GUIA PARA LA DETERMINACION DE ACTIVIDAD MICROBIANA

INTRODUCCION
La mineralizacin es el proceso de descomposicin de la materia orgnica del suelo en el cual se libera
nitrgeno inorgnico. La mineralizacin es la transformacin del nitrgeno orgnico en amonio, mediante
la accin de microorganismos del suelo. En general, el trmino mineralizacin indica el proceso global
de conversin del nitrgeno orgnico en nitrgeno mineral, fundamentalmente nitrato y amonio
degradacin completa de un compuesto a sus constituyentes minerales, en donde el carbono orgnico es
oxidado asta !"#. $ado %ue la descomposicin de un sustrato orgnico por medio del proceso de
respiracin aerbica tiene como productos principales a !"# y &#", la evolucin de !"# puede utilizarse
como un indicador bastante preciso de la actividad respiratoria de comunidades en agua y suelo. $ico
ob'etivo se cumple en la medida %ue el ensayo de mineralizacin es realizado ba'o condiciones
aerbicas.
Los microorganismos no estn distribuidos regularmente en el suelo pues ay un mosaico discontinu de
microambientes, a%ullos favorables para el desarrollo microbiano se caracterizan por su limitada
extensin en el tiempo y en el espacio. La dispersin de los microorganismos, con excepcin de los
fotosintetizantes, sigue la distribucin vertical de los nutrientes pero es alterada por varios factores( la
composicin de la atmsfera del suelo, el p&, la umedad, la cantidad de minerales asimilables, la
presencia de substancias antimicrobianas.
Los factores ecolgicos f)sicos *umedad, temperatura, luz+ act,an directamente -obre la micro biota
rizosfrica o indirectamente por intermedio de la planta modificando la calidad y cantidad de los exudados
radicales. La elevacin de la umedad del suelo por sobre un cierto nivel puede modificar
considerablemente el e%uilibrio microbiano. Los carboidratos son los productos predominantes de la
fotos)ntesis vegetal y son, tambin, los principales nutrientes de la mayor)a de los microorganismos en
los ambientes naturales.
La estimacin de la respiracin del suelo da una idea de la dinmica de su biota y, por lo tanto, de los
procesos metablicos %ue en l se desarrollan. tales procesos var)an en funcin de factores biof)sicos y
climticos del suelo y del uso de la tierra, por lo cual su medicin es un indicador de la biomasa
microbiana presente. La actividad microbiana se desarrolla en funcin de factores intr)nsecos y
extr)nsecos al sistema suelo, por lo cual constituye un indicador de la dinmica del suelo y de la salud del
recurso, pues una buena actividad microbiana puede ser el refle'o de ptimas condiciones f)sicas y
%u)micas %ue permitan el desarrollo de los procesos metablicos de bacterias, ongos, algas y
actinomicetos y de su accin sobre los substratos orgnicos.
Determinacin de la respiracin basal Acti!idad micr"biana
La determinacin de la respiracin basal del suelo se efect,a ba'o las condiciones de incubacin en
laboratorio, sin la aplicacin de extra de nutrientes, ba'o una temperatura constante *#/0#1
/
!+ y un
contenido optimo de agua en las muestras de suelos *aprox. 1/02/ 3 del mximo de la capacidad de
retencin de agua+ *4-E56E7E5, 891#. :LE; 8998+. $urante el periodo de incubacin se mide la formacin
de bixido de carbono *!"#+, como tambin respectivamente el consumo de oxigeno *"#+. :ntes de la
incubacin las muestras de suelos se preincubaron por un tiempo de #< . para evitar anomal)a
ocasionadanas por la alza de la actividad microbiana despus de aber pesado las muestras y de a'ustar
el contenido de umedad de la misma *=E>?4>-">, 89@@+
MATERIALE# $ METODO#
Reacti!"s
>a"& */,1 6. p.a 6ercA 2<9@+
&!L *8,/ 6. Bitrisol, 6ercA 99C/+
Da!l# *-olucin saturada. p.a. 6ercA 8C89+
;enolftale)na */.8 g in 8// ml 2/3 Etanol. 6ercA C##C+
6ateriales utilizados en el laboratorio.
E%ec&cin ' determinacin
#// g de suelo *correspondiente al suelo seco en orno+ con umedad de campo se pesaron en cilindros,
ante de regular el contenido de agua al 1/3 de su capacidad de retencin )drica. El suelo se coloco en
recipientes de incubacin con cerro'os *tapas+ de E litros y se preincubaron en un cuarto oscuro por #<
oras y a #9
/
!. Branscurrido este tiempo se coloco en el fondo de los recipientes de incubacin un frasco
de Ferber con #/ ml de agua para umedecer el aire interno y un frasco con #/ ml de una solucin de /,1
6 >a"& para la absorcin del bixido de carbono formado *!"#. : continuacin se incubo el suelo por #
d)as seguidos para la medicin de la respiracin basal a #9
/
! en condiciones oscuras. Bras aber
terminado la incubacin se procedi al anlisis de las muestras.
