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3.2.

2 CROMATOGRAFIA DE GASE ACOPLADA A ESPECTROSCOPIA DE MASAS


La cromatografa de gases es una tcnica que permite la separacin de mezclas muy
complejas. Pero una vez separados, detectados, e incluso cuantificados todos los componentes
individuales de una muestra problema, el nico dato de que disponemos para la identificacin
de cada uno de ellos es el tiempo de retencin de los correspondientes picos cromatogrficos.
Este dato no es suficiente para una identificacin inequvoca, sobre todo cuando analizamos
muestras con un nmero elevado de componentes.

Por otra parte, la espectrometra de masas puede identificar de manera casi inequvoca
cualquier sustancia pura, pero normalmente no es capaz de identificar los componentes
individuales de una mezcla sin separar previamente sus componentes, debido a la extrema
complejidad del espectro obtenido por superposicin de los espectros particulares de cada
componente.

Por lo tanto, la asociacin de las dos tcnicas, GC (cromatografa de gases) y MS
(espectrometra de masas) da lugar a una tcnica combinada GC-MS que permite la separacin
e identificacin de mezclas complejas.
La cromatografa de gases/espectroscopia de masas (GC/MS) se ha convertido en
una de las ms poderosas herramientas para el anlisis de mezclas orgnicas y
bioqumicas complejas al alcance de los qumicos. En este caso se efectan los
espectros de los compuestos que salen de la columna cromatografa. Estos espectros
son almacenados en un ordenador para el subsiguiente proceso.





FUNCIONAMIENTO
En este dispositivo (Fig 27.13) la salida de gases fluye a travs de la boquilla de un
separador de chorro( de vidrio)el cual aumenta el momento lineal de las molculas
ms pesadas del analito , de tal forma que el 50 por 100 o ms de stas se
desplazan aproximadamente en lnea recta hacia el conducto colector de salida.
Por el contrario. Los tomos de helio ligeros se desvan por el vacio y son
succionados hacia el exterior.
La mayora de los espectros de masa cuadripolar y el sector magntico se suministra
con los accesorios necesarios para ser acoplados a un equipo de cromatografa de
gases. Adems los espectrmetros de masas de transformada de Fourier se han
acoplado a columnas de cromatografa de gases. Su rapidez y alta sensibilidad son
especialmente ventajosas para esta aplicacin
El detector de masas ms simple para cromatografa de gases es el detector de
trampa de iones. Los iones se generan por impacto de electrones o por ionizacin
qumica a partir de la muestra eluida, y luego se mantienen en un campo de radio
frecuencia. A continuacin los iones atrapados se expulsan del rea de
almacenamiento hacia el detector multiplicador de electrones .La expulsin se
controla de tal forma que es posible un barrido en funcin de la relacin masa
/carga. El detector de trampa de iones es extraordinariamente compacto y ms
barato que los instrumentos de cudruplo. Los detectores espectromtricos de
masas tienen por lo comn varias formas de presentacin de datos, que se agrupan
en dos categoras: de tiempo real y los reconstruidos por ordenador . Dentro de cada
una de las categoras se puede elegir entre los cromatogramas que registran la
intensidad de todos los iones (una representacin de la suma de las intensidades de
todos los iones en funcin del tiempo).
Los cromatogramas que registran la intensidad de un ion seleccionado (una
representacin de la intensidad para uno o unos pocos iones en funcin del tiempo.
), y los espectros de masa de diversos picos. Los espectros de masas a tiempo real se
presenta en la pantalla de un osciloscopio equipada con marcadores de masa; el
cromatograma de masas puede presentarse en la pantalla del osciloscopio o como
un grafico a tiempo real. Despus de completarse la separacin, los cromatogramas
reconstruidos por ordenador pueden presentarse en la pantalla o pueden imprimirse.
Los espectros de masas reconstruidos para cada pico tambin se pueden presentar
en pantalla o imprimir. Algunos instrumentos estn equipados adems con
colecciones de espectros para la identificacin de los compuestos.


