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Formao de Biofilmes
Microbianos
Prof Dra Luciana Maria Ramires Esper
Universidade Federal Fluminense
28/09/2011
V Simpsio Brasileiro de Microbiologia
Aplicada
SUMRIO
INTRODUO
CARACTERSTICA E ARQUITETURA DOS BIOFILMES
FORMAO DE BIOFILME
COMUNICAO INTERCELULAR (QUORUM SENSING)
BIOFILME NA INDUSTRIA DE ALIMENTOS
SANITIZANTES
AVALIAO DE BIOFILME
CONTROLE E PREVENO DE BIOFILMES
CONSIDERAES FINAIS
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Por muito tempo foi considerado que as bactrias viviam de forma
isolada.
No entanto, observou-se que ocorre associao, e nas ltimas
dcadas tambm uma comunicao entre as bactrias.
Esse tipo de comportamento comunitrio permite a formao de
uma estrutura multicelular complexa denominada BIOFILME
(FUQUA et al., 1996).
Introduo
A definio exata do que seja biofilme ainda no consensual nos meios
acadmicos e h vrias definies descritas na literatura
Biofilmes uma comunidade complexa e estruturada de
microrganismos, envoltos por uma matriz extracelular de
polissacardeos, aderidos entre si a uma superfcie ou interface
(Costernon et al., 1995).
Definio :
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Biofilmes no setor da sade
Biofilmes formados sobre ou dentro de aparatos mdicos constituem
uma sria ameaa sade pblica.
Fonte: Xavier,2005
Implante
Estaes de tratamento de guas ou de efluentes
Importncia dos biofilmes
Tem grande importncia em inmeras atividades humanas
Introduo
Numerosos bioprocessos tambm utilizam biofilmes:
* biorreatores para a produo de fermentados
* produo de vinagre
* cido ctrico
*vinhos
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Introduo
Estas estruturas, uma vez constitudas, agem como ponto de
contaminao constante, liberando clulas de microrganismos
patognicos e deteriorantes, podendo comprometer, assim, a
qualidade microbiolgica de matrias-primas, insumos e alimentos
processados.
A ocorrncia de biofilmes ganha cada vez mais destaque nas
discusses focadas em qualidade e segurana de alimentos.
O crescimento no desejado de biofilmes, tem um impacto negativo em
vrias atividades
Trocadores de calor: aumento da resistncia do fluxo e da taxa de
transferncia de calor.
Membranas de filtrao: reduz o fluxo atravs da membrana,
entupimento.
Biocorroso de materiais, como o ao inoxidvel.
Contaminao dos alimentos por microrganismos deteriorantes e
patgenos
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Clulas planctnicas
Superfcie
As clulas aderidas so designadas por ssseis, enquanto
aquelas livres e dispersas so denominadas por planctnicas.
Um biofilme corresponde a uma comunidade de clulas ssseis
aderidas a um substrato, embebidas em uma matriz de polmeros
extracelulares, na qual existem diferenciados fentipos, metabolismo,
fisiologia e transcrio gentica.
Caractersticas e arquitetura dos biofilmes
ssseis
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So complexas comunidades mono ou multiespcies (indstria de
alimentos), ancoradas a uma superfcie, sendo estas embebidas em
uma matriz constituda, basicamente por exopolissacardeo (EPS).
A matriz de polmeros extracelulares (EPS) de natureza
polissacardea ou proteica, expe-se exteriormente membrana
externa das clulas Gram negativas e ao peptdeoglicano das Gram
positivas, sintetizado pr polimerases, constituindo-se em uma
estrutura complexa bem hidratada
Vital importncia no processo de ancoragem dos microrganismos
Exopolissacardeos
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Um dos grandes responsveis por conferir proteo aos
sanitizantes so os EPS, que agem como barreira fsica impedindo
que sanitizantes cheguem a seus stios de ao como, por exemplo,
a membrana de gram-negativos.
Em alguns casos o EPS capaz de sequestrar ctions, metais e
toxinas, conferindo tambm proteo contra radiaes UV,
alteraes de pH, choques osmticos e dessecao.
