1) Describa otros mtodos para determinacin de hormonas

RADIOINMUNOANLISIS

Es una tcnica inmunolgica propuesta en 1959 porYallow y Berson, que tiene
una gran aplicacin en clnica.
Permite la cuantificacin exacta de compuestos biolgicos presentes en el
organismo en concentraciones tan bajas como ng/ml (nanogramo=10-9 g) o
incluso de pg/ml (picogramo=10-12 g), incluso hacerlo en mezclas con enormes
cantidades y diversidad de materiales extraos, por lo que no es necesario
purificar previamente la muestra.
El radioinmunoanlisis se basa en una reaccin antgeno-anticuerpo.
Los anticuerpos deben ser especficos contra la substancia que queremos
determinar, y tener una gran afinidad.
La cantidad de anticuerpo aadida al anlisis es limitada, e inferior a la cantidad
de antgeno total. Por lo que va a quedar saturado con l.
El antgeno es la hormona (de la muestra) que queremos determinar, (antgeno
fro). Adems del antgeno (hormona) presente en la muestra problema, se va a
aadir una cantidad constante y conocida de antgeno pero marcado (antgeno
caliente). Los antgenos marcados se forman sustituyendo algunos de los tomos
normales del antgeno por los correspondientes istopos radiactivos (H3=tritio,
P32), o introduciendo radioistopos extraos en la molcula (yodo=I125 unido a
un resto de TYR).
Los dos tipos de antgenos, fro y caliente, van a competir, en igualdad de
condiciones, por unirse con el anticuerpo disponible.
Las concentraciones del antgeno marcado y del anticuerpo son constantes, la
nica variable del sistema es la concentracin de antgeno no marcado (muestra
problema). Cuanto mayor sea la cantidad de antgeno fro en la muestra problema,
este desplazar al antgeno caliente y por tanto se fijarn al anticuerpo cantidades
menores de antgeno marcado.As pues, la formacin de complejos radiactivos
(Ag*-Ac) vara en funcin de la concentracin del antgeno no marcado: a mayor
concentracin de antgeno no marcado, mayor formacin de complejos antgeno-
anticuerpo no marcados, y menor formacin de complejos radiactivos, y viceversa.

ENZIMOINMUNOANLISIS (EIA)

Son tcnicas inmunoqumicas cuantitativas basadas en reacciones
antgenoanticuerpocomo en el RIA, y siguiendo un protocolo experimental similar.
La diferencia consiste en que, en este caso, el marcaje se hace con un enzima
en vez de con un istopo radiactivo. Se puede marcar tanto el antgeno como el
anticuerpo (hay distintas estrategias). La cuantificacin se hace, por tanto,
basndose en la medida de la actividad del enzima marcador.
Tras la formacin del complejo antgeno-anticuerpo, en el momento adecuado, se
aade un sustrato que es catalizado por el enzima transformndose en un
coloreado lo que permite la medida de la actividad enzimtica con compuesto
ayuda de un espectrofotmetro. Esta medida de la actividad nos servir para
calcular la concentracin de la molcula problema.
Al igual que en el cado del radioinmunoanlisis es necesario elaborar una curva
patrn.Con objeto de aumentar la sensibilidad de este anlisis es frecuente utilizar
el sistema biotina-streptavidina, que acta como mecanismo multiplicador. As,
porejemplo, el anticuerpo est unido a varias molculas de biotina (vitamina).
Cada molcula de biotina se une especficamente a varias molculas de
estreptavidina(similar a la avidina de huevo, pero de origen bacteriano y mayor
afinidad). El enzima est unido a la streptavidina. De esta forma se consigue un
efecto multiplicador de la seal. (Ej. 3 molculas de biotina por anticuerpo x 4
molculas de streptavidina, cada una con un enzima, se unen a cada molcula de
biotina= 12- enzima en vez de una). Las tcnicas enzimticas presentan
numerosas ventajas respecto alradioinmunoanlisis (RIA):

no utilizan compuestos radiactivos lo que facilita la manipulacin y evita la
necesidad de instalaciones y licencias especficas)
reactivos de larga duracin
posibilidades de automatizacin (estaciones automticas ELISA)
gran sensibilidad

