Manual de Procedimientos

de
Anlisis de Agua

Nota: Se recomienda que estos procedimientos sean actualizados con el Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 21st Edition (APHA/AWWA)





martes 28 de septiembre de 2010
Ultima revisin: Enero 2001

Preparado y Revisado por: Ing. Germn Enrique Padilla Daz, Ing. Azucena Espinales Martnez
& Tc. Jos Rivera




Managua, Nicaragua











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Tabla de Contenido
1. METODOS DE ANALISIS VOLUMETRICOS 1.4
1.1 ALCALINIDAD 1.4
1.2 CLORUROS [Mtodo argentomtrico] 1.6
1.3 DUREZA TOTAL 1.7
1.4 CALCIO 1.9
1.5 MAGNESIO (Determinacin por diferencia) 1.10
1.6 SULFUROS (METODO YODOMETRICO) 1.11
1.7 DETERMINACION DE CLORO 1.13
1.8 OXIGENO DISUELTO (METODO DE MODIFICACION DE AZIDA) 1.14
2. METODOS DE ANALISIS COLORIMETRICOS 2.15
2.1 ALUMINIO (CIANURO ERIOCROMO R.) 2.15
2.2 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO) 2.21
2.3 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO) 2.23
2.4 HIERRO TOTAL (O - FENANTROLINA) 2.24
2.5 FLUOR (SPADNS) 2.25
2.6 NITRITOS (DIAZOTIZACION) 2.26
2.7 NITRATOS ( METODO DE LA BRUCINA) 2.27
2.8 NITRATOS ( M. Ultravioleta) 2.29
2.9 FOSFATO Soluble ( A. VANADOMOLIBDOFOSFORICO) 2.32
2.10 COMPUESTOS FENOLICOS (4-AMINOANTIPIRINA) 2.33
3. METODOS DE ANALISIS POTENCIOMETRICOS 3.36



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3.1 PH 3.36
3.2 CONDUCTIVIDAD ELECTRICA 3.38
3.3 NITRATOS 3.39
3.4 POTASIO 3.41
3.5 SODIO 3.43
3.6 TURBIEDAD 3.44
4. METODOS DE ANALISIS PARA DEMANDAS 4.45
4.1 DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (ENSAYO DE 5 DIAS) 4.45
4.2 DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO 4.48
5. METODOS DE ANALISIS BACTERIOLOGICOS 5.50
5.1 COLIFORMES FECALES - Mtodos de Tubos Mltiples 5.50
5.2 COLIFORMES FECALES - FILTRO DE MEMBRANA 5.52
6. BALANCE DE ANIONES Y CATIONES 6.53
7. ELABORACION DE CARTAS DE CONTROL 7.54
8. METODOS DE ANALISIS DE PUREZA DE PRODUCTOS QUIMICOS 8.56
9. BIBLIOGRAFIA 9.57
10. RECONOCIMIENTOS 10.57




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1. METODOS DE ANALISIS VOLUMETRICOS
1.1 ALCALINIDAD
1.1.1 Indicadores a utilizar

Fenolftalena en solucin alcohlica al 5% (ph = 8.3)- Pesar 5 g de fenolftalena y disolverlos en
500 ml de etanol y 500 ml de agua destilada.

Indicador mixto (ph = 4.6): Pesar 0.02 g de rojo de metilo y 0.1 g de Verde bromocresol y llevar a
100 ml con alcohol etlico o isoproplico al 95%. Este indicador d sucesivamente las coloraciones
siguientes:

azul verde ph 5.2
azul espliego ph 5
rosa gris ph 4.8
rosa claro ph 4.6

1.1.2 Acido sulfrico 0.02 N
Medir 28 ml de H
2
SO
4
concentrado, agregarlo en un baln de 1000 ml de agua destilada y llenar
hasta la marca con agua destilada. Luego de esta solucin medir con una pipeta volumtrica 20 ml
de la solucin H
2
SO
4
0.1 N echando en un baln de 1000 ml y llenar con agua destilada hasta la
marca o graduacin. La solucin de H
2
SO
4
queda al 0.02 N.

1.1.3 Procedimiento de anlisis:

Medir 50 ml de muestra usando pipeta volumtrica, agregar de 2 a 3 gotas de fenolftalena, si se
desarrolla un color rosa titular con H
2
SO
4
0.02 N hasta que la solucin sea incolora (anotar el
volumen gastado de titulante como V
fenolf
).

Aadir de 2 a 3 gotas de indicador mixto y seguir titulando con H
2
SO
4
0.02 N hasta tono entre
rosa gris y rosa claro (anotar el volumen gastado como V
tot
).

Efectuar los clculos como se denota a continuacin.









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1.1.4 Clculos:

alcalinidad total como CaCO3 (mg/l) = ( Vtot * NH2SO4*1000 * 50.04)/ Vm

alcalinidad total meq/litro = alc total mg/l / 50.04

HCO3 mg/l = Vtablas * N
H2SO4
*1000*61.02/Vmuestra

CO3 mg/l = Vtablas *N
H2SO4
*1000*30/Vmuestra

OH mg/l = Vtablas * N
H2SO4
*1000*17.01/Vmuestra

A partir de las relaciones de alcalinidad se pueden determinar las especies presentes considerando
lo siguiente:

Determinacin de V
TABLA
TITULACION OH
-
CO
3
2-
HCO
3
-


F=0 0 0 T
F<1/2 T 0 2F T - 2F
F= T 0 2F 0
F> T 2F - T 2(T- F) 0
F=T T 0 0
F: volumen de cido sulfrico 0.02 N gastado en neutralizar la coloracin roja que se produce al
agregar indicador de fenolftalena a la muestra cuando sta presenta pH mayor a
aproximadamente 8.3. F es solamente el volumen de cido sulfrico que se gast en neutralizar el
color rojo y volver transparente la muestra T: volumen de acido sulfrico total gastado hasta el
viraje a un pH aproximado de 4.5, incluye el volumen de acido sulfrico gastado en la
neutralizacin de la coloracin rojo a la fenolftalena, en caso que hubiera.
1.1.5 Estandarizacin del H
2
SO
4
0.02 N
Se prepara una solucin de Na
2
CO
3
0.02 N con agua destilada libre de CO
2
, es decir, previamente
hervida y dejada enfriar a temperatura ambiente. De la solucin anterior se toman 10 mls y se
valora el cido sulfrico.
El carbonato de sodio debe ser secado a 270 - 300C por 2 horas. Se pesan 1.06 gr exactamente y
se diluye a 1 litro. Utilizar el volumen total gastado como V
1 .
El clculo es el siguiente: N
1
= 10 * 0.02 / V
1

Se aconseja usar N con 5 decimales.


ULTIMA MODIFICACION: 29 mayo de 2006






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1.2 CLORUROS [Mtodo argentomtrico]

1.2.1 REACTIVOS

Soln indicadora de cromato potsico: Disolver 50 g de K
2
CrO
4
en un poco de agua
destilada. Agregar sol de AgNO
3
hasta formarse un precipitado rojo. Dejar reposar por
12 horas, filtrar y diluir a 1 litro con agua destilada.
Titulante de nitrato de plata 0.0141 N: Disolver 2.395 g de AgNO
3
en agua destilada y
diluir a 1000 ml.
Cloruro de sodio patrn 0.0141 N: Disolver 0.824 g de NaCl (secado a 140C) en agua
destilada y diluir a 1000 ml (1 ml=500g Cl
-
).

1.2.2 PROCEDIMIENTO

Se toma 50 ml de muestra medidas usando una pipeta volumtrica.
Titular con AgNO3 (Nitrato de Plata) usando como soln. indicadora dicromato de potasio
(K2 CrO4 ) hasta un punto final amarillo rosado (color zapote) el cual debe aplicarse en
todos los anlisis. Correr un blanco de reactivos siempre.
Efectuar clculos.

1.2.3 Clculos:
1) mg Cl
-
/L = (A - B) *N*35450 / Volumen de muestra, ml
2 ) mg Cl
-
/L = (A - B) * 9.9969
En caso de utilizarse 50 ml de muestra y la normalidad del Nitrato de plata sea 0.0141 N emplear
la ecuacin 2).

A = volumen de valoracin de muestra, ml
B = volumen de valoracin de blanco, ml
N = normalidad de AgNO
3



ULTIMA MODIFICACION: 31 mayo de 2006








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1.3 DUREZA TOTAL

[METODO TITULOMETRICO DE EDTA]

1.3.1 PREPARACION DE REACTIVOS

1. Soln Bufer: Disolver 16.9 g de NH
4
Cl ( cloruro de amonio) en 143 ml de hidrxido de
amonio (NH
4
OH) conc. Agregar 1.25 g de EDTA de magnesio y diluirlo en 250 ml.
2. En caso de no estar disponible el EDTA magnsico, disolver 1.179 g de EDTA de sodio
dihidrato y 0.78 g de sulfato de magnesio 7 hidrato (MgSO
4
7 H
2
O) o 0.644 g de cloruro
de magnesio 6 hidrato (MgCl
2
6H
2
O) en 50 ml de agua destilada, esta porcin debe
mezclarse con 16.9 gr de NH
4
Cl (cloruro de amonio) en 143 ml de hidrxido de amonio
(NH
4
OH) conc y diluir a 250 ml con agua destilada. Ambas soluciones (1 y 2) deben
almancenarse en recipiente plstico o de borosilicato durante un perodo no superior a un
mes.
3. Titulante EDTA 0.01 M (0.02 N): Pesar 3.723 g de etilendiaminotetracetato disdico
dihidrato y disolver en 1000 ml de agua destilada.
4. Sol Negro Eriocromo Negro T : pesar 0.5 g y disolver en 100 g de trietanolamina o
etilenglicol monometil ter. Agregar 2 gotas por 50 ml de muestra.

1.3.2 PROCEDIMIENTO

Medir 50 ml de muestra y agregar entre 1 y 2 ml de bufer para ajustar el pH entre 10 y
10.1.

Agregar 1 o 2 gotas de soln indicadora de Eriocromo Negro T.

Titular poco a poco con soln. de EDTA 0.02 N, hasta un viraje de color azul.

Nota: En caso de que se conozca que el agua tiene valores bajos de dureza, se recomienda usar
volmenes mayores.

1.3.3 CALCULO

1) Dureza como mg de CaCO
3
/L = A* N * 1000*50.04/ volumen de muestra
2) Dureza como mg de CaCO
3
/L = A* 20.016 , Cuando se utilizan 50 ml de muestra y la conc. de
EDTA es 0.02 N.



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A= volumen gastado de EDTA
N= N
EDTA-Na2


1.3.4 PROCEDIMIENTO DE ESTANDARIZACION DEL EDTA 0.02 N

Pesar 2.467 g de MgSO
4
7H
2
O y diluir a 1 litro exactamente, esto producir una solucin 0.02 N
de la cual se toman 10 mls para valorar la solucin de EDTA cuyo valor terico es 0.02 N.
El clculo a realizarse es el siguiente:
V
1
N
1
= V
2
N
2


por lo tanto : N
1
= 10 * 0.02/ V
1

Se aconseja usar 5 decimales para N
1
.



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1.4 CALCIO

METODO TITULOMETRICO DE EDTA

1.4.1 PREPARACION DE REACTIVOS

Indicador murexida : Disolver 150 mg del indicador en 100 g de etilenglicol absoluto.
Debido a que las soluciones acuosas no son estables ms de un da se recomienda
alternativamente preparar una mezcla de 200 mg de murexida y 100 g de NaCl,
triturandola hasta 40 - 50 mesh.
Hidrxido de sodio 1 N: Pesar 40 gr de NaOH en lentejas y diluirlos en 1000 ml de agua
destilada.
Soln. de EDTA 0.01 M (0.02N): Pesar 3.723 g de etilendiaminotetracetato disdico
trihidrato en 1000 ml de agua destilada. Equivalencia 400.8 g Ca = 1 ml.

