PROCESO ESTRATEGICO

SUBPROCESO ACTIVIDAD
CONTROL DE LA SANIDAD ANIMAL DEL PAIS

CODIGO
GR-I-SA-BR (I) 003
NOMBRE

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE BRUCELOSIS PARA ENVIO A LABORATORIO







SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD


OBJETIVO

Establecer los requisitos para toma, identificacin, conservacin y envo de sueros sanguneos y de leche, al
laboratorio de diagnstico del ICA o a un laboratorio autorizado por el Instituto.

1. GENERALIDADES

Las muestras de sangre para la obtencin de sueros para el diagnstico de brucelosis, se recolectan para
las siguientes pruebas diagnsticas:

Prueba de Aglutinacin Rosa de Bengala (RB).
Tcnica Inmunoenzimatica Indirecta (ELISA-i) para la deteccin de anticuerpos contra Brucella
abortus en suero de bovinos.
Prueba de Elisa Competitiva Frente a s-LPS de Brucella abortus.
Fluorescencia Polarizada ( FPA)

Las muestras de leche de hembras bovinas para la obtencin de sueros para el diagnstico de brucelosis,
se recolectan nicamente para la prueba diagnstica de ELISA Indirecta.

Se realiza toma de muestras serolgicas y de leche para:

Certificacin de fincas libres.

Recertificacin de fincas libres.

Fincas en proceso de saneamiento.

Movilizacin de bovinos y otros animales susceptibles (Resolucin vigente sobre el tema) con
propsitos de:

Participar en concentraciones de animales como: Eventos deportivos, recreativos, Ferias comerciales,
exposicin, mercado ganadero, remates y subastas.

Movilizar intra e interdepartamentales.

Movilizar a fincas y zonas libres de Brucelosis Bovina

PRUEBAS DIAGNSTICAS PARA BRUCELOSIS EN COLOMBIA

Las pruebas para diagnosticar la Brucelosis Bovina en Colombia son:

Pruebas directas:

Permiten identificar el agente etiolgico en una muestra del paciente o el animal enfermo. Se realiza a partir
de muestras de lquido del cuarto estmago del feto abortado, placenta, pulmn, bazo, leche, sangre y otros
lquidos. Se deben conservar en refrigeracin y enviarse al laboratorio lo antes posible. El porcentaje de
aislamiento depende de varios factores como la frescura de la muestra, el mtodo de transporte, la asepsia
en el momento de tomarla, la temperatura a la que se envi y el manejo de la misma en el laboratorio.

Cultivo bacteriolgico y tipificacin (Realizadas nicamente en los Centros de Diagnstico del ICA)

PROCESO ESTRATEGICO

SUBPROCESO ACTIVIDAD
CONTROL DE LA SANIDAD ANIMAL DEL PAIS

CODIGO
GR-I-SA-BR (I) 003
NOMBRE

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE BRUCELOSIS PARA ENVIO A LABORATORIO







SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD


Pruebas indirectas:

Buscan la presencia de anticuerpos especficos anti-brucella en el suero del animal enfermo o infectado.
Como en ocasiones no es posible esperar el tiempo que se requiere para obtener un aislamiento de brcelas
y ste no siempre se logra, con gran frecuencia se recurre a las pruebas indirectas para establecer el
diagnstico.

Durante la fase bactermica de la brucelosis el animal afectado genera niveles importantes de anticuerpos
contra la bacteria.

La bsqueda de estos anticuerpos especficos para Brucella en muestras sospechosas, se efectan en
forma rutinaria como la mejor alternativa dado que el aislamiento por cultivo del agente, es un proceso
costoso, prolongado, de baja sensibilidad y que muchas veces brinda resultados fuera de oportunidad.

Los mtodos serolgicos utilizan como antgeno a la bacteria inactivada completa y determinan la presencia
de anticuerpos aglutinantes, que son los primeros en aparecer despus de la infeccin.

Los anticuerpos inducidos estn dirigidos principalmente al lipopolisacrido (LPS) de la superficie bacteriana
y corresponden a las tres clases principales de inmunoglobulinas (IgM, IgG e IgA).

