Adriano Marinho Mria Roberta Rios Thas Nonato de Oliveira
RELATRIO DE AULA PRTICA: Determinao do Nmero de Contaminantes Mtodo Pour Plate
Relatrio apresentado como requisito de avaliao do curso de Farmcia do Centro Universitrio UNA para aprovao em disciplina.
Professor (a): Elzria de Aguiar Nunan Farmcia - 7 P - manh
Belo Horizonte 2014 1
1 INTRODUO
O controle de qualidade microbiolgico de extrema importncia para avaliao de pontos crticos de contaminao e estabelecimento de normas, a fim de se obter produtos de qualidade. definido como conjuntos de procedimentos que asseguram que ensaios necessrios e relevantes sejam executados e que os materiais no sejam liberados para uso, at que a qualidade dos mesmos seja garantida. Produtos contaminados podem causar danos sade do consumidor e podem levar ao comprometimento do produto final (SILVA E SILVA, 2012). Os testes de qualidade avaliam caractersticas microbiolgicas e fsico- qumicas de matrias primas e produtos acabados. Os resultados encontrados devem estar de acordo com as especificaes farmacopeicas, legislaes vigentes e artigos cientficos (SILVA E SILVA, 2012). Buscando estabelecer rgidos parmetros da qualidade em todas as etapas de fabricao dos produtos manipulados, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), determina que seja cumprida a Resoluo da Diretoria Colegiada (RDC) n 67, de 8 de outubro de 2007, a qual dispe sobre as boas prticas de manipulao das preparaes magistrais e oficinais em uso humano em farmcia (SILVA E SILVA, 2012). O mtodo de Pour Plate ou plaqueamento em profundidade utilizado para investigar a qualidade dos produtos do ponto de vista microbiolgico, permite a contagem de bactrias e fungos. O princpio do mtodo se baseia na afirmao de que cada clula microbiana presente no produto testado (amostra) ir formar em meio slido apropriado, uma colnia visvel e isolada (DOMINGUES et al, 2007).
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2 OBJETIVO Avaliar o nmero total de microorganismos (bactrias mesfilas aerbias e fungos) presentes em um determinado produto (Shampoo Palmolive).
3 METODOLOGIA Inicialmente, desinfetou-se a embalagem do shampoo Palmolive com lcool a 70% e algodo e foi realizada a agitao manual do frasco. Com auxilio de uma pipeta, transferiu-se 10 mL da amostra para um erlenmeyer devidamente identificado, contendo 90 mL de soluo salina peptonada e tamponada (SSPT) estril com o neutralizante Tween 80 a 3,0% + lecitina a 0,3% j adicionado previamente (tabela 1). Logo aps mediu-se o pH da soluo que se encontrava com pH 7,0 e agitou-se at total dissoluo da amostra, obtemos assim, a diluio 10 -1 . Conservante Neutralizante Formaldedo Histidina 0,1 % Produtos que liberam cloro (hipoclorito de sdio) Tiossulfato de sdio 0,5 % Sais de amnio quaternrio (cloreto de benzalcnio) Tween 80 a 3,0 % + lecitina a 0,3 % Fenis e derivados (nipagin, nipazol) Tween 80 a 1,0 % Tensoativos anfteros (sabes e detergentes) Tween 80 a 3,0 % + lecitina a 0,3 % Metais pesados orgnicos ou ionizados (timerosal) Cistena 0,1 % Tabela 1: tipos de conservantes e seus neutralizantes utilizado Dando continuidade prtica, transferiu-se 1 mL da diluio 10 -1 para um tubo de ensaio contendo 9 mL de SSPT, ento obtemos a diluio 10 -2 . A partir da diluio 10 -2 , foi feita a diluio 10 -3 ao adicionarmos em um tubo de ensaio contendo 9 mL de SSPT, 1 mL da diluio 10 -2 . 3
Transferiu-se 1mL da diluio 10 -2 para tubo de ensaio contendo 9 mL de SSPT obtendo-se a diluio 10 -3 . Por fim, transferiu-se 1mL desta soluo a 10 -3 para tubo de ensaio contendo 9 mL de SSPT obtendo-se a diluio 10 -4 . De acordo a tcnica de semeadura em profundidade descrita na Farmacopeia Brasileira V ed. colocou-se em placas de Petri estreis uma alquota de 1 mL de cada diluio em duplicata, contendo a amostra, e verteu-se 20 mL de gar casena-soja (previamente fundido e resfriado a 45 C). O mesmo procedimento foi realizado para anlise de fungos e leveduras, no entanto, utilizou-se gar sabouraud-dextrose (previamente fundido e resfriado a 45 C). As placas de anlise para bactrias foram incubadas em estufa por 3-5 dias a 35 C e temperatura ambiente por 5-7 dias a 25 C para fungos.
