CENTRO DE CINCIA DA SADE - CCS

QUMICA ANALTICA QUANTITATIVA

PROF. FRANCISCO ARTUR
CROMATOGRAFIA
ANTONIO SAMUEL FERNANDES
JOSILENE BRAGA
KARYSIA VERAS
ROSELY ROCHA
Sobral CE
2010
I. INTRODUO
A Cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao Ela est!
fu"dame"tada "a migrao difere"cial dos compo"e"tes de uma mistura# que ocorre
de$ido a difere"tes i"tera%es# e"tre duas fases imisc$eis# a fase mvel e a fase
estacionria A gra"de $ariedade de combi"a%es e"tre fases m&$eis e estacio"!rias a
tor"a uma tc"ica e'tremame"te $ers!til e de gra"de aplicao
( termo cromatografia foi primeirame"te empregado em 1)0* e sua
utili+ao atribuda a um bot,"ico russo ao descre$er suas e'peri-"cias "a separao
dos compo"e"tes de e'tratos de fol.as /esse estudo# a passagem de ter de petr&leo
0fase m&$el1 atra$s de uma colu"a de $idro pree"c.ida com carbo"ato de c!lcio 0fase
estacio"!ria1# 2 qual se adicio"ou o e'trato# le$ou 2 separao dos compo"e"tes em
fai'as coloridas Este pro$a$elme"te o moti$o pelo qual a tc"ica co".ecida como
cromatografia 0chrom 3 cor e graphie 3 escrita1# pode"do le$ar 2 err4"ea idia de que o
processo se5a depe"de"te da cor
Apesar deste estudo e de outros a"teriores# que tambm poderiam ser
co"siderados precursores do uso dessa tc"ica# a cromatografia foi praticame"te
ig"orada at a dcada de 60# qua"do foi redescoberta A partir da# di$ersos trabal.os "a
!rea possibilitaram seu aperfeioame"to e# em co"5u"to com os a$a"os tec"ol&gicos#
le$aram-"a a um ele$ado grau de sofisticao# o qual resultou "o seu gra"de pote"cial
de aplicao em muitas !reas
A cromatografia pode ser utili+ada para a ide"tificao de compostos# por
comparao com padr%es pre$iame"te e'iste"tes# para a purificao de compostos#
separa"do-se as subst,"cias i"dese5!$eis e para a separao dos compo"e"tes de uma
mistura As difere"tes formas de cromatografia podem ser classificadas co"sidera"do-se
di$ersos critrios# se"do algu"s deles listados abai'o7
. C!"##$%$&"'() *+!" %),-" %.#$&" /) #$#0+-" &,)-"0)1,2%$&)
Em relao 2 forma fsica do sistema# a cromatografia pode ser subdi$idida
em cromatografia em coluna e cromatografia planar E"qua"to a cromatografia pla"ar
resume-se 2 cromatografia em papel 0C81# 2 cromatografia por ce"trifugao
0C.romatotro"1 e 2 cromatografia em camada delgada 0CC91# so di$ersos os tipos de
cromatografia em colu"a# os quais sero mais bem compree"didos qua"do classificados
por outro critrio
3. C!"##$%$&"'() *+!" %"#+ -45+! +-*,+1"/"
Em se trata"do da fase m&$el# so tr-s os tipos de cromatografia7 a
cromatografia gasosa# a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica 0CSC1#
usa"do-se "a :ltima um $apor pressuri+ado# acima de sua temperatura crtica A
cromatografia lquida aprese"ta uma importa"te subdi$iso7 a cromatografia lquida
cl!ssica 0C;C1# "a qual a fase m&$el arrastada atra$s da colu"a ape"as pela fora da
gra$idade# e a cromatografia lquida de alta efici-"cia 0C;AE1# "a qual se utili+am fases
estacio"!rias de partculas me"ores# se"do "ecess!rio o uso de uma bomba de alta