1.4.2 PROCEDIMIENTO

Medir 50 ml de muestra con pipeta volumtrica.
Agregar 2 ml de NaOH 1 N para ajustar el ph entre 12 y 13 .
Agregar 0.1 a 0.2 g de la mezcla de indicador (o de 2 a 3 gotas).
Titular con EDTA 0.02 N agitando continuamente hasta un cambio de color de rosa a
prpura.

1.4.3 CALCULOS

mg Ca
2+
/ L = A * N * 20.04*1000/Ml muestra
mg Ca
2+
/ L = A *8.016, en caso de utilizarse 50 ml de muestra y que la conc. del EDTA sea 0.02
N.


A = volumen gastado de EDTA
N = N
EDTA-Na2



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1.5 MAGNESIO (Determinacin por diferencia)

METODO POR DIFERENCIA (Por clculo)


El magnesio puede calcularse como diferencia entre la dureza y el calcio como CaCO
3
, si los
metales que interfieren estn presentes en concentraciones mnimas en la titulacin del calcio.
Cmo efectuar clculos

A partir de los volmenes obtenidos en la titulacin de Dureza total y calcio, se procede a
introducirlos en la frmula de abajo:

Mg
++
(MG/L)= (V
DUREZA T
- V
CALCIO
) * 1000*12.16*N
EDTA
/V
MUESTRA


V
DUREZA
: volumen de EDTA gastado para dureza
V
CALCIO : VOLUMEN DE EDTA GASTADO PARA CALCIO

N
EDTA : NORMALIDAD DEL EDTA DE SODIO
V
muestra :
Volumen de muestra utilizado en la titulacin de la Dureza T. y el Calcio



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1.6 SULFUROS (METODO YODOMETRICO)
1.6.1 Preparacin de Reactivos

Acido clorhdrico 6 N : Diluir en relacin 1:1 cido clorhdrico conc. en agua destilada.
Solucin estandar de yodo, 0.025 N: disuelva 20 a 25 g KI en un poco de agua y agregue
3.2 g de yodo. Despus que el yodo se ha disuelto, diluir a 1000 ml y estandarizar contra
0.025 N de Na
2
S
2
O
3
, usando solucin de almidn como indicador.
Solucin Standar de tiosulfato de sodio, 0.025 N : disolver 6.205 g de Na
2
S
2
O
3
5H
2
O en
agua destilada. Agregar 1.5 ml 6N de NaOH o 0.4 g de NaOH slido y diluya a 1000 ml.
Estandarizar con solucin de biyodato.
Solucin estandar de biyodato de potasio, 0.0021 M: disolver 812.4 mg KH(IO
3
)
2
en agua
destilada y diluir a 1000 ml.

1.6.2 ESTANDARIZACION DEL TIOSULFATO DE SODIO:

Disolver aproximadamente 2 g KI en agua libre de yodato en un erlenmeyer con 100 a 150 ml de
agua. Agregar 1 ml de H
2
SO
4
6 N o unas pocas gotas de H
2
SO
4
conc y 20 ml de solucin estandar
de bi-yodato. Diluir a 200 ml y titular el yodo liberado con titulante de tiosulfato, agregando
solucin de almidn al punto de vire, cuando se forme un amarillo plido. Cuando las soluciones
son de la misma fuerza 20 ml de 0.025 M de tiosulfato de sodio son usados.
1.6.3 PROCEDIMIENTO DE ANALISIS:

Medir desde una bureta en un baln de 500 ml una cantidad de solucin de yodo estimada
a exceder la cantidad de sulfuro presente.
Agregar agua destilada, si es necesario, para completar el volumen a 20 ml y agregar 2
ml de Hcl 6N.
Pipetear 200 ml de muestra en un baln descargando la muestra bajo la superficie de la
solucin. Si el color del yodo desaparece, agregue ms yodo hasta que el color se
mantenga.
Valore por retroceso con solucin de Na
2
S
2
O
3
5H
2
O agregando pocas gotas de solucin de
almidn a medida que se aproxima el punto de vire, y contine hasta que desaparezca el
color azul.
1.6.4 CALCULO

Se debe tomar en cuenta la siguiente relacin: 1 mililitro de solucin de yodo 0.025N reacciona
con 0.4 mg S
2-
, donde:
mg S
2-
/L = [(A * B) - (C * D) ] * 16 000 / ML MUESTRA

A : volumen de solucin de yodo



PAG 1. 12











B : normalidad de la solucin de yodo
C : volumen de solucin Na2S2O3, y
D : normalidad de solucin de Na2S2O3



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1.7 DETERMINACION DE CLORO
METODO YODOMETRICO (Para Anlisis de Calidad de Hipoclorito de sodio comercial y
Demanda de Cloro)

1.7.1 Preparacin de Reactivos

1) Solucin Standar de tiosulfato de sodio, 0.025 N : disolver 6.205 g de Na
2
S
2
O
3
5H
2
O en agua
destilada y diluir a 1 L.
2) Cristales de KI (yoduro de potasio).
3 ) Acido actico conc.

1.7.2 Cristalera

Bureta de 25 ml
Baln aforado de 150 ml (1), de 100 ml (2), de 500 ml (1)
Beakers de 100 ml (4), de 400 ml (2)
Erlenmeyers de 125 ml (5)

1.7.3 PROCEDIMIENTO

Colocar en un baln de 150 ml de capacidad, 50 ml de agua destilada, adicionar 0.5 ml de
muestra de hipoclorito de sodio comercial y aforar a 150 ml.
Tomar 25 ml de la solucin de NaOCl diluida y colocarlos en un erlenmeyer de 200 ml.
Nota: En el anlisis de Demanda de cloro, los pasos 1 y 2 se reemplazan por la toma de
un volumen de la muestra a analizar (100 o 200 ml).
Agregar 5 ml de cido actico concentrado y agitar para lograr la acidificacin de la
muestra.
Agregar cristales de KI, yoduro de potasio. Agitar.
Titular la muestra hasta decoloracin total, usando como titulante tiosulfato de sodio
0.025 N.
1.7.4 CALCULO

MG/LITRO (CLORO) = A x 0.025 N x 35450 x 150/ 12.5
= A x 10635
A: volumen gastado de Na
2
S
2
O
3
5H
2
O



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1.8 OXIGENO DISUELTO (METODO DE MODIFICACION DE AZIDA)

1.8.1 Preparacin de Reactivos

Solucin de sulfato manganoso: Disolver 480 g de MnSO
4
4H
2
O, 400 g de MnSO
4
2H
2
O o
364 g de MnSO
4
monohidrato en agua destilada, filtrar y diluir a 1 litro. La solucin de
MnSO
4
no debe dar color con almidn cuando se agregue a una sol. acidificada de yoduro
potsico (KI).

Reactivo alcali/yoduro/azida: Para muestras saturadas o menos que saturadas: disolver
500 g de NaOH y 135 g NaI en agua destilada y diluir a 1 litro. Agregar 10 g NaN
3

disueltos en 40 ml de agua destilada.

Para muestras sobresaturadas: disolver 10 g NaN
3
en 500 ml de agua destilada. Agregar 480 g de
hidrxido de sodio y 750 g de yoduro de sodio (NaI) y agitar hasta disolucin.


Acido sulfrico conc. : 1 ml es equivalente a unos 3 ml de reactivo lcali-yoduro-azida.

Almidn: disolver 2 g de almidn soluble calidad laboratorio y 0.2 g de cido saliclico
como preservante en 100 ml de agua destilada caliente.

Titulante de tiosulfato de sodio patrn: disolver 6.205 g Na
2
S
2
O
3
5H
2
O en agua
destilada. Agregar 1.5 ml de NaOH 6 N o 0.4 g de NaOH slido y diluir a 1000
ml.
1.8.2 Procedimiento

A la muestra recogida en un frasco de 250 a 300 ml se agrega 1 ml de solucin de MnSO
4

y despus aadir 1 ml de lcali-yoduro-azida. Mezclar invirtiendo varias veces. Cuando
el precipitado se ha depositado a la mitad aproximadamente , se agrega 1 ml de H
2
SO
4

conc., para dejar un sobrenadante claro por encima del hidrxido de manganeso floculado.

Titular un volumen correspondiente a 200 ml de muestra original tras corregir la prdida
de muestra por desplazamiento con los reactivos. As para un total de 2 ml (1 ml de cada
uno) de MnSO
4
y reactivos lcali-yoduro-azida en un frasco de 300 ml, titulnse 200 x
300/ (300 - 2) = 201 ml.
Titular con Na
2
S
2
O
3
5H
2
O 0.025 M hasta color paja plido. Agregar unas gotas de
solucin de almidn y continuar valorando hasta la primera desaparicin del color azul.

1.8.3 Clculo
Para titular 200 ml de muestra: 1 ml Na
2
S
2
O
3
5H
2
O 0.025 M = 1 mg OD/L



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2. METODOS DE ANALISIS COLORIMETRICOS

2.1 ALUMINIO (CIANURO ERIOCROMO R.)
Metodo: CIANURO ERIOCROMO R.
2.1.1 Principio del Mtodo:

Al diluir una solucin de Aluminio con R Cianuro Eriocromo tamponada a un pH de 6.0, produce
un complejo de color rojo a rosado, que presenta una mxima absorcin a 535 nm. La intensidad
del desarrollo del color est influenciada por la concentracin de aluminio, tiempo de reaccin,
temperatura, pH, alcalinidad y concentracin de otros iones en la muestra. Para compensar el color
y la turbidez del aluminio, una porcin de muestra se mezcla con EDTA para proporcionar un
blanco. Las interferencias de Fe y Mn, dos elementos comnmente encontrados en el agua, se
elimina por la adicin de cido ascrbico. El rango ptimo de lectura del Aluminio, est entre 20 y
300 g/L, pero puede ser extendido hacia arriba por simple dilucin
2.1.2 Interferencias:

Pueden causar errores negativos, los iones Fluoruros y Polifosfatos, cuando la concentracin de
fluoruro es constante, el % de error disminuye con el aumento de la concentracin de Al, ya que la
concentracin de F
-
frecuentemente es conocida puede ser determinada directamente,
ajustndose a resultados que pueden ser obtenidos por la adicin de una cantidad conocida de
fluoruro a un grupo de estndares.

Una simple correccin puede ser determinada desde la familia de curva en la figura 3500-Al:1.
Para la eliminacin de la interferencia de los complejos de polifosfato est dado el siguiente
procedimiento. Los ortofosfatos en concentraciones menores de 10 mg/L no causan interferencias.
Las interferencias ocasionadas por un nivel de pequeas cantidades de alcalinidad es eliminada
precisamente por la acidificacin de la muestra, despus del punto de neutralizacin del
metilnaranja. Los sulfatos no interfieren hasta una concentracin de 2000 mg/L.

Mnima Concentracin Detectable:

La mnima concentracin de aluminio detectable por este mtodo en ausencia de fluoruros y
complejos de fosfatos es aproximadamente 6 g/L.

2.1.3 Manipulacin de la Muestra:

Las muestras son colectadas en limpio en frascos lavados con cidos, preferiblemente plsticos, los
cuales son examinados tanto como sea posible, antes de la coleccin. Si se va a determinar
nicamente el aluminio soluble, filtrar una porcin de la muestra a travs de un filtro de membrana
de 0.45 um, desechar los primeros 50 ml de filtrado y utilizar el filtrado sucesivo para la



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determinacin. No se debe utilizar filtros de papel, algodn absorbente vasos de vidrio para
filtrar cualquier solucin que puede estar contaminada con aluminio, porque ellos removern parte
de el aluminio soluble:

2.1.4 APARATOS


Equipo Colorimtrico: Se requiere uno de los siguientes:


Espectofotmetro, para ser utilizado a 535 nm, con un haz de luz de 1 cm de longitud.


Filtro fotomtrico, que proporciona un haz de luz de 1 cm de largo y equipado con un filtro verde
con una mxima trasmitancia entre 525 y 535 nm.

Tubos Nesler, de 50 ml de forma alta y esmerilada.