Lo ideal en una prueba diagnstica indirecta, es que tenga las siguientes propiedades:
Que detecte infeccin en perodo de incubacin: alta sensibilidad.
Que no presente influencia en sus resultados por anticuerpos inespecficos. Alta especificidad
Que tengan la capacidad para detectar portadores crnicos. Alta sensibilidad.
Que diferencie animales vacunados de infectados. Alta especificidad.

Las pruebas indirectas son:

Prueba de Aglutinacin Rosa de Bengala (RB)
Prueba de Fijacin del Complemento (FC)
Tcnica Inmunoenzimatica Indirecta (ELISA-i) para la deteccin de anticuerpos contra Brucella abortus
en suero de bovinos
Prueba de Elisa Competitiva Frente a s-LPS de Brucella abortus
Prueba de Elisa Indirecta para la deteccin de anticuerpos Anti Brucella abortus en leche bovina.
Prueba de Fluorescencia Polarizada para la deteccin de anticuerpos contra Brucella abortus en suero
de bovinos.

El ICA estableci que las pruebas de: Aglutinacin Rosa de Bengala, Inmunoenzimatica Indirecta (ELISA-i)
para la deteccin de anticuerpos contra Brucella abortus en suero de bovinos y Elisa Indirecta para la
deteccin de anticuerpos Anti Brucella abortus en leche bovina, pueden ser realizadas por laboratorios
autorizados.

PROCEDIMIENTO PARA LA TOMA DE MUESTRAS
SANGRA
Debido a que la contaminacin interfiere sustancialmente con el diagnstico, por estar directamente implicada
con la degradacin de los anticuerpos, las muestras deben tomarse aspticamente.
Los factores ms importantes a considerar en la toma de muestras se describen a continuacin:

PROCESO ESTRATEGICO

SUBPROCESO ACTIVIDAD
CONTROL DE LA SANIDAD ANIMAL DEL PAIS

CODIGO
GR-I-SA-BR (I) 003
NOMBRE

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE BRUCELOSIS PARA ENVIO A LABORATORIO







SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD


Edad
Para la serologa en brucelosis es aconsejable tomar muestras de sangre a la edad aproximada de
24meses, ya que para esta poca los animales que han sido vacunados reglamentariamente entre
los 3 y 8 meses de edad con la cepa 19 de Brucella abortus, no deben presentar ttulos de
anticuerpos.
Las muestras tomadas antes de los 24 meses de edad pueden presentar anticuerpos residuales post-
vacunales.
Inmediatamente despus de la vacunacin con la cepa 19, los ttulos serolgicos aparecen en la
mayora de animales, pero la presencia o ausencia de un ttulo de anticuerpos, no asegura que el
animal est protegido, ya que la proteccin a la infeccin, en gran medida es de tipo celular, ms que
humoral.
Es importante tener en consideracin la toma de muestras de sangre antes de la entrada del animal a
servicio reproductivo, para confirmar la ausencia de reactividad serolgica o bien determinar, si existe
ttulo serolgico, si ste es post-vacunal, condicin que se debe confrontar con el certificado de
vacunacin, o verificar con la prueba confirmatoria especializada ELISA competitiva.
En el caso de vacunacin con cepa de Brucella abortus RB51 no se presenta seroconversin, por lo
tanto las muestras pueden ser tomadas en cualquier edad post vacunacin.
Con relacin a la toma de muestras post parto o post aborto, en ocasiones la muestra puede ser
negativa o presentar un ttulo bajo, debido a la utilizacin de los anticuerpos a nivel local en el aborto o
por la transmisin pasiva de IgG1 al calostro, por lo cual es recomendable la evaluacin de la situacin
del animal por comparacin del nivel de anticuerpos con una muestra de suero tomado en los 2 a 3
meses posteriores. En cualquiera de los dos casos, el usuario debe informar claramente las fechas del
parto o del aborto, y la de obtencin de la muestra de suero.