presso para a eluio da fase m&$el A C;AE foi i"icialme"te de"omi"ada
cromatografia lquida de alta presso# mas sua atual desig"ao mostra-se mais
adequada /o caso de fases m&$eis gasosas# separa%es podem ser obtidas por
cromatografia gasosa 0C<1 e por cromatografia gasosa de alta resoluo 0C<A=1 A
difere"a e"tre os dois tipos est! "a colu"a E"qua"to "a C<A= so utili+adas colu"as
capilares# "as quais a fase estacio"!ria um filme depositado "a mesma# a C< utili+a
colu"as de maior di,metro empacotadas com a fase estacio"!ria
6. C!"##$%$&"'() *+!" %"#+ +#0"&$)72,$" 80$!$9"/"
>ua"to 2 fase estacio"!ria# disti"gue-se e"tre fases estacio"!rias s&lidas#
lquidas e quimicame"te ligadas /o caso da fase estacio"!ria ser co"stituda por um
lquido# este pode estar simplesme"te adsor$ido sobre um suporte s&lido ou imobili+ado
sobre ele Suportes modificados so co"siderados separadame"te# como fases
quimicame"te ligadas# por "ormalme"te diferirem dos outros dois em seus meca"ismos
de separao
:. C!"##$%$&"'() *+!) -)/) /+ #+*","'()
8or este critrio# separa%es cromatogr!ficas se de$em 2 adsoro# partio#
troca i4"ica# e'cluso ou misturas desses meca"ismos 9e"tre os $!rios tipos de
cromatografia# especial -"fase ser! dada 2 cromatografia em camada delgada 0CC91# 2
cromatografia lquida cl!ssica e de alta efici-"cia 0C;AE1 e 2 cromatografia gasosa de
alta resoluo 0C<A=1
II. CROMATOGRAFIA PLANA
/a cromatografia pla"a# a fase estacio"!ria suportada sobre uma placa
pla"a ou "os poros de um papel /esse caso# a fase m&$el desloca-se atra$s da fase
estacio"!ria por ao da capilaridade ou sob a i"flu-"cia da gra$idade ?til em
separao de compostos polares E"co"tra-se basta"te difu"dida de$ido 2 sua facilidade
e'perime"tal e ao seu bai'o custo
. C,)-"0)1,"%$" +- P"*+!
Esta tc"ica assim c.amada porque utili+a para a separao e ide"tificao
das subst,"cias ou compo"e"tes da mistura a migrao difere"cial sobre a superfcie de
um papel de filtro de qualidade especial 0fase estacio"!ria1 A fase m&$el pode ser um
sol$e"te puro ou uma mistura de sol$e"tes Este mtodo muito :til para separar
subst,"cias muito polares# como a:cares e ami"o!cidos 8ossui o i"co"$e"ie"te de
poder-se cromatografar poucas qua"tidades de subst,"cia de cada $e+
@a"ipula-se o papel com cuidado e pelas po"tas# e cortam-se tiras em
tama".os que possam ser co"tidos "as cubas A importa"te cortar o papel segui"do o
ei'o das fibras# pois a celulose est! orie"tada "este se"tido# o que facilitar! a passagem
da fase m&$el (s lquidos polares tero gra"de afi"idade pelas .idro'ilas da molcula
de celulose# forma"do po"tes de .idrog-"io# fica"do retido e fu"cio"a"do como fase
estacio"!ria# e os lquidos me"os polares sero repelidos por esta estrutura# fu"cio"ado
como fase m&$el
As cubas de$ero ser perfeitame"te fec.adas para permitir a saturao
i"ter"a A cromatografia pode ser asce"de"te ou desce"de"te# se"do que esta :ltima
mais r!pida e co"some me"os elue"te 2cm de altura de elue"te "a cuba suficie"te
para a cromatografia asce"de"te
Coloca-se a amostra a ser a"alisada um pouco acima da e'tremidade i"ferior