Cristalera: Tratar toda la cristalera calentando con 1 + 1 HCL y enjuagando con agua destilada
libre de aluminio para evitar errores debido al material absorbido en el vidrio. Enjuague
suficientemente para remover todo el cido.

2.1.5 REACTIVOS

Utilizar reactivos bajos en aluminio y agua destilada libre de aluminio.

Solucin Stock de Aluminio

Utilizar cualquiera de los dos, el metal (1) la sal (2), para preparar una solucin stock: 1.00 ml =
500 ug Al.

1) Disolver 500 mg de aluminio metlico en 10 ml de HCL concentrado con
calentamiento suave. Diluir a 1000 ml con H
2
O destilada

2) Disolver 8.791 g de sulfato potsico de aluminio (tambin llamado aluminio potsico),
AlK (SO
4
)
2
. 12 H
2
O, en agua y diluir a 1000 ml. Corregir este peso por la divisin de la fraccin
decimal de la aleacin AlK (SO
4
)
2
. 12 H
2
O,en el reactivo utilizado.

Solucin Standard de Aluminio:

Diluir 10 ml de solucin stock de aluminio a 1000 ml con agua destilada: 1.00 ml = 5.00
ug/Al. Preparar diariamente.


Acido Sulfrico: H
2
SO
4
, 0.02N y 6N



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Solucin de Acido Ascorbico:

Disolver 0.1 g de cido ascrbico en agua y enrasar a 100 ml en un frasco volumtrico.
Preparar diariamente.

Reactivo Buffer:


Disolver 136 g de acetato de sodio, NaC
2
H3O
2
.3H
2
O en agua destilada, aadir 40 ml 1N
de cido actico y diluir a 1 litro.

Solucin Stock de Color:

Utilizar cualquiera de los siguientes productos:

Cianuro Solocromo R-200* Cianuro Eriocromo. Disolver 100 mg en agua y diluir a 100 ml en
un frasco volumtrico. Esta solucin debe tener un pH cerca de 2.9.

Cianuro Eriocromo R. Disolver 300 mg de colorante en aproximadamente 50 ml de agua
destilada. Ajustar pH desde 9 hasta 2.9 con una proporcin 1 + 1 cido actico (aproximadamente
3 ml sern requerido). diluir con agua destilada a 100 ml.

Cianuro Eriocromo R. Disolver 150 mg en aproximadamente 50 ml H
2
O destilada. Ajustar pH
desde 9 hasta 2.9 con 1 + 1 cido actico (aproximadamente 2 ml sern requerido). Diluir con
H
2
O destilada hasta 100 ml.

Esta solucin stock tiene una estabilidad excelente y puede ser almacenada hasta por un ao.

Solucin coloreada de Trabajo:

Diluir 10.0 ml de la solucin stock coloreada seleccionada a 100 ml en un frasco
volumtrico con agua destilada. Las soluciones de trabajo son estables por al menos 6 meses.


Solucin Indicadora de Metilnaranja: indicador verde bromocresol


Solucin especificada en la determinacin de la alcalinidad total. (seccin 2320 B. 3d).


EDTA: Sol. sdica de cido etilendiamin-Tetractico dihidrato, 0.01 M: Disolver 3.7 g
en agua destilada y diluir a 1 litro.


Hidrxido de Sodio, NaOH, 1N y 0.1N.




PAG 2. 18













2.1.6 PROCEDIMIENTO

Preparacin de Curva de Calibracin - Preparar una serie de standares de Aluminio desde
0 hasta 7 ug (O hasta 280 ug/L basado en una muestra de 25 ml) midiendo exactamente
los volmenes calculados de la solucin standard de aluminio en un frasco volumtrico de
50 ml tubos nessler. Agregar agua hasta un volumen total de aproximadamente 25 ml.

Agregar 1 ml 0.02N H
2
SO
4
a cada standard y mezclar. Aadir 1 ml de sln. de cido
ascrbico y mezclar. Aadir 10 ml de soln. buffer y mezclar. Con una pipeta
volumtrica, adicionar 5.0 ml del reactivo colorante de trabajo y mezclar.
Inmediatamente enrasar hasta 50 ml con agua destilada. Mezclar y dejar reposar desde 5
hasta 10 min. El color iniciar hasta desaparecer despus de 15 min.


Leer transmitancia o absorvancia utilizando una longitud de onda de 535 nm. Ajustar el
instrumento a cero absorvancia con un standard que no contiene aluminio. (Plotear la
concentracin de Al (microgramos Al en 50 ml de volumen final) Vs. absorvancia
obtenida.

2.1.7 Tratamiento de la muestra en ausencia de fluoruro y complejos fosforados

Medir 25.0 ml de muestra, diluir una porcin a 25 ml, en una cpsula frasco de
porcelana, aadir unas cuantas gotas de indicador metilnaranja y titular con H
2
SO
4
0.02N
hasta un ligero color rosado.

Registrar la lectura, y descartar la muestra. Para dos muestras similares a la misma
temperatura ambiente, aadir la misma cantidad de H
2
SO
4
0.02 N para eliminar HCO
3

utilizado en la titracin ms 1 ml en exceso.

A una muestra, agregar 1 ml de solucin EDTA. Esta servir como un blanco para
cualquier complejo de aluminio presente y compensar la turbidez y el color. Para ambas
muestras agregar 1 ml de cido ascrbico, 10 ml de reactivo buffer y 5.00 ml de reactivo
colorante de trabajo, como se describi anteriormente.

Fijar el equipo a cero absorvancia 100 % transmitancia utilizando el blanco de EDTA.
Despus de 5 a 10 min. de reaccin, leer transmitancia absorvancia y determinar la
concentracin de aluminio a partir de la curva de calibracin previamente preparada.

2.1.8 Eliminacin de las interferencias de Fosfatos:





PAG 2. 19











Agregar 1.7 ml de H
2
SO
4
6N para 100 ml de muestras en un erlenmeyer de 200 ml.
Calentar en un plato caliente por un perodo de 90 minutos cuidando que la temperatura
de la solucin est justamente por debajo del punto de ebullicin. Al finalizar el perodo
de calentamiento el volumen de la solucin debe estar cerca de 25 ml. Agregar agua si es
necesario para completar el volumen.

Despus de enfriarse la muestra, neutralizar a un pH de 4.3 a 4.5 con NaOH, utilizando
NaOH 1N al inicio y NaOH 0.1N para el ajuste final. Monitorear con un pHmetro.
Enrasar a 100 ml con H
2
O destilada y tomar una porcin de 25 ml para la prueba de
aluminio.


Correr un blanco en la misma forma, empleando 100 ml de agua destilada y 1.7 ml H
2
SO
4

6N. Restar la lectura del blanco de la lectura de la muestra utilizar el mismo para poner
en cero el equipo antes de leer la muestra.


2.1.9 Correccin para las muestras que contienen Fluoruro:


Medir la concentracin de fluoruro en la muestra por el SPADNS el mtodo del
electrodo. Cualquiera de los dos:

Agregar la misma cantidad de fluoruro como en la muestra para cada standar de aluminio,


Determine la correccin de fluoruro desde el set de curvas de la fig 3500-AL:1, pgina 3-
57 del STANDARD METH. EDICION 20.

2.1.10 CALCULOS

mg Al/L =
gAl en ml volumen final
ml muestra
( . . . )
.
50


2.1.11 DESVIACION Y PRECISION

Una muestra sinttica que contiene 520 g Al/L y sin interferencia en agua destilada fue
analizada por el mtodo de Cianuro Eriocromo, en 27 laboratorios. La desviacin relativa de los
estandares fue de 34.4 % y el error relativo 1.7 %.




PAG 2. 20











Una segunda muestra sinttica que contiene 50 g Al/L, 500 g Ba/L y 5 g Be/L en
agua destilada fue analizada en 35 laboratorios. La desviacin relativa del estandard fue de 38.5 %
y el error relativo 22.0 %.

Una tercer muestra sinttica que contiene 500 g Al/L, 50 g Cd/L, 110 g G/L, 1000
g Cu/L, 300 g Fe/L, 70 g Pb/L, 50 g Mn/L, 150 g Ag/L y 650 g Zn/L en agua destilada
fue analizada en 26 laboratorios. La desviacin relativa del estandard fue de 28.8 % y el error
relativo de 6.2 %.

Una cuarta muestra sinttica que contiene 540 g Al/L y 2.5 mg polifosfato/L en agua
destilada fue analizada en 16 laboratorios. La muestra se hidroliz de la forma descrita. La
desviacin relativa del estandard fue de 44.3 % y el error relativo de 1.3 %. En 12 laboratorios
donde no fueron aplicadas las medidas correctivas, la desviacin relativa del estandard fue de 49.2
% y el error relativo de 8.9 %.

Una quinta muestra sinttica que contiene 480 g Al/L y 750 g F/L en agua destilada
fue analizada en 16 laboratorios en las que se realiz la correccin del contenido de fluoruro en las
curvas. la desviacin relativa del estandar fue de 25.5 % y el error relativo de 2.3 %.

Los 17 laboratorios que agregaron fluoruro a los estandares de aluminio presentaron una
desviacin relativa del estandar de 22.5 % y el error relativo de 7.1 %.





PAG 2. 21












2.2 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO)
METODO #1: Turbidimetrico - Rango 10 - 40 Mg/L So
4


2.2.1 Equipos empleados

Un agitador magntico - Usarlo a velocidad constante, asimismo los magnetos deben ser
de igual tamao y forma.
Espectrofotmetro - para usarlo a 420 nm.
Un cronmetro.
Una cuchara con capacidad de 0.2 a 0.3 ml.
2.2.2 Preparacin de Reactivos

Solucin bufer rango alto (para concentraciones mayores a 10 mg/l y menores a 40 mg/l):
Disolver 30 g de cloruro de magnesio MgCl 6 H
2
0, 5 g de acetato de sodio CH
3
COONa
3H
2
0 , 1 g nitrato de potacio KNO
3
y 20 ml de cido actico, CH
3
COOH (99 %) en 500
ml de agua destilado y aforar a 1000 ml.
Solucin bufer rango bajo (< 10 mg/l): Disulvase 30 g MgCl
2
6 hidrato; 5 g acetato de
sodio 3 hidrato; 1 g de KNO
3
; 0.111 g de sulfato de sodio Na
2
SO
4
y 20 ml de cido
actico (99 por 100), en 500 ml de agua destilada completando a 1000 ml.
Cloruro de Bario, cristales 20 a 30 mesh.
Solucin standard: diluir 10.4 ml de H
2
SO
4
100 ml de agua destilada, o bien disolver
0.1479 g de Na
2
SO
4
anhidro en agua destilada y diluir a 1000 ml, (1 ml = 100 g SO
4
2-
).

2.2.3 Procedimiento

Medir 100 ml de muetra clara y verterlo en un erlenmeyer de 125 ml.

Introducir el magneto y mantener agitacin constante, luego agregar 20 ml de bufer (ya
sea Rango Bajo o Rango Alto, segn sea la concentracin estimada) y seguidamente una
cucharadita de cloruro de bario. Mezclar por 1 minuto. Tras finalizar el perodo de
agitacin, se vierte la solucin en la celda del espectrofotmetro y se mide la turbidez
despus de 5 0.5 minutos, usando una longitud de onda de 420 nm. El Mtodo a
utilizar en el Espectrofotmetro HACH DR/2000 es el # 620.

Corrjanse el color y turbidez realizando blancos a los que no se ha aadido BaCl2
(cloruro de Bario).

Calcular el contenido de sulfatos por regresin lineal de standares utilizando dos curvas:
Rango Bajo (2, 4 6 8 y 10 mg/l) y Rango Alto (10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mg/l).




PAG 2. 22











Para las muestras que excedan el lmite de absorbancia del Rango alto, se proceder a
diluir la muestra de tal manera que permita obtener una absorbancia dentro del Rango
establecido en el Mtodo.











