: LI:996G7
>8= 8E:9<=:>CB


i: i:
COLECCION DEL EYACULADO
2"M.*""/N% ,* .$ )#*'&+$ "M% "M%,M%
*'O*"/$.P

QR /79:K:96>:> K:I: 9C=895:I =: H<845I: KCI
H:45<I3:96G7 87 8= =:3CI:5CI6C E 87 9:4:B

?R ,:I=8 := K:968758 =:4 67>69:96C784 K:I: =:
9C=8996G7 >8 =: H<845I: >8 48H87 9C7 9C7>G7B

SR #56=6T:I 9C7>C784 84K896:=84B

UR +8D645I:I =: VCI: >8 =: 9C=8996G7 >8= 48H87B

WR *75I8D:I =: H<845I: := =:3CI:5CI6C >875IC >8 =:
VCI: >84K<X4 >8 =: 9C=8996G7 >8 =: H<845I: >8
48H87B

YR ):75878I =: H<845I: >8 48H87 875I8 ?Z E S@["
><I:758 8= 5I:74KCI58 := =:3CI:5CI6CB

i i
./"#*\$""/M%

Proceso en el cual el semen pasa de
un estado hiperviscoso a un estado
liquido (manejable).


-El semen generalmente se licua
dentro de los primeros 15 minutos.


-El semen puede contener grnulos
gelatinosos.



Transferencia al recipiente de recoleccin
Transferencia desde el recipiente
de recoleccin con pipeta o
decantando a un cilindro graduado:

Falsos volmenes bajos
-0.4 a -0.8 ml (14%)
EVALUACION DEL VOLUMEN
Medicin indirecta a partir del peso, asumiendo
que la densidad del semen es 1g/ml (1,014g/ml)
1.- Pesar el recipiente (con la etiqueta).
2.- Pesar el recipiente con el semen (g).
3.- Calcular la diferencia de peso (g = ml).
EVALUACION DEL VOLUMEN
i6 i6
APARIENCIA
VALOR DE REFERENCIA:
]+/' MO$.*'"*%&*

2)87C4 MK:9CP
"C79875I:96G7 ,64H67<6>:B

2+CFC G ):IIG7P
^8HC4K8IH6:B

2$H:I6==CP
_65:H67:4B

iy iy
VISCOSIDAD
VALOR DE REFERENCIA:
VISCOSIDAD NORMAL : Se forman gotas de semen
al dejarlo caer.

VISCOSIDAD AUMENTADA: Se forma una filancia
mayor a 2 cm.


Comentario. La viscosidad puede interferir con la
determinacin de la movilidad, concentracin,
detencin de anticuerpos antiespermatozoides.
iS iS
pH
PARAMETRO VALOR DE REFERENCIA
pH >7.2

*= K^ 7CIH:= >8= 48H87 I896X7 8E:9<=:>C >838
48I H:ECI : @B?` "C7 8= 5I:749<I4C >8= 568HKC 8=
K^ >8= 48H87 48 :=9:=676T:a 84 KCI 84C b<8 84
KI8L8I63=8 H8>6I=C 67H8>6:5:H8758 >84K<X4 >8 =:
=69<8L:996G7 c46 4<98>8 87 =C4 KI6H8IC4 SZ
H67<5C4Ra K8IC 46 4<98>8 V:45: =: VCI: 8= K^ 84
9:H36:>C KCI =: K8I>6>: >8 "M?B
Refleja el balance entre las vesculas seminales y la prstata.
iq iq
Anlisis del semen: representacin de una alcuota
El semen es viscoso

rea 1: -Elevada concentracin de espermatozoides.
-Espermatozoides rpidos.
-Buena morfologa.



rea 2 : -Baja concentracin de espermatozoides.
-Espermatozoides lentos.
-Mala morfologa.



MEZCLAR BIEN LA MUESTRA.!
Contar a T ambiente o 37C en cmaras con una profundidad de ~20 !m, para
permitir el movimiento libre
La profundidad (D,!m) es el volumen (V, !l=mm") dividido por el rea (A, mm#)
Movilidad espermtica: profundidad de la cmara
Contar 2 x 200 espermatozoides en al menos 5 campos diferentes

