NOMBRE: MARTNEZ URIBE MARA DE LOS NGELES

MATRCULA: 99333856

TELFONO: (044) 5518465873

LICENCIATURA: INGENIERA BIOQUMICA INDUSTRIAL

DIVISIN: CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD

UNIDAD UNIVERSITARIA: IZTAPALAPA

TRIMESTRE LECTIVO: 04-O

TTULO DEL PROYECTO DE INVESTIGACIN: DESARROLLO DE NUEVAS
TECNOLOGAS Y PRODUCTOS PARA EL APROVECHAMIENTO INTEGRAL DE
LEVADURAS MARGINALES Y PRIMARIAS COMO FUENTE DE ALIMENTO (YAF)
EN CONVENIO CON EL INSTITUTO CUBANO DE INVESTIGACIONES DE LOS
DERIVADOS DE LA CAA DE AZCAR (ICIDCA).

TTULO DEL TRABAJO DE SERVICIO SOCIAL: PRODUCCIN DE Saccharomyces
cerevisiae BAJO CONDICIONES DE ESTRS OXIDATIVO

ASESORES:
DRA. ARACELI TOMASINI CAMPOCOSIO. DEPTO. DE BIOTECNOLOGA
PROFESOR TITULAR C
DRA. ISABEL GUERRERO LEGARRETA. DEPTO. DE BIOTECNOLOGA
PROFESOR TITULAR C

LUGAR DONDE SE REALIZ EL SERVICIO: LABORATORIO DE INGENIERA
GENTICA Y METABOLISMO SECUNDARIO DEL DEPARTAMENTO DE
BIOTECNOLOGA. S-154. UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA
IZTAPALAPA

CLAVE DE REGISTRO: IBI.077.04

PRODUCCIN DE Saccharomyces Cerevisiae BAJO
CONDICIONES DE ESTRS OXIDATIVO


JUSTIFICACION


El inters por la produccin de levaduras (S. cerevisiae) ha sido de gran inters debido a
que es una fuente excelente para la obtencin de protenas como fuente de alimento, esperando as
lograr la creciente demanda de protena de alta calidad en la alimentacin humana y animal,
adems de que es un excelente potenciador de sabor, fuente natural de vitaminas (B), as como
fuentes excelentes de enzimas y coenzimas.
En la produccin de levaduras se ofrece el uso de la levadura S. cerevisiae debido a que
presenta grandes ventajas como:
Los microorganismos (S. cerevisiae) poseen una alta tasa de multiplicacin.
Poseen un alto contenido de protena.
Pueden utilizar un gran nmero de fuentes de carbono diferentes.
Pueden seleccionarse o producirse cepas con alta produccin relativamente fcil.
Las instalaciones de la produccin ocupan reas limitadas y dan produccin alta.
Las clulas de levadura pueden ser recuperadas fcilmente.
El tamao de su genoma, que por ser pequeo facilit su secuenciacin; y muchas otras virtudes
que se han ido haciendo evidentes conforme se han desarrollado nuevos enfoques y mtodos de
estudio.



INTRODUCCIN


Desde la antigedad tanto en las culturas de Oriente como en Occidente los
microorganismos han sido utilizados para transformar o producir alimentos y de esta forma han
sido siempre parte de la dieta del hombre y los animales. La fermentacin ha sido realizada como
un arte desde hace siglos; por ejemplo, la elaboracin del vino se cree que se practicaba ya al menos
10.000 a.C. mientras que los historiadores creen que los egipcios producan cerveza en los aos
5.000-6000 a.C. dejando germinar la cebada en vasijas de barro y despus estrujndola,
amasndola, y finalmente remojndola con agua para obtener la bebida. Hacia el ao 4.000 a.C. Los
egipcios utilizaron las levaduras de la cerveza para la produccin de dixido de carbono para la
hinchazn de la masa del pan.
La primera produccin industrial de una levadura con fines nutricionales tuvo lugar en
Alemania durante la primera guerra mundial. Despus de la guerra el inters de Alemania se
desvaneci, pero fue reavivado a mitad de los aos treinta, y durante la segunda guerra mundial se
produjeron aproximadamente 15.000 toneladas al ao de levadura que se incorporaron en la dieta
de civiles y del ejrcito, principalmente en sopas y salchichas. El inters en producir levadura
tambin se desarrollo en Estados Unidos y Gran Bretaa y continu despus de terminar la
segunda guerra mundial en forma bastante poco metdica hasta que se produjo un rpido inters
en todo el mundo en mitad de los aos cincuenta.
6