PAG 2. 23












2.3 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO)
METODO #2: Turbidimetrico - Rango 10 - 40 Mg/L SO
4


2.3.1 Preparacin de reactivos

Solucin Bufer para sulfatos - Disuelva 75 g. de cloruro de sodio en 300 ml de agua
destilada y agrguele 30 ml de cido clorhdrico concentrado, luego 50 ml de glicerina y
finalmente 100 ml de alcohol etlico al 95%. Agite unos 15 minutos para lograr una buena
homogenizacin de la mezcla.

Solucin de cloruro de bario - Se debe preparar una solucin de tal forma que por mililitro
de solucin sean equivalentes a 1 g. de cloruro de bario. Disuelva 100 g de cloruro de
bario adicionando pequeos volmenes de agua destilada y agitando para saturar la
solucin. Luego afore a 250 ml. ( 2.5 ml = 1 g).

2.3.2 Procedimiento

Coloque 100 ml de muestra (o una alcuota aforando a 100 ml) en un erlenmeyer de 250
ml, introduzca un magneto y agite, colocando el erlenmeyer en un agitador magntico.
Adicione 5 ml de solucin Bufer para sulfatos.
Adicione 2.5 ml de cloruro de bario y agite durante dos minutos.
Lea la concentracin de sulfatos a 420 nm y exprese los resultados como mg/l SO
4
2
-.

ULTIMA REVISION: 31 May. 06




PAG 2. 24












2.4 HIERRO TOTAL (O - FENANTROLINA)
2.4.1 Equipos empleados
Espectrofotmetro para usarse a 510 nm.

2.4.2 REACTIVOS

Acido clorhdrico HCl concentrado que contenga menos de 0.000 05% de hierro.
Solucin de hidroxilamina: Disolver 10 g NH
2
OH HCl en 100 ml de agua.
Solucin bufer de acetato de amonio: disolver 250 g de NH
4
C
2
H
3
0
2
en 150 ml de agua.
Agregar 700 ml de cido actico glacial concentrado.
Solucin de fenantrolina: Disolver 0.10 gramos de 1,10-fenantrolina monohidrato
(C
12
H
8
N
2
H
2
O), en aproximadamente 70 ml de agua con agitacin y calentamiento a
80C; luego aforar a 100 ml de agua destilada. El calentamiento es innecesario si se
agregan 2 gotas de cido clorhdrico concentrado.

2.4.3 PROCEDIMIENTO

Medir 50 ml de muestra y verterlos en un erlenmeyer de 125 ml.
Agregar 2 ml de HCl conc. y 1 ml de sol. de hidroxilamina al 10%.
Proceder a digestar la muestra hasta reducir el volumen original a 20 mL. Para muestras
muy coloreadas o con mucha materia orgnica, se deben evaporar completamente y luego
acidificarlas en aproximadamemte 10 ml de agua destilada.
Dejar enfriar la muestra hasta que adquiera la temperatura ambiente.
Proceder a verter 10 ml de solucin bufer y 4 ml de soln de fenantrolina. Aforar con agua
destilada a 50 ml y agitar por inversin repetida.
Dar 15 minutos para desarrollo del color.
Leer en el Mtodo 265 del Espectrofotmetro HACH a una longitud de onda de 510 nm.
Calcular el contenido de hierro (Fe) de las muestras por regresin lineal de estandares de
hierro que vayan desde aproximadamente 0.10 a 3 mg/l.
Se debe correr siempre un blanco de reactivos.



PAG 2. 25











2.5 FLUOR (SPADNS)
METODO DEL SPADNS
2.5.1 Equipos a Emplear

Espectrofotmetro, para uso a 570 nm, con paso de luz de al menos 1 cm.
2.5.2 Preparacin de Reactivos

Solucion estandar de flor: disolver 221 mg de fluoruro de sodio anhidro NaF, en agua
destilada y diluir a 1000 ml, 1 ml = 100 g F
-
.
Solucion de SPADNS: Disolver 0.985 gramos de SPADNS en agua destilada y diluir a
500 ml. Esta solucin es estable por al menos 1 ao si es protegida de la luz solar.
Reactivo acido de zirconilo: disolver 0.133 gramos de cloruro de zirconilo 8 hidrato, en
cerca de 25 ml de agua destilada, agregar 350 ml de Hcl concentrado y diluir a 500 ml
con agua destilada.
Reactivo combinado: mezclar igual volmenes de solucin de SPADNS y cloruro de
circonilo cido. El reactivo combinado es estable por al menos 2 aos.
Solucin de Referencia: Aadir 20 ml de la solucin SPADNS - Hcl zirconilo (solucin
combinada) a 200 ml de agua destilada. Agregar 14 ml de cido clorhdrico previamente
diluido a 20 ml con agua destilada.
2.5.3 Procedimiento

Correr un blanco con solucin de Referencia antes de leer los estandares y las muestras,
as se fija el valor de absorbancia a 0 mg/l de Flor.
Correr una curva de calibracin usando estandares en el rango de 0 a 1.4 mg F
-
/L por
dilucin adecuada de la solucin madre de fluroruro en 50 ml de agua destilada.
Mida 50 ml de estandar usando una pipeta volumtrica, agregar luego 10 ml del reactivo
combinado y agitar suavemente. Leer despus de 5 minutos en el Mtodo 190 del HACH
DR/2000 a una longitud de onda de 570 nm.
Las muestras deben tratarse de igual forma que los estandares. Se debe tener especial
cuidado en la temperatura de las muestras y los estandares, la cual debe ser igual.

2.5.4 CALCULO

Se introducen los valores de absorbancia en la curva de Regresin lineal obtenida y calcular la
concentracin.

Una ecuacin tpica es la siguiente:

Y = 3.11635 - 1.4717 * X , r = 0.9994
donde




PAG 2. 26











X : absorbancia
Y: concentracin de flor en mg/litro Nota: La pendiente de esta curva es negativa.

2.6 NITRITOS (DIAZOTIZACION)
METODO: Diazotizacin

2.6.1 APARATOS

1. Espectrofotmetro para ser usado a 543 nm.
2. Beakers de 50 ml

2.6.2 REACTIVOS

Reactivo colorante: Adase a 600 ml de agua 100 ml de cido clorhdrico o Acido
Fosfrico al 85% y 10 gramos de sulfanilamida. Tras disolver completamente la
sulfanilamida, agrguese 1 gramo de diclorhidrato de N-(1-naftil)-etilendiamina.
Mzclese para disolver y dilyase con agua hasta 1 litro. La solucin es estable por un
mes si es almacenada en un frasco oscuro en refrigeracin.
Solucin madre: Disulvase 1.232 g de NaNO
2
en agua y dilyase a 1000 ml; 1 ml = 250
g. Consrvese con 1 ml de cloroformo.

2.6.3 Procedimiento

Agrguese 2 ml de reactivo colorante a 50 ml de muestra clara.

Mdase la absorbancia a 543 nm, entre 10 minutos y 2 horas despus de aadir el reactivo
a las muestras y patrones. Preferiblemente hora.

Observaciones: No usar nunca la conservacin cida en las muestras destinadas a anlisis
de nitritos, hacer la determinacin inmediatamente, o conservarse a 4C por 1 a 2 das.

Para celdas de 1 cm de paso de luz, el rango de concentracin ptimo es de 0.006 hasta
0.076 mg/l de nitritos, o sea 2 - 25 g /L de NO
2
-N.

Calcule el contenido de nitritos de las muestras por regresin lineal a partir de estandares
de 0.01 a 0.44 mg/l.



PAG 2. 27











2.7 NITRATOS ( METODO DE LA BRUCINA)
METODO: BRUCINA
2.7.1 Preparacin de Reactivos

Solucin Acido Sulfrico 28.82 N - Disolver 500 ml de Acido Sulfrico concentrado en 125 ml de
agua destilada (625 ml de V
T
).

NOTA: Tener cuidado de adicionar poco a poco el cido al agua y nunca en sentido contrario.
Colocar el recipiente en un bao de agua para lograr un enfriamiento homogneo, ya que esta
reaccin es altamente exotrmica.

Solucin de Brucina/Acido Sulfanlico - Disolver 1.0 g de Sulfato de Brucina y 0.1 g de cido
sulfanlico en aproximadamente 70 ml de agua destilada caliente, adicione 3 ml de cido
clorhdrico concentrado y enfre, afore a 100 ml con agua destilada.

2.7.2 Procedimiento Tradicional:

Colocar en un beaker de 50 ml de capacidad, 10 ml de cido sulfrico 28.82 N. (Rotular el
beaker como Ar)

Colocar en otro beaker de 50 ml, 2 ml de muestra y adicionar 1 ml de soln brucina-cido
sulfanlico, agitar para obtener un buen mezclado. (Rotular el beaker como A
2
).

Adicionar el contenido del beaker (A
1
) al del beaker (A
2
) y transfiera el contenido de un
beaker a otro unas cinco veces.

Dejar reposar en la oscuridad durante diez minutos.

Adicionar al beaker vaco 10 ml de H
2
O destilada y viceversa, repitiendo la misma
operacin unas cinco veces.

Guarde en la oscuridad durante unos veinte minutos

Leer la concentracin de Nitrato a 410 nm y expresar los resultados como mg/lt de
Nitrato.

Procedimiento alterno en el cual se eliminan interferencias:

Tomar 10 ml de muestra

Adicionar 2 gotas de Arsenito de Sodio (Elimina interferencias por cloro residual)

Colocar la muestra en bao de agua fra




PAG 2. 28











Adicionar 2.0 ml de NaCl

Adicionar 10 ml de H
2
SO
4


Adicionar 1 ml de Brucina

Colocar la muestra en bao mara 20 min. 95
o
C

Dejar enfriar a temperatura ambiente

Medir absorbancia a 410 nm



PAG 2. 29











2.8 NITRATOS ( M. Ultravioleta)
2.8.1 Principio
Se utiliza esta tcnica para el monitoreo de muestreas que tienen bajo contenido de materia
orgnica, por ejemplo, aguas naturales no contaminadas y suministros de agua potable. La curva
de calibracin cumple la ley de Beer hasta 11 mg/L de N.

La medida de absorcin de ultravioleta a 220 nm posibilita la rpida deteccin de nitratos. Debido
a que la materia orgnica disuelta puede absorber a 220 nm y los nitratos no absorben a 275 nm,
una segunda medida a 275 nm puede utilizarse para corregir el valor de nitrato. El grado de la
correccin emprica se relaciona a la naturaleza y concentracin de la materia orgnica y puede
variar de un agua a otra. Consecuentemente, este mtodo no se recomienda si se requiere una
correccin significativa de la absorbancia de materia orgnica, aunque puede ser til al monitorear
los niveles de nitratos en cuerpos de agua con un tipo constante de materia orgnica. Pueden
establecerse factores de correccin para absorbancia de materia orgnica mediante el mtodo de
adiciones en combinacin con anlisis del contenido original de nitratos por otro mtodo. La
filtracin de muestra se utiliza para remover la posible interferencia de partculas suspendidas. La
acidificacin con HCl 1 N se disea para prevenir la interferencia de hidrxidos y carbonatos en
concentraciones superiores a 1000 mg/L como CaCO3. Cloruros no tienen efecto en la
determinacin.
2.8.2 Interferencias
Materia orgnica disuelta, surfactantes, nitritos cromo hexavalente (Cr
6+
) interfieren. Varios iones
inorgnicos no encontrados normalmente en aguas naturales como cloritos y cloratos pueden
interferir. Sustancias inorgnicas pueden compensarse por anlisis independiente de sus
concentraciones y la preparacin de curvas individuales de correccin.

2.8.3 Equipos
Espectrofotmetro para uso en rango ultravioleta a 220 nm y 275 nm con celdas pareadas de silica
o cuarzo de 1 cm de paso de luz.
2.8.4 Reactivos
Agua libre de nitratos: utilice agua desionizada, redistalada o destilada, de la ms alta
pureza para preparar todas las soluciones y diluciones.
Solucin stock de nitratos: Secar Nitrato de potasio (KNO
3
) en un horno a 105C por 24
horas. Disuelva 0.7218 g en agua y diluya a 1000 mL; 1.00 mL = 100 g NO
3-
- N.
Preserve con 2 mL de cloroformo por litro. Esta solucin es estable por al menos 6 meses.
Solucin intermedia de nitratos: Diluya 100 mL de solucin stock de nitratos a 1000 mL
con agua; 1.00 mL = 10 g NO
3-
- N.
Solucin de cido clorhdrico 1 N HCl.