Aplicaciones GC-MS
Los instrumentos de cromatografa de gases/espectroscopia de masa se han utilizado
para la identificacin de cientos de componentes que estn presentes en sistemas
naturales y biolgicos. Por ejemplo , estos procedimientos han permitido caracterizar
los componentes responsables del olor y del sabor en los alimentos, identificar
contaminantes del agua, llevar a cabo diagnsticos mdicos basados en los
componentes del aliento y estudios sobre los metabolitos de frmacos.
En la industria se enfoca principalmente a evaluar la pureza de reactantes y productos
de reaccin o bien a monitorizar la secuencia de reaccin. En la industria del petrleo
juega una funcin primordial, por medio de la cromatografa se puede analizar
constituyentes de las gasolinas, las mezclas de gases de refinera, gases de combustin,
etc.

Las cromatografa de gases tiene una amplia aplicacin en la identificacin y
cuantificacin de molculas orgnicas voltiles. Esta tcnica es tambin utilizada en
estudios de contaminantes en aguas como insecticidas, pesticidas, etc.














3.3 CROMATOGRAFA DE LQUIDOS DE ALTA RESOLUCIN (HPLC)

La cromatografa liquida de alta resolucin HPLC es el tipo de cromatografa de
elucin ms verstil y ampliamente usado; es un tipo de cromatografa en la que se
utiliza una fase mvil liquida y una fase estacionaria muy finamente dividida. Para
lograr una velocidad de flujo satisfactoria, el lquido debe someterse a una presin de
cientos de libras por pulgada cuadrada (psi). Los qumicos la emplean para separar y
determinar especies en diversos materiales orgnicos inorgnicos y biolgicos. En
cromatografa liquida la fase mvil es un disolvente lquido que contiene la muestra
como una mezcla de solutos. En el sistema de HPLC el uso de partculas de menor
dimetro (<10 micras) mejora drsticamente el poder de separacin; la cromatografa
de lquidos de alta resolucin emplea columnas y bombas diseadas para soportar las
altas presiones que son necesarias para vencer la mayor resistencia al flujo que
ejercen estas partculas. Los tipos de cromatografa liquida de alta resolucin suelen
clasificares segn el mecanismo de separacin o el tipo de fase estacionaria. Estos
comprenden:
1) Cromatografa de reparto o de liquido liquido
La cromatografa de reparto se puede subdividir en cromatografa lquido-lquido y
cromatografa con fases unidas qumicamente (enlazadas). La diferencia entre estas
tcnicas radica en la forma como se retiene la fase estacionarla sobre las partculas
soporte del relleno. En lquido-lquido, la fase estacionaria lquida se retiene sobre la
superficie del soporte por adsorcin fsica. En fase unida qumicamente, la fase
estacionaria se une qumicamente a la superficie del soporte. La cromatografa de
reparto, al principio era del tipo lquido-lquido; sin embargo, en la actualidad los
mtodos de fase enlazada son los que predominan debido a las desventajas del
sistema lquido-lquido. Una de esas desventajas es la prdida de fase estacionaria por
disolucin en la fase mvil, lo que hace necesario un peridico recubrimiento de las
partculas del soporte

2) Cromatografa de adsorcin o de liquido solido
La cromatografa de adsorcin, o lquido-slido, es la forma clsica de cromatografa de
lquidos que introdujo Tswett por vez primera a principios de este siglo. Ms
recientemente, se ha convertido en un mtodo importante de HPLC. Las nicas fases
que se utilizan en HPLC lquido-slido son la slice y la almina, siendo la primera la que
se prefiere para casi todas las aplicaciones debido a su mayor capacidad de carga y a su
mayor diversidad de presentaciones. Con pocas excepciones, las caractersticas de
adsorcin de los dos adsorbentes son similares. Con ambos, el orden de tiempos de
retencin es: olefinas < hidrocarburos aromticos < haluros = sulfuros < teres <
nitrocompuestos < esteres = aldehdos = cetonas < alcoholes = aminas < sulfonas <
sulfxidos < amidas < cidos carboxlicos. Este tipo de cromatografa se utiliza para
separar compuestos no-polares, como por ejemplo hidrocarburos alifticos o
alcoholes alifticos y el tiempo de retencin aumenta al aumenta la polaridad del
analito