do papel seco# que ap&s ter esta e'tremidade i"ferior mergul.ada "uma mistura de
sol$e"tes# tero os seus co"stitui"tes arrastados# 5u"tame"te com esta mistura que te"de
a subir por capilaridade (s difere"tes co"stitui"tes aprese"taro $ariao "a $elocidade
de deslocame"to# de acordo com os seus coeficie"tes de partio (s compo"e"tes
me"os sol:$eis "a fase estacio"!ria 0!gua1 tero uma mo$ime"tao mais r!pida 8ode
ser utili+ado para a"!lise de mistura de ami"o!cidos ou misturas de a:cares A
cromatografia em papel pode ser tambm "o se"tido desce"de"te e bidime"sio"al# este
:ltimo reali+ado em duas etapas com sol$e"tes aprese"ta"do difere"tes propriedades
3. C,)-"0)1,"%$" +- C"-"/" D+!1"/"
A cromatografia em camada fi"a 0ou delgada1 uma tc"ica simples# barata
e muito importa"te para a separao r!pida e a"!lise qua"titati$a de peque"as
qua"tidades de material Ela usada para determi"ar a pure+a do composto# ide"tificar
compo"e"tes em uma mistura compara"do-os com padr%esB acompa".ar o curso de
uma reao pelo aparecime"to dos produtos e desaparecime"to dos reage"tes e ai"da
para isolar compo"e"tes puros de uma mistura
/a cromatografia de camada delgada a fase lquida asce"de por uma camada
fi"a do adsor$e"te este"dida sobre um suporte ( suporte mais tpico uma placa de
$idro 0outros materiais podem ser usados1
Sobre a placa espal.a-se uma camada fi"a de adsor$e"te suspe"so em !gua
0ou outro sol$e"te1 e dei'a-se secar A placa coberta e seca c.ama-se Cplaca de camada
fi"aC >ua"do a placa de camada fi"a colocada $erticalme"te em um recipie"te
fec.ado 0cuba cromatogr!fica1 que co"tm uma peque"a qua"tidade de sol$e"te# este
eluir! pela camada do adsor$e"te por ao capilar

Cromatografia em camada delgada

A amostra colocada "a parte i"ferior da placa# atra$s de aplica%es
sucessi$as de uma soluo da amostra com um peque"o capilar 9e$e-se formar uma
peque"a ma"c.a circular D medida que o sol$e"te sobe pela placa# a amostra
compartil.ada e"tre a fase lquida m&$el e a fase s&lida estacio"!ria 9ura"te este
processo# os di$ersos compo"e"tes da mistura so separados Como "a cromatografia de
colu"a# as subst,"cias me"os polares a$a"am mais rapidame"te que as subst,"cias
mais polares Esta difere"a "a $elocidade resultar! em uma separao dos
compo"e"tes da amostra >ua"do esti$erem prese"tes $!rias subst,"cias# cada uma se
comportar! segu"do suas propriedades de solubilidade e adsoro# depe"de"do dos
grupos fu"cio"ais prese"tes "a sua estrutura
9epois que o sol$e"te asce"deu pela placa# esta retirada da cuba e seca at
que este5a li$re do sol$e"te Cada ma"c.a correspo"de a um compo"e"te separado "a
mistura origi"al Se os compo"e"tes so subst,"cias coloridas# as di$ersas ma"c.as
sero clarame"te $is$eis Co"tudo# basta"te comum que as ma"c.as se5am i"$is$eis
porque correspo"dem a compostos i"colores 8ara a $isuali+ao de$e-se Cre$elar a
placaC Em mtodo basta"te comum o uso de $apores de iodo# que reage com muitos
compostos org,"icos forma"do comple'os de cor caf ou amarela (utros reage"tes
