Facultad de Ingeniera

Escuela de Ingeniera en Bioinformtica

OSMOLARIDAD PLASMTICA Y
PERMEABILIDAD DE
LAMEMBRANA CELULAR






Integrantes:
-Daniela Araya
- Karla Jara
- Hctor Montecino
- Alejandra Verdugo

Profesores:
- Sebastin Zagmutt
- Ulises Novoa

Asignatura:
Fisiologa Animal

Fecha de entrega:
22 de septiembre del 2014

INTRODUCCIN

Como toda clula animal, sta requiere de estar en continuo contacto con el medio exterior,
para ingresar o eliminar sustancias que ella estime necesario. Debido a las caractersticas de
las membranas plasmticas en estas clulas, si bien, son muy permeables al agua, sin
embargo son muy pocas las sustancias que la atraviesan con igual facilidad, esto ocasiona
que cuando exista entrada y salida de ella, alterando la forma de la clula.
Debido a esta razn, ocurren determinados procesos que afectan a nuestras clulas, dentro de
estos procesos se encuentran: la permeabilidad, que es la capacidad de un material para
permitir que un fluido lo atraviese sin alterar su estructura interna. La osmosis, el cual, como
mecanismo de transporte por las membranas, permite la difusin del agua a travs de en una
membrana ms permeable al agua que a los solutos disueltos. A su vez, encontramos la
difusin que es el movimiento neto de molculas desde un gradiente de alta concentracin a
otro de baja concentracin.
No podemos dejar de lado, otro proceso que sucede en nuestras clulas denominado
hemlisis, proceso que se caracteriza por producir una turgencia causada por los glbulos
rojos, ocasionada por las soluciones hipotnicas que hacen que los eritrocitos se hinchen y
pierdan la hemoglobina que se difunde en la solucin salina.
Por lo tanto, en este prctico se darn a conocer diferentes procedimientos que muestras estos
fenmenos en clulas animales, detallando sus principales caractersticas.

MATERIALES Y MTODOS

PROCEDIMIENTO 1:
Se necesitan tener 13 tubos de ensayo grandes y 13 pequeos. Deben ser se rotulador del 1 al
12 y un tubo control H.
En cada uno de los tubos se debe agregar un total de 10 ml entre agua y NaCl.
Luego de tener los 13 tubos preparados se debe agregar 2 gotas de sangre y tapar con papel
parafilm y agitar suavemente.
Se debe dejar reposar los tubos durante 30 minutos a temperatura ambiente.
Transferir 4 ml de cada tubo a los pequeos y llevar a la centrfuga durante 5 minutos a 2000
rpm.
Transferir 1 ml del sobrenadante a unos pequeos tubos especiales para utilizar en el
espectrofotmetro para medir calcula la absorbancia para luego clcular el porcentaje de
Hemlisis.
Realizar clculo de porcentaje de Hemlisis y anotar.
Para el clculo del % de hemolisis, se utiliz la frmula:
(Lectura Absorbancia tubo n x 100)/ Lectura Absorbancia tubo control
Se formul un grfico donde el eje Y presenta el porcentaje de hemolisis y el eje X representa
el porcentaje de concentracin de NaCl.

PROCEDIMIENTO 2:
















RESULTADOS

PROCEDIMIENTO 1: FRAGILIDAD OSMOTICA DEL ERITROCITO
Luego de realizar todos los procedimientos descritos, se procedi a realizar el clculo del
porcentaje de hemlisis, los cuales pueden ser vistos en la siguiente tabla:
Tubo
N
Volumen de
NaCl 1%(ml)
Volumen de
agua (ml)
Concentracin
de NaCl (%)
Hemlisis
(%)
1 8,5 1,5 0,85 1,36%
2 7,5 2,5 0,75 0,57%
3 6,5 3,5 0,65 0,50%
4 6,0 4,0 0,60 0,50%
5 5,5 4,5 0,55 0,22%
6 5,0 5,0 0,50 0,29%
7 4,5 5,5 0,45 4,09%
8 4,0 6,0 0,40 70,25%
9 3,5 6,5 0,35 70,25%
10 3,0 7,0 0,30 99,64%
11 2,0 8,0 0,20 100,00%
12 1,0 9,0 0,10 68,60%
Ctrl H 0,0 10 0,00 56,27%

Tabla 1: Tabla que muestra el porcentaje de hemlisis por cada tubo.

