Caracterização Das Nanopartículas

SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS DE FeO
x
/Au/Ag EM
MULTICAMADA NCLEO-CONCHA

Tese apresentada UNIVERSIDADE DA MADEIRA para obteno do grau de mestre
em Bioqumica Aplicada

Por Carla Sofia Caseiro Miguel

Sob a orientao do Professor Doutor Joo Manuel Cunha Rodrigues
e co-orientao da Professora Doutora Helena Maria Pires Gaspar Toms

Centro de Competncia de Cincias Exatas e da Engenharia,
Centro de Qumica da Madeira
Campus Universitrio da Penteada 9000-390, Funchal - Portugal

Setembro 2012

SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS DE FeOx/Au/Ag EM MULTICAMADA NCLEO-CONCHA
Carla Miguel Setembro 2012

A maior parte do que existe no se v

i

ndice

Agradecimentos ........................................................................................................................................... iii
Resumo .......................................................................................................................................................... v
Abstract ....................................................................................................................................................... vii
Lista de siglas, acrnimos e abreviaturas ..................................................................................................... ix
ndice de figuras ........................................................................................................................................... xi
ndice de tabelas ......................................................................................................................................... xv
Objetivos ................................................................................................................................................... xvii
Captulo 1 - Enquadramento terico .............................................................................................................1
1.1 As nanopartculas em contexto ........................................................................................................1
1.2 - Nanopartculas metlicas de ouro e prata ........................................................................................7
1.3 - Nanopartculas magnticas ............................................................................................................ 11
1.4 - Nanopartculas ncleo-concha ....................................................................................................... 15
1.5 - Sntese e estabilizao de nanopartculas ...................................................................................... 19
1.6 - Caracterizao das nanopartculas ................................................................................................. 23
1.7 - Farmacocintica e biodistribuio vs citotoxicidade ..................................................................... 25
Captulo 2 - Parte experimental ................................................................................................................. 29
2.1 - Reagentes ....................................................................................................................................... 29
2.2 - Equipamento .................................................................................................................................. 29
2.3 - Preparao de nanopartculas ....................................................................................................... 30
2.3.1 - Nanopartculas de Au .............................................................................................................. 30
2.3.2 - Nanopartculas de Ag .............................................................................................................. 31
2.3.3 - Co-reduo de uma mistura de ies de ouro e prata ............................................................. 32
2.3.4 - Reduo sucessiva dos dois sais metlicos ............................................................................. 33
2.3.5 - Nanopartculas de xido de ferro ........................................................................................... 33
2.3.6 - Revestimento de nanopartculas de xido de ferro com ouro ............................................... 34
2.3.7 - Revestimento de nanopartculas de xido de ferro com prata .............................................. 34
2.4 - Caracterizao de nanopartculas .................................................................................................. 35
2.5 - Ensaios de citotoxicidade ............................................................................................................... 35
2.5.1 - Cultura de clulas .................................................................................................................... 35
2.5.2 - Teste de citotoxicidade ........................................................................................................... 36
Captulo 3 - Resultados e discusso ........................................................................................................... 39
ndice
ii

3.1 - Nanopartculas de Au ..................................................................................................................... 39
3.1.1 - Reduo de HAuCl
4
3H
2
O com -D- glucose .......................................................................... 39
4
3H
2
O com -D- glucose na presena de amido ...................................... 41
4
3H
2
O com -ciclodextrina ...................................................................... 41
3.2 - Nanopartculas de Ag ..................................................................................................................... 42
3.2.1 - Reduo de AgNO
3
com -D-glucose atravs do uso de microondas ..................................... 42
3
com -D-glucose num banho termostatizado ......................................... 42
3
com NaBH
4
............................................................................................... 42
3
com -ciclodextrina ................................................................................. 42
3.3 - Nanopartculas de Fe
3
O
4
................................................................................................................ 43
3.4 Ligas de nanopartculas de Ag e Au ............................................................................................... 44
3.5 - Nanopartculas em multicamada ncleo-concha ........................................................................... 48
4
3H
2
O sobre NP de Ag .............................................................................. 48
3
sobre NP de Au e HAuCl
4
3H
2
O sobre NP de Ag com -ciclodextrina .... 51
3.5.3 - Nanopartculas de Fe
3
O
4
-Au .................................................................................................... 53
3.5.4 - Nanopartculas de Fe
3
O
4
-Ag .................................................................................................... 58
3.6 - Ensaios de citotoxicidade ............................................................................................................... 59
Concluso ................................................................................................................................................... 65
Referncias ................................................................................................................................................. 69
Anexo I - Tcnicas experimentais ............................................................................................................... 81
I.1 - Difrao de raios-X .......................................................................................................................... 81
I.2 - Disperso dinmica da luz ............................................................................................................... 83
I.3 - Espetroscopia de disperso de energia ........................................................................................... 87
I.4 - Espetroscopia do ultravioleta-visvel .............................................................................................. 89
I.5 - Microscopia eletrnica de transmisso .......................................................................................... 91
I.6 - Potencial zeta .................................................................................................................................. 93
Anexo II - Procedimentos experimentais ................................................................................................... 95
Anexo III - Resumo das caractersticas das NP preparadas ...................................................................... 135

iii

Agradecimentos

Estou grata pelas circunstncias,
Pela educao, que agora sinto como um privilgio,
Pela oportunidade de regressar Universidade.
Agradeo ao Professor Doutor Joo Rodrigues por acreditar em mim e ter a pacincia necessria
para entender as incompreenses de uma no qumica no laboratrio. Agradeo igualmente todas
as conversas e as palavras que alavancaram muitas ideias.
Agradeo Professora Doutora Helena Toms a confiana, a disponibilidade, a ajuda e tambm
as palavras tranquilizadoras quando as dvidas mais bsicas surgiram.
Estou grata ao meu patrocinador nmero um, o Manel Balbino, que com o seu salrio nico foi
conseguindo manter o barco apesar das tempestades. Cozinhou e tratou da roupa, brincou com os
meninos, para eu poder ficar sentada a queimar pestanas e a engordar as ndegas e a barriga.
Alm disso, ainda lhe sobrou tempo para variadssimas revises, opinies e sugestes.
Estou grata aos meus queridos filhos que so o meu tesouro precioso.
Estou grata minha Me porque sonho em grande. Porque entre feijes, trigo e mosquitos me
deu o gozo pela vida e o seu mistrio. Por todas as dvidas tiradas distncia de um telefonema
e tambm por todas as correes aos meus escritos.
Estou grata ao meu Pai porque apesar da exigncia ensinou-me a sorrir na adversidade.
Aos meus irmos pelo apoio incondicional e por continuarem a acreditar em mim.
Aos amigos que com palavras de admirao e respeito me do fora e energia para continuar a
tentar realizar o meu potencial.
E o discurso vai longo. Estou grata porque tenho o privilgio de ter uma famlia linda, um teto
para viver, sade, alegria de vida, liberdade e porque tenho uma cabea pensante.

iv

Estou igualmente grata a todos os que dalguma forma contriburam para o meu crescimento
enquanto tardia estudante universitria. Aos colegas da UMa, aos colegas do CQM e do Grupo
de Qumica de Coordenao e Materiais Moleculares do CQM, ao Centro de Qumica da
Madeira atravs do projeto estratgico FCT (PEst-OE/QUI/UI0674/2011), ao Professor
Xiangyang Shi e aos fundos da Ctedra em Nanotecnologias (UMa/Santander/FCT).
Porque nunca se desiste, no sem prejuzo da famlia, comecei e agora acabo este
empreendimento.

Carla Miguel
Setembro de 2012

v

Resumo

Nesta dissertao, apresenta-se o trabalho realizado no decorrer do segundo ano do Mestrado em
Bioqumica Aplicada. Prepararam-se nanopartculas metlicas atravs da reduo qumica de
sais metlicos em soluo. Obtiveram-se solues coloidais monometlicas de Au, Ag e FeO
x
e
bimetlicas de Au/Ag, Ag/Au, FeO
x
/Au e FeO
x
/Ag seguindo ou adaptando mtodos publicados
na literatura. Numa primeira fase foram sintetizadas nanopartculas monometlicas de prata e
ouro utilizando-se -D-glucose, borohidreto de sdio e -ciclodextrina como agente redutor dos
ies metlicos. Seguidamente, por co-reduo de uma mistura de ies prepararam-se ligas de
nanopartculas de prata e ouro e por reduo sucessiva de Ag e Au sintetizaram-se
nanopartculas com uma estrutura ncleo-concha. As nanopartculas de FeO
x
foram preparadas
por co-precipitao de Fe (III) e Fe (II). O revestimento com ouro foi conseguido atravs da
reduo com citrato de sdio e para a deposio de prata utilizou-se o cido ascrbico. As
solues coloidais preparadas foram caracterizadas atravs de estudos de espetroscopia do UV-
vis, tendo sido registados os mximos de absorvncia caractersticos do ouro e da prata e os
desvios esperados para o caso das nanopartculas ncleo-concha. As anlises por disperso
dinmica de luz permitiram auferir o tamanho das nanopartculas, eventual aglomerao e,
portanto, permitiram a apreciao da estabilidade dos coloides. Com o intuito de confirmar a
formao de estruturas em camada ncleo-concha foi feita a caracterizao das amostras por
microscopia eletrnica de transmisso e espetroscopia de raios-X de energia dispersiva. Alguns
dos espetros obtidos confirmam o sucesso na preparao de uma estrutura em multicamada.
Finalmente, demonstrou-se a biocompatibilidade de algumas amostras preparadas atravs da
realizao de estudos de citotoxicidade na linha celular fibroblstica NIH 3T3.

Palavras-chave: Nanopartculas, ouro, prata, xido de ferro, reduo qumica, citotoxicidade.

vii

Abstract

This dissertation presents the work performed during the second year of the MSc in Applied
Biochemistry. Metallic nanoparticles were prepared by chemical reduction of metal salts in
solution. Colloidal solutions with monometallic particles of Au, Ag and FeO
x
, as well as
bimetallic particles of Au/Ag, Ag/Au, FeO
x
/Au and FeO
x
/Ag, were obtained following or
adapting methods published in the literature. Initially, monometallic nanoparticles of silver and
gold were synthesized using either -D-glucose, sodium borohydride and -cyclodextrin as
reducing agent of the metal ions. Nanoparticles alloys of silver and gold were then prepared by
co-reduction of a mixture of ions and by subsequent reduction of Ag and Au, thereby resulting in
the synthesis of nanoparticles with a core-shell structure. FeO
x
nanoparticles were prepared by
co-precipitation of Fe (III) and Fe (II). The gold coating was accomplished by reduction with
sodium citrate, while ascorbic acid was used to coat FeO
x
with silver. The nanoparticles were
characterized by UV-vis spectroscopy, where the maximum absorbance characteristics of gold
and silver were recorded. In the case of the core-shell nanoparticles, the expected deviations
were recorded. Analysis by dynamic light scattering allowed for the acquisition of data on
nanoparticle size and eventual agglomeration, thereby assessing the stability of the colloidal
solutions. In order to confirm the formation of particles having a core-shell structure, samples
were characterized by transmission electron microscopy and energy dispersive X-ray
spectroscopy. Some of the spectra obtained confirmed the successful preparation of core-shell
structures. Finally, cytotoxicity studies using the NIH 3T3 fibroblastic cell line demonstrated the
biocompatibility of some of the samples that were prepared.

Keywords: Nanoparticles, gold, silver, iron oxide, chemical reduction, cytotoxicity.

ix

Lista de siglas, acrnimos e abreviaturas

AA Antibitico e antimictico
DDS Drug delivery system / Sistema de entrega de frmacos
DLS Dynamic light scattering / Disperso dinmica da luz
DMEM Dulbeccos modified eagle medium / Meio para clulas em cultura
DMSO Dimetilsulfxido
EDX Energy dispersive x-ray spectroscopy / Espetroscopia de raios-x de disperso de
energia
FT-IR Fourier Transform Infrared Spectroscopy / Espetroscopia de Infravermelho com
transformada de Fourier
MRI Magnetic resonance imaging / Imagem da ressonncia magntica
MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazlio)
NIR Near infrared / Infravermelho prximo
NP Nanopartculas
NPM Nanopartculas Magnticas
PAA cido poliacrlico
PBS Phosphate buffered saline solution / Soluo tampo de fosfato salino
PEG Polietilenoglicol
PS Poliestireno
PVP Polivinilpirrolidona
Lista de siglas, acrnimos e abreviaturas
x

Ref. Referncia
SBF Soro bovino fetal
SEM Scanning electron microscopy / Microscopia eletrnica de varrimento
SERS Surface-enhanced Raman scattering / Superfcies melhoradas para disperso de
Raman
SPION Superparamagnetic iron oxide nanoparticle / Nanopartcula superparamagntica de
xido de ferro
SPR Surface Plasmon Resonance /Ressonncia da superfcie plasmnica
TEM Transmission electron miscroscopy / Microscopia eletrnica de transmisso
UV-Vis Espetroscopia do Ultravioleta-Visvel
XRD X-ray diffraction / Difrao de raios-X

xi

ndice de figuras

Figura 1 - Copo de Lycurgus [3]. ................................................................................................... 1
Figura 2 - Evoluo cronolgica dos nanomateriais aceites pela FDA para aplicao mdica.
Adaptado da Ref. [16] ..................................................................................................................... 4
Figura 3 - Aplicao teranstica de nanopartculas de magnetite. Adaptado da Ref. [29] ........... 5
Figura 4 - Diferentes cores das solues de ouro coloidal em funo do tamanho das NP [35]. . 7
Figura 5 Alinhamento dos dipolos magnticos para diferentes tipos de magnetismo: (a)
ferromagnetismo (b) antiferromagnetismo e (c) ferrimagnetismo. Adaptado da Ref. [53] .......... 11
Figura 6 - Curva de magnetizao versus campo magntico para nanopartculas
superparamagnticas (NP SPM) e ferri- ou ferro-magnticas (NP FM) onde (H
C
) o campo
coercivo, (M
S
) a magnetizao de saturao e (M
R
) a magnetizao remanescente. Adaptado da
Ref. [30] ........................................................................................................................................ 12
Figura 7 - Estrutura em espinela inversa da magnetite. (a) Ilustrao de um lado da unidade
cbica da clula (b) Ilustrao do plano [111] com a organizao ferrimagntica na magnetite.
Adaptado da Ref. [58] ................................................................................................................... 13
Figura 8- Esquema da estrutura ncleo-concha. Adaptado da Ref. [80] ..................................... 16
Figura 9 - Mecanismo de sntese de NP na fase lquida. Adaptado da Ref. [1] ........................... 20
Figura 10 - Partcula estabilizada (a) eletrostaticamente e (b) por repulses estricas. Adaptado
da Ref. [89] ................................................................................................................................... 21
Figura 11 NP funcionalizada. Adaptado da Ref. [17] ............................................................... 22
Figura 12 - Espetro eletromagntico e rosa das cores [94] ......................................................... 23
Figura 13 - Barreiras fisiolgicas e limitaes que condicionam a ao de uma nanopartcula
para ao teraputica. Adaptado da Ref. [17] ............................................................................. 26
Figura 14 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Au. Evoluo da banda de absoro com o
pH. ................................................................................................................................................. 40
Figura 15 Distribuio de tamanhos das NP de Au, obtida por DLS. ...................................... 41
Figura 16 - Nanopartculas de Fe
3
O
4
(a) sob a influncia de um man e (b) dispersas em gua.
....................................................................................................................................................... 43
ndice de figuras
xii

Figura 17 Mecanismo de reao de formao de partculas de magnetite a partir de uma
mistura aquosa de cloreto ferroso e frrico por adio de uma base [57]. ................................. 43
Figura 18 Fotografia das NP de Au-Ag e respetivo espetro de absoro UV-Vis. ................... 45
Figura 19 Distribuio de tamanhos das NP preparadas por co-reduo dos dois sais
metlicos, obtida por DLS. ............................................................................................................ 46
Figura 20 - Espetros de EDX das amostras (a) Au-Ag 1:3 e (b) Au-Ag 1:1. ............................... 47
Figura 21 Fotografias e imagens TEM das amostras de Ag, Au e Au-Ag 1:3. .......................... 48
Figura 22 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Ag-Au obtidas pela reduo sucessiva de
ouro sobre prata coloidal. ............................................................................................................. 49
Figura 23 Distribuio de tamanhos das NP de Ag-Au, obtida por DLS. ................................. 50
Figura 24 Micrografia TEM e espetro EDX da amostra CM-01-81 Ag/Au. ............................. 50
Figura 25 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Ag, Ag-Au, Au e Au-Ag preparadas usando
a -ciclodextrina como agente redutor. ........................................................................................ 51
Figura 26 Distribuio de tamanhos, obtida por DLS, das NP de Ag, Ag-Au, Au e Au-Ag
preparadas usando a -ciclodextrina como agente redutor. ........................................................ 52
Figura 27 - Micrografia TEM e espetro EDX da amostra Au-Ag. ............................................... 52
Figura 28 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Fe
3
O
4
e Fe
3
O
4
-Au. .................................... 54
Figura 29 Espetro de EDX das NP de Fe
3
O
4
-Au. ...................................................................... 55
Figura 30 Imagens TEM das NP de Fe
3
O
4
-Au. ......................................................................... 55
Figura 31 Imagem das NP de Fe
3
O
4
-Au preparadas (a) sob condies cidas e (b) em meio
bsico. ........................................................................................................................................... 56
3
O
4
-Au. .................................................. 56
Figura 33 Distribuio de tamanhos das NP de Fe
3
O
4
-Au, obtida por DLS. ........................... 57
Figura 34 - Espetro de absoro UV-Vis das NP de Fe
3
O
4
/Ag. ................................................... 59
Figura 35 - Espetros de absoro UV-Vis das NP monometlicas usadas nos testes de
citotoxicidade. ............................................................................................................................... 59
Figura 36 - Espetros de absoro UV-Vis das NP ncleo-concha usadas nos testes de
citotoxicidade. ............................................................................................................................... 60
ndice de figuras
xiii

Figura 37 Fotografias das clulas aps 70h de exposio s diferentes concentraes de NP.
....................................................................................................................................................... 61
Figura 38 Percentagem de viabilidade para as quatro amostras de NP testadas. ................... 62
Figura 39 Controlo do sobrenadante. Adaptado da Ref. [112] ................................................. 63

xv

ndice de tabelas

Tabela 1- Diferentes tipos de nanopartculas ferri- ou ferro-magnticas .................................... 13
Tabela 2- Classificao das nanopartculas ncleo-concha. Adaptado da Ref. [13] .................. 17
Tabela 3 - Potencial de reduo dos metais em estudo [13] ........................................................ 21
Tabela 4 - Principais tcnicas utilizadas na caracterizao de NP ............................................. 24
Tabela 5 Composies monometlicas e ncleo-concha testadas durante o estudo de
citotoxicidade ................................................................................................................................ 37
Tabela 6 - Variao do pH em funo da quantidade de NaOH adicionado ............................... 39

xvii

Objetivos

Atualmente, as nanopartculas superparamagnticas de xido de ferro so utilizadas com bons
resultados no diagnstico clnico. Contudo, apenas alguns artigos descrevem a sua utilizao
simultnea para diagnstico e terapia (aplicao teranstica). As NP em multicamada ncleo-
concha representam uma estratgia alternativa que alia estes dois aspetos. As nanopartculas de
FeO
x
, utilizadas em imagem na ressonncia magntica e na fototerapia do cancro, so adequadas
para a estrutura interior (um ncleo) na preparao de NP em multicamada ncleo-concha. O
ouro e a prata so metais j bem conhecidos em qumica mdica e, dada a facilidade de ajuste de
condies (tunability), propriedades ticas e fisiolgicas nicas, tm uma srie de possveis
aplicaes que vo desde a teraputica in vitro/vivo, transporte de frmacos, imagem e
diagnstico, at monitorizao do tratamento podendo funcionar como estrutura exterior
(concha).
O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar nanopartculas monometlicas de Au, Ag
e FeO
x
, nanopartculas em multicamada ncleo-concha de Au/Ag, Ag/Au, FeO
x
/Au e FeO
x
/Ag e
investigar a sua citotoxicidade em culturas celulares especficas (clulas animais da linha celular
fibroblstica NIH 3T3), com a finalidade de fornecer um contributo para um melhor
entendimento das caractersticas de biocompatibilidade destes materiais para que no futuro
possam ser utilizados com segurana no diagnstico e na terapia clnica.

1

Captulo 1 - Enquadramento terico

1.1 As nanopartculas em contexto
Uma nanopartcula caracteriza-se por ter um tamanho entre 1 a 100nm [1]. As nanopartculas
(NP), hoje na ordem do dia, so utilizadas desde h muito. De facto, at ao sculo IX as NP
foram utilizadas na Mesopotmia por artesos, para criar um efeito brilhante na superfcie de
vasos. O Copo de Lycurgus, artefacto do sculo IV, (Figura 1) considerado como um dos mais
antigos registos de um objeto que integra nanomateriais. Apesar de forma no deliberada, e de
no ser conhecida a composio destes materiais e das suas propriedades, sculos antes de Cristo
j eram usados objetos que empregavam nanopartculas [2].

Figura 1 - Copo de Lycurgus [3].

O brilho e a cor de cobre metlico, de peas cermicas da Idade Mdia e do Renascimento, eram
alcanados atravs de um filme metlico, contendo nanopartculas de prata, ouro e cobre
dispersos homogeneamente na matriz vtrea do esmalte cermico, aplicado superfcie
transparente de um vidro. Estas NP foram criadas pelos artesos, adicionando cobre e sais de
prata e ouro e xidos juntamente com ocre vinagre e argila, superfcie de vidro [4].
Desde a alquimia medieval que o ouro considerado como o mais perfeito dos metais. O elixir
que concederia vida eterna aos seres humanos resultaria da transformao de outros metais em
ouro. A sua utilizao como agente teraputico remonta a 2.500 A.C. na China. Na Europa,
suspenses de ouro em gua so empregues desde a Idade Mdia, no tratamento da sfilis,
alcoolismo, tuberculose e artrite reumatoide [2].
As nanopartculas em contexto
2

Michael Faraday (1791-1867) foi o primeiro cientista a estudar de forma sistemtica e cientifica
as propriedades das NP tendo desenvolvido um mtodo de sntese de coloides de ouro [5].
Podemos dizer que a nanocincia comea com ele.
Do ponto de vista da fsica compreendemos hoje em dia a cor amarela do ouro escala macro
assim como a mudana de cor escala nano. A teoria da relatividade de Einstein explica a
interao entre este ouro macro com a luz visvel da qual deriva a cor amarela [6]. Um dos
maiores contributos para a compreenso das propriedades ticas das nanopartculas foi proposto
em 1908, pelo fsico alemo Gustav Mie [7]. A sua teoria, que representa uma soluo analtica
completa das equaes de Maxwell para a disperso da radiao eletromagntica por partculas
esfricas, veio ajudar os cientistas a confirmar que o tamanho das partculas determina a cor com
que so vistas e tambm permitiu o desenvolvimento de uma tcnica para o clculo do seu
tamanho. Em 1951, Turkevich et al. [8] estudaram o processo de nucleao e crescimento do
ouro coloidal. Kleemann, baseando-se na teoria de Mie, explica a absoro da prata coloidal em
1968 [9].
A aplicao biomdica das nanopartculas metlicas foi iniciada em 1971 por Faulk e Taylor

com
a introduo em microscopia eletrnica da tcnica de immunogold labellin. [Faulk W. P., Taylor,
G.M.. Immunochemistry 1971; 8: 10811083] citado por Boisselier et al. [10].
Segundo Atkins et al. [11] a verso original de nanotecnologia ter surgido na natureza quando
os organismos desenvolveram a capacidade de utilizarem luz e matria numa escala atmica, a
fim de conseguirem materiais capazes de lhes permitir sobreviver e manter todas as funes
necessrias manuteno da vida, nomeadamente sob o ponto de vista trfico, no
armazenamento de informao para a replicao do material gentico e para o movimento.
A existncia de uma grande diversidade de nanopartculas pode ser entendida se considerarmos a
natureza qumica (metais, xidos metlicos, semicondutores, polmeros, biomolculas), o
tamanho, a forma (esferas, cubos, varas), o estado de disperso (individualmente dispersas,
irreversivelmente agregados e aglomerados), o meio de disperso (gasoso, lquido, gel, matriz
slida) e a modificao da superfcie (revestimento) [1]. As propriedades das NP so fortemente
dependentes destas caractersticas [12] sendo o tamanho a mais importante. O reduzido tamanho
das nanopartculas conduz a uma maior razo rea/volume entrando-se por isso num domnio em
que os efeitos qunticos predominam [13]. Por outro lado, a existncia de uma grande
quantidade de tomos superfcie das NP (dado o pequeno tamanho), conduz a uma maior
reatividade, o que modifica as propriedades do material de que so feitas quando comparadas
com o congnere escala macro [14]. As propriedades ticas (emisso e/ou absoro de um
3

determinado comprimento de onda) podem ser controladas pelo tamanho e funcionalizao da
superfcie. Nos metais, o reduzido tamanho das nanopartculas conduz a um melhoramento no
comportamento magntico e a uma mais baixa temperatura de fuso ou sinterizao [1].
Neste trabalho, centraremos a nossa ateno sobre disperses aquosas de nanopartculas esfricas
metlicas e xidos metlicos.
Tm sido comercializados vrios produtos provenientes das nanotecnologias. Alguns exemplos
de aplicao so em medicina, no diagnstico, em sistemas de entrega de frmacos e engenharia
de tecidos; no mbito da energia para a reduo do consumo energtico, aumento da eficincia
da produo da energia, na utilizao de sistemas de energia mais ecolgicos e na reciclagem de
baterias; na qumica e ambiente em catlise e filtragem; no setor da informao e da
comunicao no desenvolvimento de novos aparelhos semicondutores e optoelectrnicos e
tambm ao nvel dos bens de consumo em alimentos, tica, cosmtica e txteis. sobre a
aplicao biomdica que o nosso estudo ir incidir. O conhecimento acerca dos mecanismos
bioqumicos associados exposio do organismo a estas partculas limitado. Para a aplicao
in vivo, um dos fatores crticos a sua toxicidade. Assim, o primeiro passo para a compreenso
da reao do organismo ao contacto com o agente envolve estudos de culturas de clulas (estudo
in vitro) [15].

A aplicao da nanotecnologia na medicina (nanomedicina) tem permitido o diagnstico e a
monitorizao do tratamento do cancro. Existem uma srie de plataformas de terapia de doenas
(lipossomas, NP de albumina, NP polimricas, dendrmeros) aprovadas pela United States Food
and Drug Administration (FDA) (Figura 2) estando outras em fase de desenvolvimento. Para a
imagiologia apenas esto aprovadas as NP de xido de ferro [16].

4


Figura 2 - Evoluo cronolgica dos nanomateriais aceites pela FDA para aplicao mdica. Adaptado da
Ref. [16]

Atualmente, as nanopartculas superparamagnticas de xido de ferro (SPION) so utilizadas
com bons resultados no diagnstico clnico [17, 18]. Contudo, apenas alguns artigos descrevem a
sua utilizao simultnea para diagnstico e terapia (nanomedicina teranstica) [19-22]. As NP
em multicamada ncleo-concha representam uma estratgia alternativa que alia estes dois
aspetos [13, 23-27]. As NP de FeO
x
utilizadas em imagem na ressonncia magntica (MRI) e na
fototerapia do cancro so adequadas para a estrutura interior (um ncleo) na preparao de NP
em multicamada ncleo-concha. O ouro e a prata so metais j bem conhecidos em qumica
mdica e, dada a facilidade de ajuste de condies (tunability), propriedades ticas e fisiolgicas
nicas, tm uma srie de possveis aplicaes que vo desde a teraputica in vitro/vivo,
transporte de drogas, imagem e diagnstico e monitorizao do tratamento [28] podendo
funcionar como estrutura exterior (concha).
O revestimento do interior (ncleo) das nanopartculas permite, entre outros: a modificao da
superfcie, a possibilidade de aumentar a funcionalizao, a estabilizao, a dispersibilidade, e a
reduo do consumo de materiais preciosos [13].
Melancon et al.