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2.8.5 Procedimiento
1. Tratamiento de la muestra: a 50 mL de muestra clara, filtrada si es necesario, agregue 1 mL de
solucin de HCl y mezcle completamente.
2. Preparacin de la curva estndar: Prepare estndares de calibracin en el rango de 0 a 7 mg
NO
3-
- N/L por dilucin a 50 mL de los siguientes volmenes de solucin intermedia de
nitratos: 0 1.00 2.00 4.00 7.00 - ..... 35.0 mL. Trate los estndares de nitratos en la
misma manera como las muestras.
3. Medida espectrofotomtrica: Lea absorbancia o transmitancia contra agua redistilada fijada a
cero absorbancia o 100% transmitancia. Use una longitud de onda de 220 nm para obtener
lecturas de nitratos y un longitud de onda de 275 nm para determinar la interferencia debida a
materia orgnica disuelta.
2.8.6 Clculos
Para muestras y estndares, sustraiga 2 veces la lectura de absorbancia a 275 nm de la lectura de
220 nm para obtener la absorbancia debida a nitratos. Construya una curva estndar graficando
absorbancia debida a nitratos contra la concentracin de nitratos del estndar. Usando las
absorbancia corregidas de muestra, obtenga las concentraciones de muestra directamente de la
curva estndar. Nota: Si el valor de correccin es ms del 10% de la lectura a 220 nm, no use este
mtodo.
2.8.7 Referencia bibliogrfica del procedimiento

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20 th Edition: Lenore Clesceri, Arnold
Greenberg, Andrew Eaton. pag. 4-115. Mtodo 4500 - NO
3
-
B. Ultraviolet Spectrophotometric Screening
Method.


Fecha de Revisin ltima: 31 may. 06















PAG 2. 31
















PAG 2. 32











2.9 FOSFATO Soluble ( A. VANADOMOLIBDOFOSFORICO)
METODO: ACIDO VANADOMOLIBDOFOSFORICO

2.9.1 EQUIPO

Espectrofotmetro para uso a 400 - 490 nm

Material de vidrio lavado al cido: Para determinar concentraciones bajas de fsforo sese material
de vidrio lavado con cido. Evitese el uso de detergentes que contengan fosfato. Lvese todo el
material de vidrio con Hcl diluido caliente y aclrese bien con agua destilada.

2.9.2 REACTIVOS
Pretratamiento: Se debe filtrar la muestra previamente usando filtros de membrana de 0.45 m.
Acido clorhdrico 1 + 1: Se recomienda una concentracin final en muestra 0.5N.
Reactivo vanadato-molibdato: Disulvanse 25 g de molibdato amnico, (NH
4
)
6
Mo
7
O
24
4H
2
O en
300 ml de agua destilada.
Disulvanse 1.25 g de metavanadato de amonio NH
4
VO
3
calentando hasta ebullicin en 300 ml de
agua destilada. Enfrese y agrguese 330 ml de Hcl concentrado. Enfrese la solucin B a
temperatura ambiente, virtase la solucin A sobre la B y dilyase a 1 litro.
Sol patrn de fosfato: disolver 219.5 mg de KH
2
PO
4
anhidro en agua destilada y diluir a 1000 ml;
1 ml = 50 g de PO
4
-3
- P.

2.9.3 PROCEDIMIENTO

Ajuste el ph de la muestra: Si el ph de la muestra es mayor de 10, aadir 0.05 ml (una gota) de
indicador de fenolftalena a 50 ml de muestra y decolorar el color rojo con a. clorhdrico 1+1 antes
de diluir a 100 ml.
Desarrollo del color: Poner 35 ml de muestra en un matraz aforado de 50 ml. Agregar 10 ml de
reactivo de vanadato-molibdato y diluir hasta la marca con agua destilada. Preparar un blanco con
35 ml de agua destilada en lugar de la muestra. Al cabo de 10 minutos o ms, medir la
absorbancia de la muestra frente a un blanco a longitud de onda de 400 a 490 nm. ver tabla abajo.

RANGO DE P, mg/l longitud de
onda, nm
1 - 5 400
2 - 10 420
4 - 18 470

3- Correr una curva de calibracin efectuando una regresin lineal sobre los datos de
absorbancia vs concentracin de estandares.



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2.10 COMPUESTOS FENOLICOS (4-AMINOANTIPIRINA)
METODO: 4-AMINOANTIPIRINA

2.10.1 APARATOS Y CRISTALERIA

Espectrofotmetro para usarse a 460 nm
pH-metro
Cronmetro
Baln de 1000 ml con cuello lateral provisto de condensador
Erlenmeyer de 400 ml graduado
Probeta de 300 500 ml
Calentador amiantado (manta de calentamiento)
Pipetas vd. de 20 ml y 3 ml
Embudo de separacin de 500 ml
Baln de 25 ml
Embudo de vidrio
Algodn lavado con hexano

2.10.2 REACTIVOS

Solucin BUFER (pH = 9.5): Disolver 5.14 g de cloruro de amonio (NH
4
cl) en 280 ml de
agua, adicionar con agitacin 20 ml de amonaco (30 %) y aforar a 300 ml. Estable lo
ms por tres meses, botella plstica.

AMINOANTIPIRINA (0.006 M) Disolver 1.20 g de Aminoantipirina (C
3
H
3
N
3
O) en 100
ml con agua destilada desgasificada. Estable lo ms por 1 semana a 4
o
C.

FERRICIANURO DE POTASIO (0.015 M) Disolver 4.8 g de Ferricianuro de potasio
(K3Fe(CN)6 en 100 ml de agua destilada desgasificada. Descompone por exposicin a la
luz (utilizar frasco oscuro). Estable a lo ms una semana.

CLOROFORMO CCl
3
H

CRISTALES DE SULFATO DE SODIO (Na
2
SO
4
) secado a 105
o
C.

FENOL (PARA CURVA DE CALIBRACION) Disolver 1000 mg (1g) en un litro
como solucin madre. Mantener refrigerado.

HIDROXIDO DE SODIO AL 50 %.

2.10.3 MUESTREO




PAG 2. 34











Tomar muestra en botella de vidrio ambar. Preservar con 2 ml de cido sulfrico conc. (H
2
SO
4
)
por cada litro de muestra. Almacenar mximo por 28 das a 4
o
C.



PAG 3. 35












2.10.4 PROCEDIMIENTO

Medir 300 ml de agua y verterlo en un beaker de 400 ml.

Ajustar el pH a 4.5 - 5 goteando hidrxido de sodio (NaoH. 50 %), incluyendo el blanco.

Adicionar la muestra en un baln de codo lateral , utilizando un embudo de vidrio,
provisto de condensador.

Destilar aproximadamente 250 ml, recolectndolo en un erlenmeyer graduado de 400 ml.

Agregar al baln 50 ml de agua destilada precalentada y destilar nuevamente hasta ajustar
los 300 ml. Dejar enfriar a Temperatura ambiente.

Preparar dos embudos de separacin (500 ml) para la muestra y el blanco.

Adicionar:

- 20 ml de buffer amonaco - cloruro de amonio
- 3 ml de amino antipirina
- 3 ml de ferrocianuro potsico

Agitar rpidamente y dejar reaccionar durante 5 minutos.

Extraer con:

- 10 ml de cloroformo agitando durante un minuto y recolectar la capa
clorofrmica en un baln de 25 ml provisto de embudo con sulfato de sodio y
algodn.

- Repetir a con 10 ml de cloroformo

- Repetir a con 5 ml de cloroformo y agitar por minuto.


Aforar a 25 ml con cloroformo.

Leer las muestras en el espectrofotmetro a 460 nm, utilizando como blanco cloroformo.

Repetir desde el paso 6 para realizar la curva de calibracin de fenol, utilizando
estandares con concentraciones de 1, 5, 10 ug/l. Partir de una solucin madre de 1000
mg/l a 10 mg/l y luego a los standares.

De la curva de calibracin de los estandares obtener la concentracin de las muestras.




PAG 3. 36













3. METODOS DE ANALISIS POTENCIOMETRICOS
3.1 PH

3.1.1 EQUIPOS

pH metro: Se sugiere el modelo 320 CORNING, el cual provee lectura digital de pH, mV
y oC. Posee una resolucin de 0.01 pH.
Electrodo 3 en 1 (pH/referencia/temperatura): Este electrodo se suministra con el equipo
detallado anteriormente.
Agitador Corning PC 320
Magnetos
Varilla para recuperar magnetos

3.1.2 REACTIVOS

Solucion bufer pH 7.00: Esta solucin generalmente se adquiere a travs de catlogos. En
caso de no contarse con ella, pero s se tienen los reactivos, puede prepararse una solucin
pH 6.86 a 25oC de la siguiente manera: se pesan 3.533 g de fosfato de sodio dibsico
Na
2
HPO
4
y 3.387 g de fosfato de potasio monobsico (KH
2
PO
4
), ambos previamente
secados entre 110 y 130oC durante 2 horas. Se disuelven ambos en 300 ml de agua
destilada, se transfieren a un frasco volumtrico de 1000 ml y se diluyen a la marca con
agua destilada.

Solucin bufer pH 4.01: Se prepara pesando 10.12 g de biftalato de potasio (KHC
8
H
4
O
4
),
se disuelve en 300 ml de agua destilada, se transfiere la solucin a un frasco volumtrico
de 1000 ml y se diluye a la marca.

Solucin bufer pH 9.18 a 25oC: Se pesan 3.8 g de borato de sodio decahidratado (llamado
tambin borax) (Na
2
B
4
O
7
10H
2
O) , disolver en 300 ml de agua destilada, transferir a un
frasco volumtrico de 1000 ml y diluir a la marca.

3.1.3 PROCEDIMIENTO DE CALIBRACION DEL PH METRO:

Para calibrar un medidor de pH se siguen las instrucciones dadas por el fabricante para cada tipo
de equipo en particular.




PAG 3. 37











En general, se sigue el siguiente procedimiento:
Antes de usar un electrodo, retirarlo de la solucin en la que estaba almacenado, lavarlo y secarlo
con un papel suave.

Seleccionar dos soluciones buffer de referencia, una de pH 7 y la otra para el ajuste de la pendiente,
de preferencia dentro de 2 unidades de ph reprecto al pH, con relacin al pH de la muestra
problema.

Colocar sobre el agitador el primer vaso con el buffer 7. Sumergir el o los electrodos. Seguir
instrucciones del fabricante, ajustar al valor de la solucin buffer.

Repetir la medicin con la solucin buffer hasta obtener 2 lecturas sucesivas que no deben diferir
en msde 0.02 unidades de pH del valor del buffer correspondiente.

Retirar los electrodos del primer buffer , lavar 3 veces cn agua destilada, secar y sumergir en el
segundo buffer en agitacin. Registrar la temfperatura a la cual se realiza la medicin. Ajustar con
el dispositivo de compensacin de temperatura hasta que el medidor indique el valor de pH del
buffer a la temperatura de la medicin (esto es ajuste de pendiente).

Retirar los electrodos del segundo buffer, lavarlos y secarlos.

El o los electrodos estn listos para su uso.

3.1.4 OBSERVACIONES

Si ocasionalmente se realizan mediciones, estandarizar el equipo cada vez que se use.
Cuando se realice una serie de mediciones de pH, chequear lal estandarizacin a intervalos
regulares.
En mediciones de alta precisin, la solucin buffer debe estar dentro de 1 a 2 unidades de pH del
valor de la muestra problema. Asimismo, la temperatura del buffer debe estar dentro de 10oC de la
temperatura de la muestra problema
Mantener los electrodos sumergidos en una solucin adecuada cuando no estn en uso,
generalmente es buffer 7.
Los electrodos de vidrio reaccionan muy rpidamente en solucifones fuertemente amortiguadas.
Sin embargo en soluciones dbilmente amortiguadas es difcil obtener lecturas exactas,
particularmente al cambiar de soluciones amortiguadas a no amortiguadas, como ocurre despus de
la estandarizacin. Las muestras, sobre todo las poco amortiguadas, deben ser agitadas durante la
medicin.