para $isuali+ao so7 "itrato de prata 0para deri$ados .aloge"ados1# 2#F-
di"itrofe"ilidra+i"a 0para ceto"as e aldedos1# $erde de bromocresol 0para !cidos1#
"i".idri"a 0para ami"o!cidos1# etc
6. C,)-"0)1,"%$" C+70,.%81"
A cromatografia ce"trifuga uma cromatografia em camada delgada
preparati$a e acelerada ce"trifugame"te Gaseia-se "o pri"cipio da operao o"de a
amostra a ser separada aplicada como uma soluo "o ce"tro do disco girat&rio
umedecido com o sol$e"te
A eluio com sol$e"te gera ba"das circulares de separao dos
compo"e"tes que so remo$idos 5u"tame"te com o sol$e"te para um tubo de recepo
A compat$el com todos os sol$e"tes comume"te usados "as outras tc"icas
cromatogr!ficas# i"clusi$e !cido actico# "o apropriada para uso com !cidos
mi"erais
Hem como $a"tage"s# a "o aplicao de IspotJ ou raspagem de ba"das# as
separa%es so r!pidas# cerca de 20 mi"# permite a obser$ao direta por EK ou de
compostos coloridos dura"te a eluio# suas camadas fi"as de 1# a F mm aprese"tam alta
capacidade#permite a utili+ao de pouco sol$e"te e a eluio por gradie"te f!cil# o
sol$e"te rege"erado i" situ# pode"do ser re-utili+ado# a atmosfera de "itrog-"io
pre$i"e o'idao das amostras# compacta 0facilme"te remo$ida de um laborat&rio para
outro1# poucos co"troles e "o "ecessita altas press%es# possui bai'o preo e assim a
C.romatotro"s custa me"os que um simples L8;C preparati$o
III. CROMATOGRAFIA EM COLUNA
A cromatografia em colu"a costuma ser citada como o mais a"tigo
procedime"to cromatogr!fico Moi utili+ada primeirame"te para o isolame"to dos
pigme"tos e'iste"tes "as fol.as $erdes dos $egetais
Co"siste em uma colu"a de $idro# metal ou pl!stico# pree"c.ida com um
adsor$e"te adequado A uma tc"ica de partio e"tre duas fases# s&lida e lquida#
baseada "a capacidade de adsoro e solubilidade ( s&lido de$e ser um material
i"sol:$el "a fase lquida associada# se"do que os mais utili+ados so a slica gel 0Si(
2
1 e
alumi"a 0Al
2
(
6
1# geralme"te "a forma de p&
A mistura a ser separada colocada "a colu"a com um elue"te 0fase m&$elB
sol$e"te1 me"os polar e $ai-se aume"ta"do gradati$ame"te a polaridade do elue"te e
co"seque"teme"te o seu poder de arraste de subst,"cias mais polares Ema seqN-"cia
de elue"tes "ormalme"te utili+ada a segui"te7 ter de petr&leo# .e'a"o# ter etlico#
tetracloreto de carbo"o# acetato de etila# eta"ol# meta"ol# !gua e !cido actico
Colu"as cromatogr!ficas 0a1 Sol$e"te adicio"ado 2 colu"aB 0b1 suporte s&lido se"do i"trodu+ido "a colu"a
( flu'o de sol$e"te de$e ser co"t"uo (s difere"tes compo"e"tes da
mistura mo$er-se-o com $elocidade disti"tas depe"de"do de sua afi"idade relati$a pelo
adsor$e"te 0grupos polares i"teragem mel.or com o adsor$e"te1 e tambm pelo elue"te
Assim# a capacidade de um determi"ado elue"te em arrastar um composto adsor$ido "a
colu"a depe"de quase diretame"te da polaridade do sol$e"te com relao ao composto
D medida que os compostos da mistura so separados# ba"das ou +o"as
m&$eis comeam a ser formadas# se"do que cada ba"da co"tem some"te um composto
Em geral# os compostos apolares passam atra$s da colu"a com uma $elocidade maior
