UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTOS DE FISIOLOGA Y ANATOMA
INSTITUTO DE FISIOLOGA CELULAR
J
o
r
g
e

B
r
a
v
o

M
a
r
t

n
e
z
Jorge Bravo Martnez
Blanca Alicia Delgado-Coello
Hugo Sols Ortz
Estela Lopez Hernandez
N a +
Na+
Polar
no polar
La difusin de partculas liposolubles
(oxgeno, bixido de carbono, alcohol y
cidos grasos, entre otros) a travs de
la bicapa lipdica se realiza sin ningn
obstculo. Sin embargo, las partculas
polares no pueden cruzar la membrana
a travs de la bicapa lipdica. Lo hacen
a travs de puentes de agua entre el
exterior e interior de la clula lla-
mados canales inicos. Estos canales
estn formados por dos o ms subuni-
dades proteicas que cruzan la totali-
dad de la bicapa lipdica y que entre
ellas forman un espacio intermolecular
por donde cruzan iones.
Los canales tienen
tres propiedades
importantes: a) condu-
cen iones; b) reconocen
y seleccionan los iones
(los canales pueden ser
selectivamente per-
meables a uno o vario
iones); c) se abren y
cierran en respuesta
a estmulos elctricos,
qumicos o mecnicos.
A FAVOR
EN CONTRA
GRADIENTE QUIMICO Q
GRADIENTE ELECTRICO e
+
+ +
-
Las dos grandes fuerzas que impulsan a los iones a moverse
son la diferencia de concentracin y la diferencia o gradi-
ente elctrico, a ambas se le llaman fuerza electromotriz. Ya
que en la regin de mayor concentracin la probabilidad de
que las partculas choque entre s es mayor, la migracin de
una partcula de esta regin a una de menor concentracin
es termodinmicamente favorecida, se dice que la partcula
se mueve en favor de un gradiente qumico o de concen-
tracin. Lo contrario es ir en contra de un gradiente qumico.
Dado que las cargas opuestas se atraen, la migracin de una
partcula de una cierta carga hacia una regin de la carga
opuesta se dice que va en favor de un gradiente elctrico, lo
contrario es ir en contra del mismo.
I

=
V

/

R
I

=

V

g
Una de los mas importantes es la ley de Ohm
(i=v/r), la cual establece que la intensidad de
la corriente elctrica es directamente pro-
porcional a la diferencia de voltaje entre los
extremos que se van a medir e inversamente
proporcional a la resistencia que ofrezca,
el conductor, al paso de esta corriente. De
hecho, el canal se comporta como una re-
sistencia cuyas unidades son los ohms ()
(mide que tan difcil le resulta pasar por el
canal). El inverso de la resistencia (1/R) es la
conductancia (g) y se mide en siemmens, es
una medida de que tan fcil le resulta al ion
pasar por el canal.
Como la corriente inica
que cruza la membrana, se
comporta de manera similar
a la corriente elctrica, se
puede predecir su compor-
tamiento con los modelos
matemticos de la corriente
elctrica.
V
m
-
E
io
n
g
=

P
a
N
I
=
(
V
m
-
E
io
n
)
g
Na+
Na+
Na+ Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
+
-
El fujo de iones a travs de un canal es
pasivo, no necesita gasto de energa por
parte de la clula. La direccin y la inten-
sidad del fujo no est determinado por el
canal sino por el gradiente electro-qumico
(o fuerza impulsora). La intensidad de la
corriente que fuye por los canales est
determinada por dos cosas: A) la conduc-
tancia de la membrana al ion en particular
y sta a su vez, est determinada por la
conductancia de un solo canal multiplicada
por la probabilidad de que el canal est
abierto en un momento determinado ( g
Pa). Hay que recordar que la conductancia
(g) es el inverso de la resistencia (R) y sus
unidades son los siemmens. B) la fuerza
impulsora dada por la diferencia entre el
potencial de membrana y el de equilibrio
del ion involucrado (Vm -Ei). I= g (Vm Ei)
Na+
Na+
Na+ Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
I
concentracin del ion
saturacin
La corriente inica a travs del canal puede satu-
rarse. Dado que el ion se pega al fltro con una
cintica parecida a la de las enzimas. Por ello, se
deduce que la corriente inica vara con respecto
a la concentracin externa del ion en forma de una
hiprbola cuadrada.
+
+
+
+
+
+ +
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
_
Agua de
Hidratacin
El agua al tener ambas cargas elctricas es atrada por
los iones. A los iones positivos, las molculas de agua se
le pegan con su oxgeno y a los negativos se les pega con
su hidrgeno formando puentes de hidrgeno. De esta
manera se forma una nube
de molculas de agua al
rededor del ion, llamada
agua de hidratacin. Entre
menos radio tenga un
ion, ms localizada esta
su carga y por lo tanto
atrae ms agua y la fja
con mayor fuerza. Esta
agua de hidratacin crea
un aumento artifcial del
dimetro del ion. As que
entre ms agua contenga,
mayor su dimetro y
menor su movilidad.

