Universidad de Sonora

Departamento de Ingeniera Qumica y

Metalurgia




Introduccin a los Bioprocesos


Mtodos de Crecimiento Celular
2013
Profesor(a): Guerrero German Patricia
Alumno(a): Felix Felix Yesenia
05/02/2013
Mtodos de Crecimiento Celular

Introduccin:

El crecimiento microbiano es el incremento ordenado de todos los constituyentes celulares que
conducen a un aumento de masa y finalmente un aumento del nmero de clulas.
Como las poblaciones bacterianas suelen ser muy grandes, la mayora de los mtodos de
cuantificacin se basan en mediciones directas o indirectas de muestras muy pequeas, despus
se determina con clculos el tamao de la poblacin total.
El crecimiento de poblaciones microbianas puede medirse de diferentes maneras. Algunos
mtodos determinan el nmero de clulas y otros la masa total de la poblacin, que a menudo es
directamente proporcional al nmero de clulas.
La magnitud de la poblacin normalmente se registra como el nmero de clulas que hay en un
mililitro de lquido o en un gramo de material slido. Cmo las poblaciones bacterianas suelen ser
muy grandes, la mayora de los mtodos de cuantificacin se basan en mediciones directas e
indirectas de muestras pequeas; despus se determina mediante clculos el tamao de la
poblacin total.
Por lo tanto para el estudio de los Mtodos de Crecimiento Celular, clasificamos de la siguiente
manera:
Mtodos Directos:
Recuentos en placa:

Es el mtodo utilizado con mayor frecuencia para la medicin de poblaciones bacterianas. Una
ventaja importante de esta tcnica es que mide el nmero de clulas viables. Una desventaja es
que se requiere bastante tiempo, por lo general ms de 24 horas para que se formen colonias
visibles.
El recuento en placa se basa en la suposicin de que cada bacteria crece y se divide para producir
una sola colonia. Esto no siempre es cierto porque las bacterias con frecuencia crecen unidas en
cadenas o como grumos, estas son llamadas Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
Cuando se realiza el recuento en placa es importante que crezca slo un nmero limitado de
colonias en la placa. Cuando hay demasiadas colonias algunas clulas se encuentran apiadas y no
pueden desarrollarse; lo que causa inexactitud en el recuento.









Recuentos en placa y disoluciones seriadas




Imagen 1.1 En las disoluciones seriadas el inoculo original se diluye en una serie de tubos. En
nuestro ejemplo, cada tubo de disolucin tendr slo una dcima parte del nmero de clulas
microbianas del tubo que lo precedi.


Placa vertida y diseminacin en placa:
Placa vertida.- En este mtodo se inocula 1.0 mL o 0.1 mL de disoluciones de la suspensin
bacteriana en una caja de petri. El medio nutritivo se mantiene a 50C, se vierte sobre la muestra,
que luego se mezcla en el medio con una agitacin suave de la placa. Cuando el agar se solidifica,
la placa se incuba.
Esta tcnica tiene algunos inconvenientes, porque ciertos microorganismos relativamente
sensibles al calor pueden resultar daados por el agar fundido y por consiguiente ser incapaces de
formar colonias.
Diseminacin en Placa.- Sobre la superficie del medio previamente vertido y solidifcado se coloca
0.1 Ml de inculo, el que se extiende sobre la superficie del medio con una varilla de vidrio
esterilizado.


Imagen 1.2. Mtodos
para la preparacin de
placas para el cuento.













Filtracin:
Utilizado cuando la cantidad de bacterias es muy baja, como en lagos o ros con corrientes
relativamente limpias.
El procedimiento se basa en hacer pasar 100 mL de agua a travs de un filtro en una membrana
delgada cuyos poros son demasiado pequeos como para permitir el paso de bacterias, que
entonces son tamizadas y retenidas en la superficie del lquido. Este filtro se transfiere a una caja
de petri que contiene una almohadilla embebida en un medio nutritivo lquido, donde las colonias
surgen de las bacterias presentes en la superficie del filtro.
Este mtodo se aplica con frecuencia para la deteccin y cuantificacin de bacterias coliformes,
que son indicadores de la contaminacin fecal de alimentos o el agua.


Recuento Macroscpico Directo:
Un volumen medido de la suspensin bacteriana se coloca dentro de un rea definida en el porta
objeto.
Esta es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza un equipamiento fcilmente disponible en
un laboratorio de microbiologa. Para estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de
recuentos, aunque tambin pueden realizarse a partir de muestras filtradas en membranas y
transparentadas o teidas con colorantes fluorescentes (Naranja de acridina).
La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener reproducibilidad en el llenado de la cmara
con lquido. Otra dificultad es la adsorcin de las clulas en las superficies del vidrio, incluyendo
pipetas. Esta adsorcin es crtica en el proceso de dilucin de la muestra y se minimiza al realizar
las diluciones en medios de alta fuerza inica (solucin fisiolgica o medios mnimos sin fuente de
carbono).


Mtodos Indirectos
No siempre es necesario contar las clulas microbianas para estimar su nmero. En la ciencia y en
la industria se determinan tambin las poblaciones microbianas o su actividad por alguno de los
siguientes mtodos indirectos.

Turbidimetra:
Para algunos tipos de trabajo experimental la determinacin de la turbidez es un mtodo prctico
para controlar el crecimiento bacteriano.
Cuando las bacterias se multiplican en un medio lquido este se torna turbio o nebuloso por las
clulas.

Imagen 1.4
Espectorfotmetro (
colormetro). En este un haz
de luz se transmite a travs
de un suspensin bacteriana
a una clula fotoelctrica.
Cuando la cantidad de
bacterias aumenta, menos luz
alcanza la clula
fotoelctrica. Este cambio de
luz se registra en la escala del
instrumento como porcentaje
de transmisin
Medicin logartmica del
instrumento llamada absorbancia que se utiliza para graficar el crecimiento bacteriano. Cuando las
bacterias estn en fase logartmica de crecimiento la representacin de la absorbancia frente al
tiempo forma una lnea recta.

Actividad Metablica:
Este mtodo supone que la cantidad de cierto producto metablico, como el cido CO2 es
directamente proporcional a la cantidad de bacterias presentes.

Peso Seco:
El sistema consiste en la filtracin del cultivo a travs de una membrana que retenga las clulas y
su posterior desecacin hasta peso constanet. El sistema, obviamente, no diferencia clulas vivas
de muertas y su sensibilidad es limitada.
En el caso de las bacterias filamentosas y los mohos los mtodos habituales de medicin son
menos satisfactorios.
En los recuentos en placa de los actinomicetos y los hongos filamentosos se cuenta el nmero de
esporas asexuales. Esta no es una buena medida de crecimiento.
Como ejemplo tenemos que, una de las mejores formas de medir el crecimiento de los organismos
filamentosos es por el peso seco:
1. Se extraen los hongos del medio de crecimiento
2. Se los filtra para eliminar el material extrao
3. Se les seca en un desecador
4. Se pesan
En el caso de las bacterias se sigue el mismo procedimiento bsico.


Bibliografa:
Microbiologa. Gerard J. Tortora,Berdell R. Funke,Christine L. Case