do que os compostos polares# porque os primeiros t-m me"or afi"idade com a fase
estacio"!ria Se o adsor$e"te escol.ido i"teragir forteme"te com todos os compostos da
mistura# ela "o se mo$er! 8or outro lado# se for escol.ido um sol$e"te muito polar#
todos os solutos podem ser eludos sem serem separados 8or uma escol.a cuidadosa
das co"di%es# praticame"te qualquer mistura pode ser separada
Colu"a cromatogr!fica acoplada a um fu"il de separao
para ma"ter o "$el do sol$e"te "a superfcie superior
( -'ito de uma colu"a depe"der! e"to da escol.a de um suporte e sol$e"te
adequados para a sua reali+ao Em algu"s casos poss$el $isuali+ar a separao dos
compo"e"tes de uma mistura obser$a"do o dese"$ol$ime"to de ma"c.as difere"tes "a
colu"a ou acompa".a"do cm uma lu+ ultra$ioleta E"treta"to# "a maioria das $e+es# tor"a-se
"ecess!rio o acompa".ame"to da separao dos compo"e"tes pela tc"ica de cromatografia
em camada delgada 0ccd1
IV. CROMATOGRAFIA GASOSA
Cromatografia data de 1)06 "o trabal.o do cie"tista russo @iO.ail
Seme"o$ic. HsPett ( estuda"te graduado alemo Mrit+ 8rior dese"$ol$eu a
cromatografia gasosa de estado s&lido em 1)FQ Arc.er Ro." 8orter @arti"# quem foi
$e"cedor do 8r-mio /obel por seu trabal.o "o dese"$ol$ime"to das cromatografias
lquido-lquido 01)F11 e em papel 01)FF1# estabeleceu os fu"dame"tos para o
dese"$ol$ime"to da cromatografia gasosa e posteriorme"te produ+iu a cromatografia
g!s-lquido 01)S01 Hc"ica de separao e a"!lise de misturas por i"terao dos seus
compo"e"tes e"tre uma fase estacio"!ria e uma fase m&$el
T;&7$&" 80$!$9"/" 7" C,)-"0)1,"%$" G"#)#"<
Ema cromatografia gasosa uma tc"ica que se baseia "a a"!lise qumica
i"strume"tal por separao de compostos qumicos e uma amostra comple'a Ema
cromatografia gasosa usa um tubo estreito atra$s do qual se d! o flu'o co".ecido como
coluna# atra$s do qual difere"tes co"stitui"tes de uma amostra passam em uma
corre"te de g!s 0g!s co"dutor# ou tra"sportador# a fase mvel1 em difere"tes ta'as
depe"de"do de $!rias propriedades fsicas e qumicas e suas i"tera%es com um
especfico rec.eio da colu"a# c.amada fase estacionria Como os composto qumicos
saem "o fi"al da colu"a# so detectados e ide"tificados eletro"icame"te
A fu"o da fase estacio"!ria "a colu"a seperar compo"e"tes difere"tes#
causa"do a cada um sada da colu"a em um tempo difere"te 0tempo de reteno1
(utros par,metros que podem ser usados para alterar a ordem ou tempo de rete"o so
a ta'a de flu'o do g!s co"dutor e a temperatura
Em uma a"!lise C<# um $olume co".ecido de a"alito gasoso ou lquido
i"5etado "a e"trada da colu"a# geralme"te com o uso de uma microseri"ga 0ou com
fibras de microe'trao de fase s&lida# ou 1 Co"forme o g!s carreador le$a as molculas
do a"alito atra$s da colu"a# essa mo$ime"tao i"ibida pela adsoro das molculas
do a"alito "as paredes da colu"a ou "o material do empacotame"to da mesma
A ta'a com que as molculas progridem ao lo"go da colu"a depe"de da
fora da adsoro que# por sua $e+# depe"de do tipo de molcula e do material da fase
