PRACTICA # 01

1.1 DETERMINACION DE LOS PROCESOS DE

TRANSAMINACION DE LOS L- ALFA AMINOACIDOS.

I . RESULTADOS

I II III IV
C
O
M
P
O
N
E
N
T
E
S

-cetoglutarato 0.2 M -
- 0.3 ml 0.3 ml
L-alanina sol. 0.2 M - - 0.3 ml 0.3 ml
Piruvato de Sodio. 0.2 M 0.3 ml 0.3 ml - -
Arsenito de Sodio 0.1 M 0.4 ml 0.4 ml 0.4 ml 0.4 ml
L-glutamato 0.2 M 0.3 ml 0.3 ml - -
Centrifugado celular hervido - 1.0 ml - 1.0 ml
Centrifugado celular fro 1.0 ml
- 1.0 ml -
1 Observacin



(+)



(-)



(+)



(-)
Incubar
Etanol 6 ml 6 ml 6 ml 6 ml
Centrifugar a 2500 r.p.m. 10'
2 Observacin



(+)



(-)



(+)



(-)
Con el sobrenadante obtenido se realiza la cromatografa para identificar los aminocidos
Soporte: Lquido, papel Eluyente: Fenol, Agua Patrn: Alanina, Glutamato
Revelado Cromatogrfico







Datos:

- Medida de la lnea basal a la lnea del solvente = 8.8 cm
- Medida de la lnea basal a la altura del problema (Alanina) = 4.2 cm
- Medida de la lnea basal a la altura del problema (I) = 2.9 cm
- Medida de la lnea basal a la altura del problema (II) = 1.75 cm
- Medida de la lnea basal a la altura del problema (III) = 3.3 cm
- Medida de la lnea basal a la altura del problema (IV) = 4 cm
- Medida de la lnea basal a la altura del problema (Glutamato)= 2.3 cm

Clculos:


Alanina

Rf
Ala
: 4.2 cm = 0.48
8.8 cm

Tubo I

Rf
Ala
2.9 cm = 0.33
8.8 cm



Tubo II

Rf
Glu
: 1.75 cm = 0.10
8.8 cm


Glutamato

Rf
Glu
: 2.3 cm = 0.26
8.8 cm

Tubo III

Rf
Ala
: 3.3 cm = 0.38
8.8 cm



Tubo IV

Rf
Ala
: 4 cm = 0.45
8.8 cm

II. DISCUSIN

La primera etapa comn del catabolismo de los Aa es la prdida del grupo amino o
desaminacin. ste proceso ocurre en 2 etapas:
1.Reaccin de transaminacin.
2.Reaccin de desaminacin oxidativa.
En la reaccin de transaminacin el grupo amino es transferido a un -cetocido por la accin de
una enzima transferasa especfica (transaminasa) para cada Aa, formando un nuevo Aa y un nuevo
cetocido. Estas reacciones son reversibles y necesitan como cofactor el fosfato de piridoxal (B
6
).
El grupo amino es aceptado por la coenzima y forma piridoxamina -s-fosfato. El fosfato de piridoxal
establece un enlace covalente.
O
O
R
1
OH
-acetocido
+
O
NH
2
R
2
OH
Transaminasa
Fosfato de piridoxal
O
NH
2
R
1
OH
aminocido 1 aminocido 2
O
O
R
2
OH


En la prctica tenemos:
Tubo I:
Piruvato
GPT
L-Alanina


L-Glutamato -cetoglutarato

El arsenito de sodio es un inhibdor de la -cetoglutarato. En este caso la Enzima es la
Glutamicotransaminasa. Al observar el revelado cromatogrfico (que contiene ninhidrina, la cual
reconoce Aa), podemos verificar la reaccin: El piruvato dio como producto al Aa L-alanina y el otro
Aa presente es el L-glutamato (uno de los sustratos), estos 2 Aa se presentan como dos manchas lilas
correspondientes a la altura de los respetivos Aa patrn.

Tubo III:
-cetoglutarato
GPT
L-Glutamato


L-Alanina Piruvato

Como la reaccin es reversible, se podran observar 2 Aa: L-alanina (sustrato) y L-Glutamato
(producto)

En el Tubo II igual que para el Tubo IV se le agreg el centrifugado celular hervido, lo que significa
que la GPT est desnaturalizada y por lo tanto no hay reaccin.
El Rf de la alanina es mayor porque tiene mayor peso molecular.

III. RESUMEN

Para el desarrollo de la presente prctica se uso de 4 tubos de ensayo; colocando en los tubos I
y II los sustratos piruvato y L-Glutamato ms Arsenito de sodio ms centrifugado celular fro
en el tubo I y el centrifugado celular hervido en el tubo II. En el tubo III y IV se coloc -
cetoglutarato ms L-alanina ms Arsenito de sodio ms centrifugado celular fro en el tubo III
y el centrifugado celular hervido en el tubo IV. As mismo se prepar el papel de filtro
respectivo para el procedimiento cromatogrfico emplendose como solvente el fenol- agua y
como revelador la ninhidrina. Luego se midieron las distancias recorridas para cada muestra y
se determin sus Rf.

IV. CONCLUSIONES

i. Las reacciones de transaminacin son reacciones reversibles, en donde un Aa y un
acetocido darn como productos a otro cetocido y otro Aa respectivamente. Esta
reaccin es catalizada por la enzima transaminasa.
ii. El glutamato, producto final de la mayor parte de las transaminasas, acta como dador del
grupo amino especfico. Las transaminasas se encuentran en las mitocondrias y en el
citosol de las clulas eucariotas.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS


1) Murray P, Mayer P, Granner D, Rodwell V. Bioquimica de Harper ed. El Manual
Moderno S.A. de C.V. Mxico 1997.pp 138,149.
2) Vsquez-Contreras, E.: http://loq.unam.mx/~evasquez Universidad Nacional
Autnoma de Mxico 2003.
3) Enciclopedia GER. Aminocidos.
http://www.canalsocial.net/GER/ficha_GER.asp?id=10386&cat=quimica





FECHA: 25/01/07
PROFESOR: Mg. Francisco Avanto Zamora
ALUMNO: Carbajal Muoz Luis Enrique MESA: 1