Etopsido induce la apoptosis y la regulacin positiva de

TACE/ADAM17 y ADAM10 en un modelo in vitro de lnea celular

germinal masculina
Resumen
El etopsido es un frmaco anti cancergeno ampliamente utilizado en el tratamiento de diferentes tumores. Se sabe
que el etopsido activa una amplia gama de seales intracelulares, el cual a su vez puede inducir respuestas celulares
distintas de la apoptosis. ADAM10 y TACE/ADAM17 pertenecen a una familia de metaloproteinasas de la
transmembrana extracelular involucradas en la regulacin paracrina / juxtacrine de muchas vas de sealizacin. El
objetivo de este trabajo fue evaluar si el etopsido induce la regulacin positiva de ADAM10 o TACE/ADAM17 en dos
lneas celulares (GC-1 y GC-2) derivadas de las clulas germinales masculinas. Los resultados mostraron que el etopsido
indujo apoptosis en una manera de dosis-respuesta tanto en las clulas GC-1 y GC-2. Apoptosis comenz a aumentar 6 h
despus de la adicin de etopsido en GC-2 clulas, mientras que lo mismo se observ 18 h despus de la adicin a las
clulas GC-1. Los niveles de protenas y los niveles de mRNA de ADAM10 y TACE / ADAM17 aumentaron 18 h despus de
que el etopsido se elimin de las clulas GC-1. En clulas GC-2, los niveles de protena de ambas protenas se
incrementaron 12 h despus de retirar etopsido. El mRNA de ADAM10 aument despus de 3 h y luego disminuyeron
constantemente hasta 12 h despus de la eliminacin, mientras que el mRNA de TACE/ADAM17 disminuy despus de
la eliminacin del etopsido. Finalmente, la apoptosis fue impedida en clulas GC-1 y GC-2 mediante la adicin de
inhibidores farmacolgicos de ADAM10 y TACE/ADAM17 al medio de cultivo de clulas tratadas con etopsido. Nuestros
resultados muestran por primera vez que etopsido regula positivamente los niveles de mRNA y protenas. Adems,
tambin se muestra que ADAM10 y TACE/ADAM17 tienen un papel en la apoptosis inducida por etopsido.

Introduccin
Etopsido (VP-16) es un agente de semi-derivado de la podofilotoxina utilizado en una variedad de tratamientos
quimioteraputicos. Informes anteriores han propuesto que la actividad del etopsido est mediada por su interaccin
con la topoisomerasa II, una enzima nuclear dependiente de ATP que regula la topologa del DNA por romper y unir
transitoriamente ADN bicatenario. Se ha demostrado que el etopsido induce la apoptosis, ambos p53 -dependiente e
independiente-, en varias lneas de clulas con cncer cultivadas y se utiliza ampliamente en diferentes protocolos para
el cncer testicular. Adems, etopsido induce una serie de respuestas intracelulares tales como la activacin de la
protena quinasa C delta (PKC), aumento de las especies reactivas del oxgeno (ROS) y la activacin de p38 MAPK. Por lo
tanto, es posible que etopsido desencadene varias respuestas celulares, adems de apoptosis, particularmente en
aquellas clulas cancerosas resistentes a este frmaco o en clulas viables no cancerosas. Adems, se ha demostrado
que etopsido regula los niveles de metaloproteinasas 2 de matriz (MMP-2) y activa el factor-1/p38/Smad3 de
crecimiento transformante va de sealizacin en las clulas del estroma de la mdula sea, pero estas respuestas no
parecen estar relacionados con su actividad pro-apopttica.
Varias molculas de sealizacin, tales como el factor de crecimiento epidrmico (EGF) y el factor de crecimiento de
fibroblastos (FGF), se sintetizan como protenas transmembrana; entonces, bajo las seales celulares especficas, los
dominios extracelulares de estas protenas se desprenden de la superficie celular y sus funciones biolgicas son
ejecutados en las clulas diana. Una familia de las metaloproteinasas transmembrana conocidas como desintegrina y
metaloproteasa (ADAM), las protenas son un componente clave en el derramamiento ectodominico de protenas.
ADAM juega un papel en diversos procesos biolgicos, principalmente mediante la regulacin paracrina / yuxtacrina la
comunicacin de clula a clula [9,11]. ADAM son de tipo 1 protenas transmembrana de aproximadamente 70 a 90 kDa.
Cuentan con una estructura modular ectodominio comn y un prodominio que se escinde en la red trans-Golgi por
convertasas protenas. ADAM10 y la convertasa TNF alfa (TACE o ADAM17) son los ms estudiados, ya que tienen un
papel relevante en el derramamiento ectodomicino de varios ligandos de EGFR unidos a la membrana como neuregulina,
EGF y protenas reguladoras del desarrollo, tales como el receptor Notch y pro-TNF-alfa.