estacio"!ria Ema $e+ que cada tipo de molcula tem uma ta'a de progresso difere"te#
os $!rios compo"e"tes da mistura de a"alito so separados co"forme progridem ao
lo"go da colu"a# c.egado ao fim dela em mome"tos difere"tes 0tempos de rete"o1
Em detector empregado para mo"itorar o flu'o de sada da colu"a
Assim# o mome"to em que cada compo"e"te sai da colu"a# e a qua"tidade
deles# pode ser determi"ada <eralme"te# as subst,"cias so ide"tificadas
0qualitati$ame"te1 pela ordem com que emerger 0eluem1 da colu"a e pelo tempo de
rete"o do a"alito "a colu"a
A*!$&"'=+# *,20$&"# /" C,)-"0)1,"%$" G"#)#"<
Q8.-$&"<
- 9etermi"ao de a"tio'ida"tes# "utrie"tes ou co"tami"a"tes em alime"tos
I7/>#0,$"<
- @o"otori+ao de processos i"dustriais
S">/+<
- A"!lises dos co"stitui"tes do sa"gue
- A"!lise fore"se
A-?$+70+<
- 9etermi"ao de resduos de pesticidas em produtos alime"tares# !guas ou
esgotos
- 9etermi"ao de gases e sol$e"tes org,"icos "a atmosfera# solos ou rios
A# *",0+# /+ 8- C,)-"041,"%) G"#)#)<
A cromatografia um mtodo fsico de separao# "o qual compo"e"tes a
serem separados so distribudos e"tre duas fases7 a fase estacio"!ria# e a fase m&$el A
amostra tra"sportada por uma corre"te de g!s atra$s de uma colu"a empacotada com
um s&lido recoberta com uma pelcula de um lquido 9e$ido a sua simplicidade#
se"sibilidade e efeti$idade para separar os compo"e"tes de misturas# a cromatografia de
g!s uma das ferrame"tas mais importa"tes em qumica A amplame"te usada para
a"!lises qua"titati$os e qualitati$os de espcies qumicas e para a determi"ar co"sta"tes
termoqumicas tais como calores de soluo e $apori+ao# presso de $apor e
coeficie"tes de ati$idade A cromatografia de g!s tambm usada para mo"itorar os
processos i"dustriais de forma autom!tica7 a"alisam-se as corre"tes de g!s
periodicame"te e reali+am-se rea%es de forma ma"ual ou autom!tica para compe"sar
$aria%es "o dese5adas
@uitas a"!lises de roti"a so reali+adas rapidame"te "o campo medici"al e
outros 8or e'emplo# por meio do uso de ape"as 01 ce"tmetros c:bicos 00006 o"as1
de sa"gue# pode-se determi"ar as porce"tage"s de o'ig-"io dissol$ido# "itrog-"io#
di&'ido de carbo"o e mo"&'ido de carbo"o A cromatografia de g!s :til tambm "a
a"!lise de co"tami"a"tes do ar# !lcool "o sa"gue# &leos esse"ciais e produtos
alime"tcios
( mtodo co"siste primeirame"te "a i"troduo da mistura de pro$a ou
amostra em uma corre"te de g!s i"erte# "ormalme"te .idrog-"io# .lio# "itrog-"io ou
arg4"io# que atuaro como g!s de arrastre As amostras lquidas $apori+am-se a"tes da
i"5eo "o g!s de arrastre ( flu'o de g!s passa pela colu"a empacotada atra$s da qual
os compo"e"tes da amostra se deslocam a $elocidades i"flue"ciadas pelo grau de
i"terao de cada compo"e"te com a fase estacio"!ria "o $ol!til As subst,"cias que
t-m a maior i"terao com a fase estacio"!ria so retidas por mais tempo e# por ta"to#
separadas daquelas de me"or i"terao D medida que as subst,"cias eluem da colu"a#
podem ser qua"tificadas por um detector eTou tomadas para outra a"!lise
E'istem dois tipos de cromatografia de g!s7 cromatografia <!s - S&lido