UF!
-
-
+
+
Los canales son selectivamente permeables a
uno o ms iones, esta selectividad depende de la
estructura del canal. En l existe una regin en
donde el canal se angosta y tiene cargas elc-
tricas. A esta regin se le llama el fltro. El ion
con su agua de hidratacin al pasar por el fltro
se forman atracciones electrostticas entre el
ion y los aminocidos provocando, por un lado, la
perdida del agua de hidratacin y por el otro que
el ion se pegue temporalmente (menos de 1 mS).
Esto sucede solo si las interacciones entre el ion
y los a.a. compensan la prdida del agua. A esto
se debe el fenmeno de saturacin.
_ _ _
_
_ _ _
+
+
A B C
Por ejemplo, tenemos un canal inico cuya
regin del fltro tiene cargas negativas y
tenemos tres iones que tratan de pasar
por l. El ion A es de dimetro grande y
con carga + por lo que atrae menos agua de
hidratacin y la fja con menor fuerza que el
ion B con carga + que es de menor tamao y
este menos que el ion C de menor dimetro
que B y con carga -. La regin del fltro
tiene un dimetro sufciente para que pase
los iones B y C pero solo el B logra pasar.
Esto se debe a que:
1) la regin del fltro al tener carga negativa
repele iones con carga negativo por lo tanto
solo pueden pasar cationes.
2) el ion A tiene mayor dimetro que la
regin del fltro as que queda descartado.
3) dado que los iones al pasar por la regin
del fltro tienen que desprenderse de su
agua de hidratacin, solo si la fuerza inica
de las cargas del fltro substituye la del
agua de hidratacin el ion puede despren-
derse del agua. Como los iones de menor
dimetro atraen ms agua y la fjan ms, el
ion C al pasar por el fltro no se desprende
de su agua por completo ya que la fuerza
inica de las cargas negativas del fltro no
son lo sufcientemente intensas para des-
prender el agua del ion C pero s del ion B.
As que el ion c tiene un dimetro mayor que
el de B al tener su agua de hidratacin.
Entonces, la seleccin
de iones depende de: el
tamao de la luz del fltro,
la carga elctrica del fl-
tro, la carga elctrica del
ion y la substitucin del
agua de hidratacin por las
cargas del fltro.
Dependiente
de
Voltaje
Dependiente
de
Ligando
Dependiente
de estmulo
Elctrico
Permanentemente
Abiertos
La apertura y cierre de los canales se
debe a un cambio conformacional en la
estructura tridimensional del canal, este
proceso requiere de energa. As que se
gener varios mecanismos regulatorios
(que dependen de estmulos qumicos,
elctricos o mecnicos) que determinan
la cantidad de tiempo que el canal pasa
en uno de tres estados:
a) cerrado y activable o cerrado
b) abierto o activo
c) cerrado y no activable o inactivado
C l -
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Sensor
de Voltaje
Cambio
de Voltaje
Mecanismo de
Inactivacin
Partcula
Otros en cambio, estn normalmente cerrados y su
apertura puede ser por tres mecanismos:
El primero de ellos es por cambios en la dife-
rencia de cargas elctricas en ambos lados de la mem-
brana, a estos, se les llama canales voltaje dependien-
tes y son importantes en la generacin del potencial
de accin. Los canales voltaje dependientes tienen en
su estructura una secuencia de aminocidos con carga
positiva llamada detector de voltaje. El cambio en la
diferencia de potencial elctrico en ambos lados de la
membrana provoca el movimiento del sensor. El mov-
imiento del sensor de voltaje crea un movimiento de
cargas (llamado corriente de compuerta) que cambia
la energa libre que modifca la estructura terciaria del
canal abrindolo o cerrndolo. Algunos de estos cana-
les tienen un estado refractario conocido como inac-
tivacin cuyo mecanismo esta dado por una subunidad
independiente de aquellas responsables de la apertura
y cierre. Hay canales de calcio voltaje dependiente que
se inactivan con el propio calcio.
Al-
gunos
de estos canales estn perman-
entemente abiertos, se llaman no
voltaje dependientes ya que varios
tipos de iones pueden cruzar a
travs de ellos y son fundamentales