[27] descrevem os desafios para a aplicao de NP de magnetite com um
revestimento de ouro (numa combinao nica de propriedades ticas e magnticas) in vivo no
diagnstico e tratamento do cancro. Ito et al. sugerem uma estratgia teraputica, ilustrada na
Figura 3, que combina as funes de diagnstico e terapia [29]. Atravs de um sistema de
Abraxane
(Nabpaclitaxel)
aprovado pela FDA
em 2005
Doxil (stealth
liposomedoxorubicin) aprovado
pela FDA em 1978
Lipossoma
descrito nos
anos 60
Primeiro dendrmero
publicado em 1978
Genexol-PM (micela de
PLA-PEG, paclitaxel)
marcado na Coreia em
2007
NP polimrica
marcada (BIND-
014) entra em
testes clnicos
(2011)
Primeiro Lipossoma
marcado (1980)
Ciclodextrina
marcada- contendo
NP polimricas
(CALAA-01) entra
em testes clnicos
(2008)
Primeiro sistema de
libertao controlada de
polmeros para
macromolculas (1976)
Long circulating PLGA-
PEG NP (1994)
Ferumoxide (NP de xido de
Ferro) aprovado como agente
de imagem para a
ressonncia magntica (1996)
5

entrega de frmacos (DDS) as nanopartculas de magnetite funcionalizadas acumulam-se nos
tecidos tumorais podendo ser utilizadas quer para o diagnstico, atravs da ressonncia
magntica, quer para a terapia por hipertermia magntica, produo de calor sob o efeito de
campos magnticos alternados [30].

Figura 3 - Aplicao teranstica de nanopartculas de magnetite. Adaptado da Ref. [29]

A investigao atual aponta para que a medicina teranstica revolucionar o diagnstico e a
terapia clnica e inclusivamente, potenciar a medicina personalizada, j que permite associar um
diagnstico, que testa possveis reaes a uma nova medicao, a um DDS especfico com base
nos resultados do teste [31, 32]. Apesar de todo este potencial ainda necessrio muito trabalho
de investigao e desenvolvimento para que a aplicao clnica possa ser implementada. A
biocompatibilidade, resposta do organismo presena de um corpo estranho

[33], um
parmetro de grande importncia que depende da estrutura das nanopartculas, da sua
composio, estabilidade e dispersabilidade sob uma gama de diferentes condies. Uma
nanopartcula teranstica ideal alcanar rpida e seletivamente o tecido alvo, acumular-se-
permitindo a visualizao e imagem do tecido e a possvel libertao de frmacos. Ser segura,
preferencialmente biodegradvel e no ter subprodutos txicos.
possvel sintetizar nanopartculas utilizando uma grande variedade de mtodos usando
processos na fase slida, lquida ou gasosa. Neste trabalho, debruar-nos-emos sobre o mtodo
em fase lquida, no qual reaes qumicas simples daro origem formao de coloides em
Nanopartculas
de magnetite
Sensor de
Impedncia
Magntica
Hipertermia
Terapia
Diagnstico
6

soluo. Estes mtodos baseiam-se em processos de precipitao em soluo em que solues de
diferentes ies podem ser misturadas sob condies controladas (temperatura, pH, presso).
assim possvel produzir partculas de diferentes tamanhos e morfologia controlando a nucleao
e a cintica de crescimento das nanopartculas [1].

7

1.2 - Nanopartculas metlicas de ouro e prata

Dada a sua estabilidade nica enquanto metal puro, o ouro o elemento mais utilizado em
nanocincia. Por esta razo as nanopartculas de ouro apresentam um conjunto de bibliografia
muito mais alargado do que qualquer outro metal [8, 12, 34]. A colorao avermelhada,
caracterstica das nanopartculas de ouro, est relacionada com o seu reduzido tamanho e uma
grande quantidade de eletres sua superfcie. De acordo com a teoria de Mie, a disperso
luminosa produzida pela incidncia da luz sobre a superfcie de nanopartculas deve-se s
oscilaes dos eletres da banda de conduo (ressonncia plasmnica) que se propagam como
ondas, o que conduz ao valor caraterstico de absoro [4, 10]. Tal como as NP de ouro, as NP de
prata tambm apresentam uma ressonncia da superfcie plasmnica na regio do visvel que
surge a partir da oscilao coerente dos eletres da banda de conduo relativa rede de ies
metlicos.
Para o caso das NP de ouro quando existe aglomerao de partculas ou quando o dimetro
aumenta observa-se uma mudana de cor da soluo de vermelho para o azul. Na figura seguinte
apresenta-se o aspeto das solues de ouro coloidal com nanopartculas de diferentes dimetros.

Figura 4 - Diferentes cores das solues de ouro coloidal em funo do tamanho das NP [35].

As diferentes cores podem tambm surgir reversivelmente em resposta a uma mudana de
temperatura. Lv et al. [36]

desenvolveram NP de ouro cujas propriedades so reversveis por
simples mudanas de temperatura e pH. Liu et al.[37] revelam que a carga superficial das
nanopartculas coloidais depende precisamente da temperatura. Quando esta aumenta as solues
de ouro coloidal apresentam a cor vermelha e as NP esto dispersas na soluo e quando a
temperatura diminui a soluo coloidal apresenta a cor azul, associada aglomerao das NP. De
Nanopartculas metlicas de ouro e prata
8

facto, as interaes electroestticas dependem no s das propriedades da superfcie das
partculas como tambm do meio de disperso que as rodeia. Alm do pH e da temperatura, as
interaes electroestticas dependem da constante dieltrica do solvente e da fora inica (Jurgen
2003) citado por Liu et al. [37].
As nanopartculas de Au podem ser utilizadas em diferentes reas de investigao relacionadas
com a biologia em particular em aplicaes biomdicas [38, 39] sendo agrupadas em quatro
grandes grupos: marcao, entrega de frmacos [40], aquecimento (terapia fototrmica) [41] e
deteo [42, 43]. Ao longo das ltimas dcadas as NP de ouro tm sido amplamente estudadas
para utilizao na deteo e terapia do cancro [44]. Apesar disso, a sua aprovao farmacutica
depende ainda de estudos mais exaustivos. Craig et al. [45] estudaram a sua utilizao como
veculos de transporte de frmacos de platina anticancergenos com um melhor alcance e
absoro nas clulas dos rgos alvo.
A boa condutividade, estabilidade qumica e a atividade cataltica e antibacteriana da prata
coloidal tornam-na particularmente interessante em diversas aplicaes (por exemplo na
desinfeo de dispositivos mdicos, tratamento de guas, embalagens para armazenamento de
alimentos, revestimento de txteis) [46]. Os quantum dots de prata so luminescentes e so
importantes para aplicaes biolgicas como sondas, materiais fotoluminescentes e
biomarcadores [47].

Apesar da sua ao antimicrobiana e da lenta libertao de ies de prata,
pouco se conhece acerca da taxa de dissoluo das NP de prata sendo provvel que esta dependa
no s das espcies qumicas destas nanopartculas mas tambm do tamanho, da funcionalizao
da superfcie e da cristalinidade [48]. Landkveld et al. [49] estudaram a influncia do tamanho
das partculas na distribuio atravs dos tecidos e verificaram que, independentemente do
tamanho, as NP foram rapidamente removidas do sangue e dirigiram-se aos rgos em estudo. A
localizao preferencial das NP com dimetros inferiores a 20nm foi o fgado enquanto as
maiores NP se dirigiram preferencialmente para o bao e pulmes. O estudo sugere que o
tamanho condicione a toxicidade das nanopartculas. NP esfricas, aninicas e com dimetros
inferiores a 20nm so supostamente menos txicas [50]. Suresh et al.

[51] sintetizaram
nanocristalites de prata com um tamanho e forma uniformes mas com diferentes revestimentos
de superfcie que conferiam elevadas cargas positivas e negativas. Estes autores demonstram que
as propriedades fsico-qumicas das NP de prata incluindo a sua carga superficial, ligao
diferencial e potencial de agregao, so influenciados pelo revestimento da superfcie e so o
fator determinante que provoca a citotoxicidade e que condiciona as potenciais interaes
celulares.
Nanopartculas metlicas de ouro e prata
9

Embora no exista uma toxicidade inerente, os estudos toxicolgicos so fundamentais para que
se garanta que as nanopartculas no tenham um efeito adverso na sade. Apesar dos vrios
estudos apresentados at agora, ainda no foram apresentados procedimentos sistemticos com
resultados definitivos [52]. Porm, poder-se- dizer que uma das formas de aumentar a
biocompatibilidade das NP utilizar o ouro e a prata como revestimento pois este melhora as
propriedades fsicas e aumenta a estabilidade qumica das NP protegendo-as da corroso e
oxidao.

11

1.3 - Nanopartculas magnticas

O magnetismo nos materiais decorre do momento magntico dos eletres (spin dos eletres no
seu eixo e ao seu movimento orbital em torno do ncleo) [53]. O magnetismo tem uma natureza
dipolar. A classificao das propriedades magnticas dos materiais baseia-se na sua
suscetibilidade magntica (m). Uma vez que a magnetizao de um material magntico
proporcional ao campo aplicado, a suscetibilidade magntica um fator de proporcionalidade,
definida como m = M/H onde M a magnetizao e H o campo magntico [54]. Existem vrios
tipos de magnetismo: o diamagnetismo, uma fraca reao repulsiva negativa do material a um
campo magntico aplicado (Cd, Cu, Ag, Sn e Zn em que m<0), o paramagnetismo, uma fraca
reao atrativa do material a um campo magntico aplicado (Al, Ca, O, Pt, Ti para os quais
m>0), e o ferromagnetismo, a criao de uma magnetizao muito grande no material quando
sujeito a um campo magntico aplicado (depois da remoo do campo aplicado o material retm
bastante magnetizao, nos metais Fe, Ni e Co), antiferromagnestismo, um tipo de magnetismo
em que na presena de um campo magntico os dipolos magnticos dos tomos se alinham em
direes opostas no havendo magnetizao (caso do Mn e do Cr no estado slido temperatura
ambiente) e o ferrimagnetismo, um tipo de magnetismo no qual mediante a aplicao de um
campo magntico os momentos dos dipolos magnticos dos diferentes ies (slido com ligaes
inicas) se alinham de forma antiparalela criando um momento magntico (alguns materiais
cermicos denominados ferrites) [53] (Figura 5).

Figura 5 Alinhamento dos dipolos magnticos para diferentes tipos de magnetismo: (a) ferromagnetismo (b)
antiferromagnetismo e (c) ferrimagnetismo. Adaptado da Ref. [53]

Uma reduo de tamanho, abaixo do denominado raio superparamagntico, (da ordem dos 10
nm) induz uma transio magntica nas partculas ferri- ou ferro-magnticas originando elevados
momentos magnticos sob o efeito de um campo magntico e nenhum momento magntico aps
a remoo do campo magntico externo. O superparamagnetismo uma forma de magnetismo
que ocorre nestas nanopartculas para as quais se verifica uma perda de magnetizao na
(c) (b) (a)
Nanopartculas magnticas
12

ausncia de um campo magntico [55] (Figura 6). O campo coercivo (H
C
) determina a energia
necessria para inverter a direo dos dipolos no material e reduzir a magnetizao a zero. O
ciclo limite (saturao) ocorre para um valor de H suficientemente elevado. A magnetizao de
saturao (M
S
) representa a mxima magnetizao possvel resultante do alinhamento de todos
os dipolos magnticos no material com o campo exterior. Quando se reduz o campo aplicado at
zero verifica-se um magnetismo residual (M
R
).

Figura 6 - Curva de magnetizao versus campo magntico para nanopartculas superparamagnticas (NP
SPM) e ferri- ou ferro-magnticas (NP FM) onde (H
C
) o campo coercivo, (M
S
) a magnetizao de saturao
e (M
R
) a magnetizao remanescente. Adaptado da Ref. [30]

Na Tabela 1 encontram-se os diferentes tipos de nanopartculas magnticas.
A famlia dos xidos de ferro formada por dezasseis compostos entre os quais se distinguem
xidos, xidos mistos, oxihidrxidos e hidrxidos de ferro [56]. As NP de magnetite Fe
3
O
4
ou
magemite -Fe
2
O
3
so compostos cermicos que possuem uma estrutura cbica em espinela
inversa B(AB)O
4
(Figura 7) que corresponde a muitos compostos ditos ferrites, como
FeMgFeO
4
, FeTiFeO
4
, ZnSnZnO
4
, FeNiFeO
4
, entre outros, de grande interesse como materiais
magnticos. Nesta estrutura metade dos ies trivalentes, B, est nos interstcios tetradricos, e os
caties bivalentes, A, bem como a outra metade dos trivalentes esto nos interstcios octadricos
[19, 57].

M
a
g
n
e
t
i
z
a
o
,

M

Campo Magntico, H
NP FM
NP SPM
13

Tabela 1- Diferentes tipos de nanopartculas ferri- ou ferro-magnticas
NPM Exemplos Caractersticas
xido
metlicos
SPION
(Fe
3
O
4
ou Fe
2
O
3
)

MFe
2
O
4
onde M
um catio
2+
de
Mn, Fe, Co ou Ni
Fceis de sintetizar, biocompatveis. Compostas por
magnetite nanocristalina (Fe
3
O
4
) ou magemite (Fe
2
O
3
) e
protegidas por um revestimento polimrico so
aplicados na MRI e em DDS. A necessidade de melhorar
as propriedades magnticas para aplicao em imagem
molecular tem promovido o desenvolvimento de xidos
de ferro dopados com outros metais e ligas revestidas
por magnetite (FePt/Fe
3
O
4
).
Metlica Fe
Co
Ni
Quimicamente instveis, formando xidos na presena
de gua ou oxignio, tendncia para agregar e portanto
protegidos numa estrutura ncleo-concha de Au, SiO
2
ou
Fe
3
O
4
. Ainda em estudo para a aplicao biolgica.
Liga metlica FePt
FeCo

FePt/Fe
3
Pt
Exibem propriedades superparamagnticas, contudo a
sua biocompatibilidade est ainda a ser investigada
atravs do encapsulamento em conchas de Au.
Esta classe de partculas principalmente utilizada para
fabricar dispositivos para novas aplicaes
nanomagnticas porque permite uma engenharia precisa
das propriedades magnticas por ajuste da magnetizao,
e das dimenses do ncleo e concha.

Figura 7 - Estrutura em espinela inversa da magnetite. (a) Ilustrao de um lado da unidade cbica da clula
(b) Ilustrao do plano [111] com a organizao ferrimagntica na magnetite. Adaptado da Ref. [58]
(a)
(b)
Interstcio tetradrico
Interstcio octadrico
14


No caso da magnetite, o momento magntico dos caties Fe
3+
nos interstcios octadricos
cancela o momento magntico dos ies Fe
3+
dos interstcios tetradricos e assim o momento
magntico desta ferrite deve-se aos ies Fe
2+
nos interstcios octadricos.

A penetrao de campos magnticos atravs de tecidos humanos e a capacidade para detetar e
manipular remotamente materiais magnticos tem sido usada e investigada para aplicao na
medicina h sculos [29].
A reduo de tamanho dos materiais magnticos apresenta vantagens que os tornam adequados
para tcnicas teraputicas e de diagnstico. Parmetros magnticos tais como a coercividade das
nanopartculas podem ser ajustados atravs da reduo do seu tamanho. Consequentemente, o
desempenho biomdico da amostra pode ser otimizado. O superparamagnetismo especialmente
vantajoso para experincias in vivo: a ausncia de coercividade ou o facto das nanopartculas no
apresentarem magnetizao depois das medies de diagnstico ou da terapia vo prevenir a
potencial agregao das partculas que poderia causar a formao de embolias nos vasos
sanguneos [30].
Dada sua biocompatibilidade quando comparada com outros materiais magnticos, estabilidade
qumica no meio fisiolgico e tambm pela sua fcil sntese, as SPION so importantes nas
cincias mdicas e biolgicas [59, 60]. Tipicamente so constitudas por um ncleo de um metal,
ou de um xido metlico, encapsulado por um revestimento metlico, polimrico ou cermico,
de modo a melhorar a estabilidade e aumentar o tempo de meia vida no organismo e minimizar a
sua toxicidade a qual, normalmente depende da dose [61].
As SPION tm sido utilizadas experimentalmente num nmero significativo de aplicaes tais
como agentes de contraste para a MRI [62, 63] e no tratamento por hipertermia e em DDS [64],
em particular a entrega de frmacos controlada magneticamente.
Carregando cisplatina em NP Au-Fe
3
O
4
Xu et al.

[65] sugerem uma nova estratgia de
tratamento fototrmico para o glioma maligno. A utilizao de conchas de metais nobres, que
promovem o revestimento do ncleo metlico, evita a sua corroso e oxidao. Alm disso, a
interao entre os dois metais pode aumentar a estabilidade qumica [66]. O revestimento de
nanopartculas magnticas com ouro confere magnetite propriedades plasmnicas o que as
torna muito interessantes para aplicaes ticas, biolgicas e magnticas [67].

15

1.4 - Nanopartculas ncleo-concha

As nanopartculas ncleo-concha so nanoestruturas compostas por um material interior (ncleo)
revestido por outro (concha) [13, 68]. Uma nanoconcha metlica consiste numa nanopartcula
esfrica dieltrica rodeada por uma camada metlica ultrafina (concha). Variando a composio
e a espessura da concha das nanopartculas, as nanoconchas podem ser projetadas e preparadas
com ressonncias plasmnicas desde o visvel at s regies infravermelhas do espetro
eletromagntico (Oldenburg, 1999) citado por Hirsch et al. [25]. Alm disso, as nanoconchas
metlicas mostram superfcies melhoradas para disperso de Raman (SERS), permitindo
conceber substratos que correspondam ao comprimento de onda desejado em funo da
aplicao, por exemplo, um nanosensor a operar no infravermelho prximo (NIR), onde a
penetrao da radiao atravs dos tecidos mxima pode ser utilizado em ensaios no sangue,
em espetroscopia intracelular ou no diagnstico in vivo [25]. As NP bimetlicas de ouro e prata
com diferentes razes e estruturas so os sistemas mais encontrados na literatura. fundamental
ter um controle simultneo e preciso do tamanho e composio qumica do ncleo e da concha.
As propriedades podem ser modificadas mudando os materiais constituintes ou a razo ncleo-
concha [13]. Os desafios experimentais so vrios: o controlo preciso da continuidade do
revestimento (evitar o crescimento descontnuo sobre o ncleo), uma nucleao independente do
material da concha [69, 70],

a espessura do revestimento e a monodispersividade [71]. Em
princpio existe uma forte correlao entre a forma do ncleo e da concha sendo possvel a
preparao de NP ncleo-concha com a morfologia desejada [72].
Quando comparadas com as NP monometlicas, este tipo de estrutura bimetlica exibe
caractersticas melhoradas, j que existe partilha de eletres entre os dois metais e tambm
efeitos geomtricos causados pelos diferentes parmetros da rede [73]. As propriedades fsicas e
a reatividade qumica das NP ncleo-concha podem ser formatadas atravs do ajuste da
composio, espessura e estrutura da superfcie da concha [74].

Por exemplo, devido mudana
dielctrica na interface entre o ouro e a prata a banda da superfcie plasmnica do ouro pode ser
melhorada atravs do revestimento com prata [75].
Conforme anteriormente referido, as propriedades ticas do ouro, na concha, combinadas com as
propriedades magnticas do xido de ferro, no ncleo, (Figura 8) conduzem a uma estrutura com
propriedades nicas que podero ser utilizadas simultaneamente numa estratgia combinada
Nanopartculas ncleo-concha
16

teranstica (de deteo e terapia) [27, 76-78]. Lim et al.

[79] demonstraram a capacidade destes
sistemas para a funcionalizao biolgica.

Figura 8- Esquema da estrutura ncleo-concha. Adaptado da Ref. [80]

As NP multifuncionais que combinam agentes teraputicos e de imagem e que respondem a um
estmulo externo representam uma ferramenta poderosa na monitorizao da entrega e da
libertao de frmacos e no estudo da sua eficcia [81].
Alm das NP FeO
x
-Au existem outros sistemas que podem ser utilizados na hipertermia, por
exemplo as nanoconchas de slica-ouro. A utilizao de nanoconchas na terapia fototrmica
representa uma estratgia promissora de tratamento do glioma maligno [82].
O artigo de reviso de Chaudhuri et al. [13] descreve detalhadamente a grande variedade de NP
ncleo-concha agrupadas de acordo com o material que lhes deu origem. Assim tm-se quatro
grandes grupos: inorgnico/inorgnico, inorgnico/orgnico, orgnico/inorgnico e
orgnico/orgnico (Tabela 2). O nosso sistema enquadra-se no primeiro grupo com concha de
outro material inorgnico que no slica. Alm das possibilidades includas na tabela este
primeiro grupo engloba tambm os semicondutores/no-semicondutores como o sistema
CdS/SiO
2
, os semicondutores/semicondutores por exemplo CdSe/ZnS e os lantandeos
inorgnico/inorgnico (LaF
3
/Eu).

Sntese Aplicao
Caracterizao
Nanopartculas ncleo-concha
17


Tabela 2- Classificao das nanopartculas ncleo-concha. Adaptado da Ref. [13]
Grupo Concha Ncleo Exemplo
I
n
o
r
g
n
i
c
o
-
I
n
o
r
g
n
i
c
o

SiO
2

Metlico Au, Ag, Ni, Fe Au/SiO
2

xido metlico Fe
3
O
4
, ZnO ZnO/SiO
2

Calcogeneto CdS, AgI CdS/SiO
2

Sal metlico CaCO
3
CaCO
3
/SiO
2

Outro
material (Ag,
Co, Pt, Fe,
Cu)
Metlico Au, Ni, Fe, Ag Au/Ag
No metlico C C/Au
xido metlico Fe
3
O
4
Fe
3
O
4
/Au
Calcogeneto CdS CdS/Ag
I
n
o
r
g
n
i
c
o
-
O
r
g
n
i
c
o

Orgnica
(Polimrica)
Magntico
Metlico Fe/PS
xido metlico Fe
3
O
4
/PEG
No magntico
Metlico Ag/PS
xido metlico SiO
2
/PS
Calcogeneto CaCO3/PS
Sal metlico ZnSe/cido ascrbico
Orgnico-
Inorgnico
Inorgnica Orgnico
Poliuretano/Au
Orgnico-
Orgnico
Orgnica Orgnico
PS/N-
isopropilacrilamida

19

1.5 - Sntese e estabilizao de nanopartculas

Existem duas abordagens distintas para a sntese de NP metlicas, de-cima-para-baixo (top-
down) ou de-baixo-para-cima (bottom-up), resultando em diferentes formas e tamanhos. O
primeiro um mtodo fsico/mecnico que consiste na reduo de partculas macroscpicas para
a escala nano. Pouco apropriado quando se pretende um controle estreito do tamanho e da forma.
O segundo um mtodo qumico, tambm conhecido como auto-montagem. Comea com o
controle de tomos e molculas a fim de obter estruturas funcionais maiores [11] e envolve a
dissoluo de um sal num determinado solvente. O primeiro passo envolve a reduo dos ies
metlicos em soluo por um agente redutor adequado.
2M
n+

reduo
M
(n-1)+
+ M
0

Os tomos produzidos atuam como centros de nucleao catalisando a reduo dos ies
remanescentes presentes na soluo [42]. Existe hoje um vasto conjunto de mtodos de sntese.
Por exemplo no artigo de reviso de Wahajuddin e Arora [83] encontra-se uma descrio
detalhada para a preparao nanopartculas de xido de ferro superparamagntico atravs de
processos que vo desde o antigo mtodo da co-precipitao at pirlise induzida por lazer. No
caso da prata e do ouro e em particular para um sistema ncleo-concha, Anandan et al.
descrevem um processo de sntese sonoqumica [84], atravs do qual possvel produzir
nanomateriais com uma distribuio de tamanhos muito inferior obtida por outros mtodos.
Neste trabalho as NP foram preparadas por reduo qumica em soluo aquosa. Neste caso,
temos um sistema de trs componentes: um solvente (a gua), um precursor (sal metlico) e um
agente redutor. Adicionalmente podemos ter tambm um agente surfatante, um tensioativo que
utilizado para promover a estabilizao das nanopartculas. Na figura seguinte apresenta-se o
mecanismo de sntese de NP na fase lquida.
Sntese e estabilizao de nanopartculas
20


Figura 9 - Mecanismo de sntese de NP na fase lquida. Adaptado da Ref. [1]

Atkins et al. [11] consideram como etapas bsicas desta sntese a solvatao dos reagentes e
aditivos, a formao de um ncleo slido e estvel a partir da soluo e o crescimento das
partculas slidas pela incorporao de material at que os reagentes tenham sido consumidos.
Os trs passos so ento a nucleao, o crescimento e a estabilizao.
Uma das limitaes quando se trabalha com NP a reprodutibilidade da sntese. Lim e Lee [85]
estudaram um conjunto de fatores experimentais que afetam a sntese por reduo qumica de NP
de prata e concluram que todos os parmetros se relacionam de forma no linear.
Uma vez em contato, um par ou grupo de NP vai coalescer de forma a reduzir a energia de
superfcie [86]. Numa disperso coloidal estabilizada e dado o seu movimento Browniano
(movimento aleatrio das partculas num fluido) as partculas podem colidir mas nunca agregar-
se [87]. A estabilizao pode ser conseguida com estabilizantes, por exemplo, polmeros, metais
e carboxilatos entre outros e pode tambm ser alcanada atravs de foras eletrostticas de ies
adsorvidos superfcie das partculas [13, 88, 89]. Na Figura 10 apresentam-se as duas principais
metodologias para a estabilizao das nanopartculas.

Molculas
Ncleos
Nanopartculas
Aglomerado
Agregado
21


(a) (b)
Figura 10 - Partcula estabilizada (a) eletrostaticamente e (b) por repulses estricas. Adaptado da Ref. [89]

Outra forma de estabilizao consiste no encapsulamento em polmeros. Nanaie et al. descrevem
a sntese de nanoestruturas ncleo-concha de prata e ouro estabilizadas em dendrmeros [90].
A escolha do agente redutor muito importante para controlar a velocidade da reao e o
tamanho das partculas [13]. Existe uma grande variedade de agentes redutores e a capacidade de
reduo do metal est estritamente relacionada com o potencial redox dos diferentes metais. Na
tabela seguinte apresenta-se o potencial de reduo dos metais em estudo.

Tabela 3 - Potencial de reduo dos metais em estudo [13]
Reao Potencial do eltrodo padro, E
0
(V)
Fe
2+
+ 2e
-
= Fe -0,447
Ag
+
+ e
-
= Ag 0,7996
Au
+
+ e
-
= Au 1,692

Para determinadas aplicaes biolgicas necessrio funcionalizar a superfcie das NP(Figura
11). As nanopartculas podem ser associadas a ligandos (frmacos, anticorpos, protenas,
enzimas, etc.) que reconheam de forma especfica determinado tipo de clulas. A modificao
da superfcie de NP de ouro e prata com diferentes recetores orgnicos importante, por
22

exemplo, para o desenvolvimento de marcadores biolgicos assim como nanodispositivos
optoelectrnicos [91]. O ouro, por exemplo, pode ser repetidamente funcionalizado com
molculas orgnicas de tiis [67, 92].

Figura 11 NP funcionalizada. Adaptado da Ref. [17]
Agente de Targeting
Agente de Terapia Gentica
Protena teraputica
Frmaco para Quimioterapia
Hipertermia Magntica
Revestimento
biocompatvel

23

1.6 - Caracterizao das nanopartculas

Depois de sintetizadas as NP tm de ser caracterizadas. A caracterizao importante para
perceber e controlar a sntese e as aplicaes. As principais tcnicas utilizadas na caracterizao
de NP esto resumidas na Tabela 4. As propriedades ticas de uma NP metlica dependem
sobretudo da ressonncia da superfcie plasmnica. A cor est diretamente relacionada com a
absoro parcial da luz pelos eletres livres das NP, resultando na visibilidade da parte
complementar da luz [93]. Na Figura 12 apresenta-se o espetro eletromagntico com os
respetivos comprimentos de onda e a rosa das cores.
Os mximos da ressonncia plasmnica dependem do tamanho e da forma da nanopartcula, da
espcie metlica e do meio dieltrico circundante. Partculas esfricas tm uma funo dieltrica
complexa dependente da frequncia. O coeficiente de absoro independente do tamanho para
grandes partculas mas para partculas pequenas, a existncia de eletres livres na banda de
conduo, caso da prata e do ouro, conduz a uma mudana na funo dieltrica e nas
propriedades ticas [93].