A partir de los resultados obtenidos en la tabla anterior se procedi realizar el grfico de
porcentaje de hemolisis (eje y) versus porcentaje concentracin de NaCl (eje x).

Grfico 1: Porcentaje de hemlisis (eje y) versus porcentaje de concentracin de NaCl (eje x).
PROCEDIMIENTO 2: PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR
1.- Tubo con 5 ml NaCl 150mM:


Figura1.Reaccin de la sangre en
solucin5 ml NaCl 150mM
Observacin:
No se observ hemolisis, puesto de que
transcurri un tiempo de 10 minutos y no
se presentaron cambios en la solucin.

2.- Tubo 5 ml NH
4
Cl 150mM


Figura2.Reaccin de la sangre en
solucin 5 ml NH
4
Cl 150mM
Observacin:
Se observ hemolisis al tiempo de 4
minutos con 52 segundos.

3.- Tubo 5 ml Urea 300mM

Observacin:
En periodo muy breve de
aproximadamente 18 segundos se
observ la hemolisis en la solucin.
Figura3.Reaccin de la sangre en
solucin 5 ml Urea 300mM

4.- Tubo 5 ml Glicerol 300mM


Figura4.Reaccin de la sangre en
solucin5 ml Glicerol 300mM
Observacin:
En un periodo muy breve se observ
hemolisis, est tardo un pocos segundos
ms que la anterior, aproximadamente 37
segundos.

5.- Tubo 5 ml Glucosa 300mM


Figura5.Reaccin de la sangre en
solucin 5 ml Glucosa 300mM
Observacin:
No se observ hemolisis, puesto de que a
los 10 minutos, no se present cambios en
la solucin.

6.- Tubo 5 ml NaCl 50mM:


Observacin:
Se observ hemolisis en un periodo muy
breve de aproximadamente 47 segundos.
Figura6.Reaccin de la sangre en
solucin 5 ml NaCl 50mM

7.- Tubo 5 ml H
2
O destilada

Figura7.Reaccin de la sangre en
solucin5 ml H
2
O destilada
Observacin:
La hemolisis fue observada de manera
instantnea al mezclarse la sangre con la
solucin, no fue medible el tiempo, ya que
transcurri en menos de 1 segundo.


8.- Tubo 2,5ml NaCl 300mM + 2,5 ml NH
4
Cl 300mM


Figura8.Reaccin de la sangre en
solucin2,5ml NaCl 300mM + 2,5 ml
NH
4
Cl 300mM
Observacin:
No se observ hemolisis, puesto de que a
los 10 minutos no se observ cambios en
la solucin.

9.- Tubo 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5ml Urea 600mM


Observacin:
No se observ hemolisis, ya que al
transcurrir 10 minutos no se present
cambios en la solucin.
Figura9.Reaccin de la sangre en
solucin 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5ml
Urea 600mM

10.- Tubo 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5 ml Glucosa 600mM



Observacin:
No se observ hemolisis, ya que al
transcurrir 10 minutos no se present
cambios en la solucin.

11.- Tubo 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5 ml Glicerol 600mM

Observacin:
No se observ hemolisis, ya que al
transcurrir 10 minutos no se present
cambios en la solucin.

12.- Tubo 5 ml NaCl 150mM + Detergente


Observacin:
Se observ hemolisis al tiempo de
aproximadamente 2 segundos.


TABLA RESUMEN
Solucin Volumen-concentracin OsmolaridadmOsmoles/l Tiempo de hemlisis
min seg
1 5 ml NaCl 150mM >10
2 5 ml NH
4
Cl 150mM 4 52
3 5 ml Urea 300mM 18
4 5 ml Glicerol 300mM 37
5 5 ml Glucosa 300mM > 10
6 5 ml NaCl 50mM 47
7 5 ml H
2
O destilada 0
8 2,5ml NaCl 300mM + 2,5 ml NH
4
Cl 300mM >10
9 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5ml Urea 600mM > 10
10 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5 ml Glucosa 600mM > 10
11 2,5 ml NaCl 300mM + 2,5 ml Glicerol 600mM > 10
12 5 ml NaCl 150mM + Detergente 2


