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Este documento describe procedimientos para la identificación de hongos filamentosos mediante cultivo y observación microscópica. Se cultivan las muestras en agar Sabouraud y otros agares para observar el micelio y estructuras reproductivas. La identificación se basa en características macro y micromorfológicas como el color, textura y velocidad de crecimiento de las colonias, y la forma, tamaño y disposición de las hifas, conidios y otras estructuras al microscopio. Se proporcionan detalles sobre
Este documento describe procedimientos para la identificación de hongos filamentosos mediante cultivo y observación microscópica. Se cultivan las muestras en agar Sabouraud y otros agares para observar el micelio y estructuras reproductivas. La identificación se basa en características macro y micromorfológicas como el color, textura y velocidad de crecimiento de las colonias, y la forma, tamaño y disposición de las hifas, conidios y otras estructuras al microscopio. Se proporcionan detalles sobre
Este documento describe procedimientos para la identificación de hongos filamentosos mediante cultivo y observación microscópica. Se cultivan las muestras en agar Sabouraud y otros agares para observar el micelio y estructuras reproductivas. La identificación se basa en características macro y micromorfológicas como el color, textura y velocidad de crecimiento de las colonias, y la forma, tamaño y disposición de las hifas, conidios y otras estructuras al microscopio. Se proporcionan detalles sobre
Profesor Asociado Programa de Microbiologia y Micologa ICBM, Facultad de Medicina Universidad de Chile mcdiaz @med.uchile.cl Zigomicosis Hialohifomicosis Feohifomicosis Micelio hialino no septado o cenoctico Micelio hialino septado Micelio pigmentado (negro), septado Micosis causadas por hongos filamentosos Alternaria , Cladosporium Curvularia , Cladophialophora Exophiala ,Phialophora Orden Mucorales : Mucor , Rhizopus, Absidia Mucormicosis Aspergillus Fusarium sp Scedosporium sp Paecilomyces sp Acremonium sp Otros..... DIAGNSTICO DE LABORATORIO Examen Microscpico Directo Identificacin Observacin macro-microscpica de la colonia Cultivo primario : Agar Sabouraud Subcultivo : Agar papa dextrosa, Agar malta , Agar Czapek Criterios de Interpretacin Observacin Microscpica IDENTIFICACION !!!!!!! COLONIA 1.- Observacin a travs de las paredes del tubo: estructuras reproductivas . 2.- Montajes directos Lactofenol (con o sin colorante ) azul de lactofenol Cinta adhesiva transparente Examen Microscpico : Procedimientos 3.- Microcultivos o cultivos en lmina . Hifas: hialinas septadas hialinas aseptadas (cenocticas) hifas pigmentadas(dematiceas), Caractersticas micromorfolgicas Asexual: Conidiforos Clulas conidigenas Conidios Esporangios, etc. Sexual: Ascosporas Basidiosporas Zigosporas Otras estructuras : sinemas, esporodoquios Conidios: Morfologa y tamao de las estructuras reproductivas. Conidiognesis Blstica Tlica Entero- Fialdica Fialdica Aneldica Aneldica Sincrnica Sincrnica Holo- Simpodial Simpodial Holo- Holotlica Holotlica -artrica Holortrica Holortrica Enterortrica Enterortrica IDENTIFICACIN DE HONGOS FILAMENTOSOS AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS OBSERVAR AL MICROSCOPIO: HIFAS SEPTADAS PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS Alternaria Mucor,Rhizopus,Absidia CONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTE Curvularia, Bipolaris CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMRFICOS Cladosporium Trichophyton Histoplasma Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIFOROS QUE CONIDIFOROS CONIDIOS CONIDIOS TERMINAN EN VESCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium Colonias :crecimiento muy rpido , invasoras Identificacin : gneros del orden Mucorales Absidia : Colonia algodonosa blanca- griscea Mucor : al principio blanca y al madurar gris o amarilla, la superficie se cubre con manchas oscuras cuando se desarrollan los esporangios. Rhizopus: Al principio es blanca y al madurar es gris a caf, Sal y pimienta reverso incoloro o crema. Apfisis hinchamiento apical del esporangi foro) Columela (prolongacin estril del esporangiforo) Esporangiosporas ( conidios asexuales ) Esporangiforos ( hifa frtil ) Esporangio( saco) Hifas aseptadas Estoln (hifas