ANTIBITICOS
SANITIZANTES SANITIZANTES SANITIZANTES SANITIZANTES
So percebidas muitas alteraes fenotpicas, principalmente nos
aparatos de motilidade, no tamanho da clula e no metabolismo,
decorrentes da restrio de nutrientes e de oxignio em algumas
fases, da variao na taxa de reproduo e em toda a regulao
gnica.
As clulas em biofilme so de 500 at 1000 vezes mais resistentes
quando comparadas s clulas planctnicas.
Biofilmes so as nicas estruturas microbianas que permitem a
coexistncia de organismos aerbios e anaerbios estritos a
distncias de poucas centenas de micrmetros um do outro.
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So compostos por microcanais internos, teis na distribuio de
nutrientes e gua, no escoamento de metablitos, alguns
potencialmente patognicos ao homem, nas enzimas
alginatoliases e as proteases, necessrias ao destacamento de
clulas do biofilme e na distribuio de molculas sinalizadoras de
quorum sensing (Hall-Stoodley et al, 2004)
Etapas que uma nova espcie bacteriana realiza,
durante sua incorporao em um biofilme
(Adaptado de Watnick & Kolter, J. Bacteriol.,
182:26752679, 2000)
Estudo microscpico da formao de um
biofilme por V. cholerae
(Adaptado de Watnick & Kolter, J. Bacteriol.,
182:26752679, 2000)
Como etapas importantes para sua formao so descritas as bioadeses iniciais,
passando os microrganismos de seu estilo de vida planctnico ao sssil, a formao
de microcolnias, a maturao do biofilme e o destacamento de clulas, retornando
ao seu estilo de vida planctnico.
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(Xavier, 2002)
Uma vez que o biofilme constitudo de agregados de clulas e a
formao de sua estrutura tridimendisional um processo dinmico
que envolve uma srie de eventos moleculares coordenados, ele
representa um ambiente propcio para a comunicao clula-clula, ou
quorum sensing (QS)
Sistema de comunicao dependente de densidade populacional em
bactrias.
COMUNICAO INTERCELULAR
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bactria
Molcula
sinalizadora
Protena
receptora
Promotor DNA
Motilidade
Fatores de virulncia
Biofilmes
Produo de
antibiticos
Esporulao
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BIOFILMES EM INDSTRIAS E UNIDADES
PROCESSADORAS DE ALIMENTOS.
E. coli
Salmonella sp
Staphylococcus aureus
Listeria monocytogenes
Bacillus cereus
Yersinia enterocolitica
Alguns micro-organismos patognicos presentes em alimentos
podem facilmente formar ou fazer parte da comunidade de
microrganismos presentes em um biofilme.
Microrganismos Deteriorantes
Pseudomonas fragi, Micrococcus sp, Pseudomonas
fluorescens, Enterococcus faecium
Nas indstrias de alimentos devido diversidade da produo, das
matrias primas e dos produtos, pode ocorrer a formao de biofilmes
com composio heterognea e com comportamentos os mais variados.
Em biofilme composto por multi-espcies, fato mais comum na
natureza, os produtos metablicos de um microrganismo podem servir
para o crescimento da outra espcie e a adeso de uma espcie pode
prover substncias ligantes que permitem a adeso de outras. Todavia, a
competio por nutrientes e o acmulo de produtos txicos gerados
podem limitar a diversidade microbiana em um biofilme.
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Shi e Zhu, 2009
BIOFILMES EM INDSTRIAS E UNIDADES
PROCESSADORAS DE ALIMENTOS.
Formao em qualquer tipo de superfcie: ao-inoxidvel, borracha,
nylon, alumnio, teflon, etc.
possvel ocorrer adeso bacteriana e formao de biofilme em
praticamente todas as superfcies envolvidas no processamento de
alimentos desde as rugosas, que apresentam fissuras e fendas at as
consideradas mais lisas.