Figura 12 - Espetro eletromagntico e rosa das cores [94]

As NP de prata coloidal esfricas absorvem a um comprimento de onda de 390-420 nm,
apresentando uma cor amarela. As NP esfricas de ouro absorvem tipicamente a cerca de 500nm
e tem uma cor que varia entre o rosa, violeta, azul e o bordeaux. Este facto permite confirmar a
sua formao. A intensidade de absorvncia no pode relacionar-se linearmente com o nmero
de partculas uma vez que dependente do tamanho dos aglomerados [93].

Caracterizao das nanopartculas

24


Tabela 4 - Principais tcnicas utilizadas na caracterizao de NP
Tcnica Aplicao Ref.
Curvas de magnetizao Estudo das propriedades magnticas
[30, 71, 80, 95-97]
DLS Dimetro hidrodinmico
[48, 59, 98]
EDX Composio qumica
[92, 96, 99]
FT-IR Identificao dos tipos de funcionalidades de
ligandos associados s NP
[92, 100]
SEM Anlise morfolgica (forma e tamanho)
[57, 59, 98]
TEM Anlise morfolgica (forma e tamanho)
[23, 30, 48, 57, 59, 67,
71, 80, 92, 95-102]
UV-Vis Identificao da amostra ressonncia da
superfcie plasmnica
[23, 67, 71, 92, 99-102]
XRD Identificao da estrutura atravs dos padres de
difrao
[67, 71, 92, 96, 100,
103]

De forma a confirmar a formao de nanoestruturas ncleo-concha frequente a utilizao de
tcnicas de XRD em que a estrutura cristalina do ncleo se torna indetetvel aps recobrimento.
Podem tambm usar-se tcnicas eletroqumicas, nomeadamente a voltametria. Aoki et al.
descrevem a deteo independente de propriedades do ncleo e da concha atravs da voltametria
[88, 104].

25

1.7 - Farmacocintica e biodistribuio vs citotoxicidade

Conforme j se referiu, no estudo da interao das nanopartculas com as clulas um dos
primeiros aspetos a ter em considerao a sua biocompatibilidade, a capacidade do material
para dar uma resposta adequada numa aplicao especfica [33]. As NP devero ser
desenhadas/preparadas para que no sejam txicas para as clulas testadas [105]. Harper et al.
[106] investigaram a influncia do tamanho do ncleo, a qumica e a carga da superfcie na
toxicidade do material. Auffan et al. [107] descrevem o efeito da estabilidade qumica e a
toxicidade in vitro.
Outro dos desafios para a aplicao das nanopartculas in vivo a sua entrega no tecido alvo. A
eficcia da maioria destes sistemas est limitada pela presena de barreiras biolgicas (Figura
13) [17, 27].
Os parmetros chave do desempenho das nanopartculas so a sua superfcie qumica, devendo
apresentar propriedades fsico-qumicas uniformes, e o tamanho, devero ser monodispersas
(apresentar uma distribuio estreita de tamanhos) e ter dimetros inferiores a 100nm.
A biocompatibilidade e a estabilidade das nanopartculas magnticas podem ser melhoradas
atravs do revestimento - com polmeros ou outros compostos hidroflicos (polietilenoglicol
(PEG), polissacardeos e outros) [108, 109] - o qual pode aumentar o tempo de meia vida destas
de minutos para dias [110]. Para aumentar a eficincia das nanoestruturas magnticas revestidas
com Au, as suas propriedades fsico-qumicas devem ser minuciosamente controladas [27]. O
tamanho deve ser to pequeno quanto possvel para escapar filtragem esplnica (as NP so
absorvidas pelas clulas fagocitrias, acumulando-se no sistema retculo-endotelial, tais como as
clulas Kupffer do fgado) [111], mas suficientemente grande para evitar a depurao renal.
Por exemplo, nanopartculas maiores que 200nm so sequestradas pelas clulas fagocitrias do
fgado e NP com dimetros inferiores a 5,5nm so rapidamente removidas atravs da depurao
renal. Alm do tamanho, outro aspeto a ter em conta o tempo de meia vida que dever ser
alargado, de modo a garantir a acumulao no tecido alvo [111]. A superfcie qumica
particularmente importante para evitar a ao do sistema imunolgico e aumentar o tempo de
meia vida das nanopartculas.

Farmacocintica e biodistribuio vscitotoxicidade
26

Sangue Fgado e Bao Rins Barreira Hemato-
Enceflica
Extravaso
B
a
r
r
e
i
r
a

R
e
s
t
r
i
e
s

- Fluido altamente complexo

- Degradao enzimtica

- Reconhecimento imunitrio
- Objetos > 100 nm so
reconhecidos e
eliminados da
circulao
- Objetos < que os
poros de 10 nm do
glomrulo so
filtrados para fora do
sangue
- A forte coeso entre as
clulas endoteliais do crebro
previne o transporte passivo
de substncias

- Os intervalos entre as
clulas endoteliais
restringem a sada de
materiais do sangue

E
s
t
r
a
t
g
i
a
s

- PEGylation

- Polmeros Zwitterionic

- Encapsulao do frmaco ou
da bioteraputica
- Dimetro
hidrodinmico < 100 nm

- Dimetro
hidrodinmico
> 10nm

- Plasmlise das clulas
endoteliais para abrir o espao
intercelular

- Transporte ativo atravs dos
vasos sanguneos
- Aumento da
permeabilidade e do
efeito de reteno

- Dimetro
hidrodinmico entre 30
e 100 nm

Figura 13 - Barreiras fisiolgicas e limitaes que condicionam a ao de uma nanopartcula para ao
teraputica. Adaptado da Ref. [17]

Alm de se acumularem no reticulo endotelial do bao e do fgado, atuando de forma passiva na
localizao de determinados alvos (targeting passivo), as nanopartculas podem, conforme j se
referiu, apresentar a capacidade de targeting ativo (por exemplo, em relao a determinadas
clulas cancergenas) atravs da conjugao a grupos funcionais que possuem uma afinidade
elevada para determinadas molculas ou estruturas biolgicas, [27].
Para j centraremos a nossa ateno na aplicao in vitro. O primeiro passo para a compreenso
de como o organismo reage na presena de um corpo estranho envolve estudos de clulas em
cultura. As nanopartculas podem ter vrios efeitos adversos ao nvel celular interagindo com os
componentes celulares vitais tais como a membrana, citoplasma, ou ncleo. Danos ao nvel do
ADN, stress oxidativo, apoptose so alguns dos possveis resultados adversos [112]. Alm de um
simples teste de inspeo visual microscpica de clulas, a maioria dos estudos de citotoxicidade
usados nos artigos que estudam as nanopartculas mede a morte celular atravs de mtodos
colorimtricos nos quais se incluem os que medem a integridade da membrana plasmtica e os
que estudam a atividade das mitocndrias [15, 112]. O teste que utilizaremos neste trabalho o
ensaio de viabilidade (para distinguir as clulas vivas das mortas) mais utilizado. O mtodo
Plasma
Eritrcitos
Leuccitos
clula endotelial
SPION
clula
endotelial
Sangue
Astrcito
Pericito
Neurnio
Forte
coeso
Farmacocintica e biodistribuio vscitotoxicidade
27

baseia-se na medida da atividade da enzima desidrogenase mitocondrial, que quando ativa,
capaz de metabolizar o MTT (tetrazlio amarelo) num composto prpura. O nmero de clulas
vivas pode ser determinado quantificando a produo deste composto e medindo a absorvncia a
cerca de 500nm [15].

29

Captulo 2 - Parte experimental

2.1 - Reagentes
Para a sntese nas NP foram utilizados os seguintes reagentes: cido cloroarico tri-hidratado
(Acros, AnalarR Normapur Probalo e Alfa Aesar), amido (Merck), borohidreto de sdio (Riedel-
de Han), -ciclodextrina (TCI Europe nv), citrato trisdico dihidratado (May & Baker), -D-
glucose (Sigma), hidrxido de sdio (Fluka e Fisher Scientific), nitrato de prata (Panreac),
cloreto de ferro (III) hexahidratado (Panreac), cloreto de ferro (II) tetrahidratado (Merck),
hidrxido de amnio (Riedel-de Han), cido clordrico (Fisher Scientific) e cido perclrico
(Merck p.a.). As solues aquosas foram preparadas com gua ultra pura (condutividade 18M)
obtida atravs do sistema de purificao Milli-Q Direct 8 (Millipore).
Nos estudos de citotoxicidade foram utilizadas clulas de tecido do embrio do rato suo
(fibroblastos de rato) da linha celular NIH 3T3 (DSMZ), meio DMEM (Gibco), AA (Gibco),
SBF (Gibco), PBS (Sigma), soluo de tripsina (Gibco), MTT (Sigma) e DMSO (Labscan,
Riedel-de Han).

2.2 - Equipamento
Os reagentes foram pesados numa balana (Mettler Toledo AB204). As solues foram agitadas
e aquecidas numa placa de aquecimento Heidolph MR 3001. Os valores de pH das solues
foram medidos utilizando um pH - metro 691 (Metrhm). O micro-ondas (Becken) utilizado tem
uma potncia de sada de 700W e uma frequncia das micro-ondas de 2450MHz. Os espetros de
UV-vis foram obtidos num espetrofotmetro Cintra 40 tendo-se utilizado a gua ultra pura como
branco das amostras e uma clula de quartzo (Labox). As medies de DLS foram realizadas no
Zetasizer Nano ZS (Malvern). Para a centrifugao das amostras usou-se uma centrifugadora
Sigma 3-30K.
A morfologia e composio das amostras foram confirmadas atravs de imagens de TEM e EDX
por um microscpio JEOL 2010F a operar a 200 kV. As amostras para TEM foram preparadas
pela deposio de uma gota da suspenso diluda num grelha de cobre revestida com carbono e
secas ao ar antes das medies. No anexo I apresenta-se uma descrio das tcnicas
experimentais utilizadas na caracterizao dos nanocristais preparados.
Parte experimental
30

As culturas celulares foram preparadas em cmara de fluxo laminar Class II Biological Saftety
Cabinet (Nuaire) e incubadas numa estufa a 37C e 5% CO
2
DH Autoflow Automatic CO
2
Air-
jacked Incubator (Nuaire). Para a observao das clulas utilizou-se um microscpio invertido
(Olympus CK40) e um microscpio invertido (Nikon) para a obteno de fotografias. A
absorvncia foi medida num leitor de placas (Perkin Elmer). As amostras utilizadas nos testes de
citotoxicidade foram desidratadas no RVT400 Refrigerated Vapor Trap (Thermo Savant),
pesadas numa microbalana (Mettler Toledo AT20) e redispersas num banho de ultrasons
(Branson 2510).

2.3 - Preparao de nanopartculas
Tal como j foi referido as NP podem ser sintetizadas por uma grande variedade de mtodos
usando processos na fase gasosa, lquida ou slida [1]. Neste trabalho as nanopartculas foram
preparadas atravs da reduo de ies metlicos em soluo aquosa com diferentes agentes
redutores, seguindo ou adaptando diferentes mtodos publicados. Depois de sintetizadas
procedeu-se caracterizao por UV-Vis, DLS e nalguns casos a TEM e EDX. No anexo II
esto os protocolos elaborados. Apresenta-se seguidamente uma descrio detalhada das
diferentes metodologias e respetivas condies de sntese.

2.3.1 - Nanopartculas de Au
2.3.1.1 - Reduo de HAuCl4.3H2O com -D- glucose
As primeiras NP preparadas foram de Au tendo-se utilizado o HAuCl
4
3H
2
O como precursor e a
-D-glucose como agente redutor e passivante. O mtodo utilizado seguiu o descrito por Liu et
al. [113]. Fez-se a mistura de 50 L de uma soluo de -D-glucose (0,03M) e 200 L de
HAuCl
4
3H
2
O (0,05M). A soluo foi agitada temperatura ambiente por 30min sem haver
alterao da cor. Adicionou-se seguidamente gota a gota uma soluo de NaOH (0,05M) at no
se verificar alterao da cor. Os valores de pH foram sistematicamente medidos durante a adio
de NaOH, tendo variado entre 3 e 7.

Parte experimental
31

2.3.1.2 - Reduo de HAuCl43H2O com -D- glucose na presena de amido
O protocolo seguiu o artigo de referncia de Raveendran et al. de 2006 [100]. Neste
procedimento as NP foram preparadas temperatura ambiente atravs da adio de 80 L duma
soluo 0,1M de HAuCl
4
3H
2
O e de 120 L de uma soluo 0,1M de -D-glucose a 4 mL de
uma soluo aquosa de amido a 0,20% (p/v), seguida da adio de 30 L de uma soluo 1M de
NaOH (pH=4). Neste caso, o amido foi utilizado como agente passivante da superfcie das NP a
fim de evitar a aglomerao.

2.3.1.3 - Reduo de HAuCl43H2O com -ciclodextrina
As NP foram preparadas de acordo com a metodologia descrita por Pande et al. [91] atravs da
dissoluo, seguida de agitao, de 0,0396g de -ciclodextrina (-CD) em 5mL de gua.
Seguidamente foi feita a adio de 0,02mL da soluo do sal metlico HAuCl
4
(10 mM).
Passados 2 min., de modo a elevar o pH at 11, adicionou-se 0.05mL de NaOH (1.0 M)
soluo. Finalmente, a mistura reacional foi rigorosamente agitada e aquecida em banho-maria
(<100 C). A formao das NP metlicas foi confirmada aps 5 min. atravs da observao da
mudana de cor da soluo, inicialmente incolor, para cor de rosa-salmo.

2.3.2 - Nanopartculas de Ag
2.3.2.1 - Reduo de AgNO3 com -D-glucose atravs do uso de microondas
O protocolo seguiu o artigo de referncia de Raveendran et al. de 2006 [100]. As NP foram
preparadas atravs da adio de 10L duma soluo 0,1M de AgNO
3
e de 25L duma soluo
0,1M de -D-glucose a 2mL de uma soluo aquosa de amido a 0,20% (p/v). Para a reduo dos
ies metlicos a mistura reacional foi aquecida (100C) no microondas durante 60 segundos.

2.3.2.2 - Reduo de AgNO3 com -D-glucose num banho termostatizado
As NP de Ag foram sintetizadas adaptando o procedimento descrito por Raveendran et al. de
2003 [101]. Adicionaram-se 200L de uma soluo de AgNO
3
(0,10 M) a 6mL de uma soluo
aquosa de amido a 0,20% (p/v) agitando-se manualmente at dissoluo completa.
Posteriormente, adicionaram-se 300L da soluo de -D glucose (0,10 M) mistura anterior e
agitou-se manualmente. Entre cada passo purgou-se a soluo sob fluxo de azoto. A mistura
Parte experimental
32

resultante foi finalmente colocada em banho termostatizado temperatura de 60C durante 22
horas.

2.3.2.3 - Reduo de AgNO3 com NaBH4
As NP de Ag foram sintetizadas de acordo com Solomon et al. [102]. Depois de preparadas as
solues aquosas arrefeceu-se a soluo de NaBH
4
(2 mM) num banho de gelo. Seguidamente,
procedeu-se adio gota a gota, de 10mL da soluo de AgNO
3
(1 mM), a 30mL da soluo de
NaBH
4
sob agitao vigorosa (700 rpm) numa placa de agitao magntica, at adio
completa da soluo de AgNO
3
.
A mistura reacional passou imediatamente de incolor a amarelo brilhante.

2.3.2.4 - Reduo de AgNO3 com -ciclodextrina
Para a sntese das NP seguiu-se o artigo de Pande et al. [91]. Comeou-se pela dissoluo,
seguida de agitao, de 0,0396 g de -ciclodextrina (-CD) em 5mL de gua. Seguidamente foi
feita a adio de 0,02mL da soluo do sal metlico AgNO
3
(10 mM). Passados 2 min.
adicionou-se 0,05mL de NaOH (1,0 M) soluo para elevar o pH at 12. Finalmente, a mistura
reacional foi agitada vigorosamente e aquecida em banho-maria (<100 C). A formao das NP
metlicas foi confirmada atravs da alterao da cor da soluo. Passados cerca de 5 min, a
soluo de prata tornou-se amarela.

2.3.3 - Co-reduo de uma mistura de ies de ouro e prata
O protocolo seguiu o artigo de referncia de Raveendran et al. de 2006 [100]. Neste
procedimento as NP foram preparadas temperatura ambiente com vrios rcios Au/Ag (0:1,
1:3, 1:1, 3:1 e 1:0) atravs da adio em simultneo das solues 0,1M de HAuCl
4
3H
2
O e 0,1 M
de AgNO
3
e de 120 L duma soluo 0,1M de -D-glucose a 4 mL de uma soluo aquosa de
amido a 0,20% (p/v), seguida da adio de 30 L de uma soluo 1M de NaOH. Para a razo 0:1
adicionou-se apenas 80 L da soluo 0,1M de AgNO
3
e para a razo 1:0 adicionou-se apenas
80 L da soluo 0,1M de HAuCl
4
3H
2
O. No caso da razo de 1:1 adicionou-se 40 L de cada
um dos sais metlicos e para as razes 1:3 e 3:1 20 L e 60 L de cada uma das solues dos
sais metlicos.
Parte experimental
33


2.3.4 - Reduo sucessiva dos dois sais metlicos
2.3.4.1 Reduo de HAuCl43H2O sobre NP de Ag
A reduo sucessiva normalmente utilizada para a preparao de NP bimetlicas com estrutura
ncleo-concha [114]. Neste procedimento a sntese das NP de Ag-Au foi feita temperatura
ambiente atravs da reduo de tomos de Au sobre a prata coloidal preparada segundo o
procedimento descrito no ponto 2.3.2.3. Comeou por misturar-se 80 L da soluo 0,1M de
HAuCl
4
3H
2
O a 3mL da soluo de Ag coloidal na presena de 120 L de -D- glucose e 1mL
de amido (0,2% peso). Verificou-se e ajustou-se o pH a ~7 atravs da adio de 30 L de uma
soluo 1M de NaOH. O procedimento foi repetido usando 160 L da soluo 0,1M de
HAuCl
4
3H
2
O. A soluo passou de violeta a roxo com o aumento da concentrao de ouro.

2.3.4.2 Reduo de AgNO3 sobre NP de Au e HAuCl43H2O sobre NP de Ag
A preparao das NP ncleo-concha seguiu o artigo de Pande et al. [91]. Para a sntese de NP
Au-Ag adicionou-se gota a gota 0,04 mL de AgNO
3
(10 mM) a 5 mL da soluo de ouro
coloidal preparada seguindo a metodologia descrita em 2.3.1.3 deixando-se repousar durante 5
min. e aquecendo (<100C) seguidamente em banho-maria durante cerca de 30min. A formao
das NP Au-Ag foi confirmada atravs da alterao da cor da soluo que passou de rosa/salmo
a amarelo/avermelhado. Para a sntese de NP Ag-Au adicionou-se gota a gota, sob agitao
vigorosa, 0,04 mL HAuCl
4
(10 mM) a 5 mL da soluo de prata coloidal preparada em 2.3.2.4.
No decorrer da reao, o amarelo da prata coloidal passou a rosa (em cerca de 20min.) o que
indicativo da formao de NP Ag-Au.

2.3.5 - Nanopartculas de xido de ferro
2.3.5.1 - Em meio bsico
As NP foram sintetizadas por co-precipitao do Fe (III) e Fe (II) com hidrxido de amnio de
acordo com Khan et al. [96]. Neste procedimento, misturaram-se sob fluxo de azoto
,
5 mL da
soluo de cloreto de ferro (III) hexahidratado (1M) e 1,25 mL da soluo de cloreto de ferro (II)
tetrahidratado (2M) dissolvido em cido clordrico e adicionou-se lentamente 62,5 mL de uma
soluo de hidrxido de amnio (0,7M). Esta mistura foi vigorosamente agitada por 30 minutos
Parte experimental
34

numa atmosfera de azoto temperatura ambiente. Aps 30 min sob agitao mediu-se e ajustou-
se o pH a 10 com hidrxido de sdio (2M). Todas as solues foram preparadas com gua
desoxigenada por 30 min. sob fluxo de N
2
.

2.3.5.2 Em meio cido
A sntese foi baseada nos artigos de referncia de Massart [103] e Lo et al. [92]. Tal como em
3.3.5.1, as NP foram preparadas pela co-precipitao do Fe (III) e Fe (II) com hidrxido de
amnio numa atmosfera de azoto. Misturaram-se as solues aquosas de FeCl
3
(4mL, 1M) e
FeCl
2
(1mL, 2M) dissolvido em HCl (2M) e adicionou-se a mistura a uma soluo de NH
4
OH
(50mL, 0,7M). Depois de agitado por 30 min. o precipitado foi isolado por decantao
magntica, agitado com HClO
4
(50mL, 2M) e isolado por centrifugao. Finalmente depois de
decantado foi redisperso em 50mL de gua desoxigenada por 30 min. sob fluxo de N
2
.

2.3.6 - Revestimento de nanopartculas de xido de ferro com ouro
O objetivo desta sntese o revestimento de NP magnticas com ouro [80].

O procedimento
adotado para a sntese seguiu o descrito por Lo et al. [92]. As NP de Fe
3
O
4
-Au foram preparadas
em duplicado atravs da reduo de 15mL 2mg/cm
3
de HAuCl
4
3H
2
O adicionado a 105mL de
gua e aquecidos at ebulio. Seguidamente adicionou-se, sob agitao, 5mL das NP de Fe
3
O
4

preparadas em 3.3.5.1 e em 3.3.5.2 e 5mL de C
6
H
5
Na
3
O
7
(80mmol/dm
3
). A soluo foi
novamente levada ebulio sob agitao durante cerca de 5min.

2.3.7 - Revestimento de nanopartculas de xido de ferro com prata
A deposio da Ag foi feita temperatura ambiente atravs da reduo de AgNO
3
usando cido
ascrbico. O procedimento foi baseado no trabalho de Xu et al. [67]. Sob fluxo de azoto e
agitao misturou-se 5mL de Fe
3
O
4
(preparada de acordo com 2.3.5.1) com 3mL de AgNO
3

(1mM) e 3mL de cido ascrbico (1mM). Seguidamente adicionou-se 0,1mL de NaOH (0,01M).
Aps a sntese esperou-se cerca de 4h para fazer a medio UV-vis. Foi feita nova adio de
AgNO
3
, cido ascrbico e NaOH para estudar o efeito do aumento da espessura da concha no
mximo de absorvncia caracterstico da prata.

Parte experimental
35

2.4 - Caracterizao de nanopartculas
Neste trabalho experimental a espetroscopia de UV-Vis serviu para confirmar a formao das
nanopartculas, ao mostrar a ressonncia da superfcie plasmnica dos eletres na banda de
conduo da prata e do ouro [115].
Nem sempre se procedeu diluio das amostras. Os valores de absorvncia apresentados no
foram normalizados e so superiores a 1 nalguns casos. Uma vez que o valor da concentrao de
NP no conhecido optou-se por mostrar o resultado real aps a sntese. De qualquer forma
verificou-se que aps diluio no h alterao do valor do comprimento de onda do mximo de
absorvncia.
A DLS foi usada para a determinao do dimetro hidrodinmico e tambm do potencial zeta.
Importa referir que na anlise por DLS a presena de um rudo de fundo pode afetar o espetro de
disperso das NP alterando os resultados [116]. Este pode ser causado pela luz ambiente ou por
resduos da preparao das solues.
Com o propsito de confirmar a formao de estruturas em multicamada ncleo-concha algumas
amostras foram enviadas para a Faculdade de Qumica, Engenharia Qumica e Biotecnologia,
Donghua University, Shanghai, Repblica Popular da China, onde se procederam a anlises de
TEM e de EDX que permitiram igualmente analisar a sua composio.

2.5 - Ensaios de citotoxicidade
Para ter uma compreenso bsica do modo de interao entre a superfcie das nanopartculas e as
clulas, determinou-se a capacidade de sobrevivncia das clulas expostas a duas concentraes
de nanopartculas. Os protocolos elaborados esto no anexo II.
2.5.1 - Cultura de clulas
Foram utilizadas clulas da linha celular fibroblstica NIH 3T3. Comeou por proceder-se ao
descongelamento das clulas criopreservadas. Depois de centrifugadas temperatura ambiente (8
min. a 2000rpm) as clulas foram distribudas em caixas de Petri com 10mL de Dulbecco's
Modified Eagle Medium (DMEM) enriquecido com 1% de uma soluo de antibitico e
antimictico (AA) e 10% de soro bovino fetal (SBF). As clulas foram incubadas em estufa a
37C em atmosfera de 5% de CO
2
. Aps 24 h, tendo a adeso e o crescimento celular sido
verificados pela observao no microscpio invertido, procedeu-se tripsinizao. Para isso
removeu-se o meio, lavou-se a cultura com uma soluo tampo salina (phosphate buffered
Parte experimental
36

saline solution, PBS) e adicionaram-se 2 mL de tripsina. As caixas de Petri foram colocadas na
estufa por 10 min. Desagregou-se e homogeneizou-se a suspenso e procedeu-se contagem das
clulas com uma cmara de Neubauer. A contagem permitiu a obteno de suspenses de clulas
a concentraes de 3,75x10
5
clulas/mL de DMEM, para a realizao do teste de citotoxicidade.

2.5.2 - Teste de citotoxicidade
Para a realizao do teste do MTT (um sal de tetrazlio), 100L de clulas fibroblstica numa
concentrao de 3,75x10
5
clulas/mL em DMEM contendo 1% AA e 10% de SBF, foram
depositadas em placas de 96 poos. Aps 24 h de incubao, retirou-se o meio de cultura e
adicionou-se 150L de meio fresco e 50 L de diluies em PBS de 1mM e 0,1mM de cada
amostra. Para referncia, foram preparados poos apenas com meio (200 L) e poos com150L
de meio e 50L PBS. As placas foram incubadas em estufa a 37C, com 5% de CO
2
. Aps 3
dias, passadas cerca de 70h removeu-se o meio e adicionou-se 100 L de MTT a uma
concentrao de 5mg/mL. As placas foram incubadas por 3 h a 37C para a reduo do MTT.
Posteriormente, atravs da adio de 100 L de uma soluo de DMSO solubilizaram-se os
cristais resultantes da reduo do MTT. Observou-se a converso do MTT (amarelo) num
produto prpura nas duas placas. Finalmente realizou-se a anlise espetrofotomtrica, usou-se o
DMSO como branco e mediu-se a absorvncia a 550nm. A quantidade de produto de reduo do
MTT presente (doseado por medio da intensidade de radiao emitida a 550nm) proporcional
ao nmero de clulas viveis.

As nanopartculas utilizadas nos testes de citotoxicidade foram selecionadas tendo por base a
anlise por TEM efetuada anteriormente. A amostra FeO
x
/Au foi escolhida por apresentar a cor
bordeaux, indicativa da deposio de Au sobre o xido de ferro e a amostra de Fe
3
O
4
foi
utilizada para comparao de resultados.
As caractersticas apresentadas pelas solues coloidais, antes da sua utilizao nas clulas, esto
reunidas na Tabela 5.