PAG 3. 38











3.2 CONDUCTIVIDAD ELECTRICA
3.2.1 EQUIPOS Y REACTIVOS

Conductivmetro digital: Se recomienda el modelo 1054 VWR. Este equipo posee 6 rangos.
Tambin es factible el conductivmetro porttil modelo 2052 VWR.
Celdas de conductivmetro
REACTIVOS

Solucin estandar de Kcl 0.0100 M: Disolver 745.6 mg de cloruro de potasio anhidroen agua grado
reactivo y diluir a 1000 ml en un baln aforado clase A a 25oC. Esta solucin tiene una
conductividad de 1412 umhos/cm. Es satisfactoria para la mayora de muestras cuando la celda
tiene una constante entre 1 y 2 cm
-1
.
3.2.2 PROCEDIMIENTO DE CALIBRACION

Enjuague la celda con al menos tres porciones de solucion de KCl 0.0100 M. Ajustar la
temperatura de la cuarta porcin a 25 +/- 0.1 oC.
Los conductivmetros generalmente dan el valor directamente. Verifique la lectura del
equipo y ajuste mediante el botn de estandarizacin el valor de la conductividad de la
solucin la cual es 1412 umhos/cm.
3.2.3 MEDICION DE LA CONDUCTIVIDAD

Enjuague la celda con uno o ms porciones de muestra. Ajuste la temperatura de la
porcin final a 25oC. Proceda a introducir la celda y lea el valor.
El coeficiente de temperatura en la mayora de las aguas es aproximadamente el mismo al
de la solucin estandar de Kcl, entre ms se desva la temperatura de la muestra de 25oC,
ms grande ser la incertidumbre de aplicar la correccin de temperatura.
Reporte todas la conductividades a 25oC.



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3.3 NITRATOS (METODO DEL ELECTRODO ION SELECTIVO)

3.3.1 EQUIPOS

pH metro, escala expandida o digital, con 0.1 mV de resolucin. Se sugiere considerar el
Medidor pH/mV Corning modelo 320 cuyo # Corning es 475817, o bien el Analizador de
iones Corning Modelo 355 o 455.

Electrodo de referencia doble unin. Rellenar la cmara exterior con solucin de
(NH4)2SO4 1 M.

Electrodo sensor de nitrato. Alternativamente puede escogerse un electrodo de
combinacin para nitrato tal como el Corning No. 476137. Nota: para poner a punto los
electrodos, tanto el de referencia como el ion selectivo, deben seguirse los consejos que da
el fabricante los cuales vienen en manuales.

Agitador Corning PC 320 o sustituto.

Magnetos

3.3.2 REACTIVOS

Sol madre de nitratos: Secar KNO
3
en un horno a 105C por 24 horas. Disolver 0.7218 g
en agua y diluir a 1000 ml; 1 ml = 100 g NO
3
-
- N. Preserve con 2 ml de CHCl
3
/ L. Esta
solucin es estable por al menos 6 meses.
Sol de relleno del electrodo de referencia (NH
4
)
2
SO
4
1 M. Disuelva 13.215 g de
(NH
4
)
2
SO
4
en agua y diluya a 100 ml.
Solucin bufer: Prepare una solucin 2 M de (NH
4
)
2
SO
4
mezclando 264.3 g de Sulfato de
Amonio, (NH
4
)
2
SO
4
, en 1 litro de Agua dest.
Solucin Bufer que elimina interferencias: Disolver 17.32 gramos de Sulfato de Aluminio
18 hidrato, 3.43 gramos de Sulfato de plata, 1.28 gramos de Acido Brico y 2.52 de cido
sulfmico en 800 ml de Agua destilada. Ajustar a pH 3 adicionando hidrxido de sodio
entre 0.1 y 1 N. Aforar hasta 1000 ml.
Solucin de NaOH 1 N: Disolver 40 gramos de perlas de NaOH en 1 litro de agua
destilada.

3.3.3 PROCEDIMIENTO:

Se deben preparar tres standares con concentraciones de 6.2, 62 y 620 mg/l de NO
3
-
.
Tanto el volumen de las muestras como de los estandares deben ser los mismos, midiendo
en cada caso 100 ml utilizando una pipeta volumtrica. En caso de utilizar un pHmetro
de escala expandida con lectura de mV se debe efectuar una curva de calibracin,



PAG 3. 40











colocando los estandares en un beaker sobre el agitador, introduciendo los magnetos y
colocando la celda de nitratos (electrodo de nitratos y el de referencia) bajo la superficie
de los estandares. Si el equipo no posee compensacin automtica de temperatura,
debe leerse la temperatura de los estandares y compensarse manualmente.

Agregar 2 ml de solucin bufer 2 M de (NH
4
)
2
SO
4
o 5 ml de Bufer que elimina
interferencias.

Debe iniciarse el proceso de calibracin con el standard ms bajo, la agitacin debe ser
constante y no muy violenta. Despus de asegurarse que el medidor est en el modo de
mV ( o modo Concentracin si utiliza el Analizador de iones Corning Modelo 355 o 455),
baje las puntas de los electrodos en la solucin. Despus que la lectura se ha estabilizado,
registre la lectura en mV.

Continuar luego con el standard intermedio, para lo cual enjuguense los electrodos con
agua destilada, squense suavemente con un pao y sumrjanse en la solucin. Cuando la
lectura se ha estabilizado, registrar los mV.

Proceder de igual manera con el estandar ms alto, registrando el valor de mV.

Usando un papel semi logartmico, graficar la lectura de mV en el eje de las y y la
concentracin en el eje x (eje log). O bien graficar en un papel milimetrado mV vs log
concentracion de nitratos.

Las muestras se ejecutan de igual forma que los standares, cuidando que la temperatura de
stos ltimos sea la misma que aqullas.

Despus de finalizado el trabajo, el electrodo de referencia debe ser guardado en solucion
de (NH
4
)
2
SO
4
1 M, en tanto el electrodo selectivo de nitratos, en el standar ms bajo,
generalmente 10 mg/l de NO
3
.





PAG 3. 41











3.4 POTASIO (METODO ELECTRODO ION SELECTIVO)
3.4.1 EQUIPOS

pH metro, escala expandida o digital, con 0.1 mV de resolucin. Se sugiere considerar el
Medidor pH/mV Corning modelo 320 cuyo # Corning es 475817.
Electrodo de referencia doble unin. Rellenar la cmara exterior con solucin de NaCl 1
M eliminando la solucin de fbrica que contiene KNO
3
1 M.
Electrodo sensor de potasio. Nota: para poner a punto los electrodos, tanto el de referencia
como el ion selectivo, deben seguirse los consejos que da el fabricante los cuales vienen en
manuales.
Agitador Corning PC 320 o sustituto.
Magnetos

3.4.2 REACTIVOS

Soluciones standar de cloruro de potasio, 0.1 M.
Solucin bufer de NaCl 2 M.
Solucin de relleno del electrodo de referencia NaCl 1 M.

3.4.3 PROCEDIMIENTO DE ANALISIS

Efectuar la curva de calibracin con 3 standares de 1, 5 y 10 mg/l de potasio K
+
.

Siempre se deben medir los estandares y las muestras a la misma temperatura, un
1C de diferencia en temperatura puede producir un 2% de error en la medicin. De lo
contrario debe efectuarse compensacin de temperatura manual o automtica, segn sea
aplicable.

Medir 100 ml de estandar ms bajo con una pipeta volumtrica, verterlo en un beaker,
aplicar agitacin constante y a baja revolucin, agregar 2 ml de bufer de cloruro de sodio
2 M, registrar la lectura en mV. De igual forma proceder con el standar ms alto y luego
con el intermedio.

Antes de cada lectura las puntas de los electrodos deben enjuagarse con agua destilada y
secarse con un pao. Las muestras deben ser tratadas de la misma forma que los
estandares.

Para construir la curva de calibracin, debe usarse un papel semilog de 4 ciclos, con la
concentracin en mg/l ploteados en el eje log y los mV en el eje lineal.

El electrodo de referencia debe ser almacenado en sol de NaCl 1 M y el electrodo selectivo
de potasio en la solucin estandar de potasio ms baja.



PAG 3. 42















PAG 3. 43











3.5 SODIO (METODO DEL ELECTRODO ION SELECTIVO)
3.5.1 EQUIPOS

pH metro, escala expandida o digital, con 0.1 mV de resolucin. Se sugiere considerar el
Medidor pH/mV Corning modelo 320 cuyo # Corning es 475817.
Electrodo de combinacin de sodio codigo CORNING 476138, o similar. Nota: para poner
a punto el electrodo deben seguirse los consejos que da el fabricante los cuales vienen en
manuales del usuario
Agitador Corning PC 320 o sustituto.
Magnetos
3.5.2 REACTIVOS

Soluciones standar de cloruro de sodio, 1000 mg/l
Solucin bufer de Trietanolamina 0.5 M (33.3 ml de Trietanolamina en 500 ml) y 3%
NH
4
OH en proporcin 1:1.
3.5.3 PROCEDIMIENTO DE ANALISIS

Efectuar la curva de calibracin con 3 standares de 1, 10, 100 mg/l de Na
+
.

Siempre se deben medir los estandares y las muestras a la misma temperatura, un
1C de diferencia en temperatura puede producir un 2% de error en la medicin. De lo
contrario debe efectuarse compensacin de temperatura manual o automtica, segn sea
aplicable.

Medir 100 ml de estandar ms bajo con una pipeta volumtrica, verterlo en un beaker,
aplicar agitacin constante y a baja revolucin, agregar 2 ml de bufer TEA+NH
4
OH,
registrar la lectura en mV. De igual forma proceder con el standar ms alto y luego con el
intermedio.

Antes de cada lectura las puntas de los electrodos deben enjuagarse con agua destilada
solamente. Las muestras deben ser tratadas de la misma forma que los estandares.

Para construir la curva de calibracin, debe usarse un papel semilog de 4 ciclos, con la
concentracin en mg/l ploteados en el eje X -log y los mV en el eje lineal.

El electrodo de combinacin debe ser almacenado en una solucin del estandar ms bajo,
por ejemplo 1 mg/l de Na
+
.

La pendiente de la curva de calibracin debe estar entre +50 y 60 mV.

El electrodo debe rellenarse en caso necesario con solucin de Kcl saturado. Para su
mantenimiento deben seguirse los consejos que da el fabricante, principalmente en lo que



PAG 3. 44











respecta a no dejar secar la punta del electrodo, la cual siempre debe estar hmeda. Para
ponerlo a punto de anlisis, el electrodo debe sumerjirse por 18 horas en solucin bufer y
solucin standard de 100 mg/l de Na
+
1:1 antes de usarse.

Al finalizar los anlisis, el electrodo de Referencia debe almacenarse en solucin Bufer de
Trietanolamina.
3.6 TURBIEDAD (METODO NEFELOMETRICO)
3.6.1 EQUIPO

Turbidmetro: Se sugiere el turbidmetro HACH 2100N, o en su defecto, el modelo anterior el
2100A.
3.6.2 PROCEDIMIENTO:

Calibracin del equipo: se deben seguir las instrucciones que da el fabricante. Asegrese que el
turbidmetro da lecturas estables en todos los rangos de sensibilidad usados. Altas turbideces
determinadas por medicin directa son probables a diferir apreciablemente de aquellas
determinadas por la tcnica de dilucin.

Medidas de turbidez menores a 40 NTU: Agite completamente la muestra, espere hasta que las
burbujas de aire desaparezcan y vierta la muestra en el tubo del turbidmetro. Lea la turbidez
directamente en la escala del instrumento.