Las levaduras son microhongos que suelen medir de 5 a 10 micras, se encuentran
generalmente en forma de clulas nicas y que se reproducen mediante gemacin. Algunas
levaduras estn formadas nicamente por clulas individuales y a veces cadenas cortas, mientras
que otras se encuentran con un cierto rango de formas celulares, incluyendo diversos tipos de
filamentos. Las levaduras S. cerevisiae se consideran como organismos facultativos anaerbicos, lo
cual significa que pueden sobrevivir y crecer con o sin oxgeno.
3

La membrana celular consta de polisacridos y muy poca quitina. Tienen glucgeno como
sustancia de reserva y contienen tambin numerosas vitaminas. Provocan la fermentacin
alcohlica de las masas de harina y de los lquidos azucarados, y muchas de ellas se utilizan para
obtener bebidas y elaborar pan y otros productos; por lo que tienen una importancia muy grande
por sus actividades bioqumicas de aplicaciones industriales muy importantes.
6


Las levaduras, particularmente S. cerevisiae, son fuentes excelentes de enzimas, coenzimas
y otros componentes biolgicos usados en la investigacin bioqumica, alimentara y medicina.
Generalmente, la protena microbiana, incluyendo la de levadura es deficiente en metionina,
valina, isoleucina y triptofano, aunque es rica en otros aminocidos esenciales como treonina y
lisina, haciendo de ella un excelente suplemento de alimentacin.
5

Las levaduras se cultivan por las clulas mismas y por los productos finales que producen
durante la fermentacin alcohlica. Las clulas de levadura se emplean en la fabricacin de pan y
tambin como fuente de alimento, de vitaminas y de otros factores de crecimiento. La fermentacin
en gran escala con levadura es la responsable de la produccin de alcohol para propsitos
industriales, pero la levadura es mejor conocida por su papel en la fabricacin de bebidas
alcohlicas como cerveza, vinos y licores. La produccin de clulas de levadura y la produccin de
alcohol por levadura son dos procesos industriales muy diferentes: en el primer proceso se requiere
de oxgeno para la mxima produccin de materia celular y por consiguiente es un proceso aerbico,
en tanto que el proceso de fermentacin alcohlica es anaerbico y slo se efecta en ausencia de
oxgeno.
La levadura S. cerevisiae proviene de la levadura silvestre, usada en tiempos antiguos para
la fabricacin del vino y de la cerveza. Las levaduras que se emplean son descendientes de la
primitiva S. cerevisiae.
Como se cultiva en laboratorio durante tiempos muy prolongados, ha habido oportunidad
de seleccionar cepas de acuerdo a las propiedades particulares que se desean.
1

Antiguamente el fabricante de pan obtena levadura de la cervecera cercana, dado que la
levadura es un subproducto de la elaboracin de cerveza. Sin embargo ahora la levadura se cultiva
en grandes fermentadores aereados en un medio que contiene melaza como ingrediente principal.
Las melazas, son un producto secundario del refinado del azcar a partir de la remolacha de azcar
o de la caa de azcar, que contiene grandes cantidades de azcar (entre 45 a 55% en peso de
azcares fermentables, en forma de sacarosa, glucosa y fructuosa) por lo que sirven como fuente de
carbono y de energa. Las melazas contienen tambin minerales, vitaminas y aminocidos que son
utilizados por la levadura.
1
Generalmente, en la fermentacin se utiliza una mezcla de los dos tipos
de melaza. Una vez que se mezclan, se ajusta el pH entre 4.5 y 5.0 porque una mezcla alcalina
promueve el crecimiento de bacterias y esto hace que el monitoreo del pH sea muy importante.
3