Parte experimental
37

Tabela 5 Composies monometlicas e ncleo-concha testadas durante o estudo de citotoxicidade
Amostras
Caractersticas
CM-02-11-
Fe
3
O
4
/Au
CM-01-47-
Au
CM-01-73-
Ag
CM-01-81-
Ag/Au
Cor Bordeaux Roxo/lils Amarelo Bordeaux
UV-Vis
do pico mximo (nm) 534 540 395 531
Abs. 1,37 0,99 1,40 1,39
DLS
Dimetro mdio (nm) 10 50 2 80
Potncial zeta (mV) -37,49,3 -26,918,5 -34,513,9 -22,819,1

Apresenta-se seguidamente uma possvel forma de clculo do valor da concentrao dos
coloides. Este clculo baseado na proposta de RL Johnston
1
e corresponde a uma estimativa. O
raio apurado atravs da anlise de DLS ou TEM e o valor do raio atmico corresponde ao
medido empiricamente.
2

Assume-se que para NP esfricas (clusters metlicos)
V
cluster
= N V
tomo

Em que N o n. tomos do cluster ou o n. tomos por NP.
N =

O n. de NP formadas por x moles de metal (quando 1dm
3
reduzido) N
NP

N
NP
=

Assim, a concentrao (mol/dm
3
) final do coloide estimada dividindo o N
NP
pelo volume total
C
NP
=

1
[Johnston RL. Atomic and Molecular Clusters. Francis Ta, Ed. 2002]
2
[Slater JC. J. Chem. Phys. 1964; 41:3199]
N
NP

39

Captulo 3 - Resultados e discusso

No anexo III apresenta-se uma tabela-resumo das caractersticas de todas as NP preparadas.

3.1 - Nanopartculas de Au

4
3H
2
O com -D- glucose
Nesta experincia, o cido cloroarico tri-hidratado o precursor para a formao de
nanopartculas de ouro e a -D-glucose atua como agente redutor e estabilizador. temperatura
ambiente e em condies bsicas, conseguidas atravs do ajuste do pH com hidrxido de sdio, a
-D-glucose reduziu os ies de Au
3+
para Au
0
.
Na Tabela 6 apresentam-se os resultados da variao do pH e da cor das solues em funo da
quantidade de NaOH (0,05M) adicionado.
Tabela 6 - Variao do pH em funo da quantidade de NaOH adicionado
pH N. de gotas de NaOH adicionadas Cor observada
3,5 Aps agitao Incolor
3,6 5 Amarelo plido
3,9 11 Rosa
5,0 15 Arroxeada
6,3 23 Roxo escuro

No decorrer da adio do NaOH estudou-se a dinmica da reao de formao de NP de Au
atravs da espetroscopia do UV-Vis. Na Figura 14 apresentam-se os resultados obtidos.
Resultados e discusso
40


Figura 14 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Au. Evoluo da banda de absoro com o pH.

A intensidade do mximo de absorvncia aumenta com o aumento do valor de pH. Com o
aumento do pH verifica-se igualmente um ligeiro desvio do mximo de absorvncia para a zona
do vermelho de 549 nm a pH=3,9 para 580 nm com pH=6,3. Este facto dever estar relacionado
com o aumento do tamanho das NP de Au formadas, confirmado por estudos DLS.
Em relao distribuio de tamanhos das NP de Au obteve-se um dimetro hidrodinmico
mdio de 101nm num primeiro ensaio e de 77nm na repetio do procedimento. A diferena
encontrada prende-se com a otimizao da prtica experimental, nomeadamente a adio
rigorosamente controlada do NaOH. Os valores obtidos so muito superiores ao valor reportado
no artigo de referncia em que o dimetro mdio de cerca de 8nm. Associa-se esta diferena
utilizao de diferentes tcnicas de medio. Tal como reportado por Mahl et al. [98] a tcnica
de DLS permite determinar a distribuio de tamanhos das NP dispersas, fundamentando-se no
seu movimento Browniano, mas uma vez que o poder de disperso das NP aumenta com o
aumento do tamanho (ver Anexo I), poucas NP de grande dimenso podero esconder um grande
nmero de pequenas NP. Os resultados obtidos apresentam-se na Figura 15.
580
549
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
450 500 550 600 650 700
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

Comprimento de onda (nm)
pH 6,3
pH 5,0
pH 3,9
pH 3,6
pH 3,5
41


Figura 15 Distribuio de tamanhos das NP de Au, obtida por DLS.

Em busca de ouro coloidal vermelho pesquisou-se uma nova metodologia para a sntese.

3.1.2 - Reduo de HAuCl43H2O com -D- glucose na presena de amido
Apesar de no artigo da referncia [100] ser dito que a soluo permanece incolor por 30 minutos,
verificou-se uma mudana imediata de cor aps a adio do hidrxido de sdio, tendo a soluo
adquirido a cor bordeaux caracterstica.
Uma vez que o agente estabilizante desempenha um papel crucial no controlo da nucleao e
crescimento das nanopartculas de metais nobres [117], neste procedimento utilizou-se o amido
para a estabilizao das nanopartculas [118].

Este procedimento foi repetido diversas vezes pelo
que se apresentam os resultados mais frente (3.4).

3.1.3 - Reduo de HAuCl43H2O com -ciclodextrina
Trata-se de um procedimento simples que permite a sntese de nanopartculas de ouro
relativamente monodispersas com um dimetro mdio de cerca de 14nm. A -ciclodextrina reduz
eficazmente o ouro e, em cerca de 10 minutos, observou-se a mudana da cor da soluo,
indicativa da formao de nanopartculas (cor-de-rosa). Os grficos elaborados apresentam-se
frente (3.5.2) para a comparao das caractersticas obtidas para as NP monometlicas e
bimetlicas.

mdio =
101nm
mdio =
77nm
0
2
4
6
8
10
12
14
1 10 100 1000
V(%)
Dimetro (nm)
Au 3-10
Au 7-10
42

3.2 - Nanopartculas de Ag

3.2.1 - Reduo de AgNO3 com -D-glucose atravs do uso de microondas
A sntese de NP de Ag atravs do mtodo descrito no 2 Procedimento Experimental (Anexo II)
revelou-se improdutiva uma vez que no se mostrou reprodutvel pois nem sempre se verificou a
alterao de cor da soluo aps o aquecimento por microondas. Isto significa que
provavelmente o aquecimento no foi suficiente para a reduo da prata e consequente formao
de nanopartculas. Alm disso, verificou-se uma grande evaporao de gua (cerca de 75%). Este
problema experimental levou-nos a uma nova tentativa.

3.2.2 - Reduo de AgNO3 com -D-glucose num banho termostatizado
Tal como no caso anterior, a sntese de NP de Ag atravs deste mtodo, descrito no 3
Procedimento Experimental (Anexo II), revelou-se improdutiva. Aps 22 horas num banho
termostatizado a 60C as solues preparadas exibiram uma banda de absorvncia reduzida
atribuda a uma baixa concentrao de nanopartculas. Com estes resultados e os anteriores
conclui-se que a -D-glucose um agente redutor pouco eficiente.

3.2.3 - Reduo de AgNO3 com NaBH4
Trata-se de um procedimento simples e rpido que permite a sntese de nanopartculas de Ag
relativamente monodispersas com um dimetro mdio de cerca de 12nm como se ver adiante. O
borohidreto de sdio um dos agentes redutores mais utilizado e muito eficiente [13]. A
estabilizao das NP coloidais conseguida por foras eletrostticas repulsivas conferidas pela
adsoro de borohidreto de sdio [89, 93].

3.2.4 - Reduo de AgNO3 com -ciclodextrina
O procedimento simples e permite a preparao de NP de Ag relativamente monodispersas
com cerca de 16nm de dimetro como se ver adiante. Aps 10 minutos de aquecimento a
soluo apresentava a colorao amarela tpica dos coloides de prata.

43

3.3 - Nanopartculas de Fe3O4
O mtodo de sntese utilizado foi o da co-precipitao de Fe
2+
/ Fe
3+
. As solues obtidas so de
cor preta e tal como esperado apresentam um comportamento magntico na presena de um man
(Figura 16).
Fe
2+

(aq)
+ 2 Fe
3+

(aq)
+ 8 OH
-

(aq)
Fe
3
O
4

(s)
+ 4 H
2
O
(l)

(a) (b)
Figura 16 - Nanopartculas de Fe
3
O
4
(a) sob a influncia de um man e (b) dispersas em gua.

De acordo com a termodinmica da reao (equao anterior) espera-se a precipitao completa
da magnetite para valores de pH entre 9 e 14. Na figura seguinte possvel ver o mecanismo de
reao de formao de partculas de magnetite a partir de uma mistura aquosa de cloreto ferroso
e frrico por adio de uma base em condies de ausncia de oxignio (borbulhando azoto).

Desprotonao
Fe
3+
+ H
2
O

Desprotonao
Fe(OH)
x
3-x

Fe
2+
+ H
2
O Fe(OH)
y
2-y

Fe(OH)
x
3-x

+
Fe(OH)
y
2-y

Oxidao

Desidratao
pH~ 9,0; 60C

Magnetite

Fe
3
O
4

Figura 17 Mecanismo de reao de formao de partculas de magnetite a partir de uma mistura aquosa de
cloreto ferroso e frrico por adio de uma base [57].
m
a
n

44

As propriedades fsico-qumicas das NP magnticas podem ser afetadas caso o ferro sofra
oxidao conforme se mostra pela equao seguinte [57]
Fe
3
O
4
+ 0,25O
2
+ 4,5H
2
O 3Fe(OH)
3

Uma das formas de minimizar este problema atravs da purga da soluo com azoto.

Existem duas formas distintas de tratar o precipitado obtido: em meio bsico no qual se utilizou
o NaOH para a precipitao da magnetite, por troca de Na
+
por caties de NH
4
+
adsorvidos
superfcie das NP sintetizadas e em meio cido no qual a ao dos anies ClO
4
-
predominante
[103].
Apresentam-se adiante (3.5.3) os resultados obtidos aps o revestimento com ouro, para
comparao de resultados.

3.4 Ligas de nanopartculas de Ag e Au

Apesar da reduo sucessiva de ies de dois metais diferentes ser considerada uma das
metodologias mais indicada para a produo de nanoestruturas com uma morfologia ncleo-
concha possvel obter este tipo de nanopartculas atravs da co-reduo/reduo simultnea dos
ies precursores [84]. O mtodo seguido foi o da co-reduo de uma mistura de ies de ouro e
prata (2.3.3) e os resultados obtidos deixam-nos com algumas dvidas. Imediatamente aps a
adio de hidrxido de sdio, sob uma suave agitao, as cores das misturas reacionais
mudaram, acompanhadas pela emergncia de espetros de absoro de NP Ag/Au distintos. Na
Figura 18 mostra-se o aspeto das solues coloidais preparadas imediatamente aps a sntese
bem como o respetivo espetro de absoro UV-Vis.

45


Ag 1:3 1:1 3:1 Au
Au-Ag

Figura 18 Fotografia das NP de Au-Ag e respetivo espetro de absoro UV-Vis.

O mximo de absorvncia caracterstico da prata surge a 412nm e o do ouro a 534nm. A amostra
Au-Ag 1:3 exibe dois mximos, a 424nm e 513nm, atribudos formao de uma estrutura
bimetlica, uma liga de prata e ouro ou uma ncleo-concha [119]. Existe alguma contradio
entre os artigos referenciados [23, 100, 119] no que respeita a formao de estruturas ncleo-
concha e existncia de um ou dois picos no espetro de absoro de UV-Vis. De acordo com
Raveendran et al. o surgimento de um nico pico atribudo formao de NP ligadas
homogneas. J Shore et al. [23] reportam a existncia de uma estrutura ncleo-concha na
presena de apenas um pico de absorvncia.
Os valores da distribuio de tamanhos foram determinados por DLS e esto resumidos na
Figura 19. A menor dimenso da prata poder estar relacionada com a sua menor capacidade
autocataltica (Tabela 3 - Potencial de reduo dos metais em estudo).
0
0,5
1
1,5
2
2,5
300 400 500 600 700 800 900
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(
u
.
a
.
)

(nm)
Ag
Au-Ag 1:3
Au-Ag 1:1
Au-Ag 3:1
Au
412 nm
424 nm
513 nm
534nm
530 nm
46


Figura 19 Distribuio de tamanhos das NP preparadas por co-reduo dos dois sais metlicos, obtida por
DLS.

A formao de nanopartculas bimetlicas de prata e ouro foi confirmada atravs da anlise EDX
(Figura 20). Os espetros obtidos permitem confirmar a presena dos dois metais superfcie da
amostra Au-Ag 1:3, o que consiste numa evidncia da interdifuso dos dois metais [120]
levando-nos a concluir que se preparou uma liga de NP de Au e Ag.

22
56
88
91
113
0
20
40
60
80
100
120
140
0 20 40 60 80 100 120
V

(
%
)

Dimetro (nm)

Ag
Au
Au-Ag 1:1
Au-Ag 1:3
Au-Ag 3:1
47


(a)

(b)
Figura 20 - Espetros de EDX das amostras (a) Au-Ag 1:3 e (b) Au-Ag 1:1.

Na amostra Au-Ag 1:1 apenas existem os picos do Au. A ausncia da Ag no espetro de EDX
associada existncia de um nico mximo de absoro de UV-Vis podero ser indicativos da
formao de uma estrutura em multicamada ncleo-concha Ag/Au [91].
A nanoestrutura das nanopartculas foi analisada por TEM. Investigou-se a forma e o tamanho.
As micrografias eletrnicas na Figura 21 mostram a formao de NP de Ag e Au relativamente
mono dispersas e esfricas com um dimetro mdio de cerca de 12nm. O envelhecimento da liga
de Au e Ag resultou na formao de aglomerados de nanopartculas esfricas polidispersas com
o tamanho mximo de cerca de 50nm. Mais uma vez os resultados de DLS so superiores aos
observados por TEM (ver 3.1.1).

48


Figura 21 Fotografias e imagens TEM das amostras de Ag, Au e Au-Ag 1:3.

Os resultados no so conclusivos pois o contraste entre o ncleo e a concha no evidente.
Tal como esperado, o valor do dimetro hidrodinmico estimado atravs da anlise das
micrografias eletrnicas inferior ao obtido atravs da DLS.

3.5 - Nanopartculas em multicamada ncleo-concha
3.5.1 - Reduo de HAuCl43H2O sobre NP de Ag
As nanopartculas foram preparadas pela reduo sucessiva dos sais de Ag e Au de acordo com a
metodologia descrita em 2.3.4.1. A caracterizao por espetroscopia do UV-Vis das NP ncleo-
concha mostra um desvio do mximo de absorvncia para maiores comprimentos de onda [13].

49


Figura 22 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Ag-Au obtidas pela reduo sucessiva de ouro sobre prata
coloidal.

Atravs da anlise do UV-Vis (Figura 22) possvel constatar um desvio para a zona do
vermelho do espetro, de 389nm para a Ag para 532nm na amostra Ag-Au 1 e 543nm na amostra
Ag-Au 2, atribuda ao crescimento das NP por deposio sucessiva de Au (aumento da espessura
da concha de Au). Este desvio para o vermelho do espetro pode no entanto ser interpretado como
significando que as NP tm uma forma menos arredondada [116]. Na Figura 23 apresenta-se a
distribuio de tamanhos obtida.

0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
250 350 450 550 650 750 850
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(
u
.
a
.
)

(nm)
Ag
Ag-80L HAuCl4
Ag-160L HAuCl4
Ag-80L HAuCl
4
Ag-160L HAuCl
4
543 nm
532 nm
389 nm
50


Figura 23 Distribuio de tamanhos das NP de Ag-Au, obtida por DLS.

O aumento de dimetro verificado aps a adio do precursor de Au e do aumento da sua
concentrao so indicativos da reduo de Au sobre as NP de Ag. Os resultados TEM e EDX
esto na figura seguinte.

Figura 24 Micrografia TEM e espetro EDX da amostra CM-01-81 Ag/Au.

Os resultados de TEM evidenciam NP esfricas com cerca de 20nm com uma estrutura ncleo-
concha. O espetro EDX vem confirmar uma presena maioritria de ouro (4 vezes superior) em
relao prata o que vem confirmar que as nanopartculas de prata foram revestidas com ouro.
14 nm
70 nm
74 nm
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
V

(
%
)

Dimetro (nm)
Ag
Ag-80L HAuCl4
Ag-160L HAuCl4
Ag-80L HAuCl
4
Ag-160L HAuCl
4
51

3.5.2 - Reduo de AgNO3 sobre NP de Au e HAuCl43H2O sobre NP de Ag com -ciclodextrina
Na busca de um resultado claro que no deixasse dvidas quanto ao sucesso na obteno de uma
estrutura em multicamada ncleo-concha, testou-se a -ciclodextrina, um homologo da -D
glucose, como agente redutor e estabilizador das NP de acordo com o artigo reportado por Pande
et al. [84]. Os resultados experimentais das alteraes fsico-qumicas, cor, tamanho das
partculas e mximo tico da superfcie plasmnica, permitiram confirmar a formao da
nanoestrutura ncleo-concha. A sntese de nanopartculas de prata foi confirmada pela colorao
amarela da disperso coloidal e a de ouro pela cor rosa adquirida pela mistura reacional. Em
relao aos mximos de absoro da prata e do ouro so os esperados, 410nm para a prata e
530nm para o ouro (Figura 25). Aps a reduo do ouro sobre as NP de prata verificou-se um
deslocamento do mximo de absoro de 410nm para 530nm tendo a soluo adquirido uma cor
lils acinzentado e para o sistema Au-Ag registou-se um desvio para o azul no espetro UV-Vis
tendo a soluo adquirido a cor laranja.

Figura 25 Espetro de absoro UV-Vis das NP de Ag, Ag-Au, Au e Au-Ag preparadas usando a -
ciclodextrina como agente redutor.

Depois do revestimento das NP monometlicas de prata e ouro verificou-se um aumento de
dimetro (Figura 26) que mais uma vez nos ajuda a concluir que se conseguiu a formao da
estrutura ncleo-concha. No grfico Ag-Au refere-se s nanopartculas ncleo-concha obtidas
atravs da adio de 40L de cido cloroarico tri-hidratado a 5mL da soluo de prata coloidal
530 nm
410 nm
-0,1
0,1
0,3
0,5
0,7
0,9
1,1
300 400 500 600 700 800 900
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(nm)
Ag
Ag-Au
Au
Au-Ag
52

e Au-Ag refere-se estrutura obtida pela adio de 40L de nitrato de prata a 5mL de ouro
coloidal.

Figura 26 Distribuio de tamanhos, obtida por DLS, das NP de Ag, Ag-Au, Au e Au-Ag preparadas
usando a -ciclodextrina como agente redutor.

Uma amostra de Au-Ag foi enviada para TEM para a confirmao da suspeita da obteno da
estrutura ncleo-concha. Os resultados obtidos deixam no entanto algumas dvidas. Na Figura
27 pode ser visualizado o aspeto das NP Au/Ag e o respetivo espetro de EDX.

Figura 27 - Micrografia TEM e espetro EDX da amostra Au-Ag.
0
5
10
15
20
25
30
0,1 1 10 100 1000
V

(
%
)

Dimetro (nm)
Ag
Au
Ag-Au
Au-Ag
Ag
53


A imagem TEM permite confirmar a formao de NP esfricas de dimetro mdio igual ou
inferior a 20nm e tambm a presena de alguns aglomerados com cerca de 50nm. Relativamente
ao espetro de EDX, a presena dos dois metais e a abundncia de ouro apontam para uma
nucleao independente dos dois metais ou para uma estrutura ncleo-concha na qual se
esperaria encontrar uma quantidade superior de prata superfcie. De facto o espetro de UV-Vis
apresenta um perfil de absoro bem definido com um mximo a 410nm, caracterstico das
nanopartculas de prata. No espao de tempo entre a sntese e a anlise por TEM e EDX houve
seguramente uma alterao na estabilidade da soluo coloidal.

3.5.3 - Nanopartculas de Fe3O4-Au
As NP de magnetite sintetizadas sob condies alcalinas (2.3.5.1 e 3.3.1) foram utilizadas como
sementes para a reduo do precursor de ouro de forma a produzir NP Fe
3
O
4
-Au. Isto foi
conseguido atravs da reduo do Au
3+
pelo citrato. Aps a sntese, a soluo de magnetite
passou da cor preta a castanho avermelhado. Contudo, este facto no por si s indicativo do
revestimento da magnetite com ouro uma vez que a oxidao da magnetite conduziria mesma
colorao [121]. Os resultados experimentais mostram o aparecimento de um mximo de
absoro caracterstico da ressonncia da superfcie plasmnica do ouro a 590nm, ligeiramente
deslocado para a gama dos vermelhos, no observvel no espetro de absoro UV-Vis das NP de
Fe
3
O
4
, o que sugere a obteno da estrutura ncleo-concha (Figura 28).

54


3
O
4
e Fe
3
O
4
-Au.

Os resultados de EDX no confirmam claramente a formao da estrutura ncleo-concha (Figura
29). Tem-se por um lado um espetro em que apenas existe ouro, o que seria partida indicativo
de uma estrutura ncleo-concha, mas tem-se outro espetro da mesma amostra no qual esto
presentes ferro e ouro. A presena dos dois metais evidencia um revestimento descontnuo dos
ncleos de magnetite ou mesmo uma nucleao independente de ouro. De acordo com Lyon et
al. [60] se no espetro de EDX esto presentes os dois metais ento a estrutura no ncleo-
concha no entanto Lo et al. [92]

determinam a composio da estrutura ncleo-concha na
presena dos dois metais no espetro.

590 nm
0
0,5
1
1,5
2
2,5
300 400 500 600 700 800 900
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(nm)
Fe
Fe-Au
55


Figura 29 Espetro de EDX das NP de Fe
3
O
4
-Au.

Por outro lado, a presena de um s metal poder ser indicativa de uma nucleao independente.
As imagens de TEM tambm nos deixam algumas dvidas (Figura 30). Temos por um lado a
micrografia (a) em que se tem uma estrutura ncleo-concha aparente e as imagens (b) e (c) nas
quais no bvio se os dois metais esto juntos ou se houve uma nucleao independente.

(a) (b) (c)
Figura 30 Imagens TEM das NP de Fe
3
O
4
-Au.

De qualquer forma, verifica-se a existncia de NP esfricas diferentes. Segundo Banerjee et al.
[95] as partculas que aparecem com menor contraste so de Fe
3
O
4
enquanto as NP que
apresentam maior contraste (negras) so de Au.
56

Em relao s NP obtidas atravs da reduo do precursor de ouro sobre magnetite preparada em
condies acdicas (2.3.5.2 e 3.3.2), a suspeita da formao da estrutura ncleo-concha (Fe
3
O
4
-
Au) acontece imediatamente aps a sntese, atravs da alterao da cor da soluo de magnetite
que passou de preto a bordeaux, tal como refere Lu et al. [92]. A imagem da Figura 31 evidncia
a diferena de cor entre as NP de Fe
3
O
4
-Au preparadas via bsica, e via-cida.

(a) (b)
Figura 31 Imagem das NP de Fe
3
O
4
-Au preparadas (a) sob condies cidas e (b) em meio bsico.

No espetro de UV-Vis (Figura 32) verifica-se a existncia de um pico mximo a 534nm o que
comparativamente s NP de Fe
3
O
4
-Au cuja magnetite foi preparada em condies bsicas,
representa um desvio para menores comprimentos de onda, o que caracterstico do ouro e
poder dever-se sua mais eficiente sntese nestas condies.

3
O
4
-Au.
534 nm
590 nm
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
400 500 600 700 800 900
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(nm)
FeO
FeO-Au
(cond.
cidas)
FeO-Au
(cond.
bsicas)
57


Os resultados das medies de DLS para a magnetite e das primeiras NP de Fe
3
O
4
-Au
sintetizadas (3.3.5.1) indicam aglomerados com cerca de um mcron de dimetro. Este facto est
diretamente relacionado com o magnetismo microscpico observado. Na figura seguinte
apresenta-se a distribuio de tamanhos das NP de magnetite, sintetizada em condies cidas,
revestida com ouro com um pico estreito indicativo da presena de NP.

Figura 33 Distribuio de tamanhos das NP de Fe
3
O
4
-Au, obtida por DLS.

Alm dos ensaios realizados, as propriedades magnticas podem igualmente ser utilizadas para a
confirmao da formao da nanoestrutura ncleo-concha. Nomeadamente atravs de medies e
da anlise de curvas de magnetizao. O aumento da espessura da concha de ouro conduziria, em
princpio, a um decrscimo do momento magntico [67, 122].
Para o caso da magnetite preparada sob condies bsicas, aps o revestimento com ouro
continua a ser percetvel o magnetismo das NP precipitadas apesar de se verificar um
abrandamento do efeito, atribudo a algum desordenamento dos momentos superficiais devido
interao com o ouro [95].
As NP de Fe
3
O
4
-Au em que a amostra de magnetite foi sintetizada em condies cidas so
intrinsecamente no-magnticas e portanto no tm tendncia para agregar em soluo. O
0
5
10
15
20
25
0,1 1 10 100 1000
V

(
%
)

Dimetro (nm)
FeO-Au
(cond.
cidas)
58

dimetro hidrodinmico mdio de cerca de 2nm e portanto as NP so superparamagnticas,
deste modo, tm uma elevada rea superficial e esto perfeitamente dispersas na soluo [96].
O artigo de Lo et al. [92], referncia para este procedimento, no analisa esta situao pois
utiliza as NP de Fe
3
O
4
-Au protegidas com o citrato para subsequente troca de citrato com
homocisteina.
Outra explicao possvel a de que a magnetite tenha sofrido uma transformao de fase e se
tenha oxidado a magemite. De acordo com Thanh [56], a oxidao ao ar no o nico processo a
ocorrer nestas transformaes, O pH do meio pode favorecer a transferncia eletrnica entre
espcies: em meio bsico os caties Fe
3+
incorporam-se na estrutura da magnetite depois de
iniciada a reduo com oxignio superfcie das nanopartculas, enquanto que em meio cido, os
caties Fe
2+
so retirados da superfcie originando lacunas de modo a manter o equilbrio de
cargas na rede. A difrao de raios-X o mtodo tradicional que poderia ser utilizado para a
caracterizao dos diferentes xidos de ferro.

3.5.4 - Nanopartculas de Fe3O4-Ag
O grfico de Uv-Vis apresentado (Figura 34) permite comparar o efeito do aumento da
concentrao de prata. Constata-se um desvio para a gama do vermelho e simultaneamente um
decrscimo no valor da absorvncia com o aumento da concentrao de prata. A que se deve este
efeito? Estes resultados deixam-nos com algumas dvidas. O aumento da espessura do
revestimento de prata sobre o xido de ferro afina as propriedades plasmnicas destas NP
ncleo-concha, tal como constatado por Xu et al. [67] ou estaremos na presena de
revestimentos de partculas de xido de ferro com diferentes dimetros? No foi possvel repetir
o procedimento nem to pouco testar outro mtodo.
59


Figura 34 - Espetro de absoro UV-Vis das NP de Fe
3
O
4
/Ag.

Relativamente ao tamanho, uma vez mais e dadas as propriedades magnticas destas NP,
verifica-se a aglomerao obtendo-se leituras de DLS com cerca de 5m.

3.6 - Ensaios de citotoxicidade
Atravs de tcnicas de cultura de clulas e do teste do MTT avaliou-se a citotoxicidade das NP
preparadas anteriormente. Antes de se proceder aos testes e com o objetivo de confirmar a
estabilidade dos coloides a utilizar foi feita a sua caracterizao. Apresentam-se seguidamente os
espetros de UV-Vis obtidos.

Figura 35 - Espetros de absoro UV-Vis das NP monometlicas usadas nos testes de citotoxicidade.
434,93nm
495,52nm
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
300 400 500 600 700 800
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(
u
.
a
.
)

(nm)
FeO/Ag (0,003mM)
FeO/Ag (0,006mM)
394,81nm
540,53nm
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
300 400 500 600 700 800
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(nm)
Ag
Au
60


Figura 36 - Espetros de absoro UV-Vis das NP ncleo-concha usadas nos testes de citotoxicidade.