Medidas de turbidez mayores a 40 NTU: Diluya la muestra con uno o ms volmenes de agua libre
de turbidez hasta que este valor caiga entre 30 y 40 NTU. Compute la turbidez de la muestra
original a partir de la muestra diluida y el factor de dilucin. Por ejemplo si 5 volmenes de agua
libre de turbidez fueron agregados a un volumen de muestra y la muestra diluida mostr un
turbidad de 30 NTU, entonces la turbidez de la muestra original es 180 NTU.



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4. METODOS DE ANALISIS PARA DEMANDAS
4.1 DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (ENSAYO DE 5 DIAS) [DBO
5
]
4.1.1 EQUIPOS
Botellas de incubacin: capacidad de 300 ml, deben limpiarse con detergente, enjuagarse
completamente y drenarse ante de usarse.
Incubadora o Bao Mara: debe estar controlada termostticamente a 20 +/- 1oC. Se debe
excluir toda luz solar para prevenir la posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno
disuelto.
4.1.2 REACTIVOS

Solucin bufer de fostato: disuelva 8.5 g de KH2PO4, 21.75 g K2HPO4, 33.4 g
Na2HPO47H2O y 1.7 g NH4Cl en cerca de 500 ml de agua destilada y diluir a 1 L. El ph
debe ser 7.2 sin ajuste.
Solucin de sulfato de magnesio: disolver 22.5 g de MgSO47H2O en agua destilada y
diluir a 1 L.
Solucin de cloruro de calcio: disolver 27.5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1 L.
Solucin de cloruro frrico: disolver 0.25 g de FeCl3 6H2O en agua destilada y diluir a 1
L.
Soluciones cidas y alcalinas 1 N para neutralizacin de muestras cidas o bsicas.
Acida: Lentamente y con agitacin agregue 28 ml de cido sulfrico concentrado al agua
destilada. Diluir a 1 L.
Bsica: disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada, diluir a 1 L.
Solucin de sulfito de sodio: disolver 1.575 g de Na2SO3 en 1000 ml de agua.Preparar
diariamente.

4.1.3 PROCEDIMIENTO

Preparacin del agua de dilucin: Coloque el volumen deseado de agua en una botella y agregue 1
ml de solucin bufer de fosfato, sulfato de magnesio, cloruro de calcio y cloruro frrico por cada
litro utilizado. Antes de usarse el agua de dilucin, llvele a 20oC y satrela con oxgeno por
aeracin con aire libre de compuestos orgnicos.

TECNICA DE DILUCION

Las diluciones que resultan en un OD residual de al menos 1 mg/L y un cambio de OD de al
menos 2 mg/l al final de 5 das de incubacin producen los resultados ms confiables. Se pueden
usar las siguientes diluciones: 0.0 a 1.0% para residuos industriales fuertes, 1 a 5% para aguas
residuales sedimentadas o crudas, 5 a 25 % para efluentes tratados biolgicamente, y 25 a
100 % para aguas de rios contaminados.



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Prepare diluciones en cilindros graduados y transfiralos a botellas de DBO o preprelas
directamente en las botellas.

DILUCIONES PREPARADAS DIRECTAMENTE EN BOTELLAS DE DBO

Usar pipeta volumtrica de pico ancho, agregar el volumen deseado a las botellas de DBO
individuales de capacidad conocida, agregar cantidades apropiadas de material semilla a las
botellas de DBO individuales o al agua de dilucin (se inocula con semilla en caso de que el agua
est altamente contaminada con material txico).
Llene las botellas con suficiente agua de dilucin, inoclelas con semilla en caso necesario, de tal
forma que la insercin del tapn desplace todo el aire, no dejando burbujas.
Para diluciones mayores que 1:100 haga la dilucin primaria en un cilindro graduado ante de hacer
la dilucin final en la botella. Si usa el mtodo iodomtrico para medir el OD , prepare dos
botellas en cada dilucin. Determine el OD inicial en una botella. Tape la segunda botella
fuertemente, selle con agua, e incube por 5 das a 20oC. Si se usa el mtodo del electrodo de
membrana para medir el OD, prepare solamente una botella de OD para cada dilucin. Determine
el OD inicial en esta botella y reemplace cualquier contenido desplazado con agua de dilucin
hasta llenar la botella. Tape firmemente, selle con agua, e incube a 20oC por 5 das. Enjuague el
electrodo OD entre determinaciones para prevenir contaminacin cruzada de las muestras.

DETERMINACION INICIAL DE OD

Si la muestra contiene materiales que reaccionan rpidamente con OD, determine el OD inicial
inmediatamente despus de llenar fla botella de DBO con muestra diluida. Si el cambio inicial de
OD es insignificante, el perodo entre preparar dilucin y medir el OD inicial no es crtico.

Use la modificacin azida del mtodo iodomtrico o el mtodo del electrodo de membrana para
determinar el OD inicial en todas las diluciones de muestras, blancos de agua de dilucin y control
inoculados con semilla cuando sea apropiado.

BLANCO DE AGUA DE DILUCION

Use el blanco de agua de dilucin como un chequeo aproximado de la calidad del agua de dilucin
no inocoluda con semilla y del limpieza de las botellas de incubacin. Junto a cada tanda de
muestras incube una botella de agua de dilucin on inoculada. Determine el OD inicial y final tal
como se explic en el apartado anterior. El cambio de OD no debe ser mayor que 0.2 mg/l y
preferiblemente no ms de 0.1 mg/L.
INCUBACION

Incube a 20o +/- 1 oC en botellas de DBO que contengan diluciones deseadas, controles con
siembra (inoculadas), blancos de agua de dilucin y chequeos con glucosa -cido glutmico. Selle
con agua las botellas.
DETERMINACION DEL OD FINAL

Despus de 5 das de incubacin determine el oxgeno disuelto en muestras diluidas y blancos.
CALCULO




PAG 4. 47











Cuando el agua de dilucin no ha sido sembrada o inoculada.
DBO5 , MG/L = (D1 - D2)/P

DONDE
D1 : OD de la muestra diluida inmediatamente despus de la preparacin, mg/L
D2 : OD de la muestra diluida despus de 5 das de incubacin a 20 C , mg/L
P : Fraccin volumtrica decimal de la muestra usada

Si ms de una muestra diluida cumple con los criterios de un residual de OD de al menos 1 mg/L y
un decremento de OD de al menos 2 mg/l y no hay evidencia de toxicidad en la concentracin de
muestra ms alta o la existencia de una anomala obvia, promedie los resultados en un rango
aceptable.



PAG 4. 48











4.2 DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO
METODO DEL REFLUJO ABIERTO

EQUIPOS

o Aparato de reflujo: Se sugiere el uso de erlenmeyers de 500 o 250 ml con cuello
24/40 vidrio esmerilado ( Corning 5000 o equivalente), y el condensador con
juntura de vidrio esmerilado 24/40.
o Plato caliente: de suficiente potencia que produzca al menos 1.4 W/cm
2
de
superficie de calentamiento.
o En caso de usarse balones fondo redondo, deben usarse mantas de calentamiento.


REACTIVOS

A. Solucin estandar de dicromato de potasio 0.0417M :disolver 12.259 g de K
2
Cr
2
O
7
, grado
estandar primario previamente secado a 103 C por 2 horas en agua destilada y diluido a 1 L.

B. Reactivo de Acido Sulfrico: Agregar Ag
2
SO
4
grado tcnico o reactivo, en cristales o
polvo al cido sulfrico concentrado en la proporcin de 5.5 g de Ag
2
SO
4
por Kg de H
2
SO
4
. Deje
reposar por 1 a 2 das hasta que se disuelva el Ag
2
SO
4.

C. Solucin indicadora de Ferron: Disolver 1.485 g de 1,10-fenantrolina monohidrato y 695
mg de FeSO
4
7H
2
O en agua destilada y diluir a 100 ml.

D. Solucin estandar de FAS (Sulfato amonical ferroso) como titulante, de aproximadamente
0.25M: Disolver 98 g de Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
6H
2
O en agua destilada. Agregar 20 ml de cido sulfrico
concentrado, enfre y diluya a 1000 ml. Estandarice esta solucin diariamente contra solucin
standard de K
2
Cr
2
O
7
de la siguiente forma:

Diluya 10 ml de standard K
2
Cr
2
O
7
en aproximadamente 100 ml. Agregue 30 ml de H
2
SO
4
conc y
enfre. Titule con FAS usando 0.1 0.15 mL (2 a 3 gotas) de indicador de ferron.

Normalidad de la solucion de FAS:

= Volumen de sol K
2
Cr
2
O
7
0.0417titulado, mL/ volumen FAS usado, mL * 0.25

E. Sulfato de Mercurio: cristales HgSO
4
.

F. Acido Sulfmico: Slo si se deben remover interferencias por nitritos.

G. Standard de ftalato de hidrgeno y potasio: Ligeramente morteree y seque el ftalato de
hidrgeno y potasio (HOOCC
6
H
4
COOK) a peso constante de 120 C. Disuelva 425 mg en agua
destilada y diluya a 1000 ml. KHP tiene un COD terico de 1.176 mg O
2
/mg y esta solucin tiene
un COD terico de 500 uG O
2
/ mL.Esta solucin es estable cuando se refrigera hasta 3 meses en
absencia de crecimiento biolgico visible.




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PROCEDIMIENTO:

1. Tratamiento de muestras con COD>50 O
2
/L: Coloque 50 ml de muestra ( para muestras
con COD de >900 mg/L, use una porcin de muestra ms pequea diluida a 50 ml) en un baln de
reflujo de 500 ml. Agregue 1 g de HgSO
4
, varios pedacitos de vidrio, y muy lentamente agregue 5
ml del reactivo de acido sulfrico con agitacin para disolver elHgSO
4
. Enfre mientras agita para
evitar posible prdida por materiales voltiles. Agregue 25 ml de K
2
Cr
2
O
7
0.0417 M y mezcle.
Pegue el condensador al baln y ponga a funcionar el grifo de agua para enfriamiento. Agregue el
remanente del reactivo de cido sulfrico (70 ml) a travs de la abertura del condensador.
Contine agitando mientras se termina de agregar el reactivo de a. sulfrico.

Cubra la parte abierta del condensador en el extremo superior con un pequeo beaker para prevenir
que material forneo entre a la mezcla en reflujo y reflujar por 2 horas. Enfre y lave el
condensador con agua destilada. Desconecte el condensador de reflujo y diluya la mezcla
alrededor 2 veces su volumen con agua destilada. Enfre a temperatura ambiente y titule el exceso
de K
2
Cr
2
O
7
con FAS, usando 0.1 a 0.15 ml de indicador ferron. Aunque la cantidad de ferron no
es crtico, use el mismo volumen para todas las titulaciones. Tome como punto final de vire el
primer cambio de color de azul verdoso a cafe rojizo. El verde zul puede reaparecer. En la misma
forma, refluje un blanco que contenga los reactivos y un volumen de agua destilada igual al de la
muestra.

DETERMINACION DE LA SOLUCION ESTANDAR:

Evale la tcnica y la calidad de los reactivos por medio de una prueba de un standard de ftalato de
hidrgeno potsico.
CALCULO
COD como mg O
2
/L = (A - B) x M x 8000/ mL muestra

donde A = mL FAS usado para el blanco
B = mL FAS usado para la muestra
molaridad del FAS



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5. METODOS DE ANALISIS BACTERIOLOGICOS
5.1 COLIFORMES FECALES - Mtodos de Tubos Mltiples

PREPARACION DE REACTIVOS

a- AGUA DE DILUCION:

PATRONES

1. Disuelva 34 gr. de potasio dihidrogeno fosfato, en 500 ml. de agua destilada, ajuste el
pH a 7.2 con hidrxido de sodio 1 N. y diluya a un litro con agua destilada.

