UNIVERSIDAD DE SONORA

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Departamento de Ciencias Qumico Biolgicas

Reporte de Prctica 1
Catalasa
Materia:
Laboratorio de bioqumica
Alumna:

Venancio Valente Brenda Aracelis
Lpez Chavarin Esteban






INTRODUCCIN

El subgrupo 1.11. De la clasificacin de las enzimas incluye protenas que utilizan el
perxido de hidrogeno como oxidante. La catalasa (E.C.1.11.1.6) (perxido de
hidrogeno: perxido de hidrogeno oxireductasa) es una enzima ampliamente
distribuidos en la naturaleza y muy importante pues su funcin es la destruccin del
perxido de hidrogeno, producto de varias oxidaciones biolgicas. Es muy semejante
en estructura y funcin a la peroxidasa.
La descomposicin del perxido de hidrogeno se puede considerar como la oxidacin
de una molcula por otra. De ah que la siguiente ecuacin describa la reaccin:
Catalasa
H
2
O
2
+ H
2
O
2
O
2
O
2
+2H
2
O
La catalasa del hgado adems del perxido de hidrogeno puede utilizar como
sustrato, alquilos de perxido, (R-O-O-R) y como segunda molcula puede utilizar
varias sustancias orgnicas, como donadoras de hidrogeno. Por ejemplo etanol,
formato, acido nitroso, compuestos de tiol y pirogalol.
La enzima comnmente distribuida en las clulas aerbicas, tiene un peso molecular
de 250,000 con cuatro grupos heme y un tomo de hierro en el centro de cada heme.
El mecanismo de reaccin es a travs de la formacin de un complejo catalasa-
perxido de hidrogeno.
Fundamento de la prctica
La reaccin normal se da y rpidamente con solo mezclar perxido de hidrogeno con
sangre diluida 1:50. La catalasa de la sangre es una de las ms activas y est
concentrada prcticamente en los glbulos rojos. Veremos en la prctica, en un tubo
de ensaye la reaccin normal y en otros el efecto de algunos inhibidores como el
cianuro, el nitrato de plomo o el calentamiento a altas temperaturas.
El efecto inhibidor del cianuro se debe a la combinacin de este con el hierro, presente
en la molcula de la catalasa. El nitrato de plomo inhibe por ser
metal por coagulacin de las protenas.
OBJETIVO
Observar la gran actividad de la catalasa normal e inhibida y de la enzima
MATERIALES Y MTODOS
Gradilla
Vaso de precipitados de 500 mL.
Vaso de precipitados de 250 mL.
4 pipetas de 5 mL.
9 tubos de ensaye de 15x150
Pinzas para tubo de ensaye
Mechero, tripie y tela de asbestos
Reactivos
Perxido de Hidrogeno al 3%
Cianuro de sodio al 5%
Nitrato de plomo al 5%
De sangre diluida 1:50
PROCEDIMIENTO
CATALASA

1) En una gradilla coloque cuatro tubos de ensaye numerados del 1 al 4
2) Pipetee 2.0 mL. De perxido de Hidrogeno al 3% a cada uno de los cuatro tubos.
3) Agregue 5 gotas de cianuro de sodio al 5% al tubo nmero 3.
4) Agregue 5 gotas de nitrato de plomo al 5% al tubo nmero 4.
5) En un tubo de ensaye aparte, tome 3 mL. De sangre diluida 1:50 y calintelos en
agua hirviendo por 5 minutos. Agrguelos al tubo nmero 2.
6) Aada 3 mL. De sangre diluida a los tubos 1,3 y 4
7) Agite suave pero rpidamente y lleve los tubos a bao mara a 37 C
8) Djelos estar por 5 minuto, haga sus observaciones y anote los resultados
NOTA: Como la reaccin es muy rpida, la observacin no debe descontinuarse desde
el momento de aadir la sangre, hasta dar por terminada la reaccin al cabo de 2
minutos.


CONCLUSIONES
La deshidrogenasa lctica es una reaccin de xido reduccin. En estas reacciones se
da una transferencia de electrones de una sustancia a otra.
Se observ como en la reaccin puede ser inhibida de diferentes formas, ya sea
mediante sustancias qumicas inhibidoras que afecten el funcionamiento de la enzima
o la elevacin de temperatura que la desactive por completo.
Como fuente de las enzimas obtuvimos de la levadura obtuvimos deshidrogenasa
lctica. De esta forma logramos apreciar en el laboratorio la reaccin de la enzima que
participan en reacciones fisiolgicas activas dentro del cuerpo humano.















CUESTIONARIO

1. Cul es el efecto del cianuro en la reaccin de la catalasa y como se explica el
fenmeno?

La catalasa tiene un peso molecular de 250,000 con cuatro grupos heme y un tomo de hierro
en el centro de cada heme. El cianuro se combina con el hierro presente en la molcula de la
catalasa, por lo tanto tiene un efecto inhibidor.

2. Qu inhibidor es mejor, el cianuro o el nitrato de plomo?

El cianuro porque hizo menos espuma y eso significa que inhibio a las enzimas desde su sitio
activo.

3. Escriba la reaccin de la catalasa, y diga A que se deben las burbujas cuando se
aade sangre al vaso de reaccin?

La reaccin es:
----------->

2H2O2 CATALASA O2 + 2 H2O

As que las burbujas que observamos es la liberacin de O2 producto de la reaccin.

4. Cul es la fuente de la catalasa en la reaccin hecha en el laboratorio?

De los glbulos rojos de la sangre que utilizamos en la prctica.

5. Cul es la funcin normal de la catalasa en el organismo humano?

La conversin del perxido de hidrogeno en agua que se genera como producto secundario de
las reacciones oxidativas de los peroxisomas. Tambin utiliza al perxido de hidrogeno para
oxidar otros sustratos.

6. Por qu la reaccin de la deshidrogenasa lctica se hace ms rpidamente cuando
en nuestro experimento aadimos lactato de sodio?

Porque normalmente la reaccin es muy lenta, as que agregamos mas lactato para que se
acelere la reaccin y podamos ver el cambio de color ms fcilmente.

7. Qu funcin tiene el azul de metileno en la reaccin de la deshidrogenasa lctica?
Explique detalladamente. Qu otro compuesto podra usarse en vez de azul de
metileno?

El azul de metileno se utiliza como aceptor de hidrogeno, pues posee la propiedad muy til de
cambiar de color al pasar de oxidado a reducido. Es azul de metileno cuando esta oxidado y
blanco (incoloro) de metileno cuando esta reducido. El azul de metileno es un indicador de
REDOX no de viraje de pH por lo que podramos utilizar un indicador con la misma propiedad
como el Sal frrica de la 1-10 ortofenantrolina, que cambia de azul palido a rojo. cido
difenilaminosulfnico, de incoloro a violeta











BIBLIOGRAFA

Mathews, Christopher K., Bioqumica, 3a Edicin, Pearson, Pg. 404, 433, 517, 620
George Rendina, Tcnicas de bioqumica aplicada, Editorial Interamericana, 1974,
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http://www.grupomexlab.com/quimica/pdf/8001301.pdf
Vernica Seija, Cocos Gram Positivos: Aspectos prcticos. Recuperado de:
http://www.educa2.madrid.org/web/educamadrid/principal/files/6046b373-a0b6-4737-
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Departamento de Bioqumica, Instituto de Fisiologa Celular, UNAM. Mxico Adelaida
Daz (2002) La estructura de catalasas recuperado de:
http://www.uacj.mx/ICB/RedCIB/REB/2003/06/2003-2_LA%20ESTRUC_.pdf