La melaza es clarificada, con el fin de eliminar cualquier impureza; luego el mosto (melaza
clarificada y diluida con el pH ajustado) se esteriliza con vapor a alta presin. Despus de la
esterilizacin, se diluye con agua y se mantiene en un estanque hasta que se necesite en el proceso
de fermentacin.
La produccin de levadura requiere adems de una variedad de nutrientes esenciales y
vitaminas. Entre los nutrientes y minerales necesarios estn el nitrgeno, potasio, fosfato,
magnesio, y calcio; y trazas de hierro, zinc, cobre, manganeso, y molibdeno. Normalmente, la
fuente de nitrgeno y de azufre es suministrado mediante sulfato de amonio, el fosfato y el
magnesio en las formas de cido fosfrico y sulfato de magnesio. Las vitaminas utilizadas en la
produccin de levadura son la biotina, inositol, cido pantotnico y tiamina.
3

Se parte de un cultivo puro de reserva y se necesitan varias etapas intermedias para
preparar el inculo en una cantidad suficiente para inocular la etapa final. Los fermentadores y el
equipo accesorio se fabrican de acero inoxidable y se esterilizan por medio de vapor a alta presin.
La operacin real de la fermentacin requiere un control especial para obtener la cantidad mxima
de levadura.
Se ha visto que no es conveniente adicionar al tanque todas las melazas en una sola vez,
porque esto da por resultado un exceso de azcar y la levadura convierte este azcar excedente en
alcohol en vez de convertirla en clulas de levadura. Por consiguiente, inicialmente slo se adiciona
una pequea cantidad de melaza y entonces a medida que la levadura se desarrolla y consume este
azcar, se adiciona ms melaza. Como la levadura se desarrolla exponencialmente, las melazas se
adicionan a una velocidad exponencial. Adems se debe prestar una cuidadosa atencin a la
aereacin, debido a que si no hay aire suficiente se desarrollan las condiciones anaerbicas y en
lugar de biomasa se produce alcohol.
Al final del periodo de crecimiento, se recogen las clulas de levadura, separndolas del
caldo por centrifugacin. Usualmente las clulas son lavadas por dilucin con agua y
recentrifugadas hasta que tienen un color claro.
1

La levadura S. cerevisiae durante las distintas etapas de produccin, las clulas de esta se
ven sometidas a diferentes condiciones de estrs que condicionan su viabilidad y su capacidad de
conducir a la formacin del producto final. Durante su produccin industrial son importantes los
estreses oxidativos.
7
Demostrado tolerancia cruzada en caso de combinacin de agentes que
producen estrs, observndose aumento de la sobrevida, disminucin de la mutagnesis y
disminucin del dao en el ADN.

Adems de que S. cerevisiae regula su ciclo celular en funcin de seales externas tales
como la limitacin nutricional y otros tipos de estrs, y por constituir un modelo de sencilla
manipulacin gentica, facilita el anlisis funcional de procesos biolgicos a nivel molecular.
Adems de profundizar en ciertos aspectos intrnsecos a la iniciacin del ciclo celular, otras
situaciones de estrs activando variantes del ciclo celular: el ciclo meitico de S. cerevisiae.
8


ANTECEDENTES
Dentro del gnero Saccharomyces, la especie cerevisiae constituye la levadura y el
microorganismo eucariote ms estudiado. Este organismo se conoce tambin como la levadura de
panadera, ya que es necesario agregarla a la masa que se utiliza para preparar el pan para que este
esponje o levante; de hecho el trmino levadura proviene del latn levare, que significa levantar.
2

Las levaduras fueron observadas primeramente por Antonie van Leeuwenhoek al
microscopio en 1680.
Pasteur contribuy al conocimiento de estos microorganismos en sus "Etudes Sur le vin"
(1866) y "Etudes Sur la Bire" (1876) en los que aclara muchos aspectos del efecto del oxgeno sobre
las levaduras.
4