Los EIA pueden ser de dos tipos:

Homogneos y heterogneos.
Los ensayos homogneos no requieren lavado o separacin fsica de las
sustancias reaccionantes antes de medir la actividad enzimtica.
Los ensayos heterogneos s necesitan la separacin fsica de los
reaccionantes en las fracciones libre y ligada antes de la determinacin de la
actividad del enzima marcador.

FLUOROINMUNOANLISIS (FIA)

Esta tcnica sigue un protocolo bsicamente igual al descrito para EIA, con la
diferencia de utilizar como marcador una molcula fluorescente o un sustrato
que por la accin de un enzima se transforma en una molcula fluorescente. La
lectura de fluorescencia es utilizada para el clculo de los resultados en la misma
forma que en RIA.

NOTA: Las molculas fluorescentes son aquellas que al ser excitadas por una
radiacin con una longitud de onda determinada, inmediatamente emiten una
radiacin con una longitud de onda mayor que es medida por un
espectrofluormetro. (fluorescencia es distinto que fosforescencia).

QUIMIOLUMINOINMUNOANLISIS

Esta tcnica sigue un protocolo bsicamente igual al descrito para EIA, con la
nica diferencia de utilizar como enzima ligada un enzima (ej. peroxidasa) que
cataliza la oxidacin de un sustrato adecuado (ej. luminol + perxido de
hidrgeno). Este sustrato, al oxidarse, alcanza un estado de excitacin electrnica,
y al volver posteriormente los electrones a sus rbitas primitivas de menor energa,
emiten la diferencia en forma de energa luminosa (=luminiscencia).Esta energa
luminosa es medida en un luminmetro. La lectura de luminiscencia es utilizada
para el clculo de los resultados en la misma forma que en RIA.

DETERMINACION DE HORMONAS TIROIDEAS

LA DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE (TSH)
Es un anlisis que se realiza por separado o en una peticin general de
bioqumica en la sangre. Mide la cantidad de hormona de origen hipofisario
presente en el suero.

La Tirotropina (TSH) es una hormona glicoproteinica secretada por la glndula
hipofisiaria en su porcin anterior y su determinacin sirve para discriminar que un
problema tiroideo sea de origen primario (del tiroides) o secundario (del
hipotlamo). Actualmente se utiliza la prueba de TSH ELISA no competitiva tipo
sndwich, ya que esta hormona es una molcula grande, es una prueba de
segunda generacin usada para la determinacin de esta hormona hipofisaria y
evaluada mediante curva de calibracin.

Cuando la hormona tiroidea (T4 o T3) est baja, el hipotlamo recibir una orden
de producir ms TSH, y por ello estar elevada ante un problema primario del
tiroides.

Si por el contrario por causa de una hemorragia, un traumatismo o tumor en el
hipotlamo puede bajar esta secrecin y por ello el tiroides no se estimula y bajan
los niveles de T3 y T4, producindose un bocio secundario. Su determinacin
servir de control cuando se administre tratamiento hormonal o regulador de la
funcin tiroidea. Si la TSH alcanza niveles normales es que el tratamiento
sustitutivo o regulador es adecuado en dosis y se llama estado eutiroideo.


La Prueba TSH ELISA esta basada en la tcnica Elisa mtodo sndwich, usando
un anticuerpo monocional anti-TSH altamente especfico que est fijado en la
superficie de los micropocillos. En el primer paso de incubacin, las muestras y el
conjugado enzimtico (anti TSH marcada con peroxidasa) formarn el completo
tipo sndwich el cual se une a la superficie de los micro pocillos para ser fijado al
anticuerpo inmovilizado. Al final de la incubacin el exceso de conjugado
enzimtica y anticuerpos monocionales son eliminados por el lavado. Se agrega el
reactivo sustrato (etapa 2) y el color resultante, el cual cambia a amarillo luego de
agregar la solucin de parada, y es medido fotomtricamente a 450 nm. El
incremento de absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de
TSH en la muestra. La concentracin es evaluada por medio de la curva de
calibracin la cual es establecida con los respectivos calibradores.

