BIOTECNOLOGA ENZIMTICA Y BIOTRANSFORMACIONES DE INTERS INDUSTRIAL

Descripcin:
Las enzimas, como catalizadores biolgicos, poseen una serie de caractersticas muy interesantes para la
Industria: tienen una elevada especificidad, trabajan en condiciones suaves, son fcilmente accesibles y
no alteran el medio ambiente. Por todas estas razones, estos biocatalizadores se estn utilizando en la
industria alimentaria, de detergentes, productos qumicos, farmacuticos y de diagnstico.

En muchos casos, los procesos enzimticos han demostrado ser muy competitivos y eficaces a gran
escala. Nuestra tecnologa ofrece la posibilidad de realizar una biotransformacin con el objetivo de
obtener el producto que interesara al cliente.
Cmo funciona?:
Fig. 1: proceso de obtencin de enzimas
Las enzimas se obtienen de microorganismos (bacterias,
hongos o levaduras) seleccionados por screening y,
posteriormente, cultivados por fermentacin (en matraz
o reactor). A partir de los caldos de cultivo se procede a la
purificacin de la enzima que cataliza la reaccin de
inters. La purificacin se lleva a cabo mediante tcnicas
cromatogrficas y se utilizan tcnicas de concentracin.

Una vez purificada, se procede a su caracterizacin
estructuralmediante tcnicas electroforticas,
MALDI-TOF, ultracentrifugacin analtica, estudios de
espectroscopa. La caracterizacin funcional se realiza
mediante estudios de estabilidad y actividad frente al pH y
la temperatura, as como estudios de especificidad de
sustrato y determinacin de los mecanismos cintico y
qumico y de estabilidad en las condiciones de trabajo.
Los datos obtenidos permiten abordar estudios de ingeniera de protenas mediante tcnicas de
mutagnesis dirigida, con vistas a su utilizacin industrial en biorreactores enzimticos.
Por otra parte, se procede al aislamiento, clonacin y secuenciacin del gen que codifica la enzima, lo que
permite su obtencin en grandes cantidades as como llevar a cabo estudios de ingeniera de protenas.
Si la clonacin e hiperexpresin en Escherichia coli falla por peculiaridades del genoma o necesidad de
procesamientos postraduccionales, se utilizan otros sistemas de clonacin y expresin puestos a punto en
nuestro laboratorio, disponemos de sistemas de clonacin y expresin en Streptomyces lividans yPichia
pastoris.
Tanto la enzima salvaje como la enzima clonada y los posibles mutantes con propiedades notablemente
mejoradas se inmovilizan para su posterior recuperacin y reutilizacin en el proceso. La inmovilizacin se
lleva a cabo mediante diferentes metodologas adaptadas al proceso industrial: atrapamiento en geles,
microencapsulacin, reticulado con reactivos bifuncionales, adsorcin y unin covalente a soportes
inorgnicos u orgnicos. A continuacin se procede a la optimizacin del proceso de inmovilizacin con el fin
de obtener un biocatalizador de aplicacin industrial. Por ltimo se determinan las condiciones ptimas del
proceso biocatalizado: determinacin del pH y temperatura ptimas, estabilidad frente a pH y temperatura,
determinacin de parmetros cinticos y reutilizacin en reacciones sucesivas.
Ventajas:
Mediante los sistemas de expresin desarrollados se puede obtener cualquier enzima de inters industrial
y/o farmacolgico en grandes cantidades, con lo que los costes del proceso se abaratan. La novedad radica
en la disposicin de sistemas no convencionales de clonacin y expresin que permiten producir enzimas y
otras molculas que no se pueden obtener utilizando E. coli, como es el caso de las producidas por
Actinomicetos, microorganismos fuente de una gran variedad de compuestos de inters industrial y/o
farmacolgico.
La inmovilizacin es una tecnologa que permite la obtencin de derivados enzimticos ms estables que la
enzima en solucin, y que pueden ser reutilizados varias veces. Tambin permiten el diseo de reactores de
fcil manejo y control. La novedad es la utilizacin de soportes activados que permiten la inmovilizacin
covalente multipuntual de las enzimas, lo que supone un incremento muy notable de su estabilidad, as
como el mantenimiento de la actividad tras sucesivos ciclos puesto que no se produce su desorcin.
Las enzimas son biocatalizadores muy especficos, presentan una elevada actividad cataltica y actan a
temperaturas moderadas y presin atmosfrica. Adems, las reacciones en medios orgnicos presentan
numerosas ventajas frente a los medios acuosos: aumentan la solubilidad de algunos reactivos, los
productos se pueden aislar con mayor facilidad, la estabilidad enzimtica puede estar incrementada, no hay
contaminacin bacteriana, etc.
El poder producir enzimas en gran cantidad y disponer de ellas en una forma estable y reutilizable reducira
los costes de produccin de cualquier proceso, que al utilizar estos biocatalizadores no generara las
sustancias qumicas contaminantes que suelen acompaar a los procesos qumicos. Esto no slo abaratara
los costes de produccin por no tener que aplicar mtodos de descontaminacin, sino que adems el
proceso en s mismo supone una mejora medioambiental.
Dnde se ha desarrollado?:
Esta tecnologa se desarrolla en el Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular I de la Facultad
de Ciencias Biolgicas. El equipo investigador posee una amplia experiencia en las metodologas descritas
y ha trabajado con diferentes enzimas (celulasas, lipasas, D-aminocido oxidasa, penicilin acilasas) de
aplicacin industrial.
La investigacin del grupo tiene como objetivo las enzimas implicadas en procesos industriales.
Y adems:
Se buscan empresas de la industria alimentaria, de detergentes, productos qumicos, farmacuticos y de
diagnstico que deseen obtener grandes cantidades de un biocatalizador concreto en biorreactores
enzimticos, en un proceso de bajo coste econmico.
El grupo de investigacin de Biotecnologa Enzimtica de la UCM ofrece su experiencia y sus conocimientos
para realizar un estudio completo y optimizar enzimas de inters industrial: produccin, aislamiento,
purificacin y caracterizacin de las enzimas a partir de microorganismos productores; aislamiento,
clonacin y secuenciacin de los genes que las codifican; hiperexpresin en microorganismos hospedadores;
ingeniera de protenas e inmovilizacin de las enzimas y optimizacin de las condiciones de trabajo en
biorreactores enzimticos. El grupo puede desarrollar cualquier enzima para empresas interesadas en
obtener biocatalizadores para cualquier campo de aplicacin.
http://www.ucm.es/info/otri/complutecno/fichas/tec_cacebal1.htm