para establecer el potencial de
membrana.
P
ABIERTO
CERRADO
IONOTRPICOS
METABOTRPICOS
El segundo mecanismo de apertura es por la
interaccin de una substancia qumica (neu-
rotransmisor u hormonas) con una parte del
canal llamado receptor, esto crea un cambio
en la energa libre que cambia la confor-
macin de la protena abriendo el canal.
Estos canales son llamados ligando depen-
dientes y son importantes en la transmisin
sinptica. Los ligando dependientes tienen
dos mecanismos de apertura: por unin del
neurotransmisor al receptor asociado al
canal se llama ionotrpicos; y por unin del
neurotransmisor al receptor que no est
asociado al canal y que provoca una cascada
de eventos enzimticos por la activacin de
protenas G y que activan enzimas fosforila-
doras que fosforilan al canal y lo abre. Estos
se llaman metabotrpicos. Ambos subgrupos
tambin tienen un estado de refractario
llamado desensibilizacin cuando se expone
el receptor por tiempo prolongado al neuro-
transmisor.
El tercer mecanismo consiste
en que los canales se abren por
desplazamientos mecnicos de la
membrana (ejemplo clulas recep-
toras ciliadas).
P
COOH
I II III IV
Nh2
S1
S2
S3
S4
S5
S6
P
sensor de
voltaje
filtro
Un ejemplo es el canal de sodio. Tienen cuatro
subunidades estructurales (I a IV). Cada una de
ellas con seis segmentos hidrofbicos transmem-
branales (S1 a S6), conectados por segmentos
intracelulares y extracelulares. S4, debido a la
presencia de residuos cargados positivamente
(lisina, arginina), son el sensor de voltaje. Los
segmentos S5 y S6 estn conectados por un
tramo largo en forma de asa, llamado H5 o P,
cuya importancia reside en que los aminocidos
que lo forman son , junto con los segmentos P
de las otras tres subunidades, los que forman el
poro del canal.
La corriente se inactiva rpidamente
por una partcula que bloquea la salida. La regin
responsable de este mecanismo es el segmento
entre las subunidades II y IV, residuos cargados
positivamente impulsados por el gradiente elc-
trico durante la despolarizacin.
ESTRUCTURA
Para
medir
las corrientes inicas a travs de un
canal especfco se utiliza un electrodo
especial llamado micropipeta. Esta
hecha de un tubo capilar de vidrio
el cual se calienta y se estira. Esto
permite que el tubo tenga una punta
de una micra de dimetro sin perder
su luz. Se llena con una solucin inica
conductora de electricidad. La micro-
pipeta se conecta a un amplifcador.
Para completar el circuito elctrico,
se conecta la tierra del amplifcador
al lquido extracelular. Las clulas se
colocan en una cmara de registro y se
baa el tejido con un lquido cerebroe-
spinal artifcial.
I
Tiempo
Corriente Unitaria
La punta de la pipeta se pega a la
membrana de una neurona. La punta
de la pipeta abarca un pedazo de la
membrana de ah el nombre de esta
tcnica de Patch-Clamp, este pedazo
de membrana contiene varios cana-
les para distintos iones, para aislar
funcionalmente a los canales para un
solo ion se usan drogas que bloquean a
los que no se necesitan registrndose
la corriente de uno solo. La corriente
inica que pasa a travs de un solo
canal se llama corriente unitaria y
siempre es de la misma intensidad. La
suma de varias corrientes unitarias es
lo que aumenta la intensidad de la cor-
riente de toda la membrana.
I
Tiempo
Cuando la boca de la micropipeta queda
pegada a la membrana se forma un sello
de mucha resistencia (no se escapan los
iones entre el vidrio de la pipeta y la
membrana) y al hacer succin, la mem-
brana se perfora teniendo al confgu-
racin que se llama Whole Cell. En esta
condicin el interior de la micropipeta
est en contacto con el interior de la
clula. As que el amplifcador puede
registrar la corriente de todos los ca-
nales inicos de la clula. Para aislar la
corriente de aquellos que nos interesa,
bloqueamos las otras ya sea con toxinas
o molculas que bloquean dichos canales.
CORRIENTES DE POTASIO
Potencial de
Membrana
Corriente
Inica
+50 mV