En 1897, los hermanos Hans y Edward Buchner obtuvieron extractos libres de clulas
moliendo levadura para pan con granos de arena, a los cuales adicionaron grandes cantidades de
azcar de caa para evitar su posible contaminacin. Para su sorpresa, encontraron que el azcar se
fermentaba rpidamente: por primera vez se haba descubierto un modelo para el estudio de la
fermentacin alcohlica en un sistema carente de clulas. Este descubrimiento atrajo la atencin de
los bioqumicos, que decidieron analizar cada uno de los pasos que conducan a la produccin de
etanol y bixido de carbono a partir de la glucosa. Este trabajo implic el esfuerzo de muchos
cientficos y dio como resultado el descubrimiento y descripcin del metabolismo del carbono;
algunas de las vas metablicas que conocemos actualmente, llevan los nombres de los cientficos
que participaron en este trabajo, como Embden y Meyerhof. La va metablica que permite la
utilizacin de glucosa fue la primera ruta metablica descrita, y la metodologa empleada para
lograrlo se utiliz para el estudio posterior de otras vas que constituyen el metabolismo celular.
As, desde fines del siglo XIX se reconocieron algunas de las ventajas que ofrece el uso de la
levadura de pan, S. cerevisiae, como modelo biolgico en la investigacin: por un lado, la facilidad
con la que se obtienen grandes cantidades de este microorganismo; y por otro, el hecho de que S.

cerevisiae posee un ciclo de vida que al incluir una fase sexual, permite abordar estudios con las
herramientas que provee la gentica formal.
2

Posteriormente mucha gente se ha dedicado a la taxonoma y sistematizacin de las mismas
como Darish, Emil Chrystian Hansen, y Guillermond, entre otros. Este ltimo escribi un libro que
incluye las claves para identificar a las levaduras.
La identificacin de las levaduras consiste en la examinacin y determinacin de hechos en
las levaduras que son comparados con las descripciones de organismos ya conocidos. Hay muchos
sistemas de identificacin, pero ninguno es ideal y 1os mtodos usados varan desde observaciones
y pruebas simples hasta tcnicas bioqumicas o fisiolgicas sofisticadas.
Las caractersticas determinadas de las levaduras, dentro de una amplia esfera de la
taxonoma de las levaduras, incluye: morfologa (macroscpica y microscpica), comportamiento
de las colonias en medio slido y lquido, caractersticas sexuales, estudios fisiolgicos y
bioqumicos (pruebas de asimilacin y fermentacin), observaciones ecolgicas con pruebas
suplementarias (para levaduras usadas en medicina), y caracterizacin industrial de las cepas
(pruebas de floculaci6n).
Es importante mencionar que no todas las pruebas son de igual importancia, por ejemplo; la
prueba de asimilacin de nitrato es esencial para distinguir entre las especies de Saccharomyces
(nitrato negativas) y especies de Hansenula (nitrato positivas), pero la misma prueba tiene poco
significado con Candida, Iorulopsis y Rhodotorula.
Como se ha mencionado antes, es importante para la clasificacin de las levaduras conocer
algunas de sus caractersticas como son (en nuestro caso son importantes las de S. cerevisiae): el
hecho de que las cepas de S. cerevisiae forman yemas multipolarmente, formando adems
ascoesporas haploides que posteriormente pueden conjugarse; adems que fermentan y asimilan
glucosa, sacarosa, maltosa, galactosa, y no fermentan ni asimilan lactosa; no metabolizan nitratos ni
nitritos, pero si utilizan sales de amonio y urea, Reed (1973) menciona que algunas cepas crecen
bien en con algunos aminocidos ( -alanina, cido -aminobutilico, asparagina, cido asprtico,
glutmico, leucina, isoleucina, arginina, fenilalanina, serina, tirosina, ornitina y rnetionina); algunas
cepas de Saccharomyces alcanzan a producir etanol de un 18 a 20% (v/v); la tolerancia al alcohol
(poder normal de fermentacin a concentraciones de etanol) de 8 a 12%, por volumen; la mayora
de las levaduras son sensibles a la ciclohexamida (actidiona), incluyendo todas las especies
utilizadas industrialmente . Algunas cepas de S. cerevisiae son inhibidas a una concentracin de

1g/mL, sin embargo, algunas cepas pueden adquirir resistencia a este antibitico, la antimicina A
y nistanina tambin son activos contra S. cerevisiae.
Barnett y Pankhurst (1974) construyeron una clave prctica para identificacin de levaduras
por medio de una computadora que se utiliza conjuntamente con la clasificacin hecha por Lodder
(1970).
4

Otra caracterstica de esta levadura es el tamao de su genoma, que por ser pequeo facilit
su secuenciacin; y muchas otras virtudes que se han ido haciendo evidentes conforme se han
desarrollado nuevos enfoques y mtodos de estudio.
2




OBJETIVO GENERAL
Producir la levadura S. cerevisiae bajo condiciones de estrs oxidativo.