Os espetros de UV-Vis apresentam picos mximos Gaussianos o que indica que as solues
apresentam-se estveis e com concentraes de nanopartculas adequadas ao estudo, tal como
aps a sntese.
Na anlise de resultados necessrio ter em conta que as culturas celulares so sensveis no s
presena de uma determinada concentrao do agente em anlise como tambm a mudanas no
ambiente tais como alteraes de temperatura, variaes de pH, concentrao de nutrientes e de
produtos de excreo das clulas [15]. Alm disso, as prprias amostras de NP, na presena dos
reagentes necessrios aos ensaios nas clulas, podem sofrer alteraes nas propriedades fsico-
qumicas: tamanho, carga superficial e portanto estabilidade [112]. Por outro lado, a interao
das nanopartculas com as clulas pode depender do tipo de clula [105].
Aps a exposio s NP durante 70h e antes do teste de reduo do MTT, as clulas foram
observadas ao microscpio. Na Figura 37 apresentam-se os resultados obtidos. possvel a
visualizao de partculas sobre as clulas e de algumas clulas mortas (pontos escuros). De uma
maneira geral, o n. de clulas com a forma tpica do fibroblasto menor que no controlo.

533,92nm
531,36nm
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
450 550 650 750
A
b
s
o
r
v
n
c
i
a

(nm)
FeO-Au
Ag-Au
61


1mM 0,1mM
FeO
x

FeO
x
/Au

Au

Ag

Ag/Au

Controlo
DMEM DMEM+PBS

Figura 37 Fotografias das clulas aps 70h de exposio s diferentes concentraes de NP.

62


Para facilitar a anlise dos resultados da percentagem de viabilidade (Figura 38), utilizaram-se as
mesmas cores dos espetros UV-Vis. Para as cinco amostras e nas diferentes concentraes
testadas, os resultados so muito prximos, com uma baixa disperso dos valores dentro da
mesma amostra e superiores a 80%, o que significa que, para o tipo celular testado, as amostras
apresentam baixa citotoxicidade pelo que so biocompatveis.
Com exceo das amostras contendo FeO
x
, verifica-se, tal como esperado, um decrscimo na %
de viabilidade para maiores valores de concentrao.

Figura 38 Percentagem de viabilidade para as quatro amostras de NP testadas.

O teste efetuado representa uma via indireta de medio da viabilidade celular j que nos d
informao acerca da atividade metablica das clulas.
Os ensaios realizados no permitem tirar concluses acerca da localizao das nanopartculas.
No possvel, pois, saber em que compartimentos celulares se encontram, por exemplo se
chegaram ao ncleo.

Apesar de se terem encontrado baixos valores de toxicidade, com exceo do sistema Au-Ag
para 1mM de concentrao (em que a citotoxicidade se revelou superior), seria interessante
investigar o processo em maior detalhe. Nomeadamente, atravs da avaliao da contribuio de
0,000
0,500
1,000
1,500

F
e
O

1
m
M

F
e
O

0
,
1
m
M

F
e
-
A
u

1
m
M

F
e
-
A
u

0
,
1

m
M

A
u

1
m
M

A
u

0
,
1

m
M

A
g

1
m
M

A
g

0
,
1

m
M

A
u
/
A
g

1
m
M

A
u
/
A
g

0
,
1
m
M

D
M
E
M
+
P
B
S

A
c
t
i
v
i
d
a
d
e

m
e
t
a
b
l
i
c
a

(
a
.
u
.
)

63

eventuais produtos qumicos remanescentes da sntese presentes no sobrenadante e
independentemente da soluo coloidal purificada. Por exemplo, atravs da centrifugao tal
como sugerem Alkilany e Murphy [112]. No seu estudo estes autores discutem os resultados
mais recentes no que respeita a citotoxicidade de nanopartculas de ouro e fornecem algumas
recomendaes experimentais para futuras pesquisas na interface da nanotecnologia com os
sistemas biolgicos. Os resultados obtidos por estes investigadores (Figura 39) mostram que os
nveis de toxicidade encontrados na soluo de nanopartculas e no sobrenadante so similares
pelo que os autores concluem que as nanopartculas, por si s, no so txicas.

Figura 39 Controlo do sobrenadante. Adaptado da Ref. [112]

Do conjunto de artigos consultados, no se encontram estudos de citotoxicidade de
nanopartculas idnticas s estruturas ncleo-concha em discusso. O mesmo no acontece em
relao citotoxicidade de nanopartculas de ouro em que a literatura disponvel vasta. Alm
do trabalho de Alkilany e Murphy [112] h que referir o trabalho de Harper et al. [106] que
investigou a influncia de alguns parmetros na toxicidade, tendo mostrado que a mortalidade,
malformaes, a absoro e a eliminao de NP Au dependem do tamanho do ncleo, da
qumica da superfcie e da carga, evidenciando a necessidade de um controlo apertado sobre as
condies experimentais e a caracterizao dos nanomateriais, apesar de no se observar
toxicidade inerente nestas nanopartculas, tal como referem Semmler-Behnke et al. [52]. No
artigo de reviso de Lewinski et al. [15] so levantadas outras questes como, por exemplo, as
%

d
e

v
i
a
b
i
l
i
d
a
d
e

c
e
l
u
l
a
r

Soluo de nanopartculas
Centrifugao
Nanovaras de ouro revestidas com surfatante
Surfatante
Sobrenadante
Sobrenadante Precipitado
Soluo de nanopartculas
64

que referem poder no ser a diminuio da viabilidade celular o nico efeito adverso das
nanopartculas, podendo estas afetar a resposta imunolgica do organismo. Este ltimo artigo
referencia, igualmente, as nanopartculas de xido de ferro superparamagnticas especulando-se
sobre a origem da sua citotoxicidade. Esta poder advir da produo de espcies reativas de
oxignio (ROS) o que pode resultar na peroxidao de lpidos, danificao do DNA e oxidao
de protenas. Esta questo igualmente discutida por Kncl et al.[59]. Kittler et al. [48]
discutem o efeito da libertao de ies de prata, resultante do envelhecimento das solues
coloidais, no aumento da citotoxicidade de nanopartculas de prata estabilizadas com PVP.

65

Concluso

Depois de sintetizadas e caracterizadas analisou-se a biocompatibilidade de um conjunto de
nanopartculas monometlicas e bimetlicas ncleo-concha.
Os mtodos de sntese utilizados no trabalho foram reproduzidos e adaptados a partir de um
conjunto de artigos publicados na literatura. A sntese de nanopartculas de ouro constituiu um
desafio muito interessante. Prepararam-se solues coloidais com uma grande variedade de cores
(rosa, violeta, azul escuro e bordeaux). A reduo do cido clorourico tri-hidratado com -D-
glucose na presena de amido produziu os melhores resultados. de fcil e rpida execuo. Os
espetros de UV-Vis apresentam uma curva Gaussiana com valores de mximo de absorvncia
superiores aos apresentados pela sntese na ausncia de amido, cuja banda mais larga. A
utilizao de -ciclodextrina para a reduo do ouro tambm produz bons resultados e
reprodutvel. No entanto, envolve aquecimento e como tal um maior consumo de energia.
Em relao sntese de nanopartculas de prata a caracterstica colorao amarela est sempre
presente, variando entre um amarelo brilhante vivo, quando reduzida pelo borohidreto de sdio e
um amarelo bao ou plido quando se usou a -D-glucose ou a -ciclodextrina. O mtodo que
produziu melhores resultados foi o da reduo de nitrato de prata com borohidreto de sdio.
Trata-se de um procedimento simples e de fcil execuo. Tal como para o caso do ouro, a
sntese de nanopartculas de prata com -ciclodextrina envolve um gasto energtico superior. A
sntese de nanopartculas de prata atravs do uso de micro-ondas e num banho termostatizado
energeticamente desfavorvel e alm disso nem sempre foi bem sucedida. A co-reduo de uma
mistura de ies de ouro e prata nem sempre se mostrou reprodutvel, verificando-se variaes na
tonalidade das solues coloidais preparadas. A co-reduo resulta normalmente na formao de
ligas de metais. No entanto, para a sntese na razo de 1:1 a existncia de apenas um mximo de
absoro, a cerca de 530nm, no espetro de UV-Vis associada ausncia de prata do espetro de
EDX so indicativos de uma estrutura ncleo-concha que refletem o mximo caracterstico do
ouro como se a prata no estivesse presente. A reduo sucessiva de cido clorourico tri-
hidratado, com -D-glucose na presena de amido, sobre a prata coloidal resultou na formao
de estruturas ncleo-concha. A preparao de nanopartculas ncleo-concha mediada pela -
ciclodextrina revelou-se reprodutvel e produziu perfis de absoro bem definidos.
Concluso
66

Os resultados mostram o mximo de absoro tpico das nanopartculas de prata a ~400nm,
correspondente caracterstica ressonncia da superfcie plasmnica destas partculas. Para o
caso das nanopartculas de ouro este valor situa-se a ~500nm. No caso das nanopartculas
ncleo-concha de prata revestidas com ouro observou-se um desvio do pico da prata para
maiores comprimentos de onda e um efeito oposto no caso das nanopartculas de ouro revestidas
com prata.
Relativamente s nanopartculas de magnetite, a sua sntese de execuo mais trabalhosa mas
reprodutvel. O facto de apresentarem um comportamento magntico na presena de um man
torna estas solues coloidais fascinantes. Depois do revestimento com ouro obteve-se a
colorao bourdeaux lmpida, esperada desde o incio dos trabalhos. Tanto o revestimento com
ouro como o revestimento com prata resultaram no surgimento do respetivo mximo de
absorvncia caraterstico.
A anlise morfolgica por microscopia eletrnica de transmisso, permitiu confirmar a presena
de nanopartculas de forma esfrica, confirmar o tamanho e tambm permitiu a visualizao de
aglomerados de nanopartculas, principalmente no caso das estruturas ncleo-concha. Conforme
esperado, os valores relativos dimenso das nanopartculas obtidos por disperso dinmica de
luz foram superiores aos encontrados por TEM. Na anlise por DLS a existncia de aglomerados
esconde partculas de menor dimenso presentes na amostra.
Conclui-se que o tipo de estabilizao das nanopartculas utilizadas nos testes de citotoxicidade,
sobretudo eletrosttica, foi suficiente para garantir a qualidade das amostras que se revelaram
biocompatveis. No entanto, seria interessante analisar a estabilidade das vrias composies
aps a mistura com o PBS e o meio de cultura ou mesmo na presena dos estabilizantes
habitualmente utilizados: o PVP, por exemplo, para as NP de ouro e prata, e para as NP de
magnetite, dextrano, PEG ou PAA que so polmeros biocompatveis para a conjugao a
agentes teraputicos e para a melhoria do perfil de biodistribuio, tal como sugerem
Wahajuddin e Arora [83]. Poderia ainda analisar-se o efeito da funcionalizao das NP na
biocompatibilidade. Erathodiyil et al. [123]

reveem um conjunto de tcnicas de revestimento e
funcionalizao que do origem a nanopartculas metlicas, de xidos metlicos, entre outras,
com propriedades fsicas melhoradas. Apesar de no geral as nanopartculas preparadas
apresentarem baixos valores de citotoxicidade, o prximo passo seria compreender a sua origem
atravs da comparao entre a toxicidade da soluo coloidal e a do sobrenadante
separadamente.
Concluso
67

Porm nem sempre possvel, dentro dos timings estabelecidos, testar todas as hipteses que nos
surgem ao analisar resultados obtidos, como gostaramos. Experimentaes futuras encontraro,
por certo, resposta a questes agora levantadas.
Apesar de modesto esperamos que este trabalho possa, de algum modo, contribuir para despertar
o interesse pelo assunto e que seja o primeiro de muitos trabalhos nesta rea aqui na
Universidade da Madeira pois o desenvolvimento da medicina teranstica passar seguramente
pela engenharia de nanopartculas multifuncionais.

69

Referncias

1. Nagarajan R, Hatton TA. Nanoparticles: Synthesis, Stabilization, Passivation, and
Functionalization. Society AC, Ed. 2008
2. Hutchings GJ, Brust M, Schmidbaur H. GoldAn Introductory Perspective. Chem. Soc.
Rev. 2008;37:17591765.
3. http://www.britishmuseum.org/images/k741_s.jpg (acedido a 2012.08.25).
4. Wilson R. The Use of Gold Nanoparticles in Diagnostics and Detection. Chem. Soc. Rev.
2008;37:2028-2045.
5. Faraday M. The Bakerian Lecture: Experimental Relations of Gold (and Other Metals) to
Light. Philos. Trans. R. Soc. A 1857;147:145-181.
6. Schmid G. The Relevance of Shape and Size of Gold Nanoparticles. Journal 2009; 1
(XXIV).
7. Mie G. Beitrage Zur Optik Truber Medien, Speziell Kolloidaler Metallosungen. Annalen
der Physik. 1908;26.
8. Turkevich J, Stevenson PC, Hillier J. A Study of the Nucleation and Growth Processes in
the Synthesis of Colloidal Gold. Discuss Faraday Soc 1951;11:55-75.
9. Kleeman W. Absorption of Colloidal Silver in KC1. Zeitschrift fr Physik 1968;215:113-
-120.
10. Boisselier E, Astruc D. Gold Nanoparticles in Nanomedicine: Preparations, Imaging,
Diagnostics, Therapies and Toxicity. Chem. Soc. Rev. 2009;38:1759-1782.
11. Atkins P, Overton T, Rourke J, Weller M, Armstrong F. Shriver and Atkins Inorganic
Chemistry. Bookman: 2006.
12. Daniel MC, Astruc D. Gold Nanoparticles: Assembly, Supramolecular Chemistry,
Quantum-Size-Related Properties, and Applications toward Biology, Catalysis, and
Nanotechnology. Chem. Rev. 2004;104:293-346.
13. Chaudhuri RG, Paria S. Core/Shell Nanoparticles: Classes, Properties, Synthesis
Mechanisms, Characterization, and Applications. Chem. Rev. 2012;112:2373-2433.
14. Ju-Nam Y, Lead JR. Manufactured Nanoparticles: An Overview of Their Chemistry,
Interactions and Potential Environmental Implications. Sci. Total Environ. 2008;400:396-414.
15. Lewinski N, Colvin V, Drezek R. Cytotoxicity of Nanoparticles. Small 2008;4:26 49.
Referncias
70

16. Shi JJ, Xiao Z, Kamaly N, Farokhzad OC. Self-Assembled Targeted Nanoparticles:
Evolution of Technologies and Bench to Bedside Translation. Acc. Chem. Res. 2011;44:1123-
1134.
17. Kievit FM, Zhang M. Surface Engineering of Iron Oxide Nanoparticles for Targeted
Cancer Therapy. Acc. Chem. Res. 2011;44:853-862.
18. Bell CS, Yu SS, Giorgio TD. The Multistrata Nanoparticle: an FeOx/Au Core/Shell
Enveloped in a Silica-Au Shell. Small 2011;7:1158-1162.
19. Leung KCF, Xuan S, Zhu X, Wang D, Chak CP, Lee SF, Ho WKW, Chung BCT. Gold
and Iron Oxide Hybrid Nanocomposite Materials. Chem. Soc. Rev. 2012;41:1911-1928.
20. Yoo D, Lee JH, Shin TH, Cheon J. Theranostic Magnetic Nanoparticles. Acc. Chem. Res.
2011;44:863-874.
21. Ho D, Sun X, Sun S. Monodisperse Magnetic Nanoparticles for Theranostic
Applications. Acc. Chem. Res. 2011;44 875-882
22. Bardhan R, Lal S, Joshi A, Halas NJ. Theranostic Nanoshells: From Probe Design to
Imaging and Treatment of Cancer. Acc. Chem. Res. 2011;44:936-946.
23. Shore MS, Wang J, Johnston-Peck AC, Oldenburg AL, Tracy JB. Synthesis of
Au(Core)/Ag(Shell) Nanoparticles and their Conversion to AuAg Alloy Nanoparticles. Small
2011;7:230-234.
24. Schrtl W. Current Directions in CoreShell Nanoparticle Design. Nanoscale
2010;2:829-843.
25. Hirsch LR, Gobin AM, Lowery AR, Tam F, Drezek RA, Halas NJ, West JL. Metal
Nanoshells. Ann. Biomed. Eng. 2006;34:15-22.
26. Hao R, Xing R, Xu Z, Hou Y, Gao S, Sun S. Synthesis, Functionalization, and
Biomedical Applications of Multifunctional Magnetic Nanoparticles. Adv. Mater. 2010;22:2729-
2742.
27. Melancon M, Lu W, Li C. Gold-Based Magneto/Optical Nanostructures: Challenges for
In Vivo Applications in Cancer Diagnostics and Therapy. Mater Res Bull. 2009;34:415-421.
28. Dreaden EC, El-Sayed MA. Detecting and Destroying Cancer Cells in More than One
Way with Noble Metals and Different Confinement Properties on the Nanoscale. Acc. Chem.
Res. 2011;10.1021/ar2003122.
29. Ito A, Shinkai M, Honda H, Kobayashi T. Medical Application of Functionalized
Magnetic Nanoparticles. J. Biosci. Bioeng. 2005;100:1-11.
Referncias
71

30. Figuerola A, Corato RD, Manna L, Pellegrinoa T. From Iron Oxide Nanoparticles
Towards Advanced Iron-Based Inorganic Materials Designed for Biomedical Applications.
Pharmacol. Res. 2010;62:126143.
31. Koo H, Huh MS, Sun IC, Yuk SH, Choi K, Kim K, Kwon IC. In Vivo Targeted Delivery
of Nanoparticles for Theranosis. Acc. Chem. Res. 2011;44:1018-1028.
32. Wang LS, Chuang MC, Ho JA. Nanotheranostics - A Review of Recent Publications. Int.
J. Nanomed. 2012:4679-4695.
33. Ratner BD, Hoffman AS, Schoen FJ, Lemons JE, Biomaterials Science An Introduction
to Materials in Medicine. Academic Press: 1996.
34. Dreaden EC, Alkilany AM, Huang X, Murphy CJ, El-Sayed MA. The Golden Age: Gold
Nanoparticles for Biomedicine. Chem. Soc. Rev. 2012;41:2740-2779.
35. http://maisunifra.com.br/wp-content/uploads/img_nan_conceitos-basicos_ouro.jpg
(acedido a 2012.08.26).
36. Lv W, Wang Y, Feng W, Qi J, Zhang G, Zhang F, Fan X. Robust and Smart Gold
Nanoparticles: One-Step Synthesis, Tunable Optical Property, and Switchable Catalytic Activity.
J. Mater. Chem. 2011;21:6173-6178.
37. Liu Y, Han X, He L, Yin Y. Thermoresponsive Assembly of Charged Gold Nanoparticles
and Their Reversible Tuning of Plasmon Coupling. Angew. Chem. Int. Ed. 2012;51:6373-6377.
38. Dykman L, Khlebtsov N. Gold Nanoparticles in Biomedical Applications: Recent
Advances and Perspectives. Chem. Soc. Rev. 2012;41:2256-2282.
39. Chen PC, Mwakwari SC, Oyelere AK. Gold Nanoparticles: From Nanomedicine to
Nanosensing. Nanotechnol. Sci. Appl. 2008;1:45-66.
40. Brown SD, Nativo P, Smith JA, Stirling D, Edwards PR, Venugopal B, Flint DJ, Plumb
JA, Graham D, Wheate NJ. Gold Nanoparticles for the Improved Anticancer Drug Delivery of
the Active Component of Oxaliplatin. J. Am. Chem. Soc. 2010;132:4678-4684.
41. Kennedy LC, Bickford LR, Lewinski NA, Coughlin AJ, Hu Y, Day ES, West JL, Drezek
RA. A New Era for Cancer Treatment: Gold-Nanoparticle-Mediated Thermal Therapies. Small
2011;7:169-183.
42. Sperling RA, Gil PR, Zhang F, Zanella M, Parak WJ. Biological Applications of Gold
Nanoparticles. Chem. Soc. Rev. 2008;37:1896-1908.
43. Day ES, Bickford LR, Slater JH, Riggall NS, Drezek RA, West JL. Antibody-Conjugated
Gold-Gold Sulfide Nanoparticles as Multifunctional Agents for Imaging and Therapy of Breast
Cancer. Int. J. Nanomed. 2010;5 445-454.
Referncias
72

44. Cai W, Gao T, Hong H, Sun J. Applications of Gold Nanoparticles in Cancer
Nanotechnology. Nanotechnol. Sci. Appl. 2008;1:17-32.
45. Craig GE, Brown SD, Lamprou DA, Graham D, Wheate NJ. Cisplatin-Tethered Gold
Nanoparticles that Exhibit Enhanced Reproducibility, Drug Loading, and Stability: a Step Closer
to Pharmaceutical Approval? Inorg. Chem. 2012;51:3490-3497.
46. El-Nour KMMA, Eftaiha A, Al-Warthan A, Ammar RAA. Synthesis and Applications of
Silver Nanoparticles. Arab. J. Chem. 2010;3:135-140.
47. Choi S, Dickson RM, Yu J. Developing Luminescent Silver Nanodots for Biological
Applications. Chem. Soc. Rev. 2012;41:1867-1891.
48. Kittler , reulich , iendorf , Kller M, Epple M. Toxicity of Silver Nanoparticles
Increases during Storage Because of Slow Dissolution under Release of Silver Ions. Chem. Mat.
2010;22:4548-4554.
49. Lankveld DPK, Oomen AG, Krystek P, Neigh A, Jong AT, Noorlander CW, Van
Eijkeren JCH, Geertsma RE, De Jong WH. The Kinetics of the Tissue Distribution of Silver
Nanoparticles of Different Sizes. Biomaterials 2010;31:8350-8361.
50. Thakor AS, Jokerst J, Zavaleta C, Massoud TF, Gambhir SS. Gold Nanoparticles: A
Revival in Precious Metal Administration to Patients. Nano Lett. 2011;11:4029-4036.
51. Suresh AK, Pelletier DA, Wang W, Morrell-Falvey JL, Gu B, Doktycz MJ. Cytotoxicity
Induced by Engineered Silver Nanocrystallites Is Dependent on Surface Coatings and Cell
Types. Langmuir 2012:28:2727-2735.
52. Semmler-Behnke M, Kreyling WG, Lipka J, Fertsch S, Wenk A, Takenaka S, Schmid G,
Brandau W. Biodistribution of 1.4- and 18-nm Gold Particles in Rats. Small 2008;4:2108-2111.
53. Smith WF, Principles of Materials Science and Engineering. 1996.
54. Henriques AB, Rumal JC. Electromagnetismo. IST press: 2006.
55. Sun C, Lee JSH, Zhang M. Magnetic Nanoparticles in MR Imaging and Drug Delivery.
Adv. Drug Deliv. Rev. 2008;60:1252-1265.
56. Thanh NTK. Magnetic Nanoparticles From Fabrication to Clinical Applications. CRC
Press: 2012.
57. Gupta AK, Gupta M. Synthesis and Surface Engineering of Iron Oxide Nanoparticles for
Biomedical Applications. Biomaterials 2005;26:3995-4021.
58. Gossuin Y, Gillis P, Hocq A, Vuong QL, Roch A. Magnetic Resonance Relaxation
Properties of Superparamagnetic Particles. Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and
Nanobiotechnology 2009;1:299-310.
Referncias
73

59. Kncl M, beling , oldenberg , Treude , minsi , ier , robty ,
Rothen-Rutishauser B, Merfort I, Mersch-Sundermann V. Cytotoxicity and Genotoxicity of Size-
Fractionated Iron Oxide (Magnetite) in A549 Human Lung Epithelial Cells: Role of ROS, JNK,
and NF-. hem. es. Toxicol. 2011;24:1460-1475.
60. Lyon JL, Fleming DA, Stone MB, Schiffer P, Williams ME. Synthesis of Fe Oxide
Core/Au ShellNanoparticles by Iterative Hydroxylamine Seeding. Nano Lett. 2004;4:719-723.
61. Corot C, Robert P, Idee J, Port M. Recent Advances in Iron Oxide Nanocrystal
Technology for Medical Imaging. Adv. Drug Deliv. Rev. 2006;58:1471-1504.
62. Cheong S, Ferguson P, Feindel KW, Hermans IF, Callaghan PT, Meyer C, Slocombe A,
Su CH, Cheng FY, Yeh CS, Ingham B, Toney MF, Tilley RD. Simple Synthesis and
Functionalization of Iron Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging. Angew. Chem. Int.
Ed. 2011;50:4206-4209.
63. Mornet S, Vasseur S, Grasset F, Veverka P, Goglio G, Demourgues A, Portier J, Pollert
E, Duguet E. Magnetic Nanoparticle Design for Medical Applications. Prog. Solid State Chem.
2006;34:237-247.
64. Peiris PM, Bauer L, Toy R, Tran E, Pansky J, Doolittle E, Schmidt E, Hayden E, Mayer
A, Keri RA, Griswold MA, Karathanasis E. Enhanced Delivery of Chemotherapy to Tumors
Using a Multicomponent Nanochain with Radio-Frequency-Tunable Drug Release. ACS Nano
2012;6:4157-4168.
65. Xu C, Wang B, Sun S. Dumbbell-like Au-Fe3O4 Nanoparticles for Target-Specific Platin
Delivery. J. Am. Chem. Soc. 2009;131:42164217.
66. Fang C, Zhang M. Multifunctional Magnetic Nanoparticles for Medical Imaging
Applications. J.Mater. Chem. 2009;19:6258-6266.
67. Xu Z, Hou Y, Sun S. Magnetic Core/Shell Fe3O4/Au and Fe3O4/Au/Ag Nanoparticles
with Tunable Plasmonic Properties. J. Am. Chem. Soc. 2007;129:8698-8699.
68. Sounderya N, Zhang Y. Use of Core/Shell Structured Nanoparticles for Biomedical
Applications. Rec. Pat. Biomed. Eng. 2008;1:34-42.
69. Zhang J, Tang Y, Weng L, Ouyang M. Versatile Strategy for Precisely Tailored
Core@Shell Nanostructures with Single Shell Layer Accuracy: The Case of Metallic Shell. Nano
Lett. 2009;9:4061-4065.
70. Liu X, Liu X. Bimetallic Nanoparticles: Kinetic Control Matters. Angew. Chem. Int. Ed.
2012;51:3311-3313.
Referncias
74

71. Wang L, Luo J, Fan Q, Suzuki M, Suzuki IS, Engelhard MH, Lin Y, Kim N, Wang JQ,
Zhong CJ. Monodispersed Core-Shell Fe
3
O
4
@Au Nanoparticles. J. Phys. Chem. B 2005;109:
21593-21601.
72. Tsuji M, Yamaguchi , Matsunaga M, Iedo K. pitaxial rowth of Au@Ni orehell
Nanocrystals Prepared Using a Two-Step Reduction Method. Cryst. Growth Des. 2011;11:1995-
2005.
73. Rodriguez JA. Physical and Chemical Properties of Bimetallic Surfaces. Surf. Sci. Rep.
1996;24:223-287.
74. Cortie MB, McDonagh AM. Synthesis and Optical Properties of Hybrid and Alloy
Plasmonic Nanoparticles. Chem. Rev. 2011;111:3713-3735.
75. Huang YF, Lin YW, Chang HT. Growth of Various AuAg Nanocomposites from Gold
Seeds in Amino Acid Solutions. Nanotechnology 2006;17:4885-4894.
76. Aaron JS, Oh J, Larson TA, Kumar S, Milner TE, Sokolov KV. Increased Optical
Contrast in Imaging of Epidermal Growth Factor Receptor Using Magnetically Actuated Hybrid
Gold/Iron Oxide Nanoparticles. Opt. Express 2006;14:12930-12943.
77. Huang C, Jiang J, Muangphat C, Sun X, Hao Y. Trapping Iron Oxide into Hollow Gold
Nanoparticles. Nanoscale Res Lett 2011;6:43-47.
78. Xie J, Liu G, Eden HS, Al H, Chen X. Surface-Engineered Magnetic Nanoparticle
Platforms for Cancer Imaging and Therapy. Acc. Chem. Res. 2011;44:883-892.
79. Lim IIS, Njoki PN, Park HY, Wang X, Wang L, Mott D, Zhong CJ. Gold and Magnetic
Oxide/Gold Core/Shell Nanoparticles as Bio-Functional Nanoprobes. Nanotechnology
2008;19:305102.
80. Wang L, Park HY, Lim SII, Schadt MJ, Mott D, Luo J, Wang X, Zhong CJ. Core@Shell
Nanomaterials: Gold-Coated Magnetic Oxide Nanoparticles. J. Mater. Chem. 2008;18:2629-
2635.
81. Gao J, Gu H, Xu B. Multifunctional Magnetic Nanopaticles: Design, Synthesis, and
Biomedical Application. Acc. Chem. Res. 2009;42:1097-1107.
82. Day ES, Thompson PA, Zhang L, Lewinski NA, Ahmed N, Drezek RA, Blaney SM,
West JL. Nanoshell-Mediated Photothermal Therapy Improves Survival in a Murine Glioma
Model. J. Neuro-Oncol. 2010;104:55-63.
83. Wahajuddin, Arora S. Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles: Magnetic
Nanoplatforms as Drug Carriers. Int. J. Nanomed. 2012:3445-3471.
84. Anandan S, Grieser F, Ashokkumar M. Sonochemical Synthesis of Au-Ag Core-Shell
Bimetallic Nanoparticles. J. Phys. Chem. 2008 112:15102-15105.
Referncias
75