2. Disolver 50 g de MgSO
4
7H
2
O en 1000 ml.

SOLUCION STOCK

Adicione 1.25 ml. de Stock buffer fosfato y 5.0 ml. de sulfato de magnesio a un litro de
agua destilada. De esta solucin stock se toman 9.5 ml y se vierten en frascos con tapn de vidrio
y se esterilizan en autoclave (15 psi, 15 min, 121oC).


b- CALDO LACTOSADO:

Disuelva 13 g. de caldo lactosado en un litro de agua destilada. Coloque 10 ml.
en tubos de ensayo e inserte tubos DURHAM, INVERTIDOS, tape la boca del tubo de ensayo con
algodn. Esterilice en autoclave ( 15 min. a 121
o
C ). Enfre los tubos a temperatura ambiente y
gurdeles en refrigeracin.

c- VERDE BRILLANTE CON BILIS DE BUEY.


Disuelva 40 gr. en un litro de agua destilada, coloque 10 ml. en tubos de ensayo e inserte tubos
DURHAM invertidos, tape los tubos de ensayo con algodn.

Esterilice en autoclave (15 minutos a 121
o
C) enfre y luego guarde en refrigeracin.

SIEMBRA DE MUESTRAS

Se toman 8 a 6 frasquitos con agua de dilucin (entrada y salida respectivamente).
Se agita la muestra y se toma 1 ml con una pipeta esterilizada y se vierte al 1er frasquito, se agita
por inversin ( como mnimo 6 veces) y de este se toma 1 ml y se pasa al siguiente frasquito
usando otra pipeta esterilizada, as sucesivamente y en los ltimos 4 frasquitos, se toman 6 ml para



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agregar 1 ml a cada tubo de ensayo de la 1er serie de 5 y 1 ml al siguiente frasquito hasta llegar al
ltimo, del cual se toman 5 ml.

PROCEDIMIENTO: - A - ( PRUEBA PRESUNTIVA )


a) Seleccionar en una gradilla bacteriolgica 15 tubos de ensayo, esterilizados conteniendo
caldo lactosado.
b) Disponerlos en tres series:
5 tubos para sembrar 10
-5
ml de muestra
5 tubos para sembrar 10
-6
ml. de muestra
5 tubos para sembrar 10
-7
ml. de muestra.
5 tubos para sembrar 10
-8
ml. de muestra

c) Agitar cada uno de los tubos por 25 veces, e incubarlos durante 24 horas a 37
o
C.
d) Tomar nota de los tubos positivos al cabo de 24 horas y slo los tubos positivos se les
somete a la prueba confirmativa.

Si al cabo de 24 horas no hay tubos positivos, entonces se dejan los tubos en incubacin otras 24
horas.

Si a las 48 horas hay tubos positivos, se les practica la prueba confirmativa.

PROCEDIMIENTO: - B - ( PRUEBA CONFIRMATIVA )

Esterilizar en la llama del mechero de BUNSEN la lupa de inocular (al rojo vivo).
Introducir ligeramente la lupa de inocular dentro del medio de cultivo que result positivo.
Introducirla totalmente en el medio y hacer rotar el tubo suavemente para atrapar las especies
microbiolgicas.
Retirar la lupa con la pelcula e introducirla en el medio de verde brillante y hacer rotar el tubo
lentamente.
Agitar los tubos unas 25 veces.
Incubar por 24 horas y al cabo de los cuales anotar aquellas que resultaran positivas.
Si ninguna resulta positiva, incubar otras 24 horas y luego leer.
Repetir el mismo procedimiento para E.C.




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5.2 COLIFORMES FECALES - FILTRO DE MEMBRANA


PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO:


Para preparar 1 litro de medio de cultivo, pesar los siguientes reactivos:
71.2 gr de lauril sulfato (BBL)
14 gr de agar tcnico # 3
0.2 gr de rojo fenol

Mezclar en un baln aforando a 1 litro con agua destilada, esterilice en autoclave por 15 minutos a
121oC. Enfriar a 45oC y verter en las placas petri aproximadamente 3 ml del medio de cultivo.

PROCEDIMIENTO:

Se esteriliza el sistema de filtracin adicionando 1 ml de metanol y flameando en el mechero.

Si se usa el sistema Gelman de plstico, esterilice en Bao Mara a 100oC por 5 minutos, previoa
cada anlisis.

Se coloca el filtro de membrana sobre la pflaca filtrante y se procede a filtrar 100 ml de muestra

Con la pinza se toma la membrana y se coloca sobre la plaquita petri con medio de cultivo y se
incuba a 44oC por 24 horas.

Se cuentan los puntos amarillos y se reportan como # de colonias colifecales /100 ml.

Este mtodo es nicamente para agua con baja contaminacin, de fuentes superficiales o
subterrneas, con turbidez menor a 5 UNT. En caso de muestras con turbidez entre 5 y 30 UNT se
filtran 50 ml y el nmero de colonias detectadas se multiplica por 2.



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6. BALANCE DE ANIONES Y CATIONES

En un anlisis qumico completo debe verificarse que la suma de miliequivalentes de aniones es
aproximadamente igual a la suma de miliequivalentes de cationes. Esto se debe a que
normalmente el agua es elctricamente neutra a menos que existan ciertos fenmenos que
distorsionen esta propiedad.
Normalmente, el balance inico es ms adecuado implementarlo en fuentes subterrneas en vez de
las fuentes superficiales, por cuanto estas ltimas presentan diversos componentes qumicos que tal
vez no se consideran en un anlisis completo.
Para poder realizar el balance inico se deben efectuar por lo menos los siguientes parmetros:

ANIONES CATIONES
BICARBONATOS SODIO
CARBONATOS CALCIO
CLORUROS MAGNESIO
SULFATOS POTASIO
NITRATOS



El porcentaje de balance inico se define de la siguiente manera:

Este porcentaje de balance ionico no debe exceder de 10 %, se pueden aceptar valores mayores en
caso que exista sospecha de factores que interfieren en la neutralidad elctrica del agua que est
siendo examinada.

Por ejemplo, aguas muy aireadas pueden sufrir este tipo de perturbaciones originando que el
porcentaje no encaje dentro de los lmites que se han definido.

Para realizar el procedimiento de balance inico, las concentraciones de los principales parmetros
descritos anteriormente deben ser convertidos a miliequivalentes por litro, para lo cual deben
multiplicarse las concentraciones halladas por los factores de conversin que se presentan en la
tabla de abajo.

Luego se procede a sumar los miliequivalentes por litro de los aniones y de los cationes
procedindose a aplicar la frmula del % de balance inico.






% *
meq/l) (aniones, ) l / meq , Cationes (
meq/l) (aniones, - meq/l) (Cationes,
Ionico Balance % 100

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A continuacin detallamos los factores de conversin de los iones principales:


ION mg/l a milieq. x
litro
HCO3 0.0164
CO3= 0.0333
CL- 0.0282
SO4= 0.0208
NO3- 0.0161
Na+ 0.0435
Ca++ 0.05
K+ 0.0256
Mg++ 0.0826


Este procedimiento es muy conveniente efectuarlo porque provee de una buena herramienta de
anlisis para detectar errores analticos y evaluar la confiabilidad de los anlisis.

7. ELABORACION DE CARTAS DE CONTROL

Las cartas de control son de mucha utilidad para determinar si los anlisis caen dentro de ciertos
lmites fuera de los cuales se puede afirmar que el proceso est fuera de control estadstico. El
objetivo es identificar la influencia de los dos principales tipos de errores: el sistemtico y
aleatorio. Se puede afirmar que esta labor es una de las primeras a ser realizadas para instalar un
control de calidad analtico interno (CCA interno).
El primer paso en la confeccin de este tipo de cartas es asumir los criterios de errores tolerables
del Programa GEMS/AGUA, para el cual si se fija un +/- 20% de error total, se est aceptando un
mximo de error permisible de 5% para cada tipo de error, tanto el alaeatorio como el sistemtico.
Las desviacin standard para el promedio de anlisis duplicados resulta ser 3.6%.
En un primer momento el promedio de los anlisis duplicados debe asumirse igual al valor de las
soluciones standard que se escojan para cada parmetro. Dicho sea de paso, estos standares deben
ser valores promedios a los analizados rutinariamente en el laboratorio.



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Existen dos tipos fundamentales de cartas de control : la carta X (lase X barra) y la D. Para los
fines del presente manual, se considera suficiente con la implementacin de la carta X por lo cual
se proceder a identificar los pasos principales para efectuar esta carta:
Escoger un valor de solucin patrn ( por ejemplo 10 mg/l de cloruros)
Con este valor ya definido se procede a calcular los limites de advertencia y los lmites de control,
tanto superiores como inferiores. La frmula es la siguiente:

LIMITE DE ADVERTENCIA: 100% +/- 2*3.6%
LIMITE DE CONTROL : 100% +/- 3*3.6%

EJEMPLO
Si se escogi 10 mg/l de cloruros como el valor del standard a ser analizado rutinariamente para
fines de control, el 100 % equivaldr a 10 mg/l, de igual manera se calcula el 3.6% del valor del
standard. Los lmites de advertencia y/o control sern:
Lmite Advertencia=10 +/- 2* 0.036*10
Lmite Control = 10 +/- 3* 0.036*10
Por lo tanto,
el lmite superior de advertencia ser : 10 + (2*0.036*10) = 10.72 mg/l
el lmite inferior de advertencia ser : 10 - (2*0.036*10) = 9.28 mg/l

el lmite superior de control ser : 10 + (3*0.036*10) = 10.72 mg/l
el lmite inferior de control ser : 10 - (3*0.036*10) = 9.28 mg/l

De manera rutinaria, es decir cada vez que se efecte una tanda de muestras, se deben correr
patrones por duplicado y el promedio de estos resultados deben plotearse en la carta de control. Si
se encuentra fuera del lmite de control, se procede a detectar la fuente de error y a corregirlo. Un
grfico de ejemplo se presenta en la pgina siguiente.



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8. METODOS DE ANALISIS DE PUREZA DE PRODUCTOS QUIMICOS

ENSAYO PARA DETERMINAR EL CLORO DISPONIBLE EN LA CAL CLORADA Y EN
HIPOCLORITO DE CALCIO

A - REACTIVOS

1: Yoduro de potasio en cristales
2: Solucin indicadora de almidn
3: Tiosulfato de sodio 0.1 N
4: Acido actico glacial


B- Cristalera

Bureta de 25 ml (1)
Erlenmeyers de 125 ml (6)
Beakears de 100 ml (3), de 400 ml (3)
Baln aforado de 1 Lt (1), de 500 ml (1), de 100 ml (2)

B- PROCEDIMIENTO

Se colocan 5 gr de cal clorada o hipoclorito de calcio en un mortero no metlico, se humedece con
agua destilada y se tritura hasta que las partculas sean impalpables. Se transfiere a un baln
aforado de 1 litro adicionando agua destilada, en seguida se lleva a volumen y se mezcla.

Se toman 25 ml de la solucin del baln aforado de 1 litro y se colocan en un Erlenmeyer de 250
ml, a continuacin se adiciona aproximadamente 1 gr de cristales de yoduro de potasio y se
acidifica con ms o menos 4 ml de cido actico glacial. Despus se titula con tiosulfato de sodio
0.1 N hasta cuando el color amarillo del yodo tienda a desaparecer. Se adiciona alrededor de 1 ml
de la solucin de almidn y se contina la titulacin hasta que el color azul desaparezca
completamente.

CALCULO

(V X N ) DE TIOSULFATO DE SODIO * 40 * 0.03545 * 100 / GRAMOS DE
MUESTRA
= cloro disponible en % en masa

1 ml x N de Tio. de sodio x 28.37 = Cloro disponible en 5 g de muestra, en %







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9. BIBLIOGRAFIA

1) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 18 th Edition, 1992, APHA,
AWWA,WEF.
2) Curso sobre Captacin y Anlisis de Muestras de Agua, preparado por Luis Tapia Berros, junio
de 1984.
3) Catlago HACH 95.
4) Catlogo VWR 94/95.

10. RECONOCIMIENTOS

Han colaborado en el mejoramiento del presente Manual:

Lic. Juan Quintana T., Ing. Katia Montenegro R., Ing. Azucena Espinales, Lic. Hayde Selva V.,
Lic. Narciso Romero P., Ing. Germn Padilla D.