Debido a que la contaminacin interfiere sustancialmente con el diagnstico, por estar directamente
implicada con la degradacin de los anticuerpos, las muestras deben tomarse aspticamente.
REQUISTOS DE BRUCELOSIS PARA LA MOVILIZACION DE ANIMALES

El ICA mediante Resoluciones 1192 del 18 de abril de 2008 y 1634 de 2010 a los que llegasen a
modificarlas, establecen los requisitos para la movilizacin de animales, definiendo la prueba serolgica a
que deben someterse. Ver ANEXO 1 (Requisitos de brucelosis para la movilizacin de animales).














PROCESO ESTRATEGICO

SUBPROCESO ACTIVIDAD
CONTROL DE LA SANIDAD ANIMAL DEL PAIS

CODIGO
GR-I-SA-BR (I) 003
NOMBRE

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE BRUCELOSIS PARA ENVIO A LABORATORIO







SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD


2. DESCRIPCIN DE TAREAS

NO. RESPONSABLE TAREA RESULTADO
1
Mdico
Veterinario ICA
PREPARACION DEL MATERIAL:
El material requerido para la toma de muestras, se debe
preparar con anticipacin teniendo en cuenta el nmero de
animales a sangrar y los predios a visitar. Adems se debe
disponer de material y verificar que todo este limpio y
completo. Debe disponer de overoles, botas limpias y
desinfectantes.


Material para
toma de
muestras
2
Mdico
Veterinario ICA
IDENTIFICACIN DE LAS MUESTRAS
La identificacin de los tubos de recoleccin de sangre
deber ser diligenciada en el momento inmediatamente
anterior a la toma de la muestra.
Se prefiere el uso de marcadores indelebles sobre cinta de
enmascarar o cualquier medio que garantice que no van a
perder accidentalmente la identificacin durante la
manipulacin de los recipientes.

La identificacin de los animales (Nombre o nmero de la
chapeta o placa) en los tubos debe ser clara y no sujeta a
posibles ambigedades en la lectura como la posicin del
tubo o letra ilegible. Se debe tener en cuenta que muestras
no identificadas no sern procesadas en el laboratorio.




Tubos para
toma de
muestras
identificados
3
Mdico
Veterinario ICA
SANGRA
Se toma una muestra de 7 a 10 ml de sangre a partir de la
vena yugular o de la arteria caudal, con el sistema de tubos
al vaco con sus respectivas agujas o con jeringa estril y se
deposita en el tubo estril sin anticoagulante. Cuando utilice
este sistema, evite la hemlisis retirando la aguja antes de
depositar la sangre en el tubo y permitiendo que sta se
deslice por las paredes del mismo.
Despus de la sangra los tubos deben colocarse en
gradillas y en termos apropiados.





Muestras de
sangre
4
Mdico
Veterinario ICA
OBTENCIN DE SUEROS SANGUNEOS
Una vez tomada la muestra de sangre se puede dejar a
temperatura ambiente o llevarse a incubadora durante 30
minutos entre 36 y 37C hasta que se forme el cogulo.
Posteriormente, la muestra se mantiene durante una o dos
horas en refrigeracin entre 5 y 8C para lograr la
retraccin completa del cogulo.

Las muestras de sangre total deben coagular completamente
antes de retirar el suero.

Si se dispone en la oficina local de centrfuga, las sangres
deben ser centrifugadas entre 1300 a 2000 gravedades














PROCESO ESTRATEGICO

SUBPROCESO ACTIVIDAD
CONTROL DE LA SANIDAD ANIMAL DEL PAIS

CODIGO
GR-I-SA-BR (I) 003
NOMBRE

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE BRUCELOSIS PARA ENVIO A LABORATORIO







SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD


durante 10 minutos, al cabo de los cuales el suero puede ser
recolectado por inversin del tubo o mediante extraccin con
micropipeta empleando micropuntas individuales
desechables.

Aspirar con pipeta el suero sobrenadante obtenido por
centrifugacin y transferir a un tubo estril tubo tipo
eppendorf (Vial), previamente identificado con el mismo
nmero del tubo Vacutainer de origen. La identificacin
debe ser hecha en esparadrapo pegado al tubo con esfero
de tinta indeleble.