0 mV
-50 mV
Para poder entender bien el funcionamiento
de los canales ionicos, debe registrarse la
corriente que cruza a traves de ellos en cada
valor del potencial de membrana. Esto implica
un problema y es que cuando se despolariza la
membrana hasta su valor del potencial umbral,
se desencadena el potencial de accin. Este es
autoregenerativo, es decir, una vez que inicia
ya no se puede parar y por lo tanto no nos per-
mite registrar las corrientes. En la confgura-
cin de whole-cell se registran las corrientes
de todos los canales (macroscpicas) a dife-
rencia del patch-clamp que registra la corri-
ente de uno o varios canales (microscpicas).
La tcnica de fjacin de voltaje
consiste en que el experimentador
determina el valor de despolarizacin de
la membrana y el amplifcador registra el
valor de despolarizacin de la clula. Si
hay una diferencia entre lo que el exper-
imentador quiere y lo que la clula tiene,
entonces a travs del mismo electrodo
manda corriente positiva o negativa de
la intensidad necesaria para mantener
a la clula en el valor que el experimen-
tador decidi. Esta tcnica nos permite
mantener a la clula en un voltaje fjo y
registra las corriente inicas que apare-
cen a ese voltaje.
Potencial de Membrana (Vm)
-70 mV
-60 mV
Corriente de Membrana (Im)
Corriente
Capacitiva
Corriente
de Fuga
i AAAAH, QUE RICO!
iAH!
OK
Si se despolariza la
membrana a un valor del
potencial de membrana
10mV ms despolarizado,
se puede observar varios
eventos. Primero una
pequea corriente sa-
liente la cual disminuye
sin llegar a cero y que se
mantiene todo el momento
en que se fja el valor del
potencial de membrana.
Cuando se deja de estimu-
lar, se genera una pequea
corriente entrante. A las
corrientes entrantes y
saliente se les llama cor-
rientes capacitivas (por
la acumulacin de cargas
en ambos lados de la membrana, como un capacitor) y a la que se mantiene estable se le llama de fuga.
Esta corriente es causada por la movilizacin de iones a travs de los canales que son permanentemente
abiertos y que son los responsables del potencial de reposo.
TCNICA DE
FIJACIN DE VOLTAJE
C
O
R
R
IE
N
T
E
C
A
P
A
C
IT
IV
A
Y
D
E
F
U
G
A
Vm
10 mV
-70 mV
Im
Corrientes
Resistivas
Entrante
Saliente
iUHIIIi
Si obligamos a la clula a
mantenerse despolarizada a
valores mayores del potencial
umbral. Las corrientes regis-
tradas son mas complicadas.
Primero las corrientes capac-
itivas y de fuga aumentan su
intensidad y segundo surgen
otras corrientes que se gen-
eran a travs de los canales
voltaje dependientes y se lla-
man corrientes resistivas. La
primera corriente resistiva
que aparece es una entrante
que alcanza su mximo en
unos cuantos milisegundos y
despus decae para dar lugar
a otra corriente saliente.
Esta alcanza su mximo y se
mantiene ah hasta que se
deja de estimular a la clula.
Estas corrientes resistivas
estn dadas por los iones que
cruzan por los canales voltaje
dependientes, quimiodependi-
entes, o mecanodependientes.
Hasta ahora con la tcnica de
fjacin de voltaje se han dis-
ecado las corrientes a travs de
la membrana, generadas por la
estimulacin de la clula. Estas
corrientes son la capacitiva, resis-
tiva y de fuga. Para disecar mas la
corriente resistiva y poder deter-
minar con precisin que ion esta
implicado en la corriente entrante
y saliente se pueden utilizar
tcnicas farmacolgicas. Estas
consisten en aplicar a la clula
toxinas o frmacos que bloquen
los distintos canales inicos. Por
ejemplo para bloquear los canales
de sodio se utiliza la tetradotoxina
(toxina del pez globo), para los de
potasio esta la alfa-bungarotoxina
(toxina de una especie de sapo)
o tetraetilamonio (TEA), etc. Por
lo tanto con la tcnica de fjacin
de voltaje se puede utilizar las
distintas drogas bloqueadoras para
ver la participacin de cada ion en
las corrientes entrantes y salien-
tes ya descritas.
CORRIENTES RESISTIVAS
Entrante
Saliente
I= g V
Vm
Vm
Im
Im
Vm
Im
Vm
Im
c
o
n
d
u
c
t
a
n
c
i
a