areas que conectan los rizoides) Rizoides ( semejante a una raiz) apfisis esporangio Esporangiosporas amarillas o caf, ovales o elipsoides. Ausencia de rizoides. Posee rizoides Esporangio redondo, hialino con base aplanada - Apfisis y columela. Columela en forma de cono con proyeccin en el pice. Apfisis con collarete. Mucor RHIZOPUS Absidia IDENTIFICACIN DE HONGOS FILAMENTOSOS AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS OBSERVAR AL MICROSCOPIO: HIFAS SEPTADAS PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS Alternaria Mucor,Rhizopus,Absidia CONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTE Curvularia, Bipolaris CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMRFICOS Cladosporium Trichophyton Histoplasma Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIFOROS QUE CONIDIFOROS CONIDIOS CONIDIOS TERMINAN EN VESCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium ASPERGILLUS CULTIVO : Crecimiento rpido ( 3-6 dias ) .25 a 37C. Colonia aterciopelada a granular. Color inicial blanco, luego verde, amarillenta, gris, caf o negra. Reverso : blanco o puede observarse pigmento amarillo o marfil. Agar extracto de malta estimula conidiognesis Agar Czapek estimula pigmentacin. Hifas relativamente anchas, ramificacin dicotmica en 45. Conidiforos rectos, no ramificados, de tamao variable. Vescula apical redonda, hemiesfrica, elipsoides. Filides nacen directamente de la vescula (uni o biseriada). Conidios forman cadenas de disposicin columnar o radiada. Micromorfologa Principales Especies de Aspergillus Colonia Micromorfologa A. fumigatus Verde azulada Vesculas subesfrica, filides a gris uniseriada y conidios columnar. A. flavus Amarillo Vesculas pequeas-achatadas y verdoso grandes-redondas, filides uni o biseriadas y conidios columnar y radiados. A. niger Negra Vesculas grandes y redondas, filides biseriada, conidios radiados A terreus Canela a caf Vesculas subesfricas, filides biseriadas y conidios columnar. Fusarium La identificacin de las especies es bastante compleja . De Hoog y Guarro : Caracteristicas macromorfolgicas :aspecto, textura, color de las colonias, velocidad de crecimiento. Caracteristicas micromorfolgicos de los cultivos : - Forma y tamao de los macroconidios - Forma, cantidad y modo de formacin de microconidios - Naturaleza de la clula conidigena - Presencia o ausencia de clamidoconidios. FUSARIUM Cultivo Crecimiento rpido, entre 25 a 30C. 3 a 6 das, colonia inicial vellosa a algodonosa. Micelio areo inicialmente blanco con el tiempo pasa a rosado, rojo, violeta, prpura, etc. sobre todo en la parte central, por la produccin de pigmento. Periferia del micelio persiste de color blanco. Micromorfologa Micelio hialino, septado, con conidiforos ramificados o no, a veces agrupados en esporodoquios. Filides nacen directamente de la hifa (ausencia de conidiforo). Macroconidios : aislados o en grupos; hialinos, alargados, fusiformes, curvos con extremo aguzados , multiseptados,( 2-7 clulas ) Microconidios : unicelulares, cilndricos, nicos o en cadena o racimos por una sustancia mucoide. Clamidoconidios terminales. Micromorfologa Fusarium solani Colonia : lisa y algodonoso, color blanco grisceo, crema, ocre o rosa prpura. Reverso no coloreado o crema plido. Micromorfologia : Conidiforos largos. Macroconidios : 3-5 septos , forma de media luna con clula apical corta y redondeada y clula basal redondeada o con forma de pie, nacen de conidiforos cortos y ramificados - esporodoquios. Microconidios :abundantes ,pequeos,ovales a reniformes, producidas en monofilides alargadas y finas. Clamidoconidios : frecuentes, con una pared lisa o rugosa,aisladas o en parejas, terminales o intercalares . Fusarium oxysporum Colonia : lisa y algodonosa,y con el tiempo un aspecto de fieltro, blanco o salmn plido, prpura en el centro. Reverso : prpura. Conidiforos : cortos, nicos o ramificados. Microconidios : abundantes, pequeos ,ovales a reniformes, ocasionalmente, con uno o dos tabiques , pueden formar masas pero nunca cadenas; Macroconidios : 1- 5 septos , fusiformes, puntiagudos, ligeramente curvados, de paredes finas y delicadas, Clamidoconidios : abundantes, grandes, hialinas, pared lisa o rugosa ,aisladas o en parejas, intercalares o terminales. F. verticillioides Colonia: algodonosa, blanco a melocotn o rosa salmn a