85. Lim JH, Lee JS. A Statistical Design and Analysis Illustrating the Interactions Between
Key Experimental Factors for the Synthesis of Silver Nanoparticles. Colloids Surf. A:
Physicochem. Eng. Aspects 2008;322:155-163.
86. Ingham B, Lim TH, Dotzler CJ, Henning A, Toney MF, Tilley RD. How Nanoparticles
Coalesce: An In Situ Study of Au Nanoparticle Aggregation and Grain Growth. Chem. Mater.
2011;23:3312-3317.
87. Handy RD, Kammer F, Lead JR, Hassellov M, Owen RC, M. The Ecotoxicology and
Chemistry of Manufactured Nanoparticles. Ecotoxicology 2008;17:287314.
88. Yang N, Aoki K. Molecular Numbers in Core and Shell: Structural Dependence of
Reactivity of Alkylcarboxylate-Stabilized Silver Nanoparticles. J. Phys. Chem. B
2005;109:23911-23917.
89. Dumur F, Guerlin A, Dumas E, Bertin D, Gigmes D, Mayer CR. Controlled Spontaneous
Generation of Gold Nanoparticles Assisted by Dual Reducing and Capping Agents. Gold Bull.
2011;44:119-137.
90. Nanaie H, Cooper A, Sanders S, Zhao D. Inter-Dendrimer Stabilized Ag/Au Alloy and
Core-Shell Nanoparticles. J. Phys. Nat. Sci. 2007;1:1-7.
91. Pande S, Ghosh SK, Praharaj S, Panigrahi S, Basu S, Jana S, Pal A, Tsukuda T, Pal T.
Synthesis of Normal and Inverted Gold-Silver Core-Shell Architectures in -Cyclodextrin and
Their Applications in SERS. J. Phys. Chem. 2007;111:10806-10813.
92. Lo CK, Xiao D, Choi MMF. Homocysteine-Protected Gold-Coated Magnetic
Nanoparticles: Synthesis and Characterisation. J. Mater. Chem. 2007;17:2418-2427.
93. Klabunde K. Nanoscale Materials in Chemistry. Wiley, Ed. 2001.
94. http://www.sagan-gea.org/hojared_radiacion/imagenes/espectroem3.gif
http://4.bp.blogspot.com/_Q-2j2ApepA/SXWntlCyFNI/AAAAAAAAATA/Ovwxzo_v738/s200/
rosa+das+cores.bmp (acedidos a 2011.07.01).
95. Banerjee S, Raja SO, Sardar M, Gayathri N, Ghosh B, Dasgupta A. How Gold
Nanoparticle Acquires Magnetism? - Formation of Large Orbital Moment at the Interface.
2010;arXiv:0912.3319v2.
96. Khan FA, Sss-Fink G. Superparamagnetic Core-Shell-Type Fe
3
O
4
/Ru Nanoparticles as
Catalysts for the Selective Hydrogenation of an Unconstrained ,-Unsaturated Ketone. Eur. J.
Inorg. Chem. 2012:727-732.
97. Rossi LM, Vono LLR, Silva FP, Kiyohara PK, Duarte EL, Matos JR. A Magnetically
Recoverable Scavenger for Palladium Based on Thiol-Modified Magnetite Nanoparticles. Appl.
Catal. A: Gen. 2007;330:139-144.
Referncias
76

98. Mahl D, Diendorf J, Meyer-Zaika W, Epple M. Possibilities and Limitations of Different
Analytical Methods for the Size Determination of a Bimodal Dispersion of Metallic
Nanoparticles. Colloids Surf. A: Physicochem. Eng. Aspects 2011;377:386-392.
99. Kumar A, Singhal A. Synthesis of Colloidal Silver Iron Oxide NanoparticlesStudy of
their Optical and Magnetic Behavior. Nanotechnology 2009;20:295606.
100. Raveendran P, u , Wallen L. A imple and reen Method for the ynthesis of Au,
Ag, and AuAg Alloy Nanoparticles. Green Chem. 2006;8:34-38.
101. aveendran P, u , Wallen L. ompletely reen ynthesis and tabiliation of
Metal Nanoparticles. J. Am. Chem. Soc. 2003;125:13940-13941.
102. Solomon SD, Bahadory M, Jeyarajasingam AV, Rutkowsky SA, Boritz C. Synthesis and
Study of Silver Nanoparticles J. Chem. Edu. 2007;84:322-325.
103. Massart. Preparation of Aqueous Magnetic Liquids in Alkaline and Acidic Media. IEEE
Trans. Magn. 1981;17:12471248.
104. Aoki K, Chen J, Yang N, Nagasawa H. Charge-Transfer Reactions of Silver Stearate-
Coated Nanoparticles in Suspensions. Langmuir 2003;19:9904-9909.
105. Mailander V, Landfester K. Interaction of Nanoparticles with Cells. Biomacromolecules
2009;10:23792400.
106. Harper SL, Carriere JL, Miller JM, Hutchison JE, Maddux BLS, Tanguay RL. Systematic
Evaluation of Nanomaterial Toxicity: Utility of Standardized Materials and Rapid Assays. ACS
Nano 2011;5:4688-4697.
107. Auffan M, Rose J, Wiesner MR, Bottero JY. Chemical Stability of Metallic
Nanoparticles: A Parameter Controlling Their Potential Cellular Toxicity In Vitro. Environ.
Pollut. 2009;157:1127-1133.
108. Lee H, Yu MK, Park S, Moon S, Min JJ, Jeong YY, Kang HW, Jon S. Thermally Cross-
Linked Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles: Synthesis and Application as a Dual
Imaging Probe for Cancer in Vivo. J. Am. Chem. Soc. 2007;129:12739-12745.
109. Tassa C, Shaw S, Weissleder R. Dextran-Coated Iron Oxide Nanoparticles: A Versatile
Platform for Targeted Molecular Imaging, Molecular Diagnostics, and Therapy. Acc. Chem.
Res. 2011;44:842852.
110. Kenzaoui BH, Vil MR, Miquel JM, Cengelli F, Juillerat-Jeanneret L. Evaluation of
Uptake and Transport of Cationic and Anionic Ultrasmall Iron Oxide Nanoparticles by Human
Colon Cells. Int. J. Nanomed. 2012;7:1275-1286.
Referncias
77

111. Lee PW, Hsu SH, Wang JJ, Tsai JS, Lin KJ, Wey SP, Chen FR, Lai CH, Yen TC, Sung
HW. The Characteristics, Biodistribution, Magnetic Resonance Imaging and Biodegradability of
Superparamagnetic CoreShell Nanoparticles. Biomaterials 2010;31:1316-1324.
112. Alkilany AM, Murphy CJ. Toxicity and Cellular Uptake of Gold Nanoparticles: What
We Have Learned So Far? J Nanopart Res 2010;12:2313-2333.
113. Liu J, Qin G, Raveendran P, Ikushima Y. acile reen ynthesis, haracteriation, and
atalytic unction of -D-Glucose-Stabilized Au Nanocrystals. Chem. Eur. J. 2006;12:2131-
2138.
114. Toshima N, Yonezawa T. Bimetallic NanoparticlesNovel Materials for Chemical and
Physical Applications. New J. Chem. 1998;22:1179-1201.
115. el , stnda Z, i H, Kesin , Taner , urgun Z, Turan AA, olak AO.
Effect of Au and Au@Ag CoreShell Nanoparticles on the SERS of Bridging Organic
Molecules. J. Colloid Interface Sci. 2010;351:35-42.
116. Hall WP, Hartland G, Duyne RV, Petrova H. Single Nanoparticle Spectroscopy: An
Analysis of Sample Preparation and Microscopy Techniques. Nanoscale 2005;2:35-41.
117. Wu Y, Jiang P, Jiang M, Wang TW, Guo CF, Xie SS, Wang ZL. The Shape Evolution of
Gold Seeds and Gold@Silver CoreShell Nanostructures. Nanotechnology 2009;20:305602-
305612.
118. Chairam S, Poolperm C, Somsook E. Starch Vermicelli Template-Assisted Synthesis of
Size/Shape-Controlled Nanoparticles. Carbohydr. Polym. 2009;75:694-704.
119. Li ZY, Wilcoxon JP, Yin F, Chen Y, Palmer RE, Johnston RL. Structures and Optical
Properties of 45 nm Bimetallic AgAu Nanoparticles. Faraday Discuss. 2008;138:363-373.
120. Shibata T, Bunker BA, Zhang Z, Meisel D, Vardeman II CF, Gezelter JD. Size-
Dependent Spontaneous Alloying of Au-Ag Nanoparticles. J. Am. Chem. Soc. 2002;124:11989-
11996.
121. Kang YS, Risbud S, Rabolt JF, Stroeve P. Synthesis and Characterization of Nanometer-
Size Fe
3
O
4
and -Fe
2
O
3
Particles. Chem. Mater. 1996;8:2209-2211.
122. Banerjee S, Raja SO, Sardar M, Gayathri N, Ghosh B, Dasgupta A. Enhanced
Magnetism, Memory and Aging in Gold-Iron Oxide Nanoparticle Composites.
2009;arXiv:0906.1497v2.
123. Erathodiyil N, Ying JY. Functionalization of Inorganic Nanoparticles for Bioimaging
Applications. Acc. Chem. Res. 2011;44:925-935.
.

ANEXOS

81

Anexo I - Tcnicas experimentais

I.1 - Difrao de raios-X
A difrao de raios-X uma tcnica de identificao da estrutura de materiais. Admitindo que os
tomos do material em anlise se encontram igualmente espaados a uma determinada distncia
interplanar d, ao serem expostos a uma radiao com comprimento de onda inferior a d, esta vai
ser dispersa em diferentes direes. Alguns destes fotes vo interagir entre si construtivamente
e outros destrutivamente. A forma como a radiao se dispersa depende do comprimento de onda
da mesma e da estrutura atmica da amostra cristalina. Na Figura encontra-se esquematizada
uma interao construtiva da radiao com o material. Com base em relaes geomtricas
possvel chegar lei de Bragg dada por n=2dsen. Em que o comprimento de onda dos
fotes incidentes, d a distncia interplanar e o ngulo entre o plano dos tomos e o feixe de
fotes incidentes ( varia entre 0 e 90).

Figura - Esquema da interao da radiao com uma amostra cristalina
O erro relativo do mtodo dado pela relao
. Pelo que se conclui que quanto

maior o ngulo de incidncia menor ser o erro relativo da medida. Para alm do erro
matemtico existem outros condicionantes experimentais que podem induzir a erros mais
significativos nas medidas tais como o correto posicionamento da amostra no porta-amostras, a
espessura e a compactao da amostra.
Com os dados de XRD possvel obter uma estimativa das dimenses das cristalites que formam
os gros. Para tal recorreu-se frmula de Scherrer,
em que K o fator de forma, o

comprimento de onda da radiao incidente, a largura a meia altura do pico em radianos e o
ngulo de Bragg. Esta frmula no aplicvel a gros com dimenses superiores a 0,1m e o
Anexo I- Tcnicas experimentais
82

fator de forma varia com a estrutura da cristalite. , no entanto, afetada por diferentes fatores
como por exemplo as especificaes do equipamento e as condies de preparao da amostra
(espessura, homogeneidade, deformaes da rede, polidisperso, etc.). Este mtodo tem como
desvantagem a preparao da amostra, uma vez que tm de ser preparadas amostras secas.

Referncias:
Zvi Szafran, Ronald M. Pike, Mono M. Singh Microscale Inorganic Chemistry, A
comprehensive Laboratory Experience John Wiley & Sons, Inc., 1991;
Skoog et al., Principles of Instrumental Analysis, Thomson Brooks/Cole, 6th ed., 2007,
169-173.
Handy R.D., Kammer F. von der, Lead J.R., Hassellv M., Owen R., Crane M., The
ecotoxicology and chemistry of manufactured Nanoparticles, Ecotoxicology, 2008, 17,
287-314.

83

I.2 - Disperso dinmica da luz
A tcnica de Disperso Dinmica da Luz tambm conhecida como espetroscopia de correlao
de fotes e pode ser usada para determinar o perfil de distribuio de tamanho de pequenas
partculas em suspenso. O seu princpio de funcionamento baseia-se na medio do movimento
browniano das partculas. Este movimento ocorre quando as molculas do meio lquido colidem
com as partculas em suspenso. Por esta razo, as partculas de maior dimenso possuem uma
velocidade de difuso mais lenta que as menores. O clculo da dimenso das partculas no por
isso direto e influenciado por diferentes fatores como a temperatura e a fora inica do meio.
No que respeita a primeira ela interfere diretamente na viscosidade do meio causando maior ou
menor atrito. A temperatura tem por isso de se manter estvel para que as correntes de conveco
no adulterem os resultados. importante ter em conta que a medida adquirida no corresponde
s partculas em si nem mesmo aos agregados, correspondendo antes ao Dimetro
Hidrodinmico por elas formado. Este dimetro corresponde ao de uma esfera que possui o
mesmo coeficiente de difuso translacional que a partcula/agregado em si. Este coeficiente
influenciado pela partcula em si, pela sua superfcie, pela concentrao e o tipo de ies do meio.
O dimetro Hidrodinmico ento calculado atravs da equao de Stokes-Einstein:

Sendo k a constante de oltmann, T a temperatura absoluta, a viscosidade do meio e o
coeficiente de difuso translacional.
A tcnica apresenta algumas limitaes em particular no que respeita a forma, as partculas em
suspenso devem ser esfricas, ao ndice de disperso, em que idealmente devem ser
monodispersas sendo igualmente afetada pela aglomerao.
Esta tcnica baseia-se na anlise da variao da intensidade medida num ngulo fixo durante um
determinado intervalo de tempo. A variao deste ngulo resulta em diferenas nalgumas ordens
de grandeza na concentrao mxima que o equipamento capaz de medir. O equipamento da
Malvern NS mede esta difrao a um ngulo de 173 e pode medir concentraes at 5% da
massa tendo em conta uma densidade de 1g/cm
3
para partculas entre os 10 e os 100 nm. As
flutuaes originadas pelo movimento Browniano das partculas vizinhas podem causar
interferncias construtivas ou destrutivas na difrao da luz numa dada direo. Neste
equipamento a intensidade da luz medida durante pequenos intervalos de tempo (da ordem dos
84

micro/milisegundos). Esta intensidade posteriormente relacionada entre si atravs de uma
funo de correlao.
A capacidade de difuso no meio das partculas muito pequenas (nanomtricas) muito grande
pelo que o grfico da sua correlao muito mais irregular.

Figura - Intensidade tpica para partculas grandes e pequenas.

Fazendo um grfico da taxa de decaimento ao longo do tempo tambm possvel retirar
informao acerca da dimenso das partculas. Quanto menor o tempo de decaimento menor a
dimenso.

Figura Coeficiente de Correlao vs Tempo para partculas grandes e para partculas
pequenas.
A taxa de decaimento pode ser convertida em Dq
2
sendo D o coeficiente de difuso e q um vetor
de onda; q = / sen (/4) com o ndice de refrao e o comprimento de onda da radiao
85

incidente. Sabendo o Coeficiente de Difuso ento possvel calcular o dimetro hidrodinmico.
Este dimetro hidrodinmico ento convertido num coeficiente de intensidade (z-average).
Este princpio tem uma limitao. Considerando o parmetro de disperso d, quando a dimenso
da partcula superior ao comprimento de onda incidente, a intensidade da luz dispersa depende
apenas do ngulo difratado. Porm, para partculas de dimenses menores, com d < /20, h que
considerar outros parmetros como, por exemplo, o ngulo de disperso ou as propriedades da
soluo. Usa-se por isso a aproximao de ayleigh em que a intensidade I d
6
. Esta questo
no se coloca para as partculas com dimenses entre /20 < d < , usando-se a aproximao de
Mie em que: d I
2
.
Para termos uma viso mais realstica de cada pico presente a distribuio de tamanhos por
intensidade convertida numa distribuio por volume.

Referncias:
M. Instruments, ynamic Light cattering: An Introduction in 30 Minutes,
http://www.malvern.com/malvern/kbase.nsf/allbyno/KB000792/$file/MRK656-
01_An_Introduction_to_DLS.pdf, pp. 1-8 [consultado em 2011.07.16].

87

I.3 - Espetroscopia de disperso de energia
a tcnica analtica mais usada para a anlise elementar qualitativa ou para a caracterizao
qumica de uma amostra. usada para determinar que elementos esto presentes e a sua
abundncia relativa. O equipamento permite identificar os raios-x (medindo o nmero e a
energia) caratersticos de uma determinada estrutura elementar. Neste tipo de espetroscopia o
detetor um dodo semiconductor (Si ou Ge) e os raios-x, emitidos pela amostra irradiada por
um feixe de eletres, so detetados e convertidos num sinal eltrico que processado num
amplificador, analisado e exibido atravs de um espetro de EDS. As diferentes fases so assim
visualizadas e a composio qumica diretamente determinada.

Figura Circuito de processamento do sinal (adaptado de Egeston)

Referncias:
Egeston, R. F., Physical Principles of Electron Microscopy: An Introduction to TEM,
SEM and AEM, Springer, 2005.

Arrefecido a cerca
de - 133
o
C
Pr-amplificador Field
Effect Transistor
Processador
Anlise
PC e espetro
Feixe de eletres
Detetor (Si, Ge)
Sinal de raios-x
Amostra

89

I.4 - Espetroscopia do ultravioleta-visvel
A espetroscopia do ultravioleta-visvel uma tcnica de caracterizao ptica de materiais que se
baseia na interao entre a radiao e a amostra. Para um dado comprimento de onda incidente, a
tcnica permite quantificar a Absorvncia (A), a Refletncia (R) e a Transmitncia (T),
parmetros que se relacionam entre si atravs de: A()+T()+() = 1.
O Espetrofotmetro de UV-Vis possui dois tipos de lmpadas, uma para a radiao visvel
geralmente de Deutrio e outra para a Ultravioleta, de Tungstnio/Halognio. Depois de
atravessar um monocromador, a luz dividida em dois feixes, um dos quais atravessa a amostra
em estudo e o outro a de referncia. A quantidade de luz que transmitida ou refletida pela
amostra ento comparada com a de referncia. Deste modo, os dados obtidos representam a
razo entre a radiao que atravessa a amostra e a incidente. Pela lei de Beer-Lambert possvel
inferir a concentrao de uma dada soluo tendo em conta a absoro a um dado comprimento
de onda atravs da relao A = dc. A absoro, d a distncia percorrida pela luz ao longo do
corpo, c a concentrao da suspenso e uma constante dependente do comprimento de onda
dada por = 4/ sendo o coeficiente de extino. A absorvncia de uma amostra A = log
(Io/I) em que Io a intensidade incidente e I a intensidade medida depois de atravessar a
amostra. A concentrao pode ento ser calculada atravs da frmula:

Referncias:
Szafran, Z., Pike, R. M., Singh, M. M., Microscale Inorganic Chemistry, A
comprehensive Laboratory Experience, John Wiley & Sons, Inc., 1991;
Skoog et al., Principles of Instrumental Analysis, Thomson Brooks/Cole, 6th ed., 2007,
169-173.

91

I.5 - Microscopia eletrnica de transmisso

A microscopia eletrnica de transmisso a ferramenta central para a completa caracterizao
dos materiais escala nano. Uma caracterizao ideal envolve a determinao da estrutura
cristalina, composio qumica, densidade (quantidade), tamanho, forma e distribuio das fases.
A TEM permite estudar a quantidade, tamanho, morfologia, distribuio das fases e defeitos
cristalinos. O microscpio eletrnico de transmisso produz imagens atravs de um feixe de
eletres que atravessa a amostra. A imagem formada por um feixe de eletres (primrios)
produzido por um filamento de tungstnio aquecido no topo de uma coluna. Esse feixe
acelerado atravs da coluna por uma alta voltagem (usualmente entre 75 a 120 KV). So
utilizadas bobinas eletromagnticas para condensar o feixe de eletres que depois atravessa um
seo muito fina da amostra. medida que os eletres a atravessam alguns so absorvidos e
outros so dispersos, mudando de direo. As diferenas no feixe de eletres secundrios
disperso ou difratado produzido pelos diferentes elementos ou defeitos da estrutura produzem
um contraste que permite a observao detalhada da forma como os tomos esto ordenados
sendo possvel atingir resolues da ordem do Angstrom. O microscpio possui detetores que
identificam os eletres secundrios retrodifundidos, os raio-X caractersticos e os eletres
transmitidos.

92


Figura Disposio do sistema de lentes no microscpio eletrnico de transmisso. O caminho
do feixe de eletres da fonte at imagem final est indicado por setas. A amostra colocada
entre o condensador as lentes da objetiva [Adaptado de Smith]

Referncias:
Smith W.S., Principles of Materials Science and Engineering, McGraw Hill, 1996;
Callister W.D., Materials Science and Engineering an Introduction, Wiley, 1997;
Williams, D. B., Carter, C. B., Transmission Electron Microscopy. 4th Edition, Springer,
1997.

Fonte de eletres
Lente
dupla
Objetiva

Condensador
Alta Voltagem
nodo
Abertura
Lente
intermediria
Deteo de
radiao
secundria e
refletida
Lente do
projetor
Amostra
Sistema tico de eletres
Imagem do
sinal
transmitido
Imagem final
Abertura
Projetor
93

I.6 - Potencial zeta
Em contacto com a gua as nanopartculas adquirem uma carga eltrica superficial. Esta carga
superficial afeta a distribuio de ies da soluo na sua vizinhana, o que conduz ao aumento da
concentrao de contra ies sua volta, formando desta forma uma dupla camada eltrica
(Figura). Esta camada composta por uma regio interna em que os ies se encontram ligados
fortemente superfcie e uma regio externa varivel, dependente das foras eletrostticas e da
temperatura. O potencial nesta camada exterior decresce com o afastamento da partcula at
atingir o valor nulo (potencial zero). Ao aplicar um campo eltrico, as NP e a camada interna vo
mover-se em unssono, causando um arrasto da camada externa. A interface entre a camada
interna e externa, vai sofrer foras contrrias levando ao rompimento das ligaes. regio em
que este fenmeno ocorre d-se o nome de plano de escorregamento. O potencial zeta pode ser
definido como a diferena entre o potencial eltrico do plano de escorregamento e um ponto no
fluido da suspenso longe da partcula.
Ao aplicar um campo eltrico as partculas vo migrar em direo ao eltrodo contrrio sua
carga. A sua velocidade proporcional magnitude do seu potencial zeta. Este mtodo muito
sensvel a contaminaes. Este valor no pode ser medido diretamente mas pode ser calculado a
partir de modelos tericos que tm em conta, entre outros parmetros, a viscosidade da
suspenso e medidas de mobilidade eletrofortica. Ou seja, atravs da medida de Mobilidade
Eletrofortica possvel calcular o potencial zeta das partculas, obtendo-se assim uma medida
da carga superficial da amostra. As partculas tm de estar em suspenso. Esta informao
fundamental no estudo da toxicidade ou na reatividade das nanopartculas. Contudo, esta tcnica
no tem em conta a heterogeneidade das cargas de cada molcula, fornecendo um valor mdio.
Existe uma variao do potencial zeta com alteraes de pH e fora inica.

94


Figura - Potencial Zeta adaptado de
http://www.malvern.com/LabEng/technology/zeta_potential/zeta_potential_LDE.htm (acedido
em 2011.09.26)

Referncias:
http://www.malvern.com/LabEng/technology/zeta_potential/zeta_potential_LDE.htm (10
Outubro 2010);
Oberdrster, J. J. G., Biswas, P., Characterization of size, surface charge, and
agglomeration state of nanoparticle dispersions for toxicological studies, Journal of
Nanoparticle Research, 2008, 11, 77-89.

95

Anexo II - Procedimentos experimentais

1 Procedimento Experimental (Setembro 2011) - SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS DE OURO
OBJECTIVO: preparao de NP de Au por reduo de ies Au 3+ numa disperso aquosa de -
D-Glucose. Investigao do pH e caracterizao por espetroscopia UV-Vis, IV-TF, Difrao de
RX e Disperso Dinmica de Luz.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
I. MATERIAL, EQUIPAMENTO E REAGENTES
Reagentes Material/Equipamento
HAuCl
4
.3H
2
O

Bales volumtricos
-D-Glucose Gobls
gua desionizada Erlenmeyer
NaOH Placa de agitao magntica, agitador e pescador
Espetrofotmetro UV-Vis
Medidor de pH
Difratmetro de RX
Zetasizer

II. PREPARAO DAS NANOPARTCULAS tempo estimado ~5h
1. Preparao das solues:
- 50 mL de -D-Glucose (0,03M)
- 200L de HAuCl
4
3H
2
O (0,05M)
- NaOH (0,05M)
2. Mistura das solues de -D-Glucose e HAuCl
4
3H
2
O
3. 30 minutos de agitao
4. Adio gota a gota da soluo de NaOH mistura
5. Verificao do pH
6. Estudo da dinmica da formao das NPAu com um Espetrofotmetro UV/Vis
Anexo II- Procedimentos experimentais
96


Tabela de dados qumicos
CAS Frmula
molecular
Massa molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso
(C)
Frases R/S
PERCLORATO DE
OURO
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83
-D-GLUCOSE 492-61-5 C
6
H
12
O
6
180,10 1,54 150 -
HIDRXIDO DE
SDIO
1310-73-2 NaOH 39,99 2,13 322 R35,36 e 38
S1/2, 26, 36, 37,
39 e 45
Artigo de referncia: Liu J., Qin G., Raveendran P., Ikushima Y., Facile Green Synthesis,
Characterization, and Catalytic Function of -D-Glucose-Stabilized Au Nanocrystals, Chem.-
Eur. J., 2006 12(8), 2131-2138.

III. PREPARAO DAS AMOSTRAS PARA IV-TF tempo estimado ~5h
7. Centrifugao da disperso de NPAu t~20 min, v~6000 rpm
8. Isolamento do precipitado de NPAg com uma pipeta plstica
9. Repetir 3 vezes os passos 7. e 8.
10. Membrana de centrifugao (peso molecular de cutoff 3000) para remover excesso de
ies isolados superfcie
11. Secagem a frio sob vcuo durante a noite para obteno de um compsito seco de
NPAu
12. Preparao de pastilhas finas e transparentes de KBr (95mg) com NPAu (1mg)
13. Subtraco do espetro de uma pastilha pura de 100mg de KBr utilizada como
referncia
IV. TAMANHO tempo estimado ~5h
Zetasizer

V. ESTUDOS DE CRISTALINIDADE tempo estimado ~5h
Difratmetro XRD
97

2 Procedimento Experimental (Outubro 2011) - SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS DE OURO E PRATA

OBJECTIVO: preparao de NPAu por reduo de ies Au
3+
do HAuCl
4
.3H
2
O e de NPAg por
reduo de Ag
+
do AgNO
3
numa disperso aquosa de Amido. Caracterizao por espetroscopia
UV-Vis e Disperso Dinmica de Luz (DLS).