Usar un ocular reticulado para limitar el rea examinada evitando los
limites del cubreobjetos
a) b)
> 5 mm
:i :i
)Cd6=6>:> OICDI846d: cO+RP *4K8IH:5CTC6>8 9C7 HCd6H6875C
:956dC` =678:= C 87 9AI9<=C4 DI:7>84 67>8K87>68758H8758 >8 =:
d8=C96>:>B
)Cd6=6>:> 7C OICDI846d: c%ORP )Cd6H6875C4 67 465<P
)Cd6H6875C4 87 8= H64HC =<D:I c467 >84K=:T:H6875CRB7:>C 87
9AI9<=C4 K8b<8eC4a =: L<8IT: >8= f:D8=C 7C K<8>8 >84K=:T:I : =:
9:38T: >8= 84K8IH:5CTC6>8 C 9<:7>C 4C=C 8= f:D8=C 48 C348Id:B
/7HGd6=84 c/)RP '67 HCd6H6875CB
CATEGORIAS DE MOVILIDAD:

-Movilidad Progresiva (MP).
-Movilidad No Progresiva (NP).
-Inmviles (IM).
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Tabla i.- Inieivalos de confanza del q% apioximadamenie paia las
difeiencias eniie dos poiceniajes deieiminados de conieos poi duplicado de
:oo ((oo espeimaiozoides ioiales coniados) o (oo espeimaiozoides.
Aplicable paia movilidad, viialidad y moifologia.

PORCENTAJE
PROMEDIO
D I F E R E N C I A
MAXIMA
ACEPTABLE
PORCENTAJE
PROMEDIO
DIFERENCIA
MAXIMA
ACEPTABLE
0 1 66-76 9
1 2 77-83 8
2 3 84-88 7
3-4 4 89-92 6
5-7 5 93-95 5
8-11 6 96-97 4
12-16 7 98 3
17-23 8 99 2
24-34 9 100 1
35-65 10
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Agregaciones: Adherencia de espermatozoides inmviles o mviles a
clulas no espermticas o detritos .
Aglutinaciones: Espermatozoides mviles adheridos a otros espermatozoides mviles.
Espermatozoides con la membrana
de la cabeza intacta: exclusin de
colorantes impermeables

Ej. Eosina-nigrosina
Eosina = colorante no permeable
Nigrosina = fondo oscuro
Cabeza roja = spz muerto (D1)
Cabeza rosa = spz muerto (D2)
Cabeza blanca = spz vivo (L)
Cuello rosa = spz vivo (L)
O+#*-$ ,* _/$-/./,$, #'$%,M *M'/%$2%/]+M'/%$
: : www.ana||s|sdesemen.com.mx
EVALUACION DE LA VIABILIDAD
-Contar 200 espermatozoides (duplicado de diferentes
preparaciones) en un campo de 40X
y obtener el porcentaje de vivos y muertos.
Eosina Amarillenta
VIVO


MUERTO
Hacer duplicados de dos diluciones separadas
No llenar ambas cmaras de una dilucin
No contar la misma cmara dos veces

Error de muestreo
Error de pipeteo
Error de dilucin
Concentracin espermtica: cmara Neubauer Improved
Cmara de 100 !l de profundidad
9 rejillas de 100nl
Rejilla central
25 cuadrados grandes de 4nl
Cada cuadrado grande
16 cuadrados pequeos de 250pl
PREPARACIN DEL FROTIS
SECADO AL AIRE
FIJACIN
PAPANICOLAOU
TREN CORTO DE TINCIN
(Papanicolaou modificada o Diff-
Quik)
PLACAS PRETEIDAS
EVALUACION DE LA MORFOLOGA
MORFOLOGIA NORMAL DE LA CABEZA
Y PIEZA MEDIA
CABEZA CUELLO Y
PIEZA MEDIA
COLA
Grande.
Amorfa.
Pequea.
Elongada.
Piriforme.
Doble.
Vacuolada.
Acrosoma
pequeo.
Insercin
Asimtrica.
Cuello Doblado.
Gruesa o
Irregular.
Fina,
Residuo
Citoplsmico.
>1/2 del rea de
la cabeza.
Mltiple.
Corta.
Doblada.
Irregular.
Enrollada.
Anormalidades
uLlLC1C uL CA8LZA
)$"+M"*\$.M

EVALUACIN DE LA MORFOLOGIA ESPERMATICA
Se valora en porcentaje de acuerdo a los
siguientes criterios:

N = Normales
DC = Defectos de cabeza.
DPM = Defectos de Pieza Media.
DF = Defectos de Flagelo.
DG = Residuo Citoplasmtico

N DC DM DF
100X
C1kAS CLLULAS kLSLN1LS LN LL SLMLN
El semen contiene clulas diferentes de los espermatozoides como
son: clulas epiteliales del tracto uretral, clulas inmaduras (clulas
de la espermatognesis) y leucocitos. A estas clulas se les llama
clulas redondas y pueden ser reportadas como nmero de clulas
por campo.