OBJETIVOS PARTICULARES
1. Seleccionar un medio de cultivo para la produccin de S. cerevisiae.
2. Determinar la cantidad de aire ms adecuada para provocar estrs oxidativo durante el
crecimiento de S. cerevisiae.
3. Obtener biomasa de S. cerevisiae bajo las condiciones seleccionadas.


METODOLOGA
1. Preparar medios de cultivo con diferentes fuentes de carbono (melazas, glucosa) y seleccionar en
el que crezca mejor la levadura S. cerevisiae.

2. Determinar actividad de catalasa lo que nos indicar el grado de estrs oxidativo presente en
cada uno de los medios de cultivo.



Protocolo para determinar la actividad de catalasa

La actividad de catalasa se determina midiendo la cantidad de oxgeno liberado, empleando
para ello un electrodo para cuantificarlo (oxmetro).
Preparar una solucin amortiguadora de fosfato 50nM pH 7, mezclando soluciones de Na2HPO4
y KH
2
PO
4
. Tomar alcuotas de la solucin amortiguadora y adicionar H
2
O
2
hasta llegar a 10mM.
Posteriormente se lleva a cabo la calibracin del oxmetro estableciendo un 50% de aire (10.4%
de oxgeno) colocando agua saturada de aire en la cmara del oxmetro.
Una vez calibrado el oxmetro se llena la cmara de lectura con 3mL de solucin de perxido de
hidrgeno 50nM en buffer de fosfatos.
Introducir el electrodo con cuidado de no dejar burbujar.
Poner en agitacin e inmediatamente inyectar la cantidad correspondiente del estndar
(catalasa 6U/mg, 5 L), o del extracto de catalasa segn sea el caso (5L).
Registrar los valores en % de oxgeno liberado, respecto al tiempo
Calcular la pendiente y establecer la actividad de catalasa.

3. Obtener la biomasa de S. cerevisiae, bajo las condiciones de cultivo seleccionadas, en un reactor
de 1 litro.


LUGAR DE REALIZACIN
Laboratorio de Ingeniera Gentica y Metabolismo Secundario del Departamento de Biotecnologa.
S-154. Universidad Autnoma Metropolitana Iztapalapa.









DURACIN Y ETAPAS

ETAPAS DURACIN
PRIMERA ETAPA:
Produccin de levadura S. cerevisiae
Noviembre
(1 mes)
SEGUNDA ETAPA:
Medir la presencia de estrs oxidativo
Diciembre a Marzo
(4 meses)
TERCER ETAPA:
Producir levadura en condiciones normales y con una tasa
alta de aire en Reactores de 1 L.
Abril a Julio
(3 meses)


TIEMPO DE DEDICACIN
3-4 horas diarias

CRITERIOS DE EVALUACIN
1. Se evaluar la responsabilidad del alumno. Si asiste el tiempo que se comprometi a trabajar en
el laboratorio.
2. Su desempeo dentro del laboratorio.
3. Su iniciativa durante el desarrollo de su trabajo de investigacin, es decir, aportaciones y
sugerencias al trabajo.
4. Revisin Bibliogrfica.
5. Reporte final.





RESULTADOS
De acuerdo a los objetivos la seleccin del medio de cultivo para la produccin de S.
cerevisiae se llevo a cabo probando tres diferentes tipos de medios, los cuales se presentan a
continuacin:











Las condiciones a las cuales se llevo a cabo la produccin de S. cerevisiae para todos los
medios fueron las siguientes:
Temperatura de incubacin: 30 C
Tiempo de incubacin: 24 horas
Agitacin: 200 rpm

Estos cultivos se realizaron en matraces Erlen Meyer de 250mL conteniendo 50mL de
medio. Se probaron los tres medios diferentes y se encontr que el medio A es donde se present
mayor crecimiento de S. cerevisiae.