HAuCl
4
.3H
2
O

Bales volumtricos
-D-Glucose Gobls
gua desionizada Pipetas e micropipeta
NaOH Espetrofotmetro UV-Vis
AgNO
3
Zetasizer
Amido Medidor de pH

NOTA: Antes de iniciar a sntese todo o material deve ser verificado. O material de vidro deve ser
lavado convenientemente em soluo de RBS 25 (20g/L).

II. PREPARAO DAS SOLUES tempo estimado ~1h
- 5 mL de HAuCl
4
3H
2
O (0,1M)
- 5 mL de NaOH (1M)
- 5 mL de AgNO
3
(0,1M)
- 5 mL de Amido (0,20% peso)
98


III. PREPARAO DAS NANOPARTCULAS DE Ag tempo estimado ~2h
1. 10L AgNO
3

25L -D-Glucose

2. 60 segundos no microondas para a reduo dos ies Ag
+

3. Estudo da dinmica da formao das NPAg com um Espetrofotmetro UV/Vis
4. Determinao da distribuio de tamanhos atravs do Zetasizer
IV. PREPARAO DAS NANOPARTCULAS DE Au tempo estimado ~2h
5. 40L HAuCl
4
3H
2
O

60L -D-Glucose
15L NaOH

6. Medio do pH em intervalos de 10 minutos at 30 minutos, tempo a partir do qual a
soluo dever tornar-se vermelha
2 mL
AMIDO
2 mL
AMIDO
99



CAS Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso
(C)
Frases R/S
cido clorourico
tri-hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 R 22 e 34
S 26, 36/37/39 e 45
-D Glucose 492-61-5 C
6
H
12
O
6
180,10 1,54 150 -
Nitrato de prata 7761-88-8 AgNO
3
169,88 4,352 212 R8,R34, R50/53
(S1/2), S26, S45,
S60, S61
Amido 9005-25-8 (C
6
H
10
O
5
)
n
1,5 A 200C
decomp
e-se

-
Hidrxido de
sdio
1310-73-2 NaOH 39,99 2,13 322 R35,36 e 38
S1/2, 26, 36, 37, 39
e 45

Artigo de referncia: Raveendran P., Fu J., Wallen S.L., A simple and green method for the
synthesis of Au, Ag, and AuAg alloy nanoparticles, Green Chem, 2006, 8, 34-38.

V. PREPARAO DE NANOPARTCULAS DE Au E
Ag
tempo estimado ~2h
9. As NP ligadas com vrios rcios Au/Ag (0:1, 0,25:0,75, 0,5:0,5, 0,75:0,25 e 1:0) sero
preparadas usando o procedimento anterior (IV), partindo de rcios molares
predeterminados de ies de Au e Ag em soluo.
10. Estudo da dinmica da formao das NP com um Espetrofotmetro UV/Vis

3 Procedimento Experimental (Novembro 2011) - SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS ncleo- concha Ag-Au

OBJECTIVO: preparao de NP de Ag e de Au por reduo, com -D-Glucose, de ies de Ag
+

do AgNO
3
e de Au
3+
do HAuCl
4
.3H
2
O numa disperso aquosa de Amido. Deposio do Au
sobre a Ag. Caracterizao das trs solues coloidais por espetroscopia UV-Vis e Disperso
Dinmica de Luz (DLS).

AgNO
3
Bales volumtricos
HAuCl
4
.3H
2
O Gobls
-D-Glucose Pipetas e micropipeta
Amido Placa de agitao magntica
gua desionizada Banho termostatizado

Zetasizer
Medidor de pH

II. Lavagem e preparao do material e equipamento tempo estimado ~3h
III. PREPARAO DAS SOLUES tempo estimado ~1h
- 100 mL de Amido (0,20% peso)
- 5 mL de HAuCl
4
3H
2
O (0,1M)
- 5 mL de NaOH (1M)
- 5 mL de AgNO
3
(0,1M)
Nota: antes da utilizao das solues proceder a uma purga com azoto
102


IV. PREPARAO DAS NANOPARTCULAS DE Ag tempo estimado ~3h
1. Mistura e dissoluo completa de 200L AgNO
3
(0,1M) e 12mL de amido (0,20% peso)
2. Sob agitao adicionar 300L de -D-Glucose (0,2M)
3. Aquecer a mistura a 60C durante 3h (ou at a alterao da cor da soluo) num banho
termostatizado
V. PREPARAO DAS NANOPARTCULAS DE Au tempo estimado ~2h
6. 80L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M)

120L -D-Glucose (0,2M)
30L NaOH (1M)

7. Controlo do pH
4 mL AMIDO
(0,20% peso)
103



CAS Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso
(C)
Frases R/S
cido clorourico
tri-hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 R 22 e 34
S 26, 36/37/39 e 45
6
H
12
O
6
180,10 1,54 150 -
3
169,88 4,352 212 R8,R34, R50/53
(S1/2), S26, S45,
S60, S61
Amido 9005-25-8 (C
6
H
10
O
5
)
n
1,5 A
200C
decomp
e-se

-
Hidrxido de
sdio
1310-73-2 NaOH 39,99 2,13 322 R35,36 e 38
S1/2, 26, 36, 37, 39 e
45

Artigos de referncia:
1. Raveendran, P., J. Fu, and S.L. Wallen, Completely "green" synthesis and stabilization of
metal nanoparticles, J. Am. Chem. Soc., 2003, 125,13940-13941;
2. aveendran, P., . u, and .L. Wallen, A simple and green method for the synthesis of
Au, Ag, and AuAg alloy nanoparticles, Green Chem, 2006, 8, 34-38.
VI. PREPARAO DAS NP ncleo-concha Ag-Au tempo estimado ~2h
10. As NP sero preparadas de duas formas:
- Atravs da mistura das solues coloidais de Ag e Au com vrios rcios Ag-Au (1:2, 1:1
e 2:1);
- Atravs da mistura da soluo de HAuCl
4
3H
2
O (0,1M) soluo de prata coloidal.
11. Estudo da dinmica da formao das NP com um Espetrofotmetro UV/Vis

105


4 Procedimento Experimental (Novembro 2011) - SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS ncleo- concha Au-Ag e Ag-Au

OBJECTIVO: preparao de NP ncleo-concha Au-Ag e Ag-Au utilizando procedimentos j
testados, para envio para Microscopia Eletrnica de Transmisso (TEM). Caracterizao das
solues coloidais por espetroscopia UV-Vis e Disperso Dinmica de Luz (DLS).
Tempo estimado: 2 dias
MATERIAL, EQUIPAMENTO E REAGENTES
AgNO
3
Bales volumtricos
NaBH
4
Bales de fundo redondo
Amido Gobls
-D-Glucose Banho de gelo
HAuCl
4
.3H
2
O Pipetas e micropipeta
NaOH Placa de aquecimento e de agitao magntica
gua desionizada Espetrofotmetro UV-Vis

Zetasizer

I. Lavagem e preparao do material e equipamento
II. Preparao de nanopartculas de prata por reduo de nitrato de prata usando como agente
redutor o borohidreto de sdio segundo a reaco: AgNO
3
+ NaBH
4
Ag + 1/2 H
2
+ 1/2 B
2
H
6
+
NaNO
3

1. Preparao da soluo 1,0 mM de AgNO
3
(Volume gua = 10 ml)
2. Preparao da soluo 2,0 mM de NaBH
4
(Volume gua = 50 ml)
3. Arrefecimento da soluo 2. num banho de gelo
4. Adio da soluo 1. a 30mL da soluo 2. sob agitao a 700 rpm numa placa de agitao
magntica
106


III. Sntese de nanopartculas de prata na presena do agente redutor -D(+) glucose, de
acordo com a seguinte reaco de oxidao-reduo:
2AgNO
3
(aq) + C
6
H
12
O
6
(aq) + H
2
O(liq) 2Ag (s) + 2HNO
3
(aq) + C
6
H
12
O
7
(aq)

IV. Sntese de nanopartculas de ouro (2 Procedimento Experimental)

V. Sntese de nanopartculas ncleo-concha Au-Ag (2 Procedimento Experimental)
1. Mistura e dissoluo completa de 200L AgNO
3
(0,1M) e 12mL de amido (0,20%
peso)
2. Adio de 300L de -D-Glucose (0,1M)
3. Aquecimento da mistura a 90C durante 1h (ou at alterao da cor da soluo)
numa placa de aquecimento
80L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M)

120L -D-Glucose (0,2M)
30L NaOH (1M)

As NP sero preparadas usando o procedimento anterior (IV), partindo de diferentes rcios
molares Au-Ag (0:1, 0,25:0,75, 0,5:0,5, 0,75:0,25 e 1:0)
4 mL
AMIDO
(0,20%
peso)
107

VI. Sntese de nanopartculas ncleo-concha Ag-Au (3 Procedimento Experimental)

VII. Estudo da dinmica da formao das NPAg com um Espetrofotmetro UV/Vis
VIII. Determinao da distribuio de tamanhos atravs do Zetasizer

CAS Frmula
molecular
Massa molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso
(C)
Frases R/S
cido
clorourico tri-
hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 R 22 e 34
S 26, 36/37/39 e 45
Amido 9005-25-8 (C
6
H
10
O
5
)
n
1,5 A 200C
decomp
e-se

-
6
H
12
O
6
180,10 1,54 150 -
Borohidreto de
sdio
16940-66-2 NaBH
4
37,83 1,074 400 -
Hidrxido de
sdio
1310-73-2 NaOH 39,99 2,13 322 R35,36 e 38
S1/2, 26, 36, 37, 39 e 45
3
169,88 4,352 212 R8,R34, R50/53
(S1/2), S26, S45, S60,
S61

Artigos de referncia: 1. S. D. Solomon, M.B., A. V. Jeyarajasingam, S. A. Rutkowsky, C. Boritz, Synthesis and
Study of Silver Nanoparticles J. Chem. Edu. , 2007, 84, 322-325.
2. P. Raveendran, J.F., S. L. Wallen, Completely Green Synthesis and Stabilization of Metal Nanoparticles.
J. Am. Chem. Soc., 2003, 125, 13940-13941.
3. P. Raveendran, J.F., S. L. Wallen A simple and green method for the synthesis of Au, Ag, and AuAg
alloy nanoparticles. Green Chemistry, 2006, 8, 34-38.
As NP sero preparadas de duas formas:
- Atravs da mistura das solues coloidais de Ag e Au com vrios rcios Ag-Au (1:2, 1:1 e
2:1);
- Atravs da mistura de 200 L da soluo de HAuCl
4
3H
2
O (0,1M) a 3mL da soluo de prata
coloidal.

109

5 Procedimento Experimental (Dezembro 2011) - Sntese e caracterizao de nanopartculas ligadas de Ag e Au

OBJECTIVO: preparao de NPs de Ag e recobrimento com Au e de NPs de Au e
recobrimento com Ag. Sero utilizados procedimentos testados anteriormente. As NPs
preparadas sero analisadas por espetroscopia de UV-Vis e por Disperso Dinmica de Luz
(DLS).
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL - Tempo estimado: 2 dias
Tabela 1 Lista de material, equipamento e reagentes
AgNO
3
Bales volumtricos
NaBH
4
Erlenmeyer
Amido Gobls
-D-Glucose Banho de gelo
HAuCl
4
.3H
2
O Pipetas e micropipeta
NaOH Placa de agitao magntica
gua desionizada Medidor de pH


Zetasizer

II. Preparao das solues
Tabela 2 Clculos para a preparao das solues
Reagente
Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
Concentrao
[n/V] (mol/L)
Volume de
soluo(L)
Massa
(g)
Pesei
(g)
cido clorourico tri-
hidratado
HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 0,10 0,0050 0,1969
Amido (C
6
H
10
O
5
)
n
0,2 0,2% peso 0,0100 0,0200
Borohidreto de sdio NaBH
4
37,83 0,002 0,0500 0,0038
-D Glucose C
6
H
12
O
6
180,1 0,2 0,0050 0,1801
Hidrxido de sdio NaOH 39,99 1,0000 0,0050 0,2000
Nitrato de prata AgNO
3
169,88
0,001 0,0100 0,0017
0,1 0,0050 0,0849

110

III. SNTESE DE NANOPARTCULAS DE PRATA por reduo de nitrato de prata
usando como agente redutor o borohidreto de sdio segundo a reao:
AgNO
3
+ NaBH
4
Ag + 1/2 H
2
+ 1/2 B
2
H
6
+ NaNO
3

1. Preparao de uma soluo 1,0 mM de AgNO
3
(Volume = 10 mL)
2. Preparao de uma soluo 2,0 mM de NaBH
4
(Volume = 50 mL)
3. Arrefecimento da soluo 2. num banho de gelo
4. Adio gota a gota da soluo 1. a 30mL da soluo 2. sob agitao a 700 rpm numa placa de
agitao magntica
5. Verificao: pH.. or da soluo
6. Estudo da dinmica da formao das NPs com um Espetrofotmetro UV/Vis:
Pico mximo
t (min) (nm) Absorvncia Observaes

7. Determinao da distribuio de tamanhos atravs do Zetasizer:

Amostra Dia
z-Average size (
nm)
PDI Comentrio
NP Ag

NP Ag

NP Ag

111


Tabela 3 - Concentrao de prata e agente redutor

Massa molar
(g/mol)
Concentrao
inicial (mol/dm3)
Volume
(dm3)
n massa (g)
Concentrao
final
(mol/dm3)
NaBH
4

37,83
2,00E-03 3,00E-02 6,00E-05 2,27E-03 1,50E-03
Ag
107,86
1,00E-03 1,00E-02 1,00E-05 1,08E-03 2,50E-04

TOTAL 0,0400

RAZO 6,00

IV. SNTESE DE NANOPARTCULAS DE PRATA-OURO por reduo de tomos de ouro
sobre a prata coloidal preparada em III. O agente redutor do ouro ser a -D-Glucose.
8. Preparao de uma soluo 0,2% peso de amido (Volume = 10 mL)
9. Preparao de uma soluo 0,2M de -D-Glucose (Volume = 5 mL)
10. Preparao de uma soluo 0,1M de HAuCl
4
3H
2
O (Volume = 5 mL)
11. Preparao de uma soluo 1M de NaOH (Volume = 5 mL)
12. Mistura de 80 L da soluo de HAuCl
4
3H
2
O (0,1M) a 3mL da soluo de prata
coloidal
13. Verificao: pH or da soluo..
14. Estudo da dinmica da formao das NP com um Espetrofotmetro UV/Vis:

Pico mximo

15. aso no se observe o pico mximo caracterstico do ouro ( ~ 500 nm) adicionar
120L da soluo de -D-Glucose (0,2M) e 1mL amido (0,20% peso) mistura
12., cc seguir para o 19.
16. Verificao: pH or da soluo.
112


Tabela 4 - Concentrao de Ag e Au em 12.

Massa molar
(g/mol) Concentrao
inicial (mol/dm3)
Volume
(dm3)
n (mol) massa (g)
Concentrao
final
(mol/dm3)
Au
196,96
1,00E-01 8,00E-05 8,00E-06 1,58E-03 2,60E-03
Ag
107,86
2,50E-04 3,00E-03 7,50E-07 8,09E-05 2,44E-04

TOTAL 0,0031

RAZO 10,67

17. Eventual ajuste de pH atravs da adio de 15 a 30 L da soluo de NaOH

Pico mximo


Amostra Dia
z-Average size (
nm)
PDI Comentrio
NP Ag-Au

NP Ag-Au

NP Ag-Au

113

V. SNTESE DE NANOPARTCULAS DE OURO por reduo do cido clorourico
tri-hidratado usando como agente redutor a -D-Glucose.

20. Preparao de uma soluo 0,1M de HAuCl
4
3H
2
O (Volume = 5 mL)
21. Preparao de uma soluo 1M de NaOH (Volume = 5 mL)
22. Preparao de uma soluo 0,2% peso de amido (Volume = 10 mL)
23. Preparao de uma soluo 0,2M de -D-Glucose (Volume = 5 mL)
24. Mistura de 80L de HAuCl
4
3H
2
O (0,1M), 4 mL amido (0,20% peso), 120L -D-
Glucose (0,2M) e 30L NaOH (1M)
25. Verificao: pH.. or da soluo..

Pico mximo


Amostra Dia z-Average size ( nm) PDI Comentrio
NP Au

NP Au

NP Au

114

VI. SNTESE DE NANOPARTCULAS DE OURO-PRATA por reduo de tomos de
prata superfcie das NPs de ouro preparadas em V. O agente redutor do nitrato de
prata ser a -D-Glucose (0,2M) e ser efectuado um aquecimento da mistura para
aumentar a taxa de reduo dos ies de prata.

28. Preparao de uma soluo 0,1M de AgNO
3
(Volume = 5 ml)
29. Mistura de 100 L da soluo de AgNO
3
(0,1M), 150L -D-Glucose (0,2M), 3mL
amido (0,20% peso) a 3mL da soluo de ouro coloidal e aquecer a mistura durante 1min
no microondas.
30. Verificao: pH or da soluo..
31. Estudo da dinmica da formao das NPs com um Espetrofotmetro UV/Vis:

Pico mximo


Amostra Dia
z-Average size (
nm)
PDI Comentrio
NP Au-Ag

NP Au-Ag

NP Au-Ag

115


1. S. D. Solomon, M.B., A. V. Jeyarajasingam, S. A. Rutkowsky, C. Boritz, Synthesis and
Study of Silver Nanoparticles, J. Chem. Edu. , 2007, 84,322-325.
2. . Liu, . Qin, P. aveendran, Y. Iushima, acile reen ynthesis, haracteriation,
and atalytic unction of -D-Glucose-Stabilized Au Nanocrystals, Chem. Eur. J., 2006,
12, 2131-2138.
3. P. Raveendran, J. Fu, S. L. Wallen, A simple and green method for the synthesis of Au,
Ag, and AuAg alloy nanoparticles, Green Chemi, 2006, 8, 34-38.
4. P. Raveendran, J.Fu, S. L. Wallen, ompletely reen ynthesis and tabiliation of
Metal Nanoparticles. J. Am. Chem. Soc., 2003, 125,13940-13941.
Tabela 5 - Dados qumicos
Reagente CAS
Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso (C) Frases R/S
cido clorourico
tri-hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83
R22 e 34 S 26,
36/37/39 e 45
Amido 9005-25-8 (C
6
H
10
O
5
)
n
1,50
A 200C
decompe-se
-
Borohidreto de
sdio
16940-66-2 NaBH
4
37,83 1,074 400
-
6
H
12
O
6
180,10 1,54 150
-
Hidrxido de
sdio
1310-73-2 NaOH 39,99 2,13 322
R35, 36 e 38 S1/2, 26,
36, 37, 39 e 45
3
169,88 4,35 212
R8,R34, R50/53
(S1/2), S26, S45, S60,
S61

117

6 Procedimento Experimental (Fevereiro 2012) - Sntese e caracterizao de nanopartculas de Fe
3
O
4

OBJECTIVO: preparao de NP de Fe
3
O
4
. As NP preparadas sero analisadas por UV-Vis,
DLS, Difrao de Raio-X, TEM e EDX.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL - Tempo estimado: 1 dia
FeCl
2
4H
2
O 5 bales volumtricos de 5 mL e 2 bales volumtricos de 250 mL de 2
tubuladuras
FeCl
3
6H
2
O Gobls
HCl Pipetas e micropipetas
NH
4
OH Medidor de pH
-D Glucose Zetasizer
gua desoxigenada

II. Preparao das solues aquosas

Tabela 2 - Clculos para a preparao das solues
Reagente
Massa molar
(g/mol)
[n/V]
(mol/L)
Volume (L) Massa (g)
[ ] %
p/p
(g/cm
3
) V[ ]% (mL) V100% (mL)
Vgua
(mL)
cido clordrico (37%) 36,46 2 0,0050 0,3646 37 1,1800 0,308983 0,84 4,16
Hidrxido de amnio (25%) 17,03 0,70 0,1000 1,1921 25 0,9100 1,31 5,24 94,76
Cloreto de ferro (II) 198,81 2,00 0,0050 0,1981
Cloreto de ferro (III) 270,30 1,00 0,0050 1,3515
-D Glucose 180,10 0,4 0,0050 0,3602
Hidrxido de sdio 40,00 2,00 0,0050 0,4000

118

III. Preparao das NP de Fe
3
O
4

Antes de iniciar a sntese desoxigenar 250mL de gua sob fluxo de azoto. Sob atmosfera de
azoto adiciona-se 5 mL de FeCl
3
6H
2
O a 1,25 mL de FeCl
2
4H
2
O dissolvido em HCl.
Imediatamente aps a mistura adiciona-se lentamente 62,5 mL de NH
4
OH tambm sob fluxo
de azoto. A mistura vigorosamente (1200rpm) agitada durante 30 min. Verifica-se o pH e
usando NaOH ajusta-se o pH a 10.

1. Khan F.-A., S.-F.G., Superparamagnetic Core-Shell-Type Fe3O4/Ru Nanoparticles as Catalysts for the
elective Hydrogenation of an Unconstrained ,-Unsaturated Ketone, European Journal of Inorganic
Chemistry, 2012, 727-732.
2. Rossi L. M., V.L.L.R., Silva F. P., Kiyohara P. K., Duarte E. L., Matos J. R., A magnetically recoverable
scavenger for palladium based on thiol-modified magnetite nanoparticles, Applied Catalysis A: General,
2007, 330, 139-144.
3. Massart R., Preparation of Aqueous Magnetic Liquids in Alkaline and Acidic Media, IEEE Trans. Magn.,
1981, 17, 12471248.
4. Wang L., P.H.-Y., Lim S. I. I., Schadt M. J., Mott D., Luo J., Wang X., Zhong C.-J., Core@shell
nanomaterials: gold-coated magnetic oxide nanoparticles, J. Mater. Chem., 2008, 18, 2629-2635.
5. Wang L., L.J., Fan Q., Suzuki M., Suzuki I. S., Engelhard M. H., Lin Y., Kim N., Wang J. Q., Zhong C. -J.,
Monodispersed Core-Shell Fe3O4@Au Nanoparticles, J. Phys. Chem. B, 2005, 109, 21593-21601.
6. Xu Z., H.Y., Sun S., Magnetic Core/Shell Fe3O4/Au and Fe3O4/Au/Ag Nanoparticles with Tunable
Plasmonic Properties, J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 8698-8699.
Reagente CAS
Frmula
molecular
Massa molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso
(C)
Frases R/S
cido clordrico (37%) 7647-01-0 HCl 36,46 1,180 -114,8
R35, 36, 37 e 38 S 1/2, 9,
23, 26, 36/37/39, 45 e 60
6
H
12
O
6
180,10 1,54 150 -
Hidrxido de amnio
(25%)
1336-21-6 NH
4
OH 35,04 0,91

R 34 e 50, S 1/2, 26,
36/37/39, 45 e 61
Cloreto de ferro (III)
(Cloreto frrico) hexa
hidratado
7705-08-0 FeCl
3
6H
2
O 162,20 2,898 306 R22 e 34, S 26 e 28
Cloreto de ferro (II)
(Cloreto ferroso) tetra
hidratado
7758-94-3 FeCl
2
4H
2
O 126,75 3,130 674 R 22, 38 e 41, S 26 e 39
Hidrxido de sdio 1310-73-2 NaOH 39,99 2,130 322
R35, 36 e 38 S1/2, 26, 36,
37, 39 e 45
119

7 Procedimento Experimental (Maro 2012) - Sntese e caracterizao de nanopartculas de Fe
3
O
4
- Au

OBJECTIVO: preparao de NP com uma estrutura ncleo-concha de Fe
3
O
4
- Au. As NP
preparadas sero analisadas por UV-Vis, Difrao de Raio-X, TEM e EDX.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL - Tempo estimado: 4 horas
HAuCl
4
3H
2
O

Balo volumtrico de 2 tubuladuras (250mL)
NP de Fe
3
O
4
Balo volumtrico (5mL)
C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O Proveta (15mL)
gua desionizada Placa de aquecimento com agitao

Reagente
Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
[m/V]
(mg/cm
3
)
[n/V]
(mol/L)
Volume
(L)
Massa (g)
cido clorourico
tri-hidratado
HAuCl
4
3H
2
O 393,83 2 0,0150 0,0300
393,83 3 0,0150 0,0450
Citrato de sdio C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O 294,1 0,08 0,005 0,1176

III. ntese das NPs e
3
O
4
- Au

Repetir o procedimento para diferentes concentraes do sal de ouro.
120


Artigo de referncia:
Lo, C.K., D. Xiao, and M.M.F. Choi, Homocysteine-protected gold-coated magnetic
nanoparticles: synthesis and characterisation, Journal of Materials Chemistry, 2007, 17,
2418.

121

8 Procedimento Experimental (Maro 2012) - Sntese e caracterizao de nanopartculas de Ag, Au, Ag Au e Au-Ag

OBJECTIVO: preparao de NP de Ag, Au e ncleo-concha Ag-Au e Au-Ag. As NP
preparadas sero analisadas por UV-Vis e DLS.

HAuCl
4
3H
2
O

Bales volumtricos de 5 mL
AgNO
3
Bales de fundo Redondo
Beta-cyclodextrin (-CD) Pipetas
NaOH Placa de aquecimento e agitao
gua ultra pura Medidor de pH
Zetasizer

Reagente
Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
[n/V] (mol/L)
Volume
(L)
Massa
(g)
cido clorourico tri-hidratado HAuCl
4
3H
2
O
393,83 0,01 0,0050 0,0197
Beta-cyclodextrin (-CD)
(C
6
H
10
O
5
)
7

1134,98 0,0792
Hidrxido de sdio NaOH
40,00 1,00 0,0050 0,2000
Nitrato de prata
AgNO
3

169,87
0,01 0,005 0,0085

122

III. Sntese dos coloides monometlicos de ouro e prata
As NP sero preparadas atravs da dissoluo, seguida de agitao, de 0,0792g de Beta-
cyclodextrin (-CD) em 9,86mL de gua. Seguidamente feita a adio de 40L da soluo do
sal metlico HAuCl4 (10 mM) e AgNO
3
(10 mM) e mede-se o pH. Passados 2 min. adiciona-se
100L de NaOH (1,0 M) s solues para que o pH suba para10-12. Finalmente, as misturas
reacionais so bem agitadas e aquecidas em banho-maria. A formao das NP metlicas
confirmada atravs da alterao da cor das solues. expectvel que passados cerca de 10 min,
a soluo de ouro fique cor de rosa-salmo e a de prata amarela.
Faz-se a anlise UV-Vis e DLS prata e ao ouro coloidal preparados.

IV. Sntese de NP bimetlicas ncleo-concha de Au-Ag e Ag-Au
Para a sntese de NP ncleo-concha Au-Ag adiciona-se gota a gota 40L de AgNO
3
(10 mM) a 5
mL da soluo de ouro coloidal preparada em III deixando-se repousar durante 5 min. e
aquecendo seguidamente em banho-maria durante cerca de 10min. A formao das NP Au-Ag
ser confirmada pela alterao da cor da soluo que dever passar de rosa/salmo a alaranjado.
Para a sntese de NP Ag-Au adiciona-se, sob agitao vigorosa, gota a gota 40L HAuCl4 (10
mM) a 5 mL da soluo de prata coloidal preparada em III. No decorrer da reao o amarelo da
prata coloidal passa a rosa (em cerca de 10min.) o que indicativo da formao de NP Ag-Au.
Faz-se a anlise UV-Vis e DLS s amostras de Au-Ag e Ag-Au.

Artigo de referncia: Pande S., G.S.K., Praharaj S., Panigrahi S., Basu S., Jana S., Pal A.,
Tsukuda T., Pal T., Synthesis of Normal and Inverted Gold-Silver Core-Shell Architectures in -
Cyclodextrin and Their Applications in SERS, J. Phys. Chem., 2007, 111, 10806-10813.
Reagente CAS
Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Tfuso
(C)
Frases R/S
cido clorourico
tri-hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 3,900
R22 e 34 S 26, 36/37/39
e 45
Hidrxido de sdio 1310-73-2 NaOH 39,99 2,130 322
R35, 36 e 38 S1/2, 26,
36, 37, 39 e 45
3
169,88 4,35 212
R8,R34, R50/53 (S1/2),
S26, S45, S60, S61
123


9 Procedimento Experimental /variao sobre o 6 e o 7 (Maio 2012) - Sntese e caracterizao de nanopartculas de Fe
3
O
4
-Au

OBJECTIVO: preparao de NP de Fe
3
O
4
em soluo acdica. Revestimento com ouro.
Caracterizao UV-Vis e DLS.