(
g
)
Conductancia
constante
Conductancia
variable por
compuertas
iUHIIIi
Si se grfca la corriente que
cruza la membrana celular en cada
valor de potencial de membrana, se
construye lo que se llama una curva
corriente/voltaje o I/V. Los valores
negativos de corriente indica que la
corriente est entrando a la clula
si por el contrario son positivos,
entonces la corriente esta saliendo
de ella. La pendiente de la curva es
igual a la conductancia (segn la ley
de ohm escrita en trminos de con-
ductancia I= Vg). Hay canales cuya
corriente se comporta en forma
lineal con el gradiente de potencial
elctrico ya que la conductancia es
fja, como los canales permanente-
mente abiertos. Sin embargo, hay
canales que no se comporta as ya
que su conductancia no es constante
con respecto al voltaje, a la con-
centracin de substancias como
neurotransmisores o a la intensidad
del estmulo mecnico, como los
canales que tienen mecanismos de
compuerta. Hay canales que condu-
cen la corriente mas en un sentido
de la membrana (por ejemplo hacia
el interior de la clula) que hacia el
otro, a estos se les llama canales
rectifcadores.
Vm
Im
Potencial de
inversin donde
la Im es de cero
Im saliente que
hiperpolariza
Im entrante que
despolariza
El valor de voltaje donde se inicia
la corriente, es el potencial de
membrana donde se activa esa
corriente. El valor del potencial
de membrana donde la corriente
se vuelve de entrante a saliente o
viceversa, es decir se invierte, se
le llama potencial de inversin. Lo
importante de este punto es que es
sumamente estable, la membrana
siempre tiende hacia ese punto.
Por ejemplo, si el valor del poten-
cial de membrana es mas nega-
tivo que este punto, la membrana
responde generando una corriente
entrante que despolariza a la
membrana regresando el potencial
de membrana al de inversin. Por
otro lado, si el valor del potencial
de membrana es mas positivo que
este punto, la membrana gen-
era una corriente saliente que la
hiperpolariza y regresa el valor del
potencial de membrana al de inver-
sion. Cuando la clula se encuentra
en el potencial umbral, la corriente
es de cero. Esta es, que el valor
del potencial de inversin es el
mismo que el potencial de equilibrio
para el ion y que se calcula con la
ecuacin de Nerst.
MEDICIN DE LAS CORRIENTE
Y LEY DE OHM