CELULAS INMADURASY LEUCOCITOS
CLLULAS LI1LLIALLS
LIMITES INFERIORES DE REFERENCIA

-Estudio en 8 pases, en 3 continentes y en laboratorios con metodologa
estndar.
-Varones cuya pareja quedo embarazada en los ltimos 12 meses de haber
suspendido los mtodos anticonceptivos
Tcnicas de preparacin de Semen
Estabilizar previamente a 37C
Suplementar con HSA 5%
SWIM UP Y LAVADOS
LAVADO
ESPERMTICO
SWIM UP
Estabilizar previamente a 37C

GRADIENTES DE
DENSIDAD
G
R
A
D
I
E
N
T
E
S

D
E

D
E
N
S
I
D
A
D

-Tcnica del Dr. Ronald Ericsson principios de los 80s.
-
-Tcnica por citometra de Flujo.
tasa de xito 93% para nias y 82% para nios.
HR
TECNICAS PARA LA EVALUACION DE LA FRAGMENTACION
DEL ADN DEL ESPERMATOZOIDE.
- EVALUACION DE LA ESTRUCTURA DE LA CROMATINA
ESPERMATICA (SCSA)

- TECNICA DE TUNEL

-TECNICA DE COMETA.
- TECNICA DE FISH.

- TECNICA DE NICK TRANSLATION.

- DISPERSION DE LA CROMATINA ESPERMATICA.
(Ostling y Johanson, 1984 ).
(Manicardi y cols, 1995).
(Sailer y cols, 1995).
(Fernndez y cols, 2000).
(Evenson y Melamed, 1983).
(Fernndez y cols, 2003).
Principio: Se basa en la capacidad del ADN del espermatozoide
con elevada fragmentacin produce un pequeo o
no produce halos de dispersin, sin embargo los
espermatozoides con poca fragmentacin en el
ADN genera grandes halos.
Dispersin de la cromatina espermtica
$ Portaobjetos pre-tratados
$ Tubos eppendorf con agarosa
con bajo punto de fusin
$ Solucin desnaturalizadora
$ Solucin de lisis
(Fernndez y cols, 2003)
-Piimeios Apaiaios CASA, a mediados de los So's.
a) Poca exaciiiud en sus iesuliados.
b) Piopsiios de invesiigacin.
-Consenso paia uso del CASA
!" #$%&'(')* ,-./0!( 0$1.&.21 3&'4-, ESHRE(iqq6, iqqS).
b) Esiandaiizai los meiodos y aplicaciones del CASA.


48
jComo func|ona e| s|stema CASA?
-Compuesio poi camaia, iaijeia paia
giabai los "cuadios"(5&!6.) y una
compuiadoia(2'517!&.).
-La imagen del espeimaiozoide en el
micioscopio es conveiiida a una
imagen digiial.
-La imagen de cada cabeza
espeimaiica es digiializada en
pixeles.
-Los deiiiios celulaies pueden
pioducii un eiioi.
-El sisiema busca las cooidenadas del
espeima.
-El punio mas biillanie(/.$1&'0%) de la
cabeza del espeima.

49
1LkMINCLCGIA AkA SIS1LMAS CASA
50
-VCL= Velocidad curvilnea.
-VSL= Velocidad rectilnea.
-VAP= Velocidad promedio de la
trayectoria.
-ALH= Amplitud del desplazamiento
lateral de la cabeza.
-LIN= Linearidad.
-MAD= Media del desplazamiento
(grados) angular.


Plperacuvacln del espermaLozolde.
-Movilidad hiperactivada:
VCL 150 !m/s, LIN % 50% y ALHmax 7.0 !m.

Semen de Donador Tratamientos con
Quimioterapia o Radiacin
Semen del Esposo
Almacenamiento
Espermatozoides

Aspirado/ Extraccin
de espermatozoides
(MESA, PESA, TESE)
Trabajos de
Alto Riesgo
Procedimientos mltiples
Almacenar, pooling de muestras
Incapacidad para producir
eyaculados frescos



Infertilidad por factor masculino
severo
Desordenes genticos





Opcin despus de intentos fallidos
INDICACIONES
PARA LA
CRIOPRESERVACIN
BANCO DE SEMEN
SELECCIN DE DONADORES DE SEMEN
1) Anlisis de semen.
2) Estudios clnicos
gentico infecciosos.
3) Examen Fsico.
4) Consentimiento pre-
donacin.
5) Criopreservacin de
semen.
PRUEBAS DE ENFERMEDADES GENTICAS
E INFECCIOSAS.
-HIV I y II.
-HTLV I y II.
-Hepatitis B y C.
-Treponema pallidum.
-Chlamydia Trachomatis.
-Neisseria Gonorrhoeae.