4 RESULTADOS E DISCUSSO
O Shampoo Palmolive utilizado na anlise possui entre seus ingredientes dois conservantes (Figura 1): Hidantona de DMDM (dmdm hydantoin), um derivado de formaldedo e Metilisotiazolinona (methylisothiazolinone), um derivado de isotiazolinona ou de isotiazolina. Sabe-se que necessria a neutralizao do agente conservante presente no produto para que o controle quantitativo e qualitativo possam ser representativos, porm, provvel que o neutralizante utilizado no tenha ao aqueles conservantes presentes no produto pois seria necessrio adicionar Histidina 0,1% para neutralizar um derivado de formaldedo como a hidantona de DMDM.
Figura 1: Ingredientes do Shampoo Palmolive
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GAR CASENA-SOJA No foi verificado crescimento de nenhum microorganismo em nenhumas das diluies. Este resultado pode ter ocorrido devido ao fato do conservante no ter sido devidamente neutralizado. GAR SABOURAUD-DEXTROSE Nas placas contendo gar sabouraud-dextrose foi verificado crescimento de fungo naquelas com diluies de 10 -2 e 10 -3 , entretanto, o crescimento foi pouco expressivo, j que somente uma colnia se desenvolveu em cada placa. Devemos levar em considerao que os conservantes presentes no produto no foram devidamente neutralizados e que provavelmente interferiram no resultado. Outro fator importante que no deve ser descartado a possibilidade de contaminao da placa durante a realizao da prtica. Diluio 10 -2 -> 1 x 100 = 100 UFC/mL Diluio 20 -3 -> 1 x 1000 = 1000 UFC/mL
4 CONCLUSO
A RDC 481/99 no declara que os cosmticos devam ser totalmente isentos de microorganismos, esta resoluo estabelece um limite de no mximo 5x10 3 UFC/mL, e no podem estar presentes Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, coliformes totais e fecais e Clostridium sulfito redutores. Apesar dos resultados encontrados estarem dentro dos padres especificados pela ANVISA, os mesmo no so confiveis, pois no foi utilizado na realizao da prtica um neutralizante especfico para os conservantes do produto. A partir disso, vale ressaltar que necessrio inibir a atividade dos conservantes durante o controle de qualidade de um produto, a fim de se obter 5
resultados fiis e produtos seguros. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1 BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - ANVISA. Portaria n 481 de 23 de setembro de 1999. Estabelece os parmetros de controle microbiolgico para os produtos de higiene pessoal, cosmticos e perfumes. Disponvel em: < http://portal.anvisa.gov.br/wps/wcm/connect/82f733004aee4c53b7cebfa337abae9d/Resolu%C3% A7%C3%A3o+RDC+n%C2%BA+481+de+27+de+setembro+de+1999.pdf?MOD=AJPERES> Acesso em: 03 de set. 2014.
2 DOMINGUES, Vanessa Oliveira et al. Contagem de bactrias heterotrficas na gua para consumo humano: comparao entre duas metodologias. Revista de Sade, vol. 33, n 1, p. 15-19, Paran, 2007. Disponvel em: < http://cascavel.ufsm.br/revistas/ojs-2.2.2/index.php/revistasaude/article/viewFile/6458/3926 >. Acesso em: 06 set. 2014.
3 SILVA, Maila Fernanda da; SILVA, Lisiane Lange da. Anlise microbiolgica de trs formulaes magistrais. Cadernos da Escola de Sade, vol. 2, n 6, p. 117-130, Curitiba, 2012. Disponvel em: < http://apps.unibrasil.com.br/revista/index.php/saude/article/viewFile/887/761 >. Acesso em: 06 set. 2014.