Los frascos ermticos cerrados con la solucin de >a"& se conservaron en un dicedator %ue contiene
absorbente de soda clcica *&idrxido de sodio+ antes de iniciar la titulacin, para evitar la contaminacin
con !"# del ambiente. Gara la determinacin del !"# se tomaron de los #/ ml de >a"& dos ali%uota de 8
ml y se aplico un 8 ml de solucin saturada de Da!l# as) como tambin E gotas de fenolftale)na *punto de
cambio p& @,E+. !on la aplicacin de Da!l# se precipita el !"# absorbido como Da!"E.
# >a"& H !"# >a#!"E H &#"
>a#!"E H Da!l# Da!"E H # >a!l
!on una bureta y una solucin de /,1 6 &!L se titulo la cantidad no consumida de >a"& asta el punto
cambio del indicador de fenolftale)na.
()*)*)*) C+lc&l"s ' e!al&acin
Para el nivel de pH hasta 8,3:
CO,-C ./0 0
-1
#&el"2 3 .B - #2 4 M 4 E 4 A D5
D I &!l0!onsumido por la muestra cero *Jl+
- I &!l0!onsumido por las muestras de suelo *Jl+
6 I 6ol de la solucin de &!l
E I ;actor de conversin del !arbono *2+
: I :li%uota de la solucin de >a"&
$K I Geso seco de la muestra de suelo *g+
Pr"cedimient" 0ra6ic" para determinar acti!idad micr"biana en lab"rat"ri".
Determinacin del 7ndice de Minerali8acin
En la materia orgnica ocurren varios procesos %u)micos y biolgicos, entre los %ue se destaca la
mineralizacin a travs de la produccin de !"# durante un periodo determinado. -i tomamos en cuenta
%ue en la materia orgnica el mayor contenido de su peso es el carbono, la proporcin de !0!"#
producido por la respiracin microbiana en funcin al !0Botal de la materia orgnica corresponde al )ndice
de mineralizacin del suelo. *;.E. 5osales et. :ll #//@+.
3 )ndice de mineralizacin I
g !"# *respiracin+
L 8//
g ! total *6."+
9ndice de minerali8acin. -e reMere al clculo de la cantidad de !0!"# %ue se relaciona con el ! total
de la materia orgnica, de donde se obtiene la proporcin de la 6" %ue es lbil o mineral)zable. Es decir,
se calcula el )ndice de mineralizacin del suelo. *:BL:-, 5. and D:5B&:, 5. *#//#+.
"GE5:!4">:L4N:!4"> $E O:54:DLE
Variable De6inicin Medicin
$ixido de
carbono
Es un gas cuyas molculas estn
compuestas por dos tomos de
ox)geno y uno de carbono. -u
frmula %u)mica es !"#.
!"#0! *Jg08suelo+ I *D0-D+P6PEP:Q$R
D( &!l consumido por la muestra
cero.
-( &!l consumido por la muestra de
suelo.
6( 6ol de solucin de &!l
E( ;actor de conversin del carbono
:(:li%uota de la solucin de >a"&
$K( Geso seco de la muestra de
suelo
6ateria orgnica
La materia orgnica del suelo es un
material constituido por un amplio
n,mero de sustancias, %ue incluyen
clulas microbianas y te'idos
vegetales y animales inalterados
*sustancia no ,micas+, como
carboidratos, prote)nas, grasas,
etc. 7 sustancias modificadas
%u)mica y biolgicamente
*sustancias ,micas+ %ue muestran
muy poca o ninguna seme'anza con
los compuestos orgnicos de donde
se originan
C+lc&l"s
Los resultados se calculan mediante la
ecuacin( 3 6.". I 8/ S 8 T *m Q b +U x
1)*(
$onde(
m I Oaloracin de la muestra, ml de
disolucin ferrosa.
b I Oaloracin en blanco, ml de
disolucin ferrosa.
Vndice de
mineralizacin
En la materia orgnica ocurren
varios procesos %u)micos y
biolgicos, entre los %ue se destaca
la mineralizacin a travs de la
produccin de !"# durante un
periodo determinado. -i tomamos
en cuenta %ue en la materia
orgnica el mayor contenido es en
carbonos, la proporcin de !0!"#
producido por la respiracin
microbiana en funcin al !0Botal de
la materia orgnica corresponde al
)ndice de mineralizacin del suelo.