-Cariotipo.
-Cultivo de semen.
- Fibrosis Qustica.
- Grupo Sanguneo
y Rh.
- VPH.
*Todas las muestras de semen se mantienen en cuarentena por 180 das.
ENVASADO EN CRIOVIALES.
CONGELACIN Y ALMACENAMIENTO
DE SEMEN.
CA1ALCGC DL DCNADCkLS DL SLMLN
PERIODO DE ALMACENAMIENTO
Se report en el 2004 un embarazo exitoso con espermatozoides almacenados
durante 21 aos:
G. Horne et.al. Live birth with sperm cryopreserved for 21 years prior to
cancer treatment. Case report. Hum Reprod 2004, 19:1448-1449.
q
EXACTlTUD
NO Sl
PREClSlON
NO
Sl
PREClSlON
NO
NO
Sl
Sl
EXACTlTUD

Anlisis de Semen
Precisin(CCI) / Exactitud(CCE)
PRECISION: Dispersin de una misma muestra alrededor de su promedio.
EXACTITUD: Grado de coherencia entre el valor obtenido y el valor verdadero.
de la muestra.
NO. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
A 38 35 40 34 38 36 44 43 39 43
B 42 36 42 40 40 40 43 43 46 40
C 38 43 40 51 38 33 39 45 35 39
D 34 36 36 37 36 39 42 43 46 34
M 38 37.5 39.5 40.5 38 37 42 43.5 41.5 39
DS 3.27 3.7 2.52 7.42 1.63 3.16 2.16 1.0 5.45 3.74
C.V. 8.6 9.8 6.3 18.3 4.2 8.5 5.1 2.2 13.1 9.5
kLGLA DL CCN1kCL SLNSI8ILIDAD
DLL LkkCk
Un resu|tado fuera de |os ||m|tes de contro|. A|eator|o o
s|stemnco
2 de 3 resu|tados consecunvos ambos por enc|ma de| ||m|te de
advertenc|a super|or o ambos por deba[o de| ||m|te de
advertenc|a |nfer|or

S|stemnco
4 de S puntos fuera de |os ||m|tes de advertenc|a S|stemnco
? I84<=5:>C4 9C7489<56dC4 KCI :II63: C KCI >83:FC >8 =C4
=AH6584 >8 :>d8I58796:
S|stemnco
2 resu|tados consecunvos, uno por enc|ma de| ||m|te super|or
de advertenc|a y otro por deba[o de| ||m|te |nfer|or de
advertenc|a.

A|eator|o
8 resu|tados consecunvos por arr|ba o por deba[o de| promed|o S|stemnco
2 de 3 resu|tados consecunvos ambos por enc|ma de| ||m|te de advertenc|a
super|or o ambos por deba[o de| ||m|te de advertenc|a |nfer|or
*IICI 46458HJ569C
6
" Mejorar los resultados de los laboratorio clnicos, para que
puedan ser transferibles.

" Comprobar el grado de imprecisin de los resultados
obtenidos con los mtodos analticos empleados en el
propio laboratorio.

" Comparar la inexactitud de los mtodos analticos propios
con la de otros participantes.

" Apoyar el control de calidad interno.
LLC- SLMLN
en MLkICC
rograma Mex|cano de Lva|uac|n Lxterna de |a Ca||dad
en An||s|s de Semen (LLC-SLMLN).
In|c|o: 2012.

En colaboiacin con:
Ceniio de Andiologia y Medicina Sexual, Hospiial Univeisiiaiio Kaiolinsla,
Esiocolmo, Suecia.

Di. Lais Bjoindall.
Diiecioi

Que iecibe el laboiaioiio paiiicipanie?
-i DVD con videos de ( muesiias de semen paia evaluai movilidad.
-( Suspensin de espeimaiozoides paia evaluai conceniiacin
espeimaiica.
-: exiensiones de muesiias de semen no ieidas paia evaluai la
moifologia.
-: exiensiones de muesiias de semen ieidas paia evaluai la moifologia
espeimaiica.
-: exiensiones ieidas con Eosina-Negiosina paia evaluai la viialidad
espeimaiica.

Infoime confeccionado paia cada laboiaioiio. : Envios al ao.
PEEC- SEMEN en
MEXICO
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EL ANLISIS BSICO
DE SEMEN.
3
er
Taller de Expertos Latinoamericanos para la
Estandarizacin del Anlisis Seminal.
PLEAS-OMS-ALIRH

Cancn, Mxico, 10 y 11 de Noviembre del 2013.


www.alirh.org

www.fertimexico.com

MUCHAS GRACIAS!
Biol. Gerardo Cerezo Parra

E-mail: fertimexico@prodigy.net.mx

Web: www.fertimexico.com

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