Por lo tanto se seleccion el medio A para continuar los estudios de produccin de biomasa
de S. cerevisiae bajo condiciones de estrs oxidativo en reactores de 1L,

A continuacin se presentan los resultados obtenidos al llevar a cabo la produccin de S.
cerevisiae con el medio seleccionado (A) en reactores de 1L, tanto del control, es decir, a una tasa
baja de aireacin; as como del crecimiento de la levadura a una tasa elevada de aireacin.
Compuesto Cantidad (g/L)
Glucosa 30
KH2PO4 2.72
K2HPO4 3H2O 5.22
(NH4)2SO4 2
Extracto de levadura 1.0
MgSO
4
7H
2
O 0.12
ZnSO
4
7H
2
O 0.004
CuSO
4
5H
2
O 0.0004
MnSO4 4H2O 0.004
FeSO4 7H2O 0.0022
pH 5.5
Compuesto Cantidad (g/L)
Melaza 40
(NH4)2SO4 4
KH2PO4 1.5
MgSO4 1.5
pH 5
Compuesto Cantidad (g/L)
Glucosa 40
(NH4)2SO4 4
KH
2
PO
4
1.5
MgSO
4
1.5
pH 5
Medio de cultivo A
Medio de
cultivo C
Medio de
cultivo B

o Reactor 1 (Control)
Condiciones de crecimiento de S. cerevisiae
Aire 150
Temperatura 30 C
rpm 250
Tiempo 63 h



CINTICA REACTOR 1
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
0 10 20 30 40 50 60
Tiempo (h)
A
z

c
a
r
e
s

R
e
d
u
c
t
o
r
e
s

(
g
/
L
)



B
i
o
m
a
s
a

(
g
/
L
)
0
1
2
3
4
5
6
p
H
Biomasa (g/L) Azcares Reductores (g/L) pH

Figura 1. Cintica de produccin de biomasa, azcares reductores; y evolucin del pH durante el
cultivo de S. cerevisiae, con baja aireacin.
Resultados de Crecimiento
Tiempo
(h)
Biomasa
(g/L)
Azcares Reductores
(g/L)
pH
0 1.96 0.7907 5.23
14 1.71 0.3364 3.65
20 2.19 0.0607 2.79
24 2.27 0.0664 2.78
38 2.45 0.0436 2.78
44 2.8 0.0407 2.77
48 2.95 0.0393 2.8
63 3.51 0.0379 2.76
Biomasa Total:
R
1
= 10.1 g/L

o Reactor 2 (Estrs Oxidativo)

Condiciones de crecimiento de S. cerevisiae
Aire 250
Temperatura 30 C
rpm 150
Tiempo 63 h

Resultados de Crecimiento
Tiempo
(h)
Biomasa
(g/L)
Azcares reductores
(g/L)
pH
0 2.75 0.8693 5.15
14 3.26 0.0636 3.21
20 3.68 0.045 2.69
24 3.94 0.0379 2.66
38 4.27 0.035 2.58
44 5.49 0.0236 2.55
48 4.95 0.0193 2.62
63 5.21 0.0179 2.58

CINTICA REACTOR 2
0
1
2
3
4
5
6
0 10 20 30 40 50 60
Tiempo (h)
A
z

c
a
r
e
s

R
e
d
u
c
t
o
r
e
s

(
g
/
L
)






B
i
o
m
a
s
a

(
g
/
L
)
0
1
2
3
4
5
6
p
H
Biomasa (g/L) Azcares Reductores (g/L) pH

Figura 3. Cintica de produccin de biomasa, azcares reductores y evolucin del pH durante la
fermentacin de S. cerevisiae con niveles altos de aireacin.
Biomasa Total:
R2= 13.84 g/L

Tabla 1. Produccin de biomasa total a las 63 h en reactores de 1L.



