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Espectrofometra
La espectrofotometra es la medicin de la cantidad de energa radiante que
absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la longitud de onda; es
el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y
bioqumicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar
la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida
de la misma sustancia.
Principio de la Espectrofotometra
En la espectrofotometra es aprovechada la absorcin de radiacin
electromagntica en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra
absorbe parte de la radiacin incidente en este espectro y promueve la
transicin del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de
menor energa radiante. En esta tcnica es medida la cantidad de luz
absorbida como una funcin de la longitud de onda utilizada. La absorcin de
las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de
las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben cierto intervalo de
longitudes de onda de la luz visible y transmite o refleja el color
complementario que no ha sido alterado. As, en el anlisis colorimtrico de
un material que aada un color rojo a un disolvente es porque la varacin de
la absorbancia con la concentracin, ser mxima en la regin verde del
espectro, mientras que el cambio de absorbancia con la radiacin roja ser
mnimo.
La espectrofotometra ultravioleta-visible utiliza haces de radiacin del
espectro electromagntico, en el rango UV de 180 a 380 nm y en el de la luz
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visible de 380 a 780 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los
materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro.
Ley de Lambert
En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto
depende de la distancia recorrida por la luz.
Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos que
ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentracin de azcar,
pero, el segundo tiene un dimetro mayor que el otro.
Segn la ley de Lambert, si hiciramos que un rayo de luz atravesara el
primer vaso, la cantidad de luz que saldra del otro lado seria mayor que si
repitiramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas
electromagnticas chocan contra un mayor nmero de tomos o/y molculas
y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explic en la ley de
Beer.

Ley de Bouguer-Beer-Lambert
Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (tambin
conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinacin
de las citadas anteriormente.
Transmitancia y absorcin de las radiaciones
Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones, por las leyes
mencionadas anteriormente, hay una prdida que se expresa con la
ecuacin:
It/Io=T-kdc''
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Donde It , es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la
celda fotoelctrica (llamada radiacin o intensidad transmitida); y Io que es la
que intensidad con la que sale al atravesar la celda (radiacin intensidad
incidente) y la relacin entre ambas (T) es la transmitancia.
En el exponente, el signo negativo se debe a que la energa radiante decrece
a medida que el recorrido aumenta. Donde k es la capacidad de la muestra
para la captacin del haz del campo electromagntico, d es la longitud de la
cubeta de espectrofotometra que recorre la radiacin, y c es la
concentracin del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.
La ecuacin simplificada de la ley de Beer-Lambert
A = .d.c
Comprende a la mnima ecuacin que relaciona la concentracin (c), la
absorbencia de la muestra (A), el espesor recorrido por la radiacin (d) y el
factor de calibracin (). El factor de calibracin relaciona la concentracin y
la absorbancia de los estndares.
La absorcin (o absorbancia) es igual a A, la que es el logaritmo reciproco de
la transmitancia:1
A= log 1/T
lo que es igual a:
A= -log T
Las ecuaciones mencionados de las leyes son validas solo y solo s:1
La radiacin incidente es monocromtica.
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Las especies actan independientemente unas de otras durante la absorcin.
La absorcin ocurre en un volumen de seccin trasversal uniforme

Aplicaciones
Las aplicaciones principales son:
1. Determinar la cantidad de concentracin en una solucin de algn
compuesto utilizando las frmulas ya mencionadas.
2. Para la determinacin de estructuras moleculares.
3. La identificacin de unidades estructurales especficas ya que estas
tienen distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomeras).
4. Determinar constantes de disociacin de indicadores cido-base.