LA DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE (T3)
Es un anlisis que se realiza por separado o en una peticin general de
bioqumica en la sangre. Mide la cantidad de hormona tiroidea T3 presente en el
suero sanguneo. La Triyodotironina (T3) es una hormona producida por la
glndula tiroides y juega un papel importante en el control corporal del
metabolismo.
Es determinada mediante el mtodo de ELISA competitiva o directa por ser una
molcula pequea.

Este estudio se realiza como parte de una evaluacin de la funcin tiroidea y el
mdico puede ordenarlo si la persona tiene signos de una enfermedad tiroidea. La
funcin de la glndula tiroides es compleja y depende de la accin de muchas
hormonas diferentes, incluyendo la hormona estimulante de la tiroides (TSH) y la
T4.

Algunas veces, cuando se examina la funcin de la tiroides, puede ser til medir
tanto la T3 como la T4. Por ejemplo, en algunos casos de bocio hipertiroideo la T3
puede estar elevada, pero la T4 puede estar normal. El exmen de sta hormona
mide la T3 que est unida a protenas y libre en la sangre.

La Prueba T3 ELISA est basada en el principio de la unin competitiva entre la
T3 de la muestra y el conjugado de T3-peroxidasa por un nmero limitado de sitios
de unin del anti-T3 unido al pocillo. As la cantidad de conjugado de T3-
peroxidasa que se une al pocillo es inversamente proporcional a la concetracion
de T3 en la muestra.
Luego de la incubacin con la muestra del conjugado de T3-peroxidasa sin unir y
en estado de equilibrio, es removido por el lavado. La solucin de sustrato se
agrega y se desarrolla un color azul. La intensidad de este color, el cual cambia a
amarillo luego de agregar la solucin de parada, es inversamente proporcional a la
cantidad de T3 en la muestra.
La absorbancia de los controles y las muestras es determinada usando un lector
de micropocillos de ELISA a 450 nm.


LA DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE (T3)
es un anlisis que se realiza por separado o en una peticin general de bioqumica
en la sangre. Mide la cantidad de hormona tiroidea T4 presente en el suero
sanguneo. La Tiroxina (T4) es una hormona producida por la glndula tiroides que
regula los procesos metablicos y del desarrollo. Es determinada mediante el
mtodo de ELISA competitiva o directa por ser una molcula pequea.

Su determinacin en sangre sirve para evaluar la funcin de la glndula tiroides. El
aumento de la secrecin de la hormona se observa en estados de hipertiroidismo
(enfermedad de Graves, bocio multinodular txico y adenoma tiroideo txico). Los
valores aumentan igualmente por ascenso de la concentracin de tiroglobulina
(significa mayor capacidad de fijacin) y por incremento de la liberacin de tiroxina
desde las clulas tiroideas (tiroiditis subaguda y tiroiditis de Hashimoto tras las
radiaciones).