La centrifugacin y transferencia de los sueros a los frascos
eppendorf deben ser realizadas en ambiente cerrado y
limpio de tal forma que se evite la contaminacin. Si no se
dispone de centrfuga, recoger el suero con una pipeta una
vez desprendido el coagulo.

En caso de no disponer de centrfuga las muestras deben
ser enviadas en el menor tiempo posible al laboratorio de
diagnstico del ICA o a uno autorizado por el Instituto.
Suero
sanguneo
5
Mdico
Veterinario ICA
TOMA DE MUESTRAS EN LECHE
Las muestras de leche de animales individuales deben
tomarse de forma asptica, los primeros tres a cuatro
chorros deben descartarse. La muestra debe recolectarse
en frascos o tubos estriles de 15 ml, empleando un
recipiente para cada cuarto o realizando una mezcla de los
cuartos hasta obtener el mismo volumen.

De igual forma se puede realizar un pool de muestras hasta
de 15 vacas y obtener una muestra de 15 ml.

Para la recoleccin se deben emplear preferiblemente tubos
o frascos con tapa de rosca o tapas que aseguren el cierre
hermtico e impidan el escape de la muestra.

El perodo mximo transcurrido entre la recoleccin, el
envo y recibo en el laboratorio, no debe superar las 24
horas.

Para el envo de muestras que supere las 24 horas para su
arribo al laboratorio se debe emplear como preservante una
solucin de formalina en concentracin final del 0.01%

Regularmente la formalina se consigue comercialmente en
concentracin entre el 36% y el 37% de pureza, a partir de
ella preparar la Solucin de Trabajo al 0.28%, mezclando
7,5ml de formalina (al 37%) con 992.5 ml de agua destilada.
El volumen de uso es de 0.5ml de la Solucin de Trabajo,
Muestras de
leche
PROCESO ESTRATEGICO

SUBPROCESO ACTIVIDAD
CONTROL DE LA SANIDAD ANIMAL DEL PAIS

CODIGO
GR-I-SA-BR (I) 003
NOMBRE

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE BRUCELOSIS PARA ENVIO A LABORATORIO







SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD


por cada 15 ml de leche recolectada. Los recipientes de
recoleccin deben ir preparados con el volumen de la
solucin de formalina lista:

Para tubos de 15 ml de leche (muestras de leche
provenientes de animal individual o muestra de pool de
hasta 15 vacas: usar 0.5ml de Solucin Trabajo de
formalina al 0.28%.

Para frascos de 250 ml (muestras de leche provenientes de
tanques de acopio de 400 litros): usar 8.3 ml de Solucin
Trabajo de formalina al 0.28%

Se debe tener cuidado especial durante el traslado de las
muestras de leche al laboratorio, ya que no pueden
congelarse, calentarse o agitarse violentamente.

No deben enviarse al laboratorio muestras de leche cortada,
ni calostro.

6
Mdico
Veterinario ICA
ENVIO DE MUESTRAS
Una vez tomadas las muestras serolgicas y de leche, stas
deben ser remitidas para su anlisis a los a los centros de
diagnstico del ICA o los laboratorios autorizados por el ICA,
los cuales se clasifican en:

1. Laboratorios autorizados para realizar la prueba de
Aglutinacin Rosa de Bengala.

2. Laboratorios autorizados para realizar la prueba de
Aglutinacin Rosa de Bengala y la prueba de Elisa Indirecta
en suero sanguneo.

3. Laboratorios autorizados para realizar la prueba de
Aglutinacin Rosa de Bengala y la prueba de Elisa Indirecta
en suero sanguneo y en leche.




Muestras
sanguneas o
de leche
enviadas al
laboratorio de
diagnstico

3. FORMAS

FORMA 3-246 Solicitud de Anlisis Serolgico de leche para Brucelosis.
FORMA 3-088 A Gua Sanitaria de Movilizacin interna de animales.
4. ANEXOS
ANEXO 1: Requisitos de brucelosis para la movilizacin de animales.