FeCl
2
4H
2
O
2 bales volumtricos de 50mL, 3 bales volumtricos de 5 mL e 3
bales volumtricos de 250 mL de 2 tubuladuras
FeCl
3
6H
2
O 2 Gobls 25mL ou 50mL e 2 de 100mL
HCl Proveta de 15mL
NH
4
OH Adaptador de termmetro e pipeta de Pasteur
HClO
4
Pipetas de 5mL, 1mL, 50mL
HAuCl
4
3H
2
O man
C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O Placa de agitao magntica (com aquecimento)
gua ultra pura Espetrofotmetro UV-Vis
Zetasizer

II. Preparao das NPs de Fe
3
O
4

Preparao das solues aquosas
Desoxigenar 250mL de gua sob fluxo de azoto.
Reagente
Massa molar
(g/mol)
[n/V]
(mol/L)
Volume
(L)
Massa (g)
[ ] %
p/p

(g/cm
3
)
V
[ ]%
(mL)
V
100%

(mL)
V
gua

(mL)
cido clordrico
(37%)
36,46 2 0,0050 0,3646 37 1,1800 0,308983 0,84 4,16
cido perclrico
(60%)
100,46 2,00 0,0500 10,0460 60 1,5300 6,566013 10,94 39,06
Hidrxido de
amnio (25%)
35,04 0,70 0,0500 1,2264 25 0,9100 1,347692 5,39 44,61
ou cloreto ferroso
198,81 2,00 0,0050 1,9881
Cloreto de ferro
(III) ou cloreto
frrico
270,30 1,00 0,0050 1,3515
124


Numa placa de agitao magntica e sob atmosfera de azoto adiciona-se 4mL de
FeCl
3
6H
2
O (1mol/dm
3
) a 1mL de FeCl
2
4H
2
O (2mol/dm
3
) dissolvido em HCl
(2mol/dm
3
);
Imediatamente aps a mistura adiciona-se lentamente 50mL de NH
4
OH (0,7mol/dm
3
)
tambm sob fluxo de azoto (trabalhar na hote);
A mistura vigorosamente (1200rpm) agitada durante 30 min;
O precipitado isolado por decantao magntica;
Agita-se o precipitado com 50mL HClO
4
(2mol/dm
3
);
Isola-se por centrifugao;
Finalmente o resduo misturado em 50mL de gua desoxigenada.

III. Preparao das NP de Fe
3
O
4
-Au
Preparao das solues com gua desoxigenada
Reagente Frmula molecular
Massa molar
(g/mol)
[m/V]
(mg/cm
3
)
[n/V]
(mol/L)
Volume
(L)
Massa (g)
hidratado
HAuCl
4
3H
2
O 393,83 2 0,0150 0,0300
393,83 3 0,0150 0,0450
Citrato tri-sdico
dihidratado
C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O 294,1 0,08 0,005 0,1176

Sobre uma placa de agitao magntica (com aquecimento) e sob fluxo de azoto,
medem-se 105mL de gua desoxigenada;
Adicionam-se 15mL de uma soluo de HAuCl
4
3H
2
O (2mg/cm
3
);
Aquece-se a mistura at ebulio (em banho maria);
Adiciona-se 5mL das NPs de e
3
O
4
preparadas em II.;
Sob agitao adiciona-se 5mL de C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O (80mmol/dm
3
) a cor da soluo
passa de castanho a bordeaux;
A mistura reacional aquecida at fervura sob agitao durante 5 min.

Repetir o procedimento para as duas concentraes de HAuCl
4
3H
2
O

125

IV. Medies UV-Vis e DLS.

Tabela de Dados qumicos
Reagente CAS
Frmula
molecular
Massa
molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Frases R/S
cido clordrico (37%) 7647-01-0 HCl 36,46 1,180
R35, 36, 37 e 38 S 1/2, 9,
23, 26, 36/37/39, 45 e 60
hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 3,900
R22 e 34 S 26, 36/37/39 e
45
Citrato tri-sdico
dihidratado
006132-04-3 C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O 294,10 1,70 Irritante
cido perclrico 7601-90-3 HClO
4
100,46 1,53
R5, R8, R35 e S1/2, S23,
S26, S36, S45
Hidrxido de amnio
(25%)
1336-21-6 NH
4
OH 35,04 0,910
R34, 50, S 1/2, 26,
36/37/39, 45 e 61
(Cloreto frrico)
7705-08-0 FeCl
3
162,20 2,898 R22 e 34, S 26 e 28
(Cloreto ferroso)
7758-94-3 FeCl
2
126,75 3,130 R 22, 38 e 41, S 26 e 39

1. Lo C. K., X.D., Choi M. M. F., Homocysteine-protected gold-coated magnetic
nanoparticles: synthesis and characterisatio, Journal of Materials Chemistry, 2007, 17,
2418-2427.
2. R., M., Preparation of Aqueous Magnetic Liquids in Alkaline and Acidic Media, IEEE
Trans. Magn., 1981, 17, 12471248.

127

10 Procedimento Experimental (Junho 2012) - Sntese e caracterizao de nanopartculas de Fe
3
O
4
-Ag e Fe
3
O
4
-Au

OBJECTIVO: revestimento de magnetite com prata para posterior anlise eletroqumica. A
deposio da Ag ser feita atravs da reduo de AgNO
3
usando cido ascrbico. Depois de
preparadas as NP de Fe
3
O
4
-Ag sero caracterizadas por UV-Vis e DLS. Ser tambm testado
outro mtodo para a sntese de magnetite, magnetite-ouro e magnetite-prata.



FeCl
2
4H
2
O
4 bales volumtricos de 5mL, 3 bales volumtricos de 10mL, 1
balo volumtrico de 100 mL, 2 bales de 100mL com 2
tubuladuras e 1 balo de 250mL com 2 tubuladuras
FeCl
3
6H
2
O 3 Gobls 25mL ou 50mL e 2 de 100mL
HCl Quitazato
cido ascrbico Micropipetas e pipetas de Pasteur
cido ctrico Pipetas de 5mL, 3mL (2x) 1mL, 50mL
HAuCl
4
3H
2
O man
C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O Placa de agitao magntica (com aquecimento)
AgNO
3
Medidor de pH
NaOH Centrifugadora
gua ultra pura Espetrofotmetro UV-Vis
Zetasizer

128


II. Preparao das solues

As solues so preparadas com gua ultra pura

III. Deposio de Ag sobre NP Fe
3
O
4

Sob fluxo de azoto e agitao mistura-se 5mL de Fe
3
O
4
(anteriormente preparadas e
caracterizadas) com 3mL de AgNO
3
(1mM), 3mL de cido ascrbico (1mM);
Seguidamente adiciona-se 0,1mL de NaOH (0,01M);
Fazer a medio UV-vis cerca de 4h depois da sntese. Caso no surja o mximo
caracterstico da prata adicionar de novo AgNO
3
, cido ascrbico e NaOH;
Fazer medies DLS.

Reagente
Massa molar
(g/mol)
[n/V]
(mol/L)
Volume
(L)
Massa (g)
[ ] %
p/p

(g/cm
3
)
V
[ ]%
(mL)
V
100%

(mL)
V
gua

(mL)
cido ascrbico 176,09 0,001 0,0100 0,0018

cido ctrico 192,123 0,0016

cido clordrico
(37%)
36,46 2 0,0050 0,3646 37 1,1800 0,308983 0,84 4,16
hidratado
393,83 0,02 0,0050 0,0394
Citrato trisdico 294,1 0.10 0,005 0,1471

Citrato trisdico 294,1

0,0008

Cloreto de ferro (II) 198,81 0,0020
Cloreto de ferro (III) 270,30 0,0040
Hidrxido de sdio 40,00 0,01 0,0050 0,0020
Hidrxido de sdio 40,00 1,50 0,1000 6,0000
Nitrato de prata 169,88 0,001 0,0100 0,0017
Nitrato de prata 169,88 0,020 0,0100 0,0340
129

IV. Preparao das NP de Fe
3
O
4

Sobre uma placa de agitao magntica e sob fluxo de azoto, misturam-se 4mg de
FeCl
3
e 2mg de FeCl
2
dissolvidos em HCl (2M) e adiciona-se 100mL de NaOH
(1,5M);
Agita-se a mistura durante 30 minutos temperatura ambiente;
Centrifuga-se a soluo e recolhe-se o sobrenadante (de modo a obter NP com uma
estreita distribuio de tamanhos);
Por decantao magntica, com um man forte, lava-se o sobrenadante 4vezes com
gua ultra pura;
Adiciona-se 20mL de uma soluo tampo de citrato (1,6mg de cido ctrico e 0,8mg
de citrato tri-sdico) para se ficar com o pH=6,3;
Finalmente a soluo liofilizada.

V. Preparao das NP de Fe
3
O
4
-Ag

Adicionam-se 300L das NP preparadas em IV. a 25mL de gua ultra pura a ferver
sob agitao;
Adiciona-se 350L de AgNO
3
(20mM);
Adiciona-se 300L de citrato trisdico (100mM);
A soluo mantida sob agitao e fervura durante cerca de 15 minutos (at mudar
de cor).

VI. Preparao das NP de Fe
3
O
4
-Au

Adiciona-se 300L das NP preparadas em IV. a 25mL de gua ultra pura a ferver sob
agitao;
Adiciona-se 350L de HAuCl
4
(20mM);
Adiciona-se 300L de citrato trisdico (100mM).
A soluo mantida sob agitao e fervura durante cerca de 15 minutos (at mudar de
cor).
130


Tabela3 - Dados qumicos
Reagente CAS Frmula molecular
Massa
molar
(g/mol)
Densidade
(g/cm
3
)
Frases R/S
cido ascrbico 50-81-7 C
6
H
8
O
6
176,09 1,65 S24/25
cido ctrico 77-92-9 C
6
H
8
O
7
192,123 1,665 -
cido clordrico (37%) 7647-01-0 HCl 36,46 1,180
R35, 36, 37 e 38 S 1/2,
9, 23, 26, 36/37/39, 45
e 60
cido cloro urico tri-
hidratado
16961-25-4 HAuCl
4
.3H
2
O 393,83 3,900
R22 e 34 S 26,
36/37/39 e 45
Citrato tri-sdico
dihidratado
006132-04-3 C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O 294,10 1,70 Irritante
(Cloreto frrico)
7705-08-0 FeCl
3
162,20 2,898 R22 e 34, S 26 e 28
(Cloreto ferroso)
7758-94-3 FeCl
2
126,75 3,130
R 22, 38 e 41, S 26 e
39
Hidrxido de sdio 1310-73-2 NaOH 39,99 2,130
R35, 36 e 38 S1/2, 26,
36, 37, 39 e 45
3
169,88 4,35
R8,R34, R50/53 (S1/2),
S26, S45, S60, S61

1. Xu Z., H.Y., Sun S., Magnetic Core/Shell Fe3O4/Au and Fe3O4/Au/Ag Nanoparticles with Tunable
Plasmonic Properties. J. Am. Chem. Soc., 2007. 129: p. 8698-8699.
2. Banerjee S., R.S.O., Sardar M., Gayathri N., Ghosh B., Dasgupta A., How Gold nanoparticle
acquires magnetism? - Formation of large orbital moment at the interface. arXiv:0912.3319v2,
2010.

131

11 Procedimento Experimental (Julho/Agosto 2012) Cultura de clulas animais

OBJECTIVO: Descongelamento de clulas animais criopreservadas (da linha celular
fibroblstica NIH 3T3), contagem de clulas, tripsinizao e inoculao.

I. Descongelamento de clulas criopreservadas

2. Meio de cultura adequado para as clulas em estudo (DMEM, Dulbeccos
Modified Eagle Medium)/ pr-aquecido num banho a ~ 37C;
3. Preparao de todo o material necessrio: eppendorf (1,5mL), micropipeta
(1000L), pipeta (10mL), pompete, 3 caixas de Petri devidamente identificadas:
Linha celular, n. Passagem, e data);
4. Cuidado na manipulao dos vials com as clulas criopreservadas em azoto
lquido usando luvas apropriadas. Descongelamento rpido num banho de gua a
~ 37C;
5. Com o auxlio de uma micropipeta retirar as clulas (1000L) do vial e deposita-
las no eppendorf;
6. Centrifugar a 2000rpm, durante 8 minutos temperatura ambiente;
7. Distribuir 10mL de meio de cultura nas caixas de Petri;
8. Aps centrifugao retirar o sobrenadante (no tocando no pellet);
9. Ressuspender as clulas com 1mL de meio de cultura completo (com soro e
antibitico) e distribuir (~333L) nas caixas de Petri;
10. Incubar e esperar que as clulas adiram ao prato de cultura;
11. Limpar a cmara com etanol.

Cuidados especiais
1. As culturas celulares so trabalhadas em cmara de fluxo laminar, desinfetada previamente com
Lmpada de UV ~20 minutos (15 luz + 5 arejamento)
Assepsia- desinfetar todo o material que entra e sai da cmara com etanol a 70%
Utilizar luvas
Manipular cuidadosamente as culturas celulares nunca passando as mos por cima

132

II. Tripsinizao e Inoculao

1. Retirar o meio de cultura da placa contendo clulas e lavar a cultura com PBS
(phosphate buffer saline solution), o suficiente para cobrir a placa;
2. Adicionar 1mL da soluo de tripsina e deixar atuar durante 10 minutos (colocar a
placa na estufa);
3. Observar a placa ao microscpio para ver se as clulas se soltaram;
4. Adicionar 2mL de meio stop (DMEM com soro e antibitico);
5. Homogeneizar a suspenso (desagregar) enchendo a pompete e arrastando-a ao
longo da caixa de Petri;
6. Proceder contagem celular retirando 20L para a Cmara de Neubauer ou
hemocitmetro:

+ + + = : 4 = (Mdia)

Mdia * 10
4
= Clulas /mL (Densidade celular)

Densidade
celular
* (V meio) = Clulas/placa

Referncias:
http://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=thaw+cells&source=web&cd=5&ved=0CGcQtwIwBA&url=http%3A%2F%2Fwww.yout
ube.com%2Fwatch%3Fv%3DCCWrLUA6Qbg&ei=wzwFUKWrDsKXhQfUuI3mBw&usg=AFQjCNEaL611Os4841Nwz5azs1YWp
ooKwg
Professora Doutora Helena Toms, Cultura de Clulas Animais/ Viabilidade Celular na presena de etanol, Tcnicas de
Caracterizao Celular e Molecular, 1 ciclo - bioqumica - 2009/2010, Aula prtica n1
http://www.millipore.com/cellbiology/cb3/cellfreezingthawingprotocol
Freshney R. I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, John Wiley & Sons, Inc., 2005.

133

12 Procedimento Experimental (Julho/Agosto 2012) - Ensaios de citotoxicidade das nanopartculas de Ag, Au,, Ag/Au e Fe
3
O
4
/Au

OBJECTIVO: Exposio das clulas NIH 3T3 (fibroblastos de rato) s NP e estudo da
viabilidade celular atravs do Teste de MTT. Teste quantitativo que avalia a atividade
metablica das clulas e que pode ser usado como uma medida da viabilidade celular. O MTT
(brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazlio) (amarelo) adicionado cultura
celular e reduzido a um produto prpura apenas pelas clulas viveis (nas mitocndrias). A
quantidade de produto presente (a dosear por medio da intensidade de radiao absorvida a
550nm) ser proporcional ao nmero de clulas viveis.

I. Semear as clulas em placas de 96 poos (concentrao= 1x10
4
clulas/cm
2
).

rea (A ) poo= 0,33cm
2
* 10
4
= 3300 clulas/poo

n. de poos
288 (96*3)

*
n. clulas/poo
3300

=

950 400
Densidade dos poos, n. clulas que
queremos

Volume de suspenso = 950 400 Densidade dos poos
(queremos)

/
Densidade celular
(temos)

II. Exposio das clulas s NP
1. Preparar as solues a testar: DMEM e DMEM + PBS (para o controlo) e solues com as NP
s diferentes concentraes.
2. Aps as 24h, retirar o meio de cultura das clulas e adicionar a cada poo 150 L de meio de
cultura + 50L de amostra+PBS de acordo com as condies da tabela. Para referncia, sero
preparados poos apenas com meio (200 L) e poos com meio e PBS (100 L de cada).
134

Tabela - Condies experimentais usadas nos testes in vitro
Amostra/NP
Dimetro mdio (nm)
Potencial zeta
(mV)
Concentrao
TEM DLS
CM-02-11-Fe
3
O
4
/Au - 10 -37,49,27
Para cada amostra foram
testadas duas
concentraes: 1mM e
0,1mM
CM-01-47-Au 20 50 -26,918,5
CM-01-73-Ag 12 2 -34,513,9
CM-01-81-Ag/Au 20 80 -22,819,1

III. Teste de reduo do MTT
Aps 3 dias (cerca de 72 h), fazer o teste de viabilidade do MTT (neste teste, usa-se o DMSO
como branco). Antes de se proceder ao teste fazer registo fotogrfico das amostras.
1. Com a luz da cmara desligada, prepara-se a soluo a 10% de MTT (numa soluo a
5mg/mL preparado em PBS) e DMEM;
2. Retiram-se as placas da incubadora e aspira-se o meio de cultura em cada poo;
3. Adiciona-se 100l da soluo preparada em 1. a cada poo e colocam-se as placas na
estufa a 37C, 5% CO
2
;
4. Passadas cerca de 3h, remove-se a soluo e adiciona-se 100 L de DMSO a cada poo.
L-se a absoro a 550nm.

Referncias: Freshney R. I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, John Wiley & Sons, Inc., 2005.

135


Anexo III - Resumo das caractersticas das NP preparadas

NP
n.
Proc.
Exp.
Mtodo de Sntese
Caracterizao
Cor pH
UV-Vis DLS TEM EDX
do pico
mximo
(nm)
Absor-
vncia
Dimetro
Hidro-
dinmico
mdio
(nm)
PDI
Dimetro
mdio
(nm)
Com-
posio
qumica
Au
1
Mistura de 50L de -D-Glucose (0.03M) e 200L de
HAuCl
4
3H
2
O (0.05M) seguida de 30 minutos de
agitao 700rpm e da adio gota a gota de NaOH
(0.05M) at obter pH 7
Roxo
Aps
sntese 7
1 semana
depois 3
~580 0,6
101,3
60,75
0,268
0,412
- -
Au
2
80L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M), 120 L -D-Glucose
(0,1M) e 30L NaOH (1M) adicionados a 4mL amido
(0,2%peso)
Salmo
Roxo/lils
4
3,5
534 0,7
70,8
56,06
0,364
0,281

~12
-
Au
3, 4,
5
80L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M), 120 L -D-Glucose
(0,2M) e 30L NaOH (1M) adicionados a 4mL amido
(0,2%peso)
Roxo/lils
Salmo
3,4 550 1,55 87,34 0,234 - -
Au 8
Dissoluo de 0.0792g de Beta-cyclodextrin (-CD) em
9.86mL de gua e adio de 40L de HAuCl4 (10 mM).
Adio de 100L de NaOH (1.0 M). Agitao e
aquecimento em banho-maria.
Rosa/
salmo
11,4 507,89 0,05 14,32 0,397 - -
Anexo III- Resumo das caractersticas das NP preparadas
136

Amos-
tra
n.
Proc.
Exp.
Mtodo de Sntese
Caracterizao
Cor pH
UV-Vis DLS TEM EDX
do pico
mximo
(nm)
Absor-
vncia
Dimetro
Hidro-
dinmico
mdio
(nm)
PDI
Dimetro
mdio
(nm)
Com-
posio
qumica
Ag
2
20L de AgNO
3
(0,1M) e 50 L -D-Glucose (0,1M)
adicionados a 4mL amido (0,2%peso) 60 segundos de
micro-ondas
Amarelo
bao
- ~400 >1 98,72 0,243 - -
Ag
3
Mistura e dissoluo completa de 200L de AgNO
3

(0,1M) e 6mL de amido (0,2%peso). Adio de 300 L
-D-Glucose (0,2M) sob agitao. Aquecimento a 60C
at mudana de cor
Amarelo
esbatido
- 400 0,2 91,58 0,155 -

-
Ag
4, 5
Adio gota a gota 10mL AgNO
3
(1mM) a 30mL
NaBH
4
(2mM) (arrefecido) sob agitao 700rpm
Amarelo
lmpido
9,3
7,5
7,3
379,04

390
3,1

1,6
13,93
21,58
60,93
0,517
0,545
0,521
12 -
Ag 8
Dissoluo de 0.0792g de Beta-cyclodextrin (-CD) em
9.86mL de gua e adio de 40L de AgNO3 (10 mM).
Adio de 100L de NaOH (1.0 M). Agitao e
aquecimento em banho-maria.
Amarela 11,8 403,36 0,364 15,77 0,634 - -
Ag/Au-
1:3
2, 4
20L de AgNO
3
(0,1M), 60L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M),
120 L -D-Glucose (0,1M) e 30L NaOH (1M)
adicionados a 4mL amido (0,2%peso)
Bourdeaux - 530 0,9
141,5
113,3
0,232
0,311
Aglomera-
dos <50
Au e Ag

A
n
e
x
o

I
I
I
-

R
e
s
u
m
o

d
a
s

c
a
r
a
c
t
e
r
s
t
i
c
a
s

d
a
s

N
P

p
r
e
p
a
r
a
d
a
s

137


Amos-
tra
n.
Proc.
Exp.
Mtodo de Sntese
Caracterizao
Cor pH
UV-Vis DLS TEM EDX
do pico
mximo
(nm)
Absor-
vncia
Dimetro
Hidro-
dinmico
mdio
(nm)
PDI
Dimetro
mdio
(nm)
Com-
posio
qumica
Ag/Au-
1:1
2, 4
40L de AgNO
3
(0,1M), 40L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M),
Amarelo
turvo/
Acasta-
nhado
- 536 2
150,1
88,01
0,353
0,261
Aglomera-
dos >20
Au
Ag/Au-
3:1
2, 4
60L de AgNO
3
(0,1M), 20L HAuCl
4
3H
2
O (0,1M),
Castanho/
Arroxea-
do
-
2 picos
424 e
513
3,5
132,9
90,58
0,418
0,248
- -
CM-01-
81-
Ag/Au
5
Reduo de 80L (e 160 L) HAuCl
4
3H
2
O (0,1M), na
presena de 1mL amido (0,2%peso), 120 L -D-
Glucose e 30L NaOH (1M), sobre 3mL NP de Ag
Violeta
Roxo/rosa

2,6
532
543
0,6
0,4
70
74
0,42
0,31
~20
4,9% Au e
1,2% Ag
CM-02-
01-
Au/Ag
8
Reduo de 40L AgNO
3
(10mM) sobre 5mL NP de Au
aquecendo em banho-maria
Laranja 11,10 410 1 15,88 0,27
<20 e
aglomera-
dos ~50
Au e Ag
A
n
e
x
o

I
I
I
-

R
e
s
u
m
o

d
a
s

c
a
r
a
c
t
e
r
s
t
i
c
a
s

d
a
s

N
P

p
r
e
p
a
r
a
d
a
s

138

Amos-
tra
n.
Proc.
Exp.
Mtodo de Sntese
Caracterizao
Cor pH
UV-Vis DLS TEM EDX
do pico
mximo
(nm)
Absor-
vncia
Dimetro
Hidro-
dinmico
mdio
(nm)
PDI
Dimetro
mdio
(nm)
Com-
posio
qumica
CM-02-
01-
Ag/Au
8
Adio gota a gota, sob agitao vigorosa, de 40L
HAuCl4 (10 mM) a 5 mL da soluo de prata coloidal
Rosa
acinzenta-
do
11,87 530 0,4- 16,26 0,281 - -
Fe
3
O
4
6
Co precipitao de 5mL FeCl
3
6H
2
O (1M) e 1,25mL
FeCl
2
4H
2
O (2M) dissolvido em HCl (2M) adicionados
a 62,5mL NH
4
OH (0,7M) sob fluxo de azoto e agitao
1200rpm
Preto 9,67 - >1 4565 1
Aglomera-
dos
magnticos
-
Fe
3
O
4
9
Sob agitao e atmosfera de azoto adiciona-se 4mL de
FeCl
3
6H
2
O (1mol/dm3) a 1mL de FeCl
2
4H
2
O
(2mol/dm3) dissolvido em HCl (2mol/dm3). Adiciona-
se lentamente 50mL de NH
4
OH (0,7mol/dm3). Agita-se
a1200 rpm durante 30 min. O precipitado isolado por
decantao magntica e agitado com 50mL HClO
4

(2mol/dm3). Isola-se por centrifugao e mistura-se o
resduo em 50mL de gua desoxigenada.
Preto -0,4 - -
Aglomera-
dos com~
5m
- - -
Fe
3
O
4
/
Au
7
15mL HAuCl
4
3H
2
O (2mg/cm
3
) adicionados a 105mL
gua desionizada. Aquecimento at fervura. Adio de
5mL Fe
3
O
4
e 5mL citrato de sdio (80 mmol/dm
3
) sob
agitao
Castanho
tonali-
dade
averme-
lhada
- 590 2
Aglomera-
dos
magnticos

Fe
3
O
4
~10
Au ~50
Fe
3
O
4
e Au

A
n
e
x
o

I
I
I
-

R
e
s
u
m
o

d
a
s

c
a
r
a
c
t
e
r
s
t
i
c
a
s

d
a
s

N
P

p
r
e
p
a
r
a
d
a
s

139


Amos-
tra
n.
Proc.
Exp.
Mtodo de Sntese
Caracterizao
Cor pH
UV-Vis DLS TEM EDX
do pico
mximo
(nm)
Absor-
vncia
Dimetro
Hidro-
dinmico
mdio
(nm)
PDI
Dimetro
mdio
(nm)
Com-
posio
qumica
CM-02-
11-
Fe
3
O
4
/
Au
9
Adicionam-se 15mL de uma soluo de HAuCl
4
3H
2
O
(2mg/cm
3
) a 105mL de gua desoxigenada. Aquece-se a
mistura at fervura (em banho maria). Adiciona-se
5mL das NP de Fe
3
O
4
e sob agitao adiciona-se 5mL
de C
6
H
5
Na
3
O
7
2H
2
O (80mmol/dm
3
). Aquecimento at
fervura sob agitao durante 5 min.
Bordeaux 3 574,3 2,4 - -
Enviado
para TEM
(6.2012)

CM-02-
21-
Fe
3
O
4
/
Ag
10
3
O
4

com 3mL de AgNO
3
(1mM), 3mL de cido ascrbico
(1mM) e 0.1mL de NaOH (0.01M)
Castanho
claro
10 434,93 2,37 - -
Enviado
para TEM
(6.2012)

CM-02-
21-
Fe
3
O
4
/
Ag
10
3
O
4

com 6mL de AgNO
3
(1mM), 6mL de cido ascrbico
(1mM) e 0.2mL de NaOH (0.01M)
Castanho
amarela-
do turvo
- 495,523 1,3 - -
Enviado
para TEM
(6.2012)

A
n
e
x
o

I
I
I
-

R
e
s
u
m
o

d
a
s

c
a
r
a
c
t
e
r
s
t
i
c
a
s

d
a
s

N
P

p
r
e
p
a
r
a
d
a
s

Governo da Repblica Portuguesa

Unio Europeia

Regio Autnoma da Madeira

Caracterização Das Nanopartículas

Caricato da

Informazioni sul documento

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Caracterização Das Nanopartículas

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

SNTESE E CARACTERIZAO DE NANOPARTCULAS DE FeO

. Pelo que se conclui que quanto

em que K o fator de forma, o

Potrebbero piacerti anche