Se observ una mayor produccin de biomasa en el reactor con mayor tasa de aireacin, 5.5
g/L a las 44 horas, con respecto al reactor con baja aireacin, 2.8 g/L a las 44 horas, es decir, se
produjo 1.9 veces ms de biomasa. Estos resultados se confirman en los experimentos realizados en
los reactores de 1L donde nicamente se determin la biomasa total a las 63 horas. En la tabla 1 se
muestran los datos obtenidos y se observa que se produjo 1.4 veces ms de biomasa en los reactores
con alta tasa de aireacin que en los reactores con baja tasa de aireacin.


Despus de haber llevado a cabo la produccin de la levadura tanto en condiciones
normales, as como bajo estrs oxidativo se obtuvo la biomasa mediante centrifugacin para
posteriormente llevar a cabo la determinacin de la actividad de catalasas, la cual se estableci
midiendo la cantidad de O2 liberado para determinar el grado de oxgeno presente ambos
reactores (control y bajo estrs oxidativo); para ello se utiliz una cantidad conocida de catalasa (6
U/mg, 5L) como estndar y una muestra de la biomasa tanto del control como de la levadura bajo
estrs oxidativo obteniendo los siguientes resultados.








Produccin de Biomasa
Reactor
Biomasa Total
(g/L)
Reactor 1
(Baja tasa de aireacin)
9.15
Reactor 2
(Baja tasa de aireacin)
10.1
Reactor 3
(Alta tasa de aireacin)
13.74
Reactor 4
(Alta tasa de aireacin)
14.4

Tabla 2: Muestra el % de oxgeno liberado tomando lecturas cada 2 seg.
Tiempo
(seg)
Estndar
(% O2 liberado)
Muestra Control
(% O2 liberado)
Muestra con
estrs oxidativo
(% O2 Liberado)
0 10.4 10.5 10.2
2 15.4 12.6 10.9
4 24 13.3 11.9
6 26.4 14.2 12.8
8 34.6 14.8 13.9
10 41.1 15.1 15.7
12 42 16.2 17.3
14 49.8 18.2 18.5
16 50 19.3 21.3
18 53 21.3 23.4
20 56 22.9 25
22 58 24.4 27.9
24 59 26.7 30.6
26 60 28.3 31.9
28 61 30.7 34.5
30 62 32.9 36.4
32 63.8 34.8 38
34 64.1 38.2 40.3
36 66.2 39.7 41.4
38 67.4 41.7 42
40 68.6 42.3 42.9
42 68.9 43.2 44
44 69.1 43.5 45.7
46 70.5 46.8
48 71.3 47.3
50 48
52 48.9
54 49.3
56 49.7
58 49.9
60 50.1


ACTIVIDAD DE CATALASA EN S. cerevisiae
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Tiempo (seg)
%

O
2

l
i
b
e
r
a
d
o
Sin Estrs
Con Estrs
Catalasa
estndar

Figura 4. Actividad de catalasa en las muestras de cultivo de S. cerevisiae en reactores con estrs y
sin estrs oxidativo, muestras tomadas a las 63 h. Se muestra la actividad obtenida a partir de un
estndar (6U/mg).

Se observa que no hay diferencia significativa en la actividad de catalasa determinada en los
reactores con alta y baja tasa de aireacin. Esto puede deberse a que la tasa de aireacin alta que se
utiliz no fue suficiente para provocar un estrs oxidativo importante; no se pudo elevar ms la
tasa de aireacin por problemas de manejo de los reactores. Se recomienda hacer fermentaciones
adicionndole un agente que cause estrs oxidativo como el sorbitol o glicerol. Sin embargo el
aumento en la tasa de aireacin si permiti mayor crecimiento de S. cerevisiae; en el reactor con
baja aireacin se obtuvo 10g/L de biomasa mientras que en el de alta tasa de aireacin la biomasa
total obtenida fue de 14g/L.

CONCLUSIONES
Se concluye que el aplicar una mayor tasa de aireacin en la produccin de la levadura S.
cerevisiae la biomasa obtenida fue de aproximadamente 4 g ms con respecto al de baja aireacin a
pesar de no haber logrado condiciones de estrs oxidativo.

BIBLIOGRAFIA

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