azulado o prpura .Reverso: crema a lila, vino tinto o prpura Conidiforos : nacen lateralmente de la hifa , escasamente ramificados. Clulas conidigenas: monofilides, habitualmente delgadas y largas, Microconidios : abundante , ovales o en forma de maza con base truncada,con 1-2 septos, algunos forma cadenas. Macroconidias :3-7 septos , ligeramente fusiformes, casi rectas, con superficies dorsal y ventral casi paralelas, de pared fina y delicada. Las clulas basal y apical son alargadas y ligeramente curvadas. No forma clamidoconidios. Acremonium Cultivo Crecen entre 25 a 37C, siendo 30C la ptima. A los 4 o 5 das, colonia membranosa o aterciopelada. Color : blanco a gris rosa con reverso beige o rosado suave. Colonia de A. falciforme es gris-violeta y pigmento violeta-prpura. Micromorfologa: Hifas delgadas y delicadas. Conidiforos : filides finas, solitarios y se forman directamente de la hifa en posicin perpendicular. Conidios :unicelulares,lisos, elipsoides, se producen individualmente, pero se mantienen unidas por una sustancia mucosa formando racimos esfricos. PENICILLIUM Cultivo Colonia aterciopelada a pulverulenta, verde azulada con periferia blanca. Algunos pueden ser amarillo, verde, caf y rojo. Algunos producen pigmentos que difunde al medio. Micromorfologa Hifas relativamente delgadas que dan origen a conidiforos rectos y septados. Pueden ser nicos (monoverticilados) o estar ramificados (bi o terverticilados) Tpicamente tiene un penicilio con mtulas y filides que generan conidios. Conidios ovoides a elipsoides, unicelulares ,en cadena. rugosas. Paecilomyces sp P lilacinus- colonias lanosas a pulverulentas , rosa plido a lila. Conidiforos rugosos, ramificados, en su extremo se desarrollan grupos de filides de base ancha y cuello largo Conidios :unicelulares, lisos ,elipsoides , en largas cadenas divergentes. P variotti: colonias de color amarillo verdoso o amarillo parduzco . Conidiforos lisos - conidios elpticos SCOPULARIOPSIS Cultivo Colonia inicial aterciopelada, luego pulverulenta. Color inicial blanco, luego beige. Micromorfologa Conidiforos :generalmente cortos pero ramificados, con ms de una clula conidiognica(anlide) por rama. Conidios: unicelulares en largas cadenas, globosos a piriforme ( limn), rugosos con una base plana por el lado proximal(base truncada),conidios distales son de mayor tamao y equinulados.. Scedosporium S. apiospermum: colonias blancas y algodonosas, luego de color gris o gris parduzco. Conidiforos escasamente ramificados. Clulas conidigenas ( anlides ) cilindricos. Conidios ovales , solitarios o en masas mucosas. S.prolificans: colonias verde griscea, gris a negra. Anlide corta con base hinchada y angosta. Conidios : redondos a ovales. IDENTIFICACIN DE HONGOS FILAMENTOSOS AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS OBSERVAR AL MICROSCOPIO: HIFAS SEPTADAS PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS Alternaria Mucor,Rhizopus,Absidia CONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTE Curvularia, Bipolaris CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMRFICOS Cladosporium Trichophyton Histoplasma Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIFOROS QUE CONIDIFOROS CONIDIOS CONIDIOS TERMINAN EN VESCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium ALTERNARIA Cultivo : colonia algodonosa, caf oscuro a verde oliva oscuro con una franja blanca alrededor de la colonia. Pigmento negro. Micromorfologa Conidiforos septados,pigmentados simples o ramificados Conidios: oscuros, con septos transversales y longitudinales,, pared lisa o rugosa, pueden estar solos o en cadenas. CURVULARIA Cultivo Colonia aterciopelada, caf oscuro o negro a verde oliva oscuro. Reverso : caf o negro. Micromorfologa Conidiforos septados, simples o ramificados, con pigmento oscuro y geniculados. Conidios: curvado, con septos transversales con 3 a 5 clulas , oscuros, la 3ra clula es asimtrica y ms oscura que las otras. Cladosporium Colonias aterciopeladas a pulverulentas , verde oliva a verde oscuro. Conidiforos ramificados , conidios en cadenas y ramificados con cicatrices prominentes y ms oscuras.- Ramoconidios Cladophialophora : Colonias aterciopeladas, pulverulentas, gris olivceo.( 42C). Conidios unicelulares en cadenas poco ramificadas, pigmentadas. Chile :C.bantiana ( absceso cerebral ).