0C<S1 e cromatografia <!s - ;quida 0C<;1 A cromatografia <!s - S&lida se baseia "a
base s&lida estacio"!ria# "a qual a rete"o das subst,"cias a"alis!$eis a co"sequ-"cia
da absoro fsica A cromatografia <as -;quida :til para separar o"s ou molculas
dissol$idas em um sol$e"te Se a soluo de amostra esti$er em co"tato com um
segu"do s&lido ou fase lquida# os difere"tes solutos i"teragem com a outra fase em
difere"tes graus# de$ido a difere"as de adsoro# i"terc,mbio de o"s# partio# ou
tama".o Estas difere"as permitem que os compo"e"tes da mistura se separem usa"do
estas difere"as para determi"ar o tempo de rete"o dos solutos atra$s da colu"a
V. CROMATOGRAFIA LQUIDA
A cromatografia lquida 0HPLC1 um processo de a"!lise de separao
fsico cu5a aplicao permite a a"!lise qualitati$a mais comume"te e qua"titati$a de
uma amostra Esse mtodo a"altico $em se"do amplame"te empregado graas ao
r!pido tempo de a"!lise 8ermite separar co"stitui"tes de uma mistura atra$s de sua
distribuio em duas fases7 fase m&$el um lquido e a fase estacio"!ria um s&lido
A cromatografia liquida utili+ada em $!rias !reas da ci-"cia# "o
acompa".ame"to de s"teses# em a"!lises de pesticidas# ferom4"ios# "o isolame"to de
produtos "aturais e si"tticos e "a produo e co"trole de qualidade de medicame"tos#
de"tre ta"tas outras aplica%es
A cromatografia a lquido permite# e"tre outras# a a"!lise das segui"tes
classes dos pri"cipais compostos7 prote"as# !cidos "uclicos# ami"o!cidos# cora"tes#
polissacardeos# pigme"tos de pla"tas# compostos i4"icos# o"s met!licos# c!tio"s#
lipdeos polares# e'plosi$os# polmeros si"tticos# surfata"tes# farmac-uticos#
metab&licos de pla"tas# ,"io"s# comple'os de metais pesados# etc
Lo5e a cromatografia lquida de alta efici-"cia tem as segui"tes
caractersticas7
alto poder de resoluoB
separa%es r!pidasB
mo"itorame"to co"t"uo do elue"teB
medidas qua"titati$as acuradasB
a"!lises repetiti$as e reprodut$eis com a mesma colu"aB
automao do procedime"to a"altico e do ma"useio dos dados
Sob algu"s aspectos# a cromatografia lquida de alta efici-"cia mais $ers!til
que a cromatografia com fase gasosa porque ela "o est! limitada a amostras $ol!teis e
termicame"te est!$eis e porque a escol.a de fases estacio"!rias e m&$eis mais ampla
0@e"d.am et al# 20021
( emprego da cromatografia a lquido para solucio"ar problemas a"alticos
ou preparati$os "ecessita# alm da i"strume"tao adequada# da combi"ao correta das
co"di%es e'perime"tais tais como7
tipo de colu"a 0fase estacio"!ria1B
fase m&$el# sua composio e $a+oB
temperaturaB
qua"tidade de amostra i"5etada# etc
A seleo correta dessas $ari!$eis "ecessita do co".ecime"to b!sico dos
fatores que co"trolam a separao "a cromatografia a lquido 0Ciola#1))U1
C,)-"0)1,"%$" " !.@8$/) /+ "!0) /+#+-*+7A) BHPLCC
A cromatografia a lquido de alto desempe".o um tipo de cromatografia
que emprega uma fase m&$el lquida e uma fase estacio"!ria fi"ame"te di$idida e que#
para ter um flu'o ra+o!$el# opera a press%es ele$adas (rigi"alme"te c.ama$a-se