3) Cromatografa de intercambio de iones o inica
La cromatografa inica est relacionada con los mtodos modernos y eficaces para la
separacin y determinacin de iones que se basan en el uso de las resinas de
intercambio inico. Los procesos de intercambio inico se basan en los equilibrios de
intercambio entre los iones de una disolucin y los iones del mismo signo que estn en
la superficie de un slido de elevada masa molecular y esencialmente insoluble.

4) Cromatografa de exclusin molecular
La cromatografa de exclusin por tamaos, que tambin se ha denominado
cromatografa en geles permeables o de filtracin en geles, es una tcnica muy valiosa
que se aplica particularmente a especies de alto peso molecular. Los rellenos para la
cromatografa de exclusin por tamaos estn constituidos por pequeas partculas
(de unas 10 m) polimricas o de slice que contienen una red uniforme de poros en
los que pueden difundir las molculas del soluto y del disolvente. En los poros, las
molculas son atrapadas efectivamente y eliminadas del flujo de la fase mvil. El
tiempo de residencia medio en los poros depende del tamao efectivo de las
molculas de los analitos. Las molculas que son ms grandes que el tamao medio de
poros del relleno son excluidas y de esta forma, esencialmente no se retienen y, por
tanto, son las primeras que eluyen. Las molculas que tienen dimetros que son
significativamente menores que los poros, pueden penetrar a travs del laberinto de
poros y as resultan atrapadas durante ms tiempo; stas son las ltimas en eluir. Entre
estos dos extremos, estn las molculas de tamao intermedio cuya penetracin
media en los poros depende de su dimetro. Dentro de este grupo, tiene lugar el
fraccionamiento, que est directamente relacionado con el tamao molecular y en
cierto modo con la forma molecular.

Las separaciones por exclusin por tamaos difieren de los otros procedimientos que
se han considerado, en que no implican una interaccin qumica o fsica entre los
analitos y la fase estacionaria. De hecho, se procura evitar este tipo de interacciones
dado que originan una mala eficacia de la columna.

5) Cromatografa de afinidad
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas por su afinidad o
capacidad de unin a un determinado ligando. Las muestras que se retienen en la
columna son aquellas que se unen especficamente a un ligando que previamente se
ha unido covalentemente a la matriz de la columna. Despus de que la muestra que no
se unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de la columna, la muestra de inters
que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una
solucin que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interaccin
entre el ligando y la protena.

6) Cromatografa quiral
Como es sabido, la cromatografa de gases (CG) es una tcnica adecuada para aquellos
compuestos orgnicos que pueden ser vaporizados sin descomposicin con relativa
facilidad. La aplicacin de esta tcnica a sustancias quirales conlleva las ventajas
inherentes a la misma, como son su simplicidad, rapidez y su elevada reproducibilidad
y sensibilidad.
La cromatografa quiral se basa en la separacin de determinados enantomeros
contenidos en una mezcla racmica, se ha desarrollado a lo largo de los aos debido a
su gran utilidad en la industria farmacutica, ya que muchos de los medicamentos se
obtienen en estas mezclas y solo uno es de utilidad por lo que es necesaria la
separacin.





















Bibliografa
Principios de anlisis instrumental, Skoog Holler y Nieman Quinta edicin Mc Gaw hill.
Madrid Espaa pp:778-780, 788-790
Fundamentos de qumica analtica. Skoog,West, Holler,Crouch octava edicin,Thomson
Mxico DF 2005 pp:985 992

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8248/4/T4cromatliquid.pdf
http://bioquiwik1.wikispaces.com/La+hemoglobina+glicosilada