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Fonte: Andrade, 2009
Fonte: Andrade, 2009
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Ao inoxidvel AISI 304
Fonte: Carelli, 2005
A adeso bacteriana depende das propriedades fsico-qumicas do
material do substrato e da superfcie da clula.
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Sanitizantes
Um biofilme microbiano presente numa superfcie com resduos
oriundos do alimento impede um efetiva penetrao do sanitizante para
eliminar microrganismos.
O sanitizante reage inicialmente com:
resduos de protenas, gordura, carboidratos e minerais.
Ao final, pouca atividade do sanitizante resta para agir sobre os
microrganismos no biofilme.
Sabe-se que, quando o biofilme tratado corretamente com detergente
antes do uso dos sanitizantes, os microrganismos geralmente so
eliminados.
No entanto, procedimentos de higienizao incorretos no removem
nem inativam ao microrganismos aderidos
EFICINCIA DO SANITIZANTE
Depende dos microrganismos envolvidos, das condies da
aderncia e desenvolvimento e caractersticas do biofilme.
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Atualmente, vrios mtodos so usados na deteco e monitoramento da
carga microbiana de superfcies envolvidas na produo de alimentos.
AVALIAO DE BIOFILME NA
INDUSTRIA DE ALIMENTOS
As tcnicas de microscopia eletrnica apresentam alto poder de
resoluo e comprimento de onda muito curto (0,5 A) de feixe de
eltrons, permitindo observar as amostras em aumentos maiores
quando comparado com a microscopia ptica comum
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Fonte: Esper, 2010
Controle/ Preveno
A estratgia nmero um de controle a prtica de adequados
procedimentos de higiene industrial, com finalidade de remover
resduos e clulas de micro-organismos de superfcies, impedindo o
inicio de todo o processo.
Preveno
O melhor caminho para controlar os biofilmes baseia-se na preveno
de seu desenvolvimento
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O tipo do material usado nos equipamentos deve ser de fcil limpeza e
resistncia a corroso.
difcil erradicar um biofilme utilizando um nico tipo de tratamento
ou um nico desinfetante ou detergente.
Preveno
Desenho correto das superfcies dos equipamentos em contato com
os alimentos.
Os equipamentos devem ser desmontveis facilmente para a limpeza
ou que possam ser limpos sem ter que desmonta-los
Boas Prticas e Sistema APPCC
A implantao de sistemas de qualidade como:
Boas Prticas de Fabricao (BPF)
Sistema de Anlises de Perigos e Pontos Crticos de Controle
(APPCC)
So ferramentas eficazes para garantir a produo de alimentos
seguros, simplificando as aes de segurana dos alimentos,
indicando operaes crticas e chaves do processo e oferecendo
formas eficientes para control-las e monitor-las.
Possibilitando, portanto, tambm prevenir a formao de biofilmes.
Preveno
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Referncias
ANDRADE, N. J.; PINTO, C. L. O.; LIMA, J. C. Adeso e formao de biofilmes microbianos. In: ANDRADE, N.
J. Higiene na Indstria de Alimentos - Avaliao e controle da adeso e formao de biofilmes bacterianos.
So Paulo (SP): Varela. 410p, 2008.
SHI,X.;ZHU. X. Biofilm formation and food safety in food industries. Trends in Food Science and Technology.
doi:10.1016/j.tifs.2009.01.054,2009
XAVIER,J.B., PICIOREANU,C., ALMEIDA,J.S., VAN LOOSDRECHT, M.C.M. Monitorizao e modelao da
estrutura de biofilme. Boletim de Biotecnologia, 2005.
WATNICK, P.; KOLTER, R. Minireview Biofilm, city of microbes. Journal of Bacteriology, v.182, p. 2675-2679,
2000.
COSTERTON, J.W.; LEWANDOWSKI, Z.; CALDWELL, D.E.; KORBER, D.R.; LAPPIN-SOCOTT, H.M. Microbial
Biofilms. Ann. Rev. Microbiol, v. 49.p.711-745, 1995.
Muito Obrigada!!!
lesper@id.uff.br