PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Reacciones cualitativas sobre pigmentos de plantas.

Materiales y reactivos: termmetro, tubos de ensayo, mortero, pipetas, balanza
analtica, papel filtro, etanol al 96%, hidrxido de bario, bencina, acido ascrbico
cristalino, acido clorhdrico al 10%.
Material: hojas de ortiga.

A. Extraccin de pigmentos de las hojas
Fundamento:
El mtodo se basa en la capacidad de la clorofila y de otros pigmentos de pasar a solucin por
la accin de alcohol caliente. La clorofila por interaccin con el alcohol se transforma a
etilclorofilida, que es un ster en el cual el resto de fitol esta sustituido por un resto de etanol
Curso de determinacin:
Se moli 5 gramos de ortiga seca en un mortero, luego aadimos 5mL de etanol. La masa
obtenida la vaciamos en un tubo de ensayo y calentamos en un bao mara de 90C (con
cuidado de que no se evapore), luego filtramos el contenido con papel filtro en un tubo de
ensayo.
B. Fraccionamiento de pigmentos
Fundamento:
El mtodo se basa en la diferente capacidad de los pigmentos de disolverse en algunos
solventes. A los solventes que extraen simultneamente todos los pigmentos de la hoja se los
suele llamar extractantes. Existen otros solventes que presentan afinidad por algunos
pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo la bencidina en donde la clorofila y
clorofilida son solubles, mas no la xantofila.
Curso de determinacin
En un tubo de ensayo se coloco 10 gotas del extracto obtenido y aadimos igual volumen de
bencidina, agitamos cuidadosamente, y observamos la formacin de dos fases.
C. Precipitacin de la clorofila por saponificacin.
Fundamento
El mtodo esta basado en la capacidad de los grupos steres de la clorofila, que por
saponificacin con hidrxido de bario, forman sales de bario de las clorofilidas A y B, insolubles
en agua; el lquido sobre el precipitado tiene color amarillo como consecuencia de la presencia
de caroteno y xantofila en el extracto.

Curso de determinacin:
En un tubo de ensayo se coloco 10 gotas de extracto lquido y luego se aadi 20 gotas de
solucin saturada de hidrxido de bario, se agito cuidadosamente la mezcla.
D. Reduccin de la clorofila con el acido ascrbico
Fundamento
El mtodo se basa en la capacidad del acido ascrbico de reducir la clorofila, como resultado
de esto adquiere una coloracin amarilla.
Curso de determinacin
A un tubo de ensayo se agreg 10 gotas de extracto lquido, 2 gotas de agua y varios cristales
de acido ascrbico, luego se coloco a un bao mara a 70-80C durante 3-5 min.
E. Obtencin de feofitina a partir de la clorofila
Fundamento
El mtodo se basa en la prdida del tomo de magnesio, formando la llamada feofitina, que es
de un color verde oliva con tonos marrones, en lugar del verde brillante de la clorofila. Esta
prdida del magnesio se produce por sustitucin por dos iones H
+
, y consecuentemente se ve
favorecida por el medio cido.
Curso de determinacin
En un tubo de ensayo se agreg 5 gotas del filtrado, luego aadimos una gota cido
clorhdrico.













RESULTADOS Y DISCUSION
A. Extraccin de pigmentos de las hojas
Como resultado se obtuvo un extracto verde, esta coloracin se debe a la presencia de la
clorofila, la cual es un pigmento verde cuyo color predomina sobre los otros pigmentos como
son la xantofila (pigmento amarillo) y caroteno (pigmento naranja).
FOTOS
B. Fraccionamiento de pigmentos
Se observ la formacin de dos fases, orgnica y acuosa, la fase orgnica tuvo una coloracin
verde oscuro, esto se debe a que la clorofila es soluble en bencina la cual acta como solvente
separador ya que los otros pigmentos como la xantofila no son solubles en este solvente,
quedndose en la fase acuosa la cual tomo una coloracin verde limn.










C. Precipitacin de la clorofila por saponificacin.
Como resultado se obtuvo un precipitado color verde esto se debe a la hidrolisis que
experiment los esteres de la clorofila en medio bsico con hidrxido de bario, la estructura
que queda al eliminarse el fitol recibe el nombre de clorofilida, cuyo color es semejante al de la
clorofila, formndose sales de bario de las clorofilidas A y B

FOTOS


FASE ACUOSA
(XANTOFILA)
FASE ORGANICA
(CLOROFILA)
D. Reduccin de la clorofila con el acido ascrbico
Se observ un cambio de coloracin de verde a amarillo despus de haberlo sometido al calor,
esto se debe a la reduccin de la clorofila por la accin del acido ascrbico.











A. Obtencin de feofitina a partir de la clorofila
Como resultado se obtuvo una solucin de color verde oliva-pardo, esto demuestra que se
obtuvo la Feofitina la cual es una alteracin en el color de la clorofila, ya que el ion magnesio
de la clorofila es sustituido por iones H
+
en medio HCl.


Clorofila Feofitina