cromatografia lquida de alta presso e esta termi"ologia foi aba"do"ada qua"do se
co"statou que o difere"cial de comportame"to desta para as demais cromatografias
lquidas "o era a maior presso# mas sim o mel.or desempe".o cromatogr!fico 9e"tre
as pri"cipais caractersticas e $a"tage"s do mtodo L8;C esto7
colu"a rec.eada com partculas de peque"o tama".o 0 6 - 10 mm1B
alta resoluoB
a"!lise "o destruti$aB
$elocidade de separaoB
mo"itorao co"t"ua do eflue"te da colu"aB
medio qua"titati$a e'ataB
a"!lises repetiti$as e reproduti$as com a mesma colu"aB
automao do procedime"to a"altico e do tratame"to dos dados
(s compo"e"tes esse"ciais da L8;C so7
B)-?" /+ "!0" *,+##()< dispositi$o importa"te pois est! relacio"ado ao tempo
de rete"o# a reprodutibilidade e a se"sibilidade do detector Este sistema
composto por bomba e co"troladores de presso e $a+o 9e uma ma"eira geral#
a bomba de$e ter a capacidade de impulsio"ar a fase m&$el E'istem dois tipos
de bomba# com presso co"sta"te e com $olume co"sta"te
S$#0+-" /+ $7D+'() /" "-)#0,"< a i"troduo da amostra pode ser reali+ada por
meio de uma $!l$ula de amostragem ou por meio de uma seri"ga de i"5eo (
eflue"te desses dispositi$os pree"c.e uma serpe"ti"a de $olume co".ecido e o
acio"ame"to da $!l$ula tra"sfere# i"tegralme"te# esse $olume para a corre"te de
fase m&$el
C)!87"< so feitas de ao i"o'id!$el polido# com comprime"tos de 10 a 60 cm#
com calibre de preciso 9i,metros i"ter"os tpicos $ariam de me"or ou igual a
1 mm para colu"as capilaresB 2# 6# F# S e * mm para colu"as a"alticas rec.eadas
e maior ou igual a 10 mm para colu"as preparati$as (s rec.eios usados so
co"stitudos por partculas peque"as# rgidas comum a distribuio
gra"ulomtrica estreita (s tipos de rec.eio podem ser di$ididos em tr-s
categorias7
1- gr,"ulos porosos# polimricos# baseados em copolmeros de estire"o-
di$i"ilbe"+e"o e so utili+ados "a troca de o"s e "a cromatografia por
permeao em gelB
2- gr,"ulos de camada porosa # co"stitudos por uma camada delgada de slica
modificada# estes rec.eios peculiares so usados em alguma aplica%es de troca
de o"s e muito usados em cromatografia de fase re$ersa para a"!lise de
compostos org,"icosB
6- partculas de slica totalme"te porosas que proporcio"am co"sider!$el
mel.oria da efici-"cia da colu"a# da capacidade de a"alisar as amostras e da
$elocidade de a"!lise
D+0+&0),< mo"itora a fase m&$el 2 medida que elui da colu"a So duas
pri"cipais classes em que podem ser di$ididos7 detectores de propriedades
macrosc&picas e detectores de propriedades de soluto# que medem a difere"a
e"tre uma propriedade fsica do soluto "a fase m&$el e a mesma propriedade "a
fase m&$el pura Esse mo"itorame"to efetuado pela deteco propriame"te
dita# associada a uma tra"sduo para um si"al eltrico que pode ser registrado
ou arqui$ado eletro"icame"te "a fase m&$el pura Esse mo"itorame"to
efetuado pela deteco propriame"te dita# associada a uma tra"sduo para um
si"al eltrico que pode ser registrado ou arqui$ado eletro"icame"te
VI. REFERNCIAS BIBLIOGREFICAS
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