La Prueba T4 ELISA est basada en el principio de la unin competitiva entre el
T4 de la muestra y el conjugado T4-peroxidasa por un nmero limitado de uniones
en pocillo con anti-T4. Asi la cantidad de conjugado T4-peroxidasa que se une al
pocillo es inversamente proporcional a la concentracin de T4 que muestra. La
absorbancia de los controles y las muestras es determinada usando un lector de
micropocillos de ELISA a 450 nm. La concentracin de las muestras es interpolada
en la curva generada al utilizar los calibradores de suero de concentraciones.
2) Cules son los significados de resultados de HCG anormales:
La gonadotropina corinica humana puede ser usada como un marcador tumoral,
ya que su subunidad es secretada por algunos cnceres incluyendo, el
seminoma, coriocarcinoma, tumores de clulas germinales, la formacin de molas
hidatiformes, teratoma con elementos de coriocarcinoma, y tumor de clulas
islotes. Por esta razn, un resultado positivo en hombres podra ser una seal de
un cncer testicular El rango normal para un hombre es 0-5 MIU/ml. Variables por
enfermedad: Aumentado: Melanoma, carcinoma de mama, carcinoma de crvix,
carcinoma gastrointestinal, de pulmn, de pncreas o de ovario (produccin
ectpica), cirrosis, lcera duodenal, enfermedad intestinal inflamatoria, mujeres
post menopasicas con insuficiencia renal, tumor testicular no seminomatoso
(70%). Seminoma testicular (50-60% de los pacientes en estadio I), Pre-eclampsia
(mayor concentracin que en un grupo control de mujeres en la misma edad
gestacional). Disminuido: Amenaza de aborto, aborto incompleto, embarazo
ectpico, gestosis o muerte intrauterina.

3) Qu significan los resultados falsos positivos y falsos negativos

Un resultado falso positivo ocurre cuando un profesional de la salud comete un
error en los resultados de una prueba. Esta persona concluye que un resultado es
positivo cuando en realidad no lo es. Generalmente se le pedir que vuelva al
centro de salud mdica o laboratorio clnico para hacerle ms pruebas, como por
ejemplo un anlisis de sangre, embrazo o cualquier otro parmetro que se pueda
medir lo cual afirmar o negar el Diagnstico inicial.
Por lo contrario un resultado Falso negativo es cuando una persona recibe un
resultado negativo de una prueba, pero en realidad est enferma.
Cuando suceden estas cosas, provocan una serie de problemas, ya que si se
recibe una noticia de un resultado Falso positivo, el paciente tiene que someterse
a una serie de pruebas para as reafirmar o eliminar que en realidad existe un
cncer un embarazo o cualquier otro diagnstico.
En los falsos positivos, es necesario realizar pruebas diagnsticas, (con las
complicaciones que eso supone), para confirmar o descartar la existencia de
cncer o cualquier otro diagnostico referente a la prueba que la persona que
realmente estn sanas. En los falsos negativos se deja de diagnosticar a una
persona con cncer con el consiguiente riesgo de que dicho tumor progrese, ya
que no se le administra tratamiento.
EJEMPLO: UN TEST DE EMBRAZO
Falsos negativos: en ocasiones, el test de embarazo ofrece un resultado negativo
(equivocado), aun cuando la mujer confirma despus (por otras vas) la gestacin.
Los falsos negativos se producen, en general, por realizar la prueba demasiado
pronto, ya sea por impaciencia o por un error involuntario en el clculo de la fecha
de menstruacin.
Falsos positivos: son menos frecuentes. Sin embargo, en ocasiones se obtiene
en el test un resultado positivo que luego no se confirma porque resulta falso. El
error se puede producir por ser un diagnstico demasiado precoz aunque,
tambin, por la ingesta de determinados medicamentos para la fertilidad que
contengan la hormona del embarazo, hCG. En otras ocasiones se debe a que no
se ha dejado transcurrir el suficiente tiempo entre el test y un anterior embarazo u
aborto.

4) Enumere tres ventajas que presenta la prueba de embarazo sangunea
sobre la de orina.

a) Pruebas en sangre cualitativas: miden si existe o no HCG en la sangre, es
decir, da un resultado positivo o negativo. Tiene mucha exactitud.
b) Pruebas en cuantitativas: miden la cantidad exacta de hCG en la sangre y
pueden detectar niveles muy pequeos de esta hormona por lo que son
muy exactos. El resultado ser positivo si la concentracin de la hormona
HCG en la sangre supera los 5mlU/ml.
c) Los anlisis de sangre pueden detectar HCG ms cerca del comienzo del
embarazo que las pruebas de orina.