Discusin
Explique para cada uno de los 12 casos analizados: A qu se debe el tiempo que tard
en ocurrir la hemlisis? y si no es as, entonces por qu no ocurri?
1. NaCl 150mM: la concentracin salina es aproximadamente isotnica, por lo cual es
difcil que produzca un movimiento osmtico masivo que termine en lisis celular.
2. NH4Cl 150mM: el cloruro de amonio en estas cantidades es utilizado dentro de los
tampones de lisis para eritrocitos ACK por su ion Cl- que es un elemento extracelular
obligatorio produciendo la excrecin de agua.
3. Urea 300mM: La urea es una molcula particularmente pequea y de alta afinidad con
las membranas plasmticas por lo que pasan libremente, su alta concentracin dentro
de la clula produjo una entrada de agua muy rpida y por tanto una lisis celular casi
instantnea.
4. Glicerol 300mM: La naturaleza lipdica del glicerol afecta de la misma manera a la clula
que la urea, pero su peso molecular puede causar mayor diferencia en el tiempo (que
es relativamente corto)
5. Glucosa 300mM: El contenido de glucosa no fue suficientemente elevado para poder
producir una lisis celular por lo que el contenido de los eritrocitos no fue afectado luego
de 10 minutos o fue afectado muy levemente.
6. NaCl 50mM: La concentracin lejos de ser isotnica es ms cercana a el agua
destilada, por su baja molaridad se infiere que el agua sali de las clulas produciendo
un empobrecimiento celular, esto se observa claramente
7. H2O destilada: la inexistencia de cualquier elemento que mantenga el estado isotnico
funciona como control negativo, ingresando masivas cantidades de agua a las clulas y
rompindolas en un tiempo menor a un segundo.
8. NaCl 300mM + NH4Cl 300mM: la molaridad final de ambos fue igual a la suma de el
experimento 1 y 2, siendo que el NaCl no produjo lisis celular y el cloruro de amonio si,
podemos inferir que la no hemolisis puede deberse a un efecto tampn por parte de las
molculas existentes en la substancia, esto frenara todo el proceso de degradacion
9. NaCl 300mM + Urea 600mM: nuevamente el NaCl funciona como tampn para la urea
evitando que salga de forma masiva
10. NaCl 300mM + Glucosa 600mM: el efecto es casi nulo puesto que ninguno de los dos
causo hemolisis, juntos mas que aumentar el efecto siguieron mantenindolo.
11. NaCl 300mM + Glicerol 600mM: El efecto del glicerol fue disminuido nuevamente, si se
produjo una lisis celular fue claramente retardada por la concentracin de NaCl
12. NaCl 150mM + Detergente: aun cuando el cloruro de sodio estuviera en estado
isotnico, el detergente elimino la bicapa lipdica produciendo el rompimiento celular

CONCLUSIONES
Luego de analizar los resultados se puede concluir que para el procedimiento 1 ocurri de
manera exitosa el efecto de hemlisis, ya que mientras mayor cantidad de agua tuviera la
mezcla, provocaba que los eritrocitos se hincharan y se volvieran muy turgentes, causando que
estos reventaran.
Resuma sus ideas: Qu concluye respecto a la velocidad pasiva del agua a travs de la
membrana celular? De qu depende?
La velocidad de paso entre el medio intracelular y extracelular depende de la concentracin de
substancias en el medio, de la cantidad de elementos diferentes que exista y finalmente de su
naturaleza y comportamientos entre molculas.
Por ejemplo, molculas pequeas de carcter lipdico pueden pasar con facilidad mientras que
molculas pequeas polares pueden ser ms complejas de tratar y producen gradientes de
concentracin que a su vez producen movimientos de agua de medio interno al externo y
viceversa.
Finalmente es necesario conocer las concentraciones que se consideran isotnicas para un
medio, puesto que alterarlas se producen cambios osmticos que terminan en lisis celular.
Otro punto importante a destacar es que la existencia de una segunda o tercera substancia
puede significar un retraso o inhibicin del proceso de lisis celular en una forma de buffer
regulatorio (lo cual explica porque no perdemos todas las clulas de golpe al comer o tener
algn tipo de afeccin).


GARCIA, Mario J and ARDILA, AngelM.La variacin del volumen celular bajo diferentes concentraciones de
solucin salina (NaCL)). Rev. colomb. anestesiol. [online]. 2009, vol.37, n.2, pp. 106-109. ISSN 0120-3347.