Exame de Bioqumica Experimental II 06/06/2013

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I. COMPLEXOS DE FERRO
Tinham-se x g de sulfato de ferro amoniacal (frmula qumica) que foram dissolvidas
em gua quente acidificada. De seguida adicionou-se oxalato de potssio, cido oxlico
e agente oxidante. No final obtiveram-se y gramas de produto final.
[Lista com as MM dos elementos qumicos envolvidos. Era necessrio calcular as MM
dos compostos.]
1. Explique o porqu de usar gua quente e acidificada. (0,25 val.)
2. Qual era o reagente oxidante? Escreva as equaes de oxidao, de reduo e
global envolvidas. (0,5 val.)
3. Calcule o rendimento. Escreva a equao geral da sntese qumica descrita. (0,75
val)

Numa outra experincia existiam 3 tubos: tubo 1, 2 e 3 nos quais foram testadas
reaces com Fe(II) e Fe(III). Escreva todos os resultados e observaes registadas.
Justifique em todos os casos.
Sol inicial + Fe3+ NH4SCN NaF KI CCl4
Tubo 1
Tubo 2 -------
Tubo 3 ------- -- --------
[Era uma tabela deste gnero, no me lembro de todas as adies e existiam mais
algumas clulas que no eram para preencher.] (1 val.)

II. MIOGLOBINA
Em 10 g de carne picada, 1% dessa massa era protena e desta, 0,5 mg eram mioglobina.
Assuma que 80% desta estava na forma oxidada e a restante na forma reduzida. A
carne picada foi homogenizada em 10 mL.
[Eles davam os coeficientes de extino molar de cada forma a 409 nm. O da Oxi-Mb
128 mM cm
-1
o outro no sei.]
Massa molecular da mioglobina: 18 kDa
1. Se as protenas absorvem preferencialmente a 280 nm, porque razo que se
fizeram leituras a comprimentos de onda superiores?
2. Qual foi a finalidade da filtrao gel?
3. Calcule a absorvncia esperada a esse comprimento de onda (409 nm).

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III. FTIR, FLUORESCNCIA E ABSORO ATMICA
Existiam 3 grficos, uma a cada temperatura. A observao era que, com o aumento da
temperatura os picos iam ficando mais largos e iam-se desviando para maiores
nmeros de onda (desvio para o azul).
1. Explique o fenmeno observado.
2. Diga qual a origem da banda Amida I.
3. Explicar o desvio de Stokes.
4. Fazer um esboo dos espectros de fluorescncia do Trp em PBS e etanol.
Explicar o comportamento observado.
5. Absoro atmica: Tabela com volumes e intensidades de absoro para o
mtodo da adio padro. Fazer um esboo do grfico e calcular a concentrao
de amostra. A concentrao do padro de ferro era dada (g/mL).

IV. RESPIRAO
Estavam 2 figuras ao lado com duas localizaes possveis para o oxidase alternativo.
Antes (A) e depois (B) do Complexo III. Era tambm apresentado um registo (s linhas
com adies de substratos/inibidores) de elctrodo de oxignio.
1. Comente os resultados apresentados pelo elctrodo de Clark e diga qual a
localizao do oxidase alternativo. Justificar tudo. (2 val.)


V. FOTOSSNTESE
Uma outra imagem com um registo do elctrodo em que j se podiam contar
quadrculas. Cmara reaccional com 2 mL.
2. Qual a reaco que ocorre no elctrodo quando se adiciona ferricianeto de
potssio?
3. Qual a quantidade de O2 formado em ambas as adies. [?] A estequiometria da
reaco anterior verificada?
4. Neste caso (aps a adio do ferricianeto), continua a haver sntese de NADPH?




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VI. INCHAMENTO MITOCONDRIAL
Eram apresentadas duas imagens onde no ocorria inchamento. Numa a adio era de
KCl e na outra de KCH3COO. A valinomicina um ionforo que permite a passagem
dos ies K+ atravs da membrana mitocondrial interna.
1. Explique porque que no ocorre inchamento nas condies anteriores, mesmo
na presena de valinomicina.
2. O que que seria necessrio adicionar, 4 minutos depois, ao ensaio de
KCH3COO para que se observasse inchamento?

VII. PCR (4 valores!)
[Era algo deste gnero.]
Primeira folha: Imagem com um quadro enorme cheio de sequncias.
1. Construa o primer ideal e diga quais as caractersticas relevantes para essa
construo. Indicar extremidades 5 e 3 e qual o reverse e forward.
2. Apresentar o programa de PCR ideia para amplificar o fragmento. Justificar
com as temperaturas, nmeros de ciclos necessrios e o que ocorre em cada
passo. (1+0,8 val)
Segunda folha: Aparecia uma imagem de